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白藜芦醇对鸭卵巢组织冻融后移植效果的影响

中国家禽 2024年第2期46卷 7-15页

作者：秦清明李治利王宏辉李浩洋麻冰洁黄立朱忠珂信阳农林学院河南省水禽资源开发利用与疫病防控工程技术研究中心河南信阳464000 河南省息县畜牧局河南信阳464300

为探究不同浓度白藜芦醇对鸭卵巢组织玻璃化冷冻以及在鸭肾脏被膜下移植过程中的影响,试验分为5组(Con组:新鲜卵巢组织;0组、2.5组、5组、10组:0、2.5、5、10 mmol/L白藜芦醇),采用荧光定量PCR技术,检测玻璃化冷冻复苏后、复苏后鸭肾脏... 详细信息

为探究不同浓度白藜芦醇对鸭卵巢组织玻璃化冷冻以及在鸭肾脏被膜下移植过程中的影响,试验分为5组(Con组:新鲜卵巢组织;0组、2.5组、5组、10组:0、2.5、5、10 mmol/L白藜芦醇),采用荧光定量PCR技术,检测玻璃化冷冻复苏后、复苏后鸭肾脏被膜下移植第3天和第9天卵巢组织中MST1、LATS1、YAP1和VEGF mRNA表达情况;HE染色观察移植后卵巢的卵泡形态。结果显示:与Con组相比,玻璃化冷冻显著降低卵巢组织MST1、LATS1、YAP1和VEGF mRNA相对表达量(P<0.05)。与0组相比,10 mmol/L白藜芦醇能显著增加玻璃化冷冻卵巢MST1、LATS1、YAP1和VEGF mRNA相对表达量(P<0.05)。卵巢移植3 d后,与0组相比,白藜芦醇能显著增加10组MST1、YAP1、VEGF,2.5组LATS1、YAP1,5组VEGF mRNA相对表达量(P<0.05);移植9 d后,白藜芦醇能显著降低MST1和LATS1 mRNA相对表达量(P<0.05)和显著升高YAP1和VEGF mRNA相对表达量(P<0.05)。白藜芦醇能显著增加冻融卵巢移植3 d和9 d的5组和10组正常卵泡率(P<0.05)。综上所述,白藜芦醇能提高鸭卵巢冻融移植后的卵泡存活率,以10 mmol/L为试验的最佳浓度。

关键词：鸭白藜芦醇玻璃化冷冻卵巢移植 YAP1/VEGF信号通路

新型鹅细小病毒信阳株的全基因组扩增及遗传进化分析

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畜牧与兽医 2023年第1期55卷 112-119页

作者：焦凤超张鑫李迎晓雷震曲哲会董建国赵瑜何书海李洵黄立赵聘信阳农林学院/河南省水禽资源开发利用与疫病防控工程技术研究中心河南信阳464000

为了解信阳地区新型鹅细小病毒(NGPV)的遗传变异特性,对疑似NGPV感染麻鸭病例进行病原检测,采集肝脏和脾脏无菌处理后接种SPF鸭胚,成功分离到1株NGPV,命名为HNXY21株,并对其进行全基因组序列分析和VP1基因重组鉴定。序列比对和系统发育... 详细信息

为了解信阳地区新型鹅细小病毒(NGPV)的遗传变异特性,对疑似NGPV感染麻鸭病例进行病原检测,采集肝脏和脾脏无菌处理后接种SPF鸭胚,成功分离到1株NGPV,命名为HNXY21株,并对其进行全基因组序列分析和VP1基因重组鉴定。序列比对和系统发育树表明,分离株HNXY21和其他9株NGPV同处于鹅细小病毒(GPV)组内的一个独立分支上,与山东分离株SD0316(GenBank登录号:MN415969)核苷酸同源性最高;VP1蛋白的氨基酸序列分析显示,与经典GPV和番鸭细小病毒(MDPV)相比,有8个氨基酸位点突变;通过Simplot软件对VP1基因进行重组分析表明,分离株HNXY21 VP1基因存在重组信号,其潜在的主要亲本为山东分离株SD0316和弱毒疫苗株SYG61v。本研究结果丰富了NGPV的分子生物学资料,为进一步研究NGPV的致病机制奠定了基础。

