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表达传染性支气管炎病毒S1重组腺病毒的构建及免疫原性分析

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中国病原生物学杂志 2024年第7期19卷 751-755页

作者：何杰珩袁子岚程晴梁志鹏张新宇陈高婕池仕红袁生郭锦玥黄淑坚温峰佛山科学技术学院生命科学与工程学院广东佛山528225

目的构建表达传染性支气管炎病毒S1蛋白的重组腺病毒,并进行初步免疫原性分析。方法本研究利用腺病毒表达载体系统,利用同义点突变技术,消除IBV-S1基因中的PacⅠ和PmeⅠ限制性酶切位点;将已突变的S1基因克隆至pShuttle-CMV-N-DsRed穿... 详细信息

目的构建表达传染性支气管炎病毒S1蛋白的重组腺病毒,并进行初步免疫原性分析。方法本研究利用腺病毒表达载体系统,利用同义点突变技术,消除IBV-S1基因中的PacⅠ和PmeⅠ限制性酶切位点;将已突变的S1基因克隆至pShuttle-CMV-N-DsRed穿梭质粒中;使用Pme I线性化处理携带目的基因的穿梭质粒,并与pAdEasy-1质粒同时转化进行同源重组;后将重组质粒转染HEK 293细胞,包装成重组Adv,构建S1-CMV-pAd(293)重组病毒;并进行免疫实验验证抗体。结果 PCR扩增出S1基因,大小约为1 700 bp。S1和pShuttle-CMV-N-DsRed穿梭质粒经酶切及测序结果表明,成功构建S1-CMV表达载体;在BJ5183感受态中进行同源重组,测序结果表明成功构建S1-CMV-Pad重组质粒。利用HEK-293细胞包装成重组腺病毒,能稳定产生红色荧光;经Western blot和IFA验证重组病毒成功表达S1 (RBD)蛋白;以106TCID50/mL滴度肌肉免疫雏鸡,7~21 d后均可检测到S1抗体,且抗体浓度仍呈增长趋势。结论本研究所构建的S1-CMV-pAd重组Adv为之后的免疫保护试验研究及IBV-Adv疫苗构建提供了基础实验支撑。

关键词：传染性支气管炎病毒 S1 腺病毒载体重组病毒

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烯丙孕素缓释微球的制备及特性研究

动物医学进展 2024年第5期45卷 68-74页

作者：陈沃俊张志远邓翔云张妙齐曾蔼宁冼伟杭陈胜锋陈志胜计慧琴刘璨颖张晖白银山王丙云佛山科学技术学院生命科学与工程学院广东佛山528000

为提高烯丙孕素的生物利用度,减少给药次数,降低猪场的养殖成本,旨在制备一种具有缓释长效性能的烯丙孕素缓释微球。以单甲氧基聚乙二醇-聚乳酸共聚物(mPEG-PLA)为载体材料,采用乳化-溶剂挥发法制备烯丙孕素缓释微球,在模拟胃肠道环境... 详细信息

为提高烯丙孕素的生物利用度,减少给药次数,降低猪场的养殖成本,旨在制备一种具有缓释长效性能的烯丙孕素缓释微球。以单甲氧基聚乙二醇-聚乳酸共聚物(mPEG-PLA)为载体材料,采用乳化-溶剂挥发法制备烯丙孕素缓释微球,在模拟胃肠道环境的溶出介质中测定烯丙孕素缓释微球的体外释放情况,并对烯丙孕素缓释微球的药物稳定性进行考察。结果显示,烯丙孕素缓释微球的最佳制备条件为搅拌速度1000 r/min,水相中吐温-80含量0.2%,mPEG-PLA质量浓度0.07 g/mL,油水体积比0.6,水相中明胶含量1.0%;以最佳制备条件制得的烯丙孕素缓释微球平均包封率为(95.64±0.23)%,平均载药量为(9.83±0.61)%,mPEG-PLA对烯丙孕素的包埋效果最佳。烯丙孕素缓释微球呈球形或近球形,外观圆整,平均粒径为82.3μm。烯丙孕素缓释微球能在分别含1%吐温-80,pH 1.2、pH 4.1以及pH 6.8这3种不同溶出介质中持续释放4 h以上,且释放机理符合一级动力学方程。烯丙孕素缓释微球在高湿环境中的稳定性良好,但在高温和强光照射的条件下储存10 d时,烯丙孕素的含量分别下降3.00%和11.92%。烯丙孕素缓释微球具有缓释的性能,且制备方法简单,包封率高,载药量好,易于产业化生产,可进一步推动烯丙孕素在养猪业的开发利用。

