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柑橘黄龙病隐症寄主九里香内生细菌分离及功能鉴定

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微生物学通报 2012年第10期39卷 1418-1427页

作者：殷幼平李佳林亚玉陈世伟王中康重庆大学生命科学学院重庆市基因功能及调控重点实验室重庆市杀虫真菌生物农药工程技术中心重庆400030 亚洲果业广西利添柑橘生物技术公司广西合浦536128

【目的】分析黄龙病高发区的九里香植株叶及茎干中内生细菌,为寻找具有抗柑橘黄龙病的内生细菌奠定基础。【方法】利用平板培养法及基于16S rDNA的限制性酶切长度多态性(Restriction fragment length polymorphism,RFLP)序列分子鉴定法... 详细信息

【目的】分析黄龙病高发区的九里香植株叶及茎干中内生细菌,为寻找具有抗柑橘黄龙病的内生细菌奠定基础。【方法】利用平板培养法及基于16S rDNA的限制性酶切长度多态性(Restriction fragment length polymorphism,RFLP)序列分子鉴定法,对九里香植物内生细菌进行多样性分析。【结果】在兼性厌氧的生长环境下,从九里香植株中分离获得可培养内生细菌26株,分属于9个细菌属的14个种,其中肠杆菌属(Enterobacter sp.)(IF=19.23%)、芽胞杆菌属(Bacillus sp.)(IF=38.46%)为九里香可培养内生细菌的优势菌属。茎干中内生细菌丰度高于叶中内生菌丰度。建立了九里香内生细菌16S rDNA文库,对文库质量检测显示,该克隆文库的覆盖度(Coverage C)为94.97%,结合Rarefaction曲线分析,表明所构建的克隆文库是相对充分的。对文库中179个阳性克隆进行HaeШ、MspⅠ、RsaⅠ3种限制性内切酶分析,得到20个不同的操作分类单元(Operational taxonomic units,OTUs),其中沙雷氏菌属(Serratia sp.)为九里香植株中内生细菌的绝对优势菌属。测定了14株内生细菌的功能,其中9株菌能产生吲哚-3-乙酸(IAA);具有抗生素(phlD)合成能力的内生细菌有4株;结合nifH和NFb固氮培养基确定有3株内生细菌具有固氮能力;1株内生细菌具有ACC脱氨酶合成能力;8株内生细菌具有铁细胞合成能力;3株内生细菌具有淀粉水解能力;2株内生细菌显示强阳性的蛋白酶合成能力,4株内生细菌具有以上4种功能。【结论】九里香植株中内生细菌具有丰富的多样性,并且可能对九里香植株生长发育及抗生物和非生物胁迫有着重要的生理功能。

关键词：柑橘黄龙病功能鉴定细菌分离九里香植物内生细菌植株生长发育平板培养法 DNA文库

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柑橘黄龙病防控药剂筛选试验初报

植物保护 2014年第2期40卷 166-170页

作者：陈仕钦卢小林陈玉龙吴东杨必赛王中康重庆大学生命科学学院重庆400030 亚洲果业广西利添生物科技发展有限公司合浦536128

为筛选有效防治罹病柑橘植株体内黄龙病菌的药剂,选取6种药剂进行韧皮部输液,利用实时定量PCR对病株体内带菌量进行动态监测以确定相对防效.结果表明,连续施药8个月后,硫酸铜、布罗波尔处理组和对照组带菌量下降了20％～30％,2,2-二溴-3... 详细信息

为筛选有效防治罹病柑橘植株体内黄龙病菌的药剂,选取6种药剂进行韧皮部输液,利用实时定量PCR对病株体内带菌量进行动态监测以确定相对防效.结果表明,连续施药8个月后,硫酸铜、布罗波尔处理组和对照组带菌量下降了20％～30％,2,2-二溴-3-次氮基丙酰胺、异噻唑啉酮以及氨苄青霉素带菌量减少了80％以上;ZnSO4处理带菌量下降了65.60％.各观察期内相对防效都超过50％的药剂有2,2-二溴-3-次氮基丙酰胺（≥50％）和氨苄青霉素（≥70％）.相对防效分析表明,施药后8个月1 g/L 2,2-二溴-3-次氮基丙酰胺、异噻唑啉酮、氨苄青霉素相对防效分别达到了89.75％、83.72％和87.27％,初步判断这3种药剂对黄龙病病树有防控效果.

