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外源ble基因在杜氏盐藻中的瞬时表达

实验生物学报 2005年第5期38卷 411-416页

作者：李子兴孙煜刘志学宋任涛许政暟上海大学生命科学学院上海200444 中科院植物生理生态研究所上海200032

利用电击法将带有ble基因的pSP124S转入杜氏盐藻细胞内进行瞬时表达,研究了外源基因在盐藻内的存留及表达情况,确定了合适的电击转化条件,发现利用电击法可以使大量的质粒导入盐藻细胞,质粒在细胞中逐渐降解但至少96h内可以检测得到,外... 详细信息

利用电击法将带有ble基因的pSP124S转入杜氏盐藻细胞内进行瞬时表达,研究了外源基因在盐藻内的存留及表达情况,确定了合适的电击转化条件,发现利用电击法可以使大量的质粒导入盐藻细胞,质粒在细胞中逐渐降解但至少96h内可以检测得到,外源启动子能够使ble基因有效转录,转录至少可以持续72h,ble基因能够在盐藻细胞中正确翻译,可以作为盐藻遗传转化研究的筛选标记。

关键词：杜氏盐藻 ble基因电击法瞬间表达外源基因瞬时表达 e基因盐藻细胞转化条件筛选标记

小麦胚乳细胞内、细胞间胞质骨架分布格局的超微结构观察

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Acta Botanica Sinica 1998年第4期40卷 298-302页

作者：张伟成李瑞秋严文梅高小彦中国科学院上海植物生理研究所

以小麦（ＴｒｉｔｉｃｕｍａｅｓｔｉｖｕｍＬ．）幼嫩胚乳为材料，经ＴｒｉｔｏｎＸ１００抽提、ＤＧＤ（ｄｉｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌｄｉｓｔｅａｒａｔｅ）渗透、包埋，制备去包埋剂超薄切片，对细胞内、细胞间胞质骨架的... 详细信息

以小麦（ＴｒｉｔｉｃｕｍａｅｓｔｉｖｕｍＬ．）幼嫩胚乳为材料，经ＴｒｉｔｏｎＸ１００抽提、ＤＧＤ（ｄｉｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌｄｉｓｔｅａｒａｔｅ）渗透、包埋，制备去包埋剂超薄切片，对细胞内、细胞间胞质骨架的分布格局与特征进行了电镜观察。由所获图像可见，胞质骨架呈主要由微管、微丝组成的三维网络结构；特别值得注意的是，有不少５～７ｎｍ的微丝在多处从网络表层向胞壁界面方向突出，并时而可见其横贯分界壁连接相邻骨架网络而将相邻细胞骨架联成一体。胚乳组织中微丝的跨胞分布以两种形式存在，直径达１００～２００ｎｍ微丝束的跨越和单个微丝的分散贯穿，看来这与该组织中开放态胞间通道与正常胞间连丝同时并存相吻合。初步讨论了微丝参与正常胞间连丝结构的可能性。

关键词：胞质骨架胚乳微丝胞间连丝小麦超微结构

光合菌SDH2 hupT基因的突变与吸氢酶表达

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 1999年第3期31卷 41-45页

作者：李强吴永强中国科学院上海植物生理研究所

利用三亲本杂交将自杀质粒ｐＳＥ８引入光合细菌Ｒｏｄｏｂａｃｔｅｒｓｐ．ＳＤＨ２０菌株，经过质粒上插入了ｋａｎＲ基因的ｈｕｐＴ基因片段与受体基因组同源双交换，构建成ｈｕｐＴ插入突变株ＳＤＨＴ１和ＳＤＨＴ２。用Ｓｏｕｔｈ... 详细信息

利用三亲本杂交将自杀质粒ｐＳＥ８引入光合细菌Ｒｏｄｏｂａｃｔｅｒｓｐ．ＳＤＨ２０菌株，经过质粒上插入了ｋａｎＲ基因的ｈｕｐＴ基因片段与受体基因组同源双交换，构建成ｈｕｐＴ插入突变株ＳＤＨＴ１和ＳＤＨＴ２。用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交方法对ＨｕｐＴ－突变株作了验证。吸氢酶活性分析表明，ＨｕｐＴ－突变株的吸氢酶活性在厌氧ＭＮ培养基和好氧ＭＧ或ＭＮ培养基生长时比野生型菌株提高一倍左右，而以ＭＧ培养基厌氧培养时无明显提高。吸氢酶结构基因ｈｕｐＳ表达分析证明，ＨｕｐＴ－突变株ｈｕｐＳ的表达在厌氧ＭＮ培养基和好氧ＭＧ或ＭＮ培养基生长时比野生型提高２～３倍，而在厌氧ＭＧ培养基生长时则提高不明显。由此说明ｈｕｐＴ是吸氢酶合成的负调节基因，同时吸氢酶的表达还受氮源和Ｏ２等环境因素的影响。

关键词：光合细菌吸氢酶负调节基因插入突变

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原核生物中的类钙调蛋白

生物化学与生物物理进展 1995年第2期22卷 98-102页

作者：张蔚文中国科学院上海植物生理研究所

钙是重要的生命元素之一，真核生物中普遍存在介导钙信号的钙调蛋白已有深入的研究，证明钙调蛋白是细胞复杂调控系统中的一个重要成员，但是在原核生物中是否也存在类似的蛋白因子却一直说法不一。自８０年代初在大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅ... 详细信息