关键词：烯丙孕素缓释微球 mPEG-PLA 体外释放药物稳定性

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掌静脉识别的深度学习方法综述

计算机工程与应用 2024年第6期60卷 55-67页

作者：谭振林刘子良黄蔼权陈荟慧钟勇佛山科学技术学院电子信息工程学院广东佛山528225

掌静脉识别作为一种新兴的红外生物识别技术,因其高安全性、活体检测性等优势已成为当前生物特征识别领域中的研究热点之一。近年来,该领域的大量研究通过引入深度学习方法推动了掌静脉识别技术的发展。为了掌握掌静脉识别领域最新研究... 详细信息

掌静脉识别作为一种新兴的红外生物识别技术,因其高安全性、活体检测性等优势已成为当前生物特征识别领域中的研究热点之一。近年来,该领域的大量研究通过引入深度学习方法推动了掌静脉识别技术的发展。为了掌握掌静脉识别领域最新研究现状及发展方向,对数据采集和数据预处理的主流算法进行了分类和总结,并针对基于深度学习的掌静脉识别的最新进展按照掌脉特征表征、网络设计与优化、轻量级网络进行了分类和详细阐述。针对当前单模态识别达到瓶颈等问题,分析并对比了多模态和多特征融合识别相关算法;探讨了当前掌静脉识别的研究难点挑战,并对未来的发展趋势进行了展望与总结。

关键词：掌静脉识别深度学习多模态融合

鸡源山夫登堡沙门菌分离鉴定及耐药性和毒力基因检测

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中国畜牧兽医 2024年第4期51卷 1773-1783页

作者：刘春红吕志航张玉倩廉春杨郑煦灿严常燕张雪莲佛山科学技术学院生命科学与工程学院佛山528231 佛山市南海种禽有限公司佛山528231

【目的】确定广东某肉鸡养殖场疑似沙门菌感染病例的病原及其药物敏感性,为制定有效的防控和净化措施及合理的用药方案提供科学依据。【方法】本研究对广东省某规模化鸡场若干份病鸡的肝脏和肠道样品进行沙门菌的分离培养、革兰染色、... 详细信息

【目的】确定广东某肉鸡养殖场疑似沙门菌感染病例的病原及其药物敏感性,为制定有效的防控和净化措施及合理的用药方案提供科学依据。【方法】本研究对广东省某规模化鸡场若干份病鸡的肝脏和肠道样品进行沙门菌的分离培养、革兰染色、生化试验、invA特异性基因PCR鉴定、16S rRNA鉴定、血清学分型,采用K-B纸片法检测菌株对20种抗菌药物的敏感性,并通过PCR方法检测菌株的耐药基因和毒力基因。【结果】细菌分离培养可见无色透明、呈细小的露珠样菌落或光滑圆整、透明湿润、中心为黑色的菌落,疑似菌落革兰染色呈粉红色、散在分布、两端稍圆的短杆菌,无荚膜,无芽孢;分离菌生化试验呈产气、底层产酸、产硫化氢呈黑色且斜面产碱变红现象;对疑似菌落DNA进行PCR扩增,invA特异性基因扩增出大小约为285 bp的条带,16S rRNA基因扩增出大小约为1500 bp的条带,本研究共分离鉴定出8株山夫登堡沙门菌。药物敏感性试验结果显示,8株菌对头孢他啶、庆大霉素、阿米卡星、卡那霉素、米诺环素、强力霉素、多黏菌素B均无耐药性,但对青霉素、头孢氨苄、万古霉素、红霉素、林可霉素、氨苄西林、哌拉西林、头孢唑林、头孢呋辛钠、头孢曲松、头孢哌酮、链霉素、四环素的耐药率较高,介于87.5%~100%,且分离株均为多重耐药菌;有7株菌均检出qnrS和stcM耐药基因,有1株未检出任何耐药基因;毒力基因检测结果显示,毒力基因invA、hilA、sipA、sipC、ssrA、stnP 1的检出率均为100%,sopB和ssaR基因检出率分别为50.0%和62.5%。【结论】本研究分离的鸡源山夫登堡沙门菌均具有多重耐药性,对头孢他啶、阿米卡星等7种药物敏感,invA、hilA、sipA、sipC、ssrA、stnP 16种毒力基因的携带率均为100%。本研究结果补充了鸡源沙门菌病的流行病学资料,为临床沙门菌的防控和净化提供了理论参考。

