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四氢生物蝶呤促进肝细胞癌肿瘤血管形成的机制

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中华肿瘤杂志 2016年第11期38卷 806-811页

作者：代佑果甘平李为明姚乾李勇裴波崔进昆明医科大学第三附属医院云南省肿瘤医院腹部外科 650118 昆明医科大学第二附属医院胃肠外科 650101 昆明医科大学第三附属医院云南省肿瘤医院肿瘤研究所 650118 昆明医科大学第二附属医院病理科 650101

目的探讨四氢生物蝶呤（BH4）对肝细胞癌（简称肝癌）肿瘤血管形成的作用及机制。方法BALB/c-nu小鼠左腋皮下接种人肝癌HepG-2细胞，并采用随机数字表法分为BH4组和对照组，其中BH4组按20 mg/kg BH4每天腹腔注射2周，对照组给予等量生... 详细信息

目的探讨四氢生物蝶呤（BH4）对肝细胞癌（简称肝癌）肿瘤血管形成的作用及机制。方法BALB/c-nu小鼠左腋皮下接种人肝癌HepG-2细胞，并采用随机数字表法分为BH4组和对照组，其中BH4组按20 mg/kg BH4每天腹腔注射2周，对照组给予等量生理盐水。采用高效液相色谱法（HPLC）检测BH4水平，Griess试剂法检测血浆一氧化氮（NO）水平，实时荧光定量PCR检测K-ras mRNA水平，Western blot法检测鸟苷三磷酸环化水解酶Ⅰ型（GTPCH）、内皮一氧化氮合酶（eNOS）、磷酸化eNOS（p-eNOS）、蛋白激酶B （Akt）和p-Akt的表达。结果BH4组和对照组小鼠肿瘤组织中BH4水平分别为（0.24±0.02）μg/ml和（0.17±0.01）μg/ml，差异有统计学意义（P〈0.01）。BH4组和对照组的肿瘤体积分别为（191.05±8.70）mm^3和（103.10±5.03）mm^3，差异有统计学意义（P〈0.01）。BH4组和对照组小鼠肿瘤组织中NO水平分别为（51.44±2.90）mmol/L和（24.77±0.54）mmol/L，差异有统计学意义（P〈0.01）。BH4组肿瘤组织中CD34、K-ras mRNA、p-eNOS、p-Akt和GTPCH表达水平明显高于对照组，差异均有统计学意义（P〈0.01）。结论BH4作为eNOS关键辅助因子，可以激活野生型Ras-PI3K/Akt路径，促进肿瘤组织产生NO，从而诱导新生血管形成，为针对靶向BH4合成路径抑制肿瘤血管的形成提供了一些潜在的靶点。

关键词：肝肿瘤裸鼠四氢生物蝶呤一氧化氮一氧化氮合酶血管形成

miRNA干扰Rap1对肝癌细胞凋亡的影响

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世界华人消化杂志 2013年第10期21卷 894-898页

作者：甘平查勇姚乾陈真谭晶昆明医科大学第三附属医院(云南省肿瘤医院)腹部外科云南省昆明市650118

目的:探讨抑制/激活蛋白(repressor/activator protein,Rap1)对肝癌细胞凋亡的影响及其作用机制.方法:肝癌细胞HepG2实验分组为:Rap1miRNA转染组、空质粒组、对照组(空白对照组).用流式细胞仪检测各组肝癌细胞凋亡率.采用Westernblot检... 详细信息

目的:探讨抑制/激活蛋白(repressor/activator protein,Rap1)对肝癌细胞凋亡的影响及其作用机制.方法:肝癌细胞HepG2实验分组为:Rap1miRNA转染组、空质粒组、对照组(空白对照组).用流式细胞仪检测各组肝癌细胞凋亡率.采用Westernblot检测各组细胞中Rap1的表达,用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)p65的表达.结果:流式细胞仪检测结果提示,转染后72h,Rap1 miRNA组肝癌细胞凋亡率,比空质粒组和对照组高(33.0%±5.8%vs8.2%±2.5%,0.6%±0.2%,P<0.05).Rap1 miRNA转染组中Rap1,NF-κBp65表达下降.结论:miRNA干扰Rap1能促进肝癌细胞凋亡.同时伴有NF-κBp65表达下降.