关键词：新型鹅细小病毒遗传变异重组

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应用羽毛无损鉴别鹌鹑早期性别的方法

畜牧与兽医 2022年第8期54卷 14-19页

作者：李治利易先国李岩闫艳霞赵云焕秦清明信阳农林学院/河南省水禽资源开发利用与疫病防控工程技术研究中心河南信阳464000

试验旨在探寻一种无损、价廉、耗时短,可用于大批量鹌鹑早期性别鉴定的方法。采用4种不同方法(试剂盒法、加热法、碱裂解法和碱裂解-乙醇洗涤法)提取鹌鹑羽毛样品的基因组DNA,使用凝胶电泳检验DNA质量,紫外分光光度计测定其浓度和纯度;... 详细信息

试验旨在探寻一种无损、价廉、耗时短,可用于大批量鹌鹑早期性别鉴定的方法。采用4种不同方法(试剂盒法、加热法、碱裂解法和碱裂解-乙醇洗涤法)提取鹌鹑羽毛样品的基因组DNA,使用凝胶电泳检验DNA质量,紫外分光光度计测定其浓度和纯度;选择最佳的羽毛DNA提取方法,应用PCR法检测3日龄鹌鹑的性别。基因组DNA提取电泳结果显示,仅碱裂解-乙醇洗涤法提取的DNA与试剂盒提取的DNA出现条带的位置相同;紫外分光光度计测定结果表明,试剂盒法获得的DNA浓度值远低于其他3种方法,其中碱裂解法浓度最高;OD_(260)/OD_(280)比值以试剂盒法和碱裂解-乙醇洗涤法(裂解10 min)为高,OD_(260)/OD_(230)比值以试剂盒法最高,碱裂解-乙醇洗涤法(裂解10 min)次之。PCR结果显示,除碱裂解法原液无目的条带外,其余各组均出现目的条带;碱裂解法操作步骤少、时间最短,加热法和碱裂解-乙醇洗涤法次之。综合分析选择碱裂解-乙醇洗涤法对70只鹌鹑进行性别鉴定,羽毛PCR鉴定性别结果与性腺解剖结果的符合率为100%,卡方分析检验差异均不显著(P>0.05)。研究表明,4种方法均可以用来处理鹌鹑羽毛样品,并用于鹌鹑的性别鉴定,其中碱裂解-乙醇洗涤法耗时更短、效果好、性价比更高,可用于大批量鹌鹑的早期性别鉴定,也适合用于其他使用PCR开展定性方面的试验。

关键词： DNA提取性别鉴定鹌鹑

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鸡骨髓源造血干细胞的体外培养及分化诱导

中国家禽 2023年第10期45卷 6-11页

作者：何书海张晒焦凤超位格格王旭黄守孝董建国信阳农林学院动物科技学院河南信阳464000 河南省水禽资源开发利用与疫病防控工程技术研究中心河南信阳464000

为获取鸡骨髓源造血干细胞(HSC)和建立其体外培养方法,试验从鸡长骨中获取骨髓单个核细胞,流式细胞术分选出CD34^(+)HSC后,在体外进行培养和诱导分化,进一步观察CD34^(+)HSC的形态、生长状态、集落形成能力和分化能力。结果显示:IMDM培... 详细信息