关键词：山夫登堡沙门菌分离鉴定耐药性毒力基因

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粤北水边河流域钙元素迁移的基岩制约作用

中国岩溶 2024年第1期43卷 105-113页

作者：涂旭魏兴琥曾发明食品科学与工程学院佛山科学技术学院广东佛山528000 环境与化学工程学院佛山科学技术学院广东佛山528000 佛山市生态固碳工程技术研究中心广东佛山528000

岩石风化是控制流域水体水化学特征的关键因素之一。为探索岩溶流域中不同基岩风化作用对地表水化学的影响,本文选择粤北典型岩溶流域(水边河)为研究对象,以水体[Ca^(2+)]变化和钙迁移机制为研究主线,通过连续5年的系统调查及采样分析,... 详细信息

岩石风化是控制流域水体水化学特征的关键因素之一。为探索岩溶流域中不同基岩风化作用对地表水化学的影响,本文选择粤北典型岩溶流域(水边河)为研究对象,以水体[Ca^(2+)]变化和钙迁移机制为研究主线,通过连续5年的系统调查及采样分析,揭示不同岩性风化对干流水体中Ca^(2+)输送通量的贡献率和岩溶流域钙元素迁移的影响机理。结果表明:(1)不同基岩支流的水体[Ca^(2+)]差异明显,特别是在干季,碳酸盐岩支流水体的[Ca^(2+)]分别是花岗岩、砂岩和砾岩支流的3.8倍、4.7倍、14.9倍;(2)不同基岩支流汇入干流后,水化学变化具有滞后性,并且呈现季节性差异。其中,碳酸盐岩支流汇入后,干流水体的[Ca^(2+)]会滞后升高,而其他支流会稀释[Ca^(2+)],产生稀释作用,其效果在湿季比干季更明显;(3)通过统计分析得出,碳酸盐岩支流在流域土地面积占比为28%,而其对流域水体中[Ca^(2+)]的贡献率达到83%,说明岩溶流域中碳酸盐岩的风化的制约着钙元素的迁移过程;(4)2016-2020年间,水边河向连江输送的钙通量平均值为7.2×10^(4) t·a^(-1),其中,湿季平均输送量为5.8×10^(4) t·a^(-1),干季平均为1.4×10^(4) t·a^(-1);但岩溶水体中钙元素迁移不仅仅有水体溶解的Ca^(2+),还有沉积态钙迁移和水生生物的钙迁移过程,而农业活动及酸雨等过程可导致水体中[Ca^(2+)]发生明显变化,因此,农业活动和酸雨等对钙迁移的影响需要多加关注。

关键词：岩溶流域钙迁移通量基岩类型钙离子浓度外源水

基于智能饲喂开展哺乳母猪采食量基因组遗传评估研究

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畜牧兽医学报 2024年第7期 2890-2900页

作者：张瑞琪厐彦芹李再山尚秀国兰干球郭金彪赵云翔广西大学动物科学技术学院佛山科学技术学院生命科学与工程学院广西扬翔股份有限公司

旨在通过分析哺乳母猪采食量性状的遗传参数及全基因组关联分析(GWAS),评估基于智能饲喂技术对哺乳期采食性状的选育效果。本研究收集2022年7月至2023年5月份分娩的922头1～4胎次大白猪的哺乳期采食量数据，分析猪只的哺乳期采食情况。... 详细信息