关键词：肝细胞肝癌抑制激活蛋白凋亡

miR-184通过TIMP-2/MMP-14促进PNX模型中代偿性肺生长

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中国病理生理杂志 2023年第12期39卷 2214-2222页

作者：彭静向旭东王忠慧王琼川邵世豪马维浩朱波波赵力昆明医科大学第三附属医院(云南省肿瘤医院)麻醉科云南昆明650118 昆明医科大学第三附属医院(云南省肿瘤医院)胸外科云南昆明650118

目的:探究微小RNA-184(miR-184)对多原发肺癌(MPLC)肺叶切除术后代偿性肺生长(CLG)的影响和作用机制。方法:(1)收集MPLC患者和肺叶切除术后恢复较好患者(CLG)的肺组织样本(n=16)。RT-qPCR检测miR-184的表达。(2)将人肺泡上皮细胞根据转... 详细信息

目的:探究微小RNA-184(miR-184)对多原发肺癌(MPLC)肺叶切除术后代偿性肺生长(CLG)的影响和作用机制。方法:(1)收集MPLC患者和肺叶切除术后恢复较好患者(CLG)的肺组织样本(n=16)。RT-qPCR检测miR-184的表达。(2)将人肺泡上皮细胞根据转染物分为NC-mimic组、miR-184 mimic组、OE-NC组、金属蛋白酶组织抑制物2(TIMP-2)过表达(OE-TIMP-2)组和miR-184 mimic+OE-TIMP-2组(n=3)。RT-qPCR检测细胞中miR-184、TIMP-2 mRMA和基质金属蛋白酶14(MMP-14)mRNA表达;Western blot检测TIMP-2和MMP-14蛋白表达;CCK-8和集落形成实验检测细胞增殖能力。(3)将C57BL/6J小鼠分为肺切除术(PNX)组和PNX+miR-184 mimic组(n=5)。用flexiVent肺功能检测系统检测小鼠肺活量和肺顺应性;水置换法检测肺容量;HE染色观察肺组织变化。结果:miR-184在肺叶切除术后恢复较好患者中的表达显著升高(P<0.01)。过表达miR-184能促进人肺泡上皮细胞增殖和PNX后小鼠肺功能恢复。miR-184与TIMP-2存在靶向结合关系;过表达miR-184通过抑制TIMP-2促进MMP-14的表达,进而促进人肺泡上皮细胞增殖和PNX后小鼠肺功能恢复。结论:miR-184通过TIMP-2/MMP-14轴促进PNX后的CLG。

关键词：多原发肺癌代偿性肺生长肺切除术微小RNA-184 金属蛋白酶组织抑制物2 基质金属蛋白酶14

表皮葡萄球菌胞间黏附素基因操纵子对细菌与真菌混合生物膜相关炎症作用影响的体内研究

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中国修复重建外科杂志 2021年第10期35卷 1328-1335页

作者：张国婧万子琳王小燕黄云超周友全陈颖雷玉洁乔丽梅昆明医科大学附属延安医院心脏大血管外科昆明650051 昆明医科大学第三附属医院(云南省肿瘤医院)胸外科昆明650118 昆明医科大学第三附属医院(云南省肿瘤医院)检验科昆明650118

目的探讨表皮葡萄球菌胞间黏附素基因(intercellular adhesion,ica)操纵子对气管导管材料表面表皮葡萄球菌与白假丝酵母菌混合生物膜相关炎症作用影响的体内研究。方法取表皮葡萄球菌标准株RP62A(ica操纵子阳性,阳性组)、ATCC12228(ica... 详细信息

目的探讨表皮葡萄球菌胞间黏附素基因(intercellular adhesion,ica)操纵子对气管导管材料表面表皮葡萄球菌与白假丝酵母菌混合生物膜相关炎症作用影响的体内研究。方法取表皮葡萄球菌标准株RP62A(ica操纵子阳性,阳性组)、ATCC12228(ica操纵子阴性,阴性组)制备浓度为1×10^(6)CFU/mL的菌液,分别与相同浓度的白假丝酵母菌标准株ATCC10231菌液按照1∶1比例制备成混合培养菌液后,与气管导管材料片孵育24 h,扫描电镜观察材料表面混合生物膜形成情况。取4~6月龄新西兰兔30只分为两组(n=15),分别于气管旁植入孵育24 h的阳性组及阴性组气管导管材料。于术前及术后1、3、7 d测量两组兔体质量。术后1、3、7 d,采用ELISA检测试剂盒检测血浆中IL-1β、IL-6、TNF-α和单核细胞趋化蛋白1(monocytechemotactic protein 1,MCP-1)水平;术后7 d,扫描电镜观察取出的气管导管材料片表面混合生物膜形成情况,HE染色观察材料周围组织炎症浸润情况,平板菌落计数法观察心脏、肺、肝脏、肾脏细菌感染情况。结果扫描电镜观察示体外孵育24 h后阳性组可见明显混合生物膜结构,阴性组未见混合生物膜形成。体内实验显示两组术前及术后1、3、7 d体质量比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。与阴性组相比,阳性组术后1 d IL-1β及MCP-1水平,术后3、7 d IL-1β、MCP-1、IL-6、TNF-α水平均升高,组间比较差异有统计学意义(P0.05),阳性组肺、肾脏细菌感染数量高于阴性组(P<0.05)。结论 ica操纵子在表皮葡萄球菌与白假丝酵母菌混合感染中可能由于增强了混合生物膜结构及其在体内的传播,导致炎症因子升高,细菌难以清除,感染迁延不愈。