为获取鸡骨髓源造血干细胞(HSC)和建立其体外培养方法,试验从鸡长骨中获取骨髓单个核细胞,流式细胞术分选出CD34^(+)HSC后,在体外进行培养和诱导分化,进一步观察CD34^(+)HSC的形态、生长状态、集落形成能力和分化能力。结果显示:IMDM培养基中添加50 ng/mL干细胞生长因子、30 ng/mL Flt-3配体、10μg/mL白细胞介素-3、50 ng/mL白细胞介素-6以及20%鸡血清可维持鸡CD34^(+)HSC的短期体外培养,最长可存活10 d。将上述培养体系加入到甲基纤维素半固体培养基中,可使鸡CD34^(+)HSC形成典型的干细胞克隆集落;在上述培养体系中加入50 ng/mL血小板生成素和80 ng/mL的粒细胞集落刺激因子,可诱导鸡CD34^(+)HSC向粒系细胞分化。瑞氏-姬姆萨染色结果显示,鸡CD34^(+)HSC的胞核较大,呈蓝紫色,核染色质细而分散,胞浆呈浅蓝色,均匀无颗粒。研究提示:在培养体系中添加鸡造血细胞生长因子,可实现鸡骨髓源CD34+HSC的体外扩增和定向诱导分化。

关键词：鸡骨髓造血干细胞分离培养分化诱导

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两种固定液对鸭小肠肥大细胞染色效果的比较

黑龙江畜牧兽医 2023年第10期 72-75,137页

作者：陈敏何敏王梦雪何书海焦凤超曲哲会信阳农林学院动物科技学院/河南省水禽资源开发利用与疫病防控工程技术研究中心河南信阳464000

为了探讨不同固定液对鸭小肠肥大细胞甲苯胺蓝染色效果的影响及鸭小肠内肥大细胞的数量和分布情况,试验选择5只100日龄的健康淮南麻鸭公鸭为研究对象,取鸭只十二指肠、空肠和回肠组织样品,均分为两份,分别置于10%中性福尔马林固定液和... 详细信息

为了探讨不同固定液对鸭小肠肥大细胞甲苯胺蓝染色效果的影响及鸭小肠内肥大细胞的数量和分布情况,试验选择5只100日龄的健康淮南麻鸭公鸭为研究对象,取鸭只十二指肠、空肠和回肠组织样品,均分为两份,分别置于10%中性福尔马林固定液和卡恩氏(Carnoy)固定液中固定,常规制作石蜡切片,切片经甲苯胺蓝染色后,观察小肠肥大细胞染色效果和肥大细胞形态、数量及分布,并进行统计分析。结果表明:Carnoy固定液对肥大细胞的染色效果优于10%中性福尔马林固定液,染色评分极显著高于10%中性福尔马林固定液(P<0.01);Carnoy固定液固定的十二指肠、空肠、回肠肥大细胞数量均极显著高于10%中性福尔马林固定液(P<0.01)。鸭十二指肠、空肠和回肠中肥大细胞形态和数目不同,在黏膜固有层血管、腺管周围的结缔组织中分布较多;空肠中肥大细胞数量最多,形态多样;十二指肠和回肠中肥大细胞数量递减,形态多为圆形。说明与10%中性福尔马林固定液相比,经Carnoy固定液固定的鸭小肠组织染色后,可清晰显示肥大细胞的形态分布。

关键词：鸭小肠肥大细胞福尔马林固定液 Carnoy固定液甲苯胺蓝染色

蜂毒素对热应激淮南麻鸭生产性能和免疫器官氧化应激的影响

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中国家禽 2022年第7期44卷 50-56页

作者：李治利秦清明李新玉冯智园易先国张自富祝发明唐雪峰信阳农林学院河南省水禽资源开发利用与疫病防控工程技术研究中心河南信阳464000 河南牧翔动物药业有限公司河南郑州451162

为研究蜂毒素对热应激淮南麻鸭生产性能和免疫器官抗氧化能力的影响,试验将320只20日龄雄性淮南麻鸭随机分为4组,每组4个重复,每个重复20只鸭。热应激组饲喂基础日粮,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别饲喂添加0.08 g/kg、0.12 g/kg和0.16 g/kg蜂毒素的... 详细信息