旨在通过分析哺乳母猪采食量性状的遗传参数及全基因组关联分析(GWAS),评估基于智能饲喂技术对哺乳期采食性状的选育效果。本研究收集2022年7月至2023年5月份分娩的922头1～4胎次大白猪的哺乳期采食量数据，分析猪只的哺乳期采食情况。利用Hiblup软件对哺乳期采食性状进行遗传参数估计，后使用Plink、GEMMA和R软件进行全基因组关联分析，筛选与采食量性状相关的SNP位点及重要候选基因，并对显著关联的SNP位点上、下游420 kb范围内注释基因进行功能富集分析。结果显示，纯种大白猪哺乳期采食性状遗传力在0.20～0.27之间，并筛选到28个SNPs位点与哺乳期采食性状显著相关。通过对相关联的SNPs位点进行注释，共筛选到15个与哺乳期采食性状相关的候选基因，这些候选基因显著富集在葡萄糖、脂肪酸、激素和辅酶等的合成代谢多个生物学过程(P<0.05),分析认为HAMP、NDUFB8、UPK1A、CHSY1、U6、COX7A1可作为大白猪哺乳期采食性状的关键候选基因。以上研究结果为大白猪哺乳期采食性状提供重要的遗传变异位点与后续基因，为后期利用该遗传分子标记进一步改良采食量性状的选育奠定基础，也将为大白猪哺乳母猪高繁殖力和高泌乳性能品种选育提供理论支撑。

关键词：智能饲喂哺乳母猪采食量选育全基因组关联分析 SNP标记

地榆皂苷Ⅱ对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的抗菌活性及作用机制研究

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药物评价研究 2024年第1期47卷 103-108页

作者：张子桦吴金婵余咏诗张淼菲张凯嘉曾芝璇卓燕萍杨烨健陈鑫佛山科学技术学院医学院广东佛山528225 佛山科学技术学院食品科学与工程学院广东佛山528225 佛山市中医院广东佛山528225

目的考察地榆皂苷Ⅱ对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的体外抑菌活性以及抑菌机制。方法肉汤稀释法检测地榆皂苷Ⅱ对16株MRSA的体外抑菌活性;比浊法和菌落计数绘制地榆皂苷Ⅱ对MRSA的... 详细信息

目的考察地榆皂苷Ⅱ对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的体外抑菌活性以及抑菌机制。方法肉汤稀释法检测地榆皂苷Ⅱ对16株MRSA的体外抑菌活性;比浊法和菌落计数绘制地榆皂苷Ⅱ对MRSA的生长曲线、杀菌曲线;通过DNA外泄实验,分析地榆皂苷Ⅱ对MRSA细胞壁膜通透性的影响;通过DAPI染色后的荧光强度分析,考察地榆皂苷Ⅱ对MRSA DNA和RNA的影响。结果地榆皂苷Ⅱ对16株MRSA的最小抑菌浓度(MIC)范围为128~256μg·mL^(-1),最小杀菌浓度(MBC)范围为2~8mg·mL^(-1)。生长曲线结果显示,地榆皂苷Ⅱ质量浓度为1×MIC(256μg·mL^(-1))及以上时,生长抑制作用明显;杀菌曲线结果显示,地榆皂苷Ⅱ2×MIC、4×MIC作用1 h后对MRSA的抑制作用明显,8×MIC、16×MIC分别作用1、2 h后对MRSA起到了完全抑制的作用。2×MIC的地榆皂苷Ⅱ作用于MRSA后,胞外核酸大分子含量显著高于对照组,6 h后核酸外泄量较对照组高26.23%(P<0.05)。地榆皂苷Ⅱ作用于MRSA菌体后,MRSA DNA和RNA水平明显低于对照组(P<0.01、0.001)。结论地榆皂苷Ⅱ对MRSA有良好的抑菌活性,可以通过抑制细菌核酸合成进而抑制MRSA的生长。

关键词：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌地榆皂苷Ⅱ 抗菌细胞壁膜通透性核酸合成

1株欧亚类禽猪流感病毒的分离鉴定及遗传进化分析

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中国畜牧兽医 2024年第4期51卷 1642-1650页

作者：韩慧郭亚晶颜广智陈盛楠刘明杰莫美连黄良宗佛山科学技术学院生命科学与工程学院佛山528000 广东方道基因生物科技有限公司佛山528000

【目的】了解广东地区猪流感病毒(Swine influenza virus,SIV)的流行情况并探究其分子生物学特征。【方法】采集广东某猪场疑似猪流感病毒感染猪的鼻拭子和肺脏组织样品进行病毒分离鉴定、遗传进化和关键氨基酸位点分析。【结果】样品... 详细信息