关键词：以生物材料为中心的感染胞间黏附素基因操纵子表皮葡萄球菌白假丝酵母菌混合生物膜兔

表皮葡萄球菌附属基因调节子C特异结合多肽对聚氯乙烯材料表面细菌生物膜形成作用的体外研究

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中国修复重建外科杂志 2019年第3期33卷 349-355页

作者：杨继琛邱良婷黄云超陈雅饶孙银阮文鹏赵光强叶联华昆明医科大学第三附属医院(云南省肿瘤医院)胸外科昆明650118

目的探讨表皮葡萄球菌附属基因调节子C(accessory gene regulator C,agr C)特异结合多肽(简称为N1)对聚氯乙烯(polyvinyl chloride,PVC)材料表面表皮葡萄球菌生物膜形成作用的体外研究。方法以表皮葡萄球菌ATCC35984(生物膜表型阳性)和A... 详细信息

目的探讨表皮葡萄球菌附属基因调节子C(accessory gene regulator C,agr C)特异结合多肽(简称为N1)对聚氯乙烯(polyvinyl chloride,PVC)材料表面表皮葡萄球菌生物膜形成作用的体外研究。方法以表皮葡萄球菌ATCC35984(生物膜表型阳性)和ATCC12228(生物膜表型阴性)作为研究对象。首先将两菌株分别加入浓度为100、200、400、800、1 600μg/mL的N1培养,以相同浓度agrC特异结合无关肽(简称为N0)培养作为对照;24 h后测定吸光度(A)值,确定N1最佳抑菌浓度。两菌株与最佳抑菌浓度的N1及N0分别培养,6、12、18、24、30、48 h测定A值,观察N1对表皮葡萄球菌生物膜形成能力的影响;在此基础上与PVC材料片培养6、12、18、24、30 h,扫描电镜观察PVC材料表面生物膜的表面结构;另取与ATCC35984菌株培养6、12、18、24 h的PVC材料片,激光共聚焦显微镜观察生物膜厚度。结果 A值测定显示,N1对ATCC35984菌株最佳抑菌浓度为800μg/mL。ATCC12228菌株与N1及N0培养后均未形成明显生物膜;ATCC35984菌株与N1及N0培养12 h时,生物膜形成能力差异有统计学意义(P0.05)。扫描电镜观察,ATCC35984菌株与N1及N0培养后,随时间延长均见成熟生物膜结构;而ATCC12228菌株培养后均未见生物膜形成。激光共聚焦显微镜观察,ATCC35984菌株与N1培养12 h时细菌量明显少于与N0培养,且以死细菌居多;6、18、24 h时两种培养条件下细菌数量未见明显差别,均以活细菌居多;同时,N1培养12、18 h时生物膜厚度明显小于N0培养(P<0.05)。结论 N1抑制表皮葡萄球菌生物膜形成的强度有量效关系;其在聚集期阻碍细菌的增殖和聚集,抑制生物膜形成,对成熟生物膜抑制作用不明显。