为研究蜂毒素对热应激淮南麻鸭生产性能和免疫器官抗氧化能力的影响,试验将320只20日龄雄性淮南麻鸭随机分为4组,每组4个重复,每个重复20只鸭。热应激组饲喂基础日粮,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别饲喂添加0.08 g/kg、0.12 g/kg和0.16 g/kg蜂毒素的基础日粮。每天进行4 h热应激处理(温度36~38℃,相对湿度60%~70%),持续15 d,采集胸腺、脾脏和法氏囊,计算器官指数,检测胸腺、脾脏和法氏囊中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)mRNA相对表达水平,以及谷胱甘肽(GSH)和SOD活性以及丙二醛(MDA)浓度。结果显示:添加蜂毒素对热应激鸭平均采食量、平均日增重、料肉比,以及胸腺、脾脏和法氏囊指数无显著性影响(P>0.05);与热应激组相比,Ⅰ组脾脏GSH-Px、SOD和CAT mRNA相对表达量显著增加,脾脏MDA含量显著降低(P<0.05),Ⅱ组胸腺和脾脏GSH-Px、SOD和CAT与法氏囊SOD mRNA相对表达量、SOD活性均显著增加及脾脏MDA含量显著降低(P<0.05),Ⅲ组热应激鸭胸腺和法氏囊SOD mRNA相对表达量显著增加(P<0.05)。综上,饲粮添加蜂毒素能提高热应激淮南麻鸭的抗氧化能力,缓解热应激导致的氧化应激损伤,以添加0.12 g/kg蜂毒素为宜。

关键词：蜂毒素热应激淮南麻鸭免疫器官抗氧化指标

鸭坦布苏病毒E蛋白结构域Ⅰ-Ⅱ与Ⅲ的反应原性和免疫原性比较

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黑龙江畜牧兽医 2023年第20期 89-95,100页

作者：曲哲会鲁绍芳郭晓秋陈敏焦凤超王梦瑶魏星马君钊张茹黄立张喜文信阳农林学院动物科技学院河南信阳464000 河南省水禽资源开发利用与疫病防控工程技术研究中心河南信阳464000 信阳市畜禽重大疫病防控综合技术研究重点实验室河南信阳464000

为了比较鸭坦布苏病毒(duck Tembusu virus,DTMUV)E蛋白结构域Ⅰ-Ⅱ(EDⅠ-Ⅱ)与结构域Ⅲ(EDⅢ)的反应原性和免疫原性,试验将重组质粒pET-EDⅠ-Ⅱ[EDⅠ-Ⅱ基因插入表达载体pET-30a(+)构建的重组质粒]和pET-EDⅢ[EDⅢ基因插入表达载体pET-... 详细信息

为了比较鸭坦布苏病毒(duck Tembusu virus,DTMUV)E蛋白结构域Ⅰ-Ⅱ(EDⅠ-Ⅱ)与结构域Ⅲ(EDⅢ)的反应原性和免疫原性,试验将重组质粒pET-EDⅠ-Ⅱ[EDⅠ-Ⅱ基因插入表达载体pET-30a(+)构建的重组质粒]和pET-EDⅢ[EDⅢ基因插入表达载体pET-30a(+)构建的重组质粒]分别转化至大肠杆菌(***)Rosetta(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导后,对表达产物进行SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定,采用亲和层析法纯化重组蛋白EDⅠ-Ⅱ和EDⅢ,通过Dot-blot试验和间接ELISA试验比较二者的反应原性;将重组蛋白EDⅠ-Ⅱ和EDⅢ免疫小鼠,通过测定免疫小鼠血清中特异性抗体、病毒中和(VN)抗体和细胞因子(IL-6、IFN-γ)水平比较两者的免疫原性;将DTMUV分离株感染重组蛋白EDⅠ-Ⅱ和EDⅢ免疫小鼠,采用实时荧光定量PCR方法检测小鼠肺脏、肝脏和脑组织中DTMUV RNA相对表达水平,比较重组蛋白EDⅠ-Ⅱ和EDⅢ对免疫小鼠的保护力。结果表明:含重组质粒pET-EDⅠ-Ⅱ和pET-EDⅢ诱导4 h的菌体蛋白经SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定分别在分子量约33 ku和17 ku位置出现明显条带,可与鸡抗DTMUV多克隆抗体发生特异性免疫反应;经Dot-blot试验和间接ELISA试验分析发现,重组蛋白EDⅠ-Ⅱ比重组蛋白EDⅢ具有更好的反应原性;重组蛋白EDⅠ-Ⅱ免疫小鼠后第42天血清中特异性抗体水平、IFN-γ和IL-6水平均极显著高于重组蛋白EDⅢ(P研究的目标蛋白,而EDⅢ蛋白更适合作为DTMUV新型疫苗研究的目标蛋白。