【目的】了解广东地区猪流感病毒(Swine influenza virus,SIV)的流行情况并探究其分子生物学特征。【方法】采集广东某猪场疑似猪流感病毒感染猪的鼻拭子和肺脏组织样品进行病毒分离鉴定、遗传进化和关键氨基酸位点分析。【结果】样品经实时荧光定量RT-PCR检测为猪流感病毒核酸阳性;在红细胞凝集试验中,该病毒对鸡红细胞有凝集作用,血凝效价为1∶128;8个基因片段序列结果经BLAST比对和进化树分析显示,HA、NA基因属于欧亚类禽猪流感病毒(H1N1)分支,PA、PB 1、PB 2、NP和M基因属pdm/09分支,NS基因属于北美三源重组分支,因此,本试验分离株属于G4基因型欧亚类禽猪流感病毒,将其命名为A/swine/Guangdong/CJM2/2022(H1N1)。关键氨基酸位点分析显示,分离株HA蛋白裂解位点序列为PSIQSR/GL,具有典型低致病性流感病毒的分子特征。HA基因在受体结合位点处的190、225、226位氨基酸分别为D、E、Q,表明其既具有结合人型唾液酸受体的潜能又具有结合禽型唾液酸受体的潜能。NA基因关键氨基酸残基均未发生突变,提示分离株对奥司他韦和扎那米韦等神经氨酸酶抑制剂的敏感性较高,而M基因3处氨基酸位点突变为V27A、A30T、D44A,提示对金刚烷胺类药物耐药性增加。【结论】本研究分离鉴定的毒株为G4基因型欧亚类禽猪流感病毒,关键氨基酸位点分析提示该毒株具有适应在哺乳动物中复制和毒力增强的特征。本研究结果为广东地区猪流感的防控提供了参考数据。

关键词：欧亚类禽猪流感病毒分离鉴定序列分析 H1N1亚型

鹅星状病毒Ⅰ型与Ⅱ型双重荧光定量PCR检测方法的建立与应用

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中国家禽 2024年

作者：姚展杏王超林寅盛赵丹张嘉家伍辉吉朱婉君张济培陈济铛佛山天牧生物科技有限公司佛山科学技术学院生命科学与工程学院

为建立一种快速检测鹅星状病毒（Goose astrovirus,GAstV）Ⅰ型（GAstV-1）与Ⅱ型（GAstV-2）的SYBR GreenⅠ双重实时荧光定量PCR检测方法，试验根据GAstV-1的ORF1a特异保守序列与GAstV-2的ORF2特异保守序列分别设计1对引物，将PCR扩增... 详细信息

为建立一种快速检测鹅星状病毒（Goose astrovirus,GAstV）Ⅰ型（GAstV-1）与Ⅱ型（GAstV-2）的SYBR GreenⅠ双重实时荧光定量PCR检测方法，试验根据GAstV-1的ORF1a特异保守序列与GAstV-2的ORF2特异保守序列分别设计1对引物，将PCR扩增的两个片段分别克隆至pMD18-T载体，构建重组质粒作为阳性质粒标准品，建立检测并鉴别GAstV-1与GAstV-2的SYBR GreenⅠ双重实时荧光定量PCR方法，并对该方法的特异性、灵敏性、重复性进行评估，并运用该方法对28份疑似痛风雏鹅临床样品进行检测。结果显示：建立的SYBR GreenⅠ双重实时荧光定量PCR方法检测GAstV-1、GAstV-2的标准曲线相关系数均在0.99以上，批间、批内重复变异系数均小于0.7%，最低检测限度均为10 copies/μL；该方法对鸭肝炎病毒、禽流感病毒、鹅细小病毒均无特异性扩增，同时检测GAstV-1与GAstV-2未出现交叉反应；该方法检测28份临床样品的GAstV阳性率为92.8%，其中GAstV-1和GAstV-2均为阳性的有6份，仅GAstV-2阳性的有18份，仅GAstV-1阳性的有2份。研究表明，建立的荧光定量PCR检测方法可用于GAstV-1与GAstV-2的鉴别检测，并且当前引发GAstV感染的主要病原依然是GAstV-2,GAstV-1和GAstV-2混合感染情况也同时存在。

关键词：鹅星状病毒 GAstV-1 GAstV-2 双重荧光定量PCR 雏鹅痛风