关键词：表皮葡萄球菌细菌生物膜附属基因调节子C 特异结合多肽聚氯乙烯

环状RNA RNF13通过下调miR-196b-5p的表达促进结直肠癌细胞的增殖

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肿瘤 2019年第11期39卷 887-896页

作者：余昆李强王伟雅蔡昕怡程先硕李云峰昆明医科大学第三附属医院(云南省肿瘤医院)结直肠外科

目的:探讨结直肠癌(colorectal cancer,CRC)中环状RNA(circular RNA,circRNA)RNF13(circRNF13)的表达水平及临床意义,并探索circRNF13调控微RNA(microRNA,miRNA,miR)-196b-5p表达对CRC细胞增殖的影响。方法:采用circRNA芯片从6对CRC患者癌和癌旁组织中筛选出差异表达的circRNA;实时荧光定量PCR法检测80例CRC患者癌和癌旁组织及CRC细胞和人结肠黏膜上皮细胞FHC中circRNF13和miR-196b-5p的表达水平,并分析其与患者临床病理特征的关系。构建circRNF13过表达载体(circRNF13-OE),以空载体pcDNA(+)作为阴性对照(negative control,NC),分别转染HCT116和HT29细胞;CCK-8法检测细胞的增殖能力,实时荧光定量PCR法检测细胞中miR-196b-5p的表达水平。HCT116和HT29细胞分别转染NC、circRNF13-OE、miR-196b-5p-抑制子(miR-196b-5p-inhibitor)、circRNF13-OE+miR-196b-5p-模拟物(miR-196b-5p-mimics),再行CCK-8法检测细胞的增殖能力。结果:circRNA芯片检测结果显示,circRNF13在CRC组织中的表达水平明显低于癌旁组织。实时荧光定量PCR验证结果显示,CRC组织中circRNF13表达水平显著低于癌旁组织(P <0.001)。HCT116、HT29、SW620和SW480细胞中circRNF13的表达水平均明显低于FHC细胞(P值均<0.001)。circRNF13过表达后,HCT116和HT29细胞增殖能力受到明显抑制(P值均<0.05)。CRC组织以及HCT116、HT29、SW620和SW480细胞中miR-196b-5p的表达水平较癌旁组织和FHC细胞明显升高(P值均<0.01)。CRC组织中circRNF13的表达水平与miR-196b-5p的表达水平呈负相关(P=0.000 1,r=-0.484)。CRC患者癌组织中circRNF13和miR-196b-5p的表达水平与淋巴结转移、分化程度及TNM分期有关(P值均<0.05)。与circRNF13-OE组细胞相比,circRNF13-OE+miR-196b-5p-mimics组HCT116和HT29细胞的增殖能力均明显提高(P值均<0.05)。结论:CRC组织中circRNF13的表达水平下调,上调circRNF13的表达水平可抑制CRC细胞增殖,circRNF13通过下调miR-196b-5p表达促进CRC细胞的增殖。

关键词：结直肠肿瘤环状RNA 微RNAs 细胞增殖

细胞角蛋白19对肝细胞癌生物学行为调控的研究进展

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中国普通外科杂志 2018年第1期27卷 107-113页

作者：刘金生査勇云南省肿瘤医院/昆明医科大学附属第三医院腹部外科云南昆明650118

肝细胞癌(HCC)是消化系统肿瘤中的常见类型之一。近年来已证实细胞角蛋白19(K19)阳性的HCC具有早期转移、低分化与高侵袭性等恶性生物学特性。因此为了更好的明确K19在HCC中对癌症干细胞、血管生成、肿瘤细胞侵袭性以及凋亡的作用以及... 详细信息

肝细胞癌(HCC)是消化系统肿瘤中的常见类型之一。近年来已证实细胞角蛋白19(K19)阳性的HCC具有早期转移、低分化与高侵袭性等恶性生物学特性。因此为了更好的明确K19在HCC中对癌症干细胞、血管生成、肿瘤细胞侵袭性以及凋亡的作用以及相关影响,笔者对K19在HCC中的相关生物学行为进行综述。

关键词：癌肝细胞角蛋白19 肿瘤侵润综述文献

调强放疗和三维适形放疗及普通放疗在局部进展期中低位直肠癌患者中的应用比较

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中华胃肠外科杂志 2018年第12期21卷 1414-1420页

作者：张策董建华沈焘李云峰杨之斌程先硕罗慧杨家莉施致裕王伟雅张旋昆明医科大学第三附属医院云南省肿瘤医院结直肠外科 650118

目的探讨调强放疗、三维适形放疗及普通放疗在局部进展期中低位直肠癌患者中的应用比较。方法2015年1月至2016年12月期间,昆明医科大学第三附属医院结直肠外科对临床分期为cT3N+M0或cT4N0/+M0局部进展期中低位直肠癌患者予以术前同期放... 详细信息