关键词：鸭坦布苏病毒 E蛋白结构域反应原性免疫原性

鸭瘟病毒、鸭坦布苏病毒和鸭疫里默杆菌多重PCR检测方法的建立与初步应用

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中国兽医学报 2023年第6期43卷 1175-1180页

作者：曲哲会张喜文鲁绍芳陈敏曾超李梦莉焦凤超何书海赵瑜黄立信阳农林学院动物科技学院河南信阳464000 信阳农林学院动物科技学院河南省水禽资源开发利用与疫病防控工程技术研究中心河南信阳464000 信阳市畜禽养殖与环境控制重点实验室河南信阳464000

设计分别检测鸭坦布苏病毒(duck Tembusu virus,DTMUV)、鸭瘟病毒(duck plague virus,DPV)和鸭疫里默杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)的特异性引物,且PCR产物大小差异明显;优化多重PCR的引物浓度、退火温度,并分析特异性和敏感性;利... 详细信息

设计分别检测鸭坦布苏病毒(duck Tembusu virus,DTMUV)、鸭瘟病毒(duck plague virus,DPV)和鸭疫里默杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)的特异性引物,且PCR产物大小差异明显;优化多重PCR的引物浓度、退火温度,并分析特异性和敏感性;利用多重PCR方法和单一PCR方法对54份临床采集的鸭源病料进行检测。结果显示,该多重PCR检测方法可用于DTMUV、RA和DPV的单纯或混合感染的诊断,PCR产物大小分别为220,308,551 bp;反应体系中最佳引物终浓度组合为1.0μmol/L的引物DTMUV-S和DTMUV-A、0.5μmol/L的引物RA-S和RA-A、0.5μmol/L的引物DPV-S和DPV-A;该检测方法退火温度在46.5~63.8℃之间均可以检测到3种病原体核酸,其中最佳退火温度为57.0℃。该方法检测DTMUV、DPV和RA的核酸最低量分别为6.570,0.600,0.440μg/L。临床样品检测结果显示,本试验建立的DTMUV、DPV和RA多重PCR检测结果与单一PCR检测结果符合率为98.1%。结果表明,本试验建立的复合PCR方法可适用于3种病原体单纯或混合感染的快速诊断,为流行病学调查及快速、准确制定针对性防控措施提供了技术支持。

关键词：多重PCR 鸭坦布苏病毒鸭瘟病毒鸭疫里默杆菌诊断

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热应激对家禽免疫功能影响的研究进展

中国家禽 2021年第7期43卷 99-105页

作者：李治利秦清明李宁倩赵聘赵云焕李建柱唐雪峰信阳农林学院河南省水禽资源开发利用与疫病防控工程技术研究中心河南信阳464000

热应激是全球畜牧业面临的最大挑战之一,环境温度和湿度的增加影响夏季动物生产,导致严重的经济损失。免疫功能是维持家禽机体健康的基础,改善机体免疫功能可以改善健康状况,提高生产性能,降低死亡率,减少损失。大量研究表明,热应激能... 详细信息

热应激是全球畜牧业面临的最大挑战之一,环境温度和湿度的增加影响夏季动物生产,导致严重的经济损失。免疫功能是维持家禽机体健康的基础,改善机体免疫功能可以改善健康状况,提高生产性能,降低死亡率,减少损失。大量研究表明,热应激能影响家禽的免疫器官和细胞因子,并通过对家禽B细胞介导的体液免疫、T细胞介导的细胞免疫和肠道免疫产生不利影响,而对免疫系统产生负面影响;热应激条件下TLR-4基因的表达可作为预测肠道病原体侵袭和免疫调节的指标。文章旨在为家禽生产管理提供理论依据。

关键词：热应激免疫细胞因子肠道免疫家禽