关键词：黄龙病韧皮部 2,2-二溴-3-次氮基丙酰胺异噻唑啉酮氨苄青霉素

亚洲韧皮杆菌兼性厌氧型伴生细菌鉴定及优势菌群分析

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微生物学通报 2011年第9期38卷 1362-1370页

作者：李颜方殷幼平王玉玺李佳陈世伟王中康重庆大学生物工程学院基因工程研究中心重庆400030 农业部全国农业技术推广服务中心北京100126 广西利添生物科技发展(合浦)有限公司广西北海536128

以定向分离培养和基于16S rDNA的PCR-DGGE(Denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)方法,分析感黄龙病柑橘与健康柑橘植株不同部位的内生细菌多样性,分离柑橘组织共获得19株可培养的兼性厌氧型内生细菌,经形态、生理生化结合16S ... 详细信息

以定向分离培养和基于16S rDNA的PCR-DGGE(Denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)方法,分析感黄龙病柑橘与健康柑橘植株不同部位的内生细菌多样性,分离柑橘组织共获得19株可培养的兼性厌氧型内生细菌,经形态、生理生化结合16S rDNA分子方法鉴定其隶属于12个属,其中短小杆菌属Curtobacterium sp.(IF:29.07%)、芽孢杆菌属Bacillus sp.(IF:23.12%)和微杆菌属Microbacterium sp.(IF:21.09%)为罹病植株的优势菌群,芽孢杆菌属Bacillus sp.(IF:21.03%)、动性球菌属Planococcus sp.(IF:20.69%)和假单胞菌属Pseudomonas sp.(IF:17.44%)为无症健株的优势菌群。对DGGE方法得到的50条16S rDNA目标条带进行序列比对,共鉴定出9个属的细菌,结果表明沙雷氏菌属Serrations sp.(IF:28%)是优势菌属,泛菌属Pantoea sp.(IF:14%)是次优势菌属;病果桔络中黄龙病菌含量最高(>1%),而罹病植株其他部位的黄龙病菌丰度较低。PCR-DGGE图谱也显示感病和健康柑橘组织的内生细菌存在差异。

关键词：黄龙病内生细菌定向分离培养 16SrRNA多样性分析

以矿物油为基础的柑橘病虫防控技术——柑橘病虫减施增效防控技术模式探讨

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广西植保 2018年第4期31卷 22-26页

作者：全金成江一红岑伊静陈慈相谭炳林广西特色作物研究院/广西柑橘生物学重点实验室桂林市541004 华南农业大学资环学院广州市510642 江西省赣州市果业局植保站赣州市341000 法国道达尔石油公司作物保护部上海市200001

本文对"以矿物油为基础的柑橘病虫防控技术"进行简介,该技术是一项以园艺级矿物油为基础药剂,视果园病虫发生情况及物候期,单用或添加少量高效、低毒、低残留化学农药的柑橘病虫防控技术,既能有效防治果园中常见病虫,实现可持续控制,又... 详细信息

本文对"以矿物油为基础的柑橘病虫防控技术"进行简介,该技术是一项以园艺级矿物油为基础药剂,视果园病虫发生情况及物候期,单用或添加少量高效、低毒、低残留化学农药的柑橘病虫防控技术,既能有效防治果园中常见病虫,实现可持续控制,又能减少农药残留,降低用药成本,是适合当前柑橘病虫减量增效防技术控模式之一。

关键词：矿物油柑橘病虫减施增效防控技术模式

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柑橘黄龙病菌RAA检测技术研究与应用

农业技术与装备 2022年第9期 41-44,47页

作者：陈海云邱英华滕丽琼郑苏华南宁众册生物科技有限公司广西壮族自治区南宁530007

以柑橘黄龙病亚洲韧皮杆菌保守基因序列为靶基因设计特异性引物,经引物筛选和反应条件的优化,建立黄龙病菌的重组酶等温扩增的快速检测方法。该方法在39℃反应温度下20min即可实现靶标基因片段的有效扩增。特异性分析结果表明RAA方法检... 详细信息

以柑橘黄龙病亚洲韧皮杆菌保守基因序列为靶基因设计特异性引物,经引物筛选和反应条件的优化,建立黄龙病菌的重组酶等温扩增的快速检测方法。该方法在39℃反应温度下20min即可实现靶标基因片段的有效扩增。特异性分析结果表明RAA方法检测柑橘黄龙病病菌与其他常见致病菌菌株间不存在交叉反应,结果表明,RAA方法操作简单、费用低廉、特异性强、灵敏度高、快速高效、操作简单、检测结果直观、对仪器设备要求低等特点,是一项具有广泛前景的方法,为检验黄龙病菌的检测提供新的发展方向。

关键词：柑橘黄龙病鉴定检测方法等温核酸扩增

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