目的探讨调强放疗、三维适形放疗及普通放疗在局部进展期中低位直肠癌患者中的应用比较。方法2015年1月至2016年12月期间,昆明医科大学第三附属医院结直肠外科对临床分期为cT3N+M0或cT4N0/+M0局部进展期中低位直肠癌患者予以术前同期放化疗,将其中资料完整的93例纳入本回顾性队列研究,根据放疗方式的不同将患者分为调强放疗组(17例)、三维适形放疗组(28例)和普通放疗组(48例)。普通放疗频率及剂量为:1次/d,5次/周,共5周,单次剂量为2.0Gy,总剂量为50Gy。三维适形及调强放疗频率及剂量均为:1次/d,5次/周,共计23~28次,单次剂量为1.8~2.0Gy,总剂量为45.0~50.4Gy;化疗方案均使用卡培他滨片,按照825mg/m2剂量,每天2次,每周5d,放疗时同期服用。比较上述3组患者治疗效果、放化疗不良反应及治疗前后免疫功能的变化情况。结果3组患者基本资料的比较,差异无统计学意义(均P>0.05)。调强放疗组和三维适形放疗组患者接受永久造口的比率分别为29.4%(5/17)和32.1%(9/28),均低于普通放疗组患者(58.3%,28/48),差异有统计学意义(χ2=7.982,P=0.030),但调强放疗组与三维适形放疗组患者接受永久性造口比率差异无统计学意义(χ^2=0.037,P=0.848)。全组患者病理完全缓解(pCR)为23.7%(22/93),三维适形放疗组患者病理完全缓解(pCR)率为39.3%(11/28),高于普通放疗组和调强放疗组[分别为12.5%(6/48)和29.4%(5/17)],差异有统计学意义(χ^2=7.407,P=0.025),但普通放疗组患者与调强放疗组患者pCR率之间的差异无统计学意义(χ^2=2.554,P=0.110)。3组患者均未出现3级以上不良反应,骨髓抑制和肝肾功能相关标志物的不良反应情况、消化道反应以及放射性皮炎发生率的差异均无统计学意义(均P>0.05)。接受同期放化疗治疗后,调强放疗组和普通放疗组患者CD3+/CD4+细胞比率均较治疗前下降[两组分别为(31.1±10.9)比(23.1±9.3),(33.6±7.2)比(27.4±10.7)],CD3+/CD8+细胞比率上调[两组分别为(24.8±10.9)比(36.1±15.2),(24.0±8.3)比(30.9±14.4)],差异均具有统计学意义(均P三维适形放疗组患者治疗前后指标的差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后,调强放疗组患者CD4+/CD8+细胞比率下降[(1.6±1.0)比(0.8±0.6),t=3.838,P=0.003],但普通放疗组和三维适形放疗组患者治疗前后CD4+/CD8+细胞比率的差异无统计学意义(均P>0.05)。结论调强放疗和三维适形放疗能够显著减少患者获得永久性造口比率,三维适形放疗方案能使患者获得更高的pCR率,而调强放疗较三维适形放疗方案在患者近期疗效中并未表现明显优势,反而使患者出现显著免疫功能抑制状态。因此,建议三维适形放疗方案可作为局部进展期中低位直肠癌患者、尤其伴随免疫功能抑制患者的最佳术前治疗策略。

关键词：直肠肿瘤普通放疗调强放疗三维适形放疗免疫功能

环状RNA对肝细胞癌的血管生成、免疫细胞和能量代谢调控的研究进展

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中国普通外科杂志 2023年第7期32卷 1079-1086页

作者：叶道文沈万波查勇云南省肿瘤医院/昆明医科大学第三附属医院肝胆胰外科云南昆明650118

肝细胞癌(HCC)是原发性肝癌最主要的病理类型,占肝癌患者总数的75%~85%。HCC的发生发展与编码RNA和非编码RNA的调节功能密切相关,其中环状RNA(circRNA)代表了一类新的内源性非编码RNA。circRNA也是一种共价闭环RNA,它通过对前体mRNA的... 详细信息

肝细胞癌(HCC)是原发性肝癌最主要的病理类型,占肝癌患者总数的75%~85%。HCC的发生发展与编码RNA和非编码RNA的调节功能密切相关,其中环状RNA(circRNA)代表了一类新的内源性非编码RNA。circRNA也是一种共价闭环RNA,它通过对前体mRNA的反向剪接环化形成。与线性RNA相比,circRNA没有5'-末端帽子和3'-末端poly A尾巴结构,可以调节哺乳动物中的基因表达。circRNA的结构保守且稳定,对核酸外切酶具有更高的耐受性。在HCC中,circRNA已被证明可以调节肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭和细胞死亡抵抗力。它们在调节血管生成、基因组不稳定、免疫监视和代谢转换方面的作用正在显现。但circRNA在HCC中所涉相关机制的细节仍然难以解析,尤其在调控HCC的血管生成、调节HCC细胞躲避免疫细胞的监测与攻击和调节细胞能量代谢为HCC细胞供能,从而引发HCC的增殖、侵袭和转移等方面。研究在HCC中起关键调控作用的circRNA,针对其靶向治疗能有望提高HCC的治疗效果,并改善患者预后。笔者就HCC中异常表达的circRNA,以及circRNA对HCC的血管生成、免疫细胞和能量代谢的调控做一综述。

关键词：癌,肝细胞 RNA,环状新生血管化,病理性免疫能量代谢综述