钙是重要的生命元素之一，真核生物中普遍存在介导钙信号的钙调蛋白已有深入的研究，证明钙调蛋白是细胞复杂调控系统中的一个重要成员，但是在原核生物中是否也存在类似的蛋白因子却一直说法不一。自８０年代初在大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）中首次发现类钙调蛋白（ｃａｌｍｏｄｕｌｉｎ－ｌｉｋｅ－ｐｒｏｔｅｉｎ）以来，已在多种原核生物中陆续发现了类钙调蛋白的存在，证明其可能参与了原核生物的孢子形成，细胞分裂，生物固氮，异型胞形成和兰细菌光合作用等多种调控功能。文章综述了近年来这一领域的部分研究成果。

关键词：原核生物类钙调蛋白生理功能

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豌豆热激蛋白Hpc60研究

Acta Botanica Sinica 1999年第10期41卷 1090-1093页

作者：陈忠苏维埃汤章城中国科学院上海植物生理研究所上海200032

研究了PEG、NaCl以及作为干旱和盐胁迫响应中信号物质的ABA对豌豆(PisumsativumL.)幼苗中一种热激诱导蛋白———Hpc60表达的影响。结果显示PEG可以提高蛋白的表达水平,其最强诱导能力与38℃热激相近。但NaCl在造成植物同等程度水势下... 详细信息

研究了PEG、NaCl以及作为干旱和盐胁迫响应中信号物质的ABA对豌豆(PisumsativumL.)幼苗中一种热激诱导蛋白———Hpc60表达的影响。结果显示PEG可以提高蛋白的表达水平,其最强诱导能力与38℃热激相近。但NaCl在造成植物同等程度水势下降的情况下对此蛋白没有诱导作用,而且,短时间内还不同程度地降低Hpc60蛋白含量。除引起植株水势的变化外,NaCl处理还显著地改变了胞内Na+和Ca2+的含量。而PEG胁迫后K+、Na+和Ca2+均无明显变化。推测造成PEG和NaCl诱导能力差异的原因可能是NaCl和PEG胁迫伤害的机理不同。NaCl胁迫导致Na+的大量内流,破坏了胞内离子平衡。另外,外源施加ABA不影响此蛋白的含量,推测热激和PEG胁迫对此蛋白的诱导过程不需要ABA中介。

关键词：豌豆热激蛋白干旱盐胁迫

NaCl胁迫下抗盐突变体和野生型小麦Na^+、K^+累积的差异分析

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Acta Botanica Sinica 1999年第5期41卷 515-518页

作者：郭房庆汤章城中国科学院上海植物生理研究所

对抗盐突变体和野生型小麦（ＴｒｉｔｉｃｕｍａｅｓｔｉｖｕｍＬ．）在盐胁迫下Ｎａ＋、Ｋ＋的累积状况进行了比较研究。结果表明，ＮａＣｌ胁迫下突变体根和叶中Ｎａ＋的相对累积较野生型显著地少，同时Ｎａ＋的净累积速率显著地低。... 详细信息

对抗盐突变体和野生型小麦（ＴｒｉｔｉｃｕｍａｅｓｔｉｖｕｍＬ．）在盐胁迫下Ｎａ＋、Ｋ＋的累积状况进行了比较研究。结果表明，ＮａＣｌ胁迫下突变体根和叶中Ｎａ＋的相对累积较野生型显著地少，同时Ｎａ＋的净累积速率显著地低。这种Ｎａ＋相对累积少的状况在叶中表现尤为明显。两者叶中Ｋ＋含量随盐浓度的增加显著下降，但突变体的含量均高于野生型。突变体根中Ｋ＋的含量也显著高于野生型，且这种差异随盐浓度的提高而增大。分别统计突变体和野生型根和叶中Ｎａ＋的含量以及每株幼苗的Ｎａ＋总量以分析二者Ｎａ＋在根和叶中的分布差异，结果表明３００ｍｍｏｌ／ＬＮａＣｌ胁迫９６ｈ后，突变体根中Ｎａ＋的累积量占其整株幼苗Ｎａ＋累积总量的４４４％，而野生型根中含量占其总量的２４３％。相对于野生型而言，在盐胁迫下突变体根中Ｎａ＋分布比例的提高可有效地减少根中Ｎａ＋向地上部分转运。

关键词： NaCl胁迫抗盐突变体 Na^+累积小麦

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莱茵藻胞外碳酸酐酶分子定位与活性诱导

植物学通报 2002年第3期19卷 317-321,335页

作者：何培民徐春和於新建于勇吴维宁张荣铣上海水产大学上海200090 中科院上海植物生理研究所上海200032 南京农业大学南京210095

胞外碳酸酐酶是藻类CCM机制和光合作用的一个重要组分 ,藻类从高CO2 转入低CO2 浓度培养时可诱导出胞外碳酸酐酶。应用金标免疫分子定位和pH调节对胞外碳酸酐酶分子定位和CO2 诱导机制进行研究 ,结果表明 :胞外碳酸酐酶主要分布于胞壁空... 详细信息

胞外碳酸酐酶是藻类CCM机制和光合作用的一个重要组分 ,藻类从高CO2 转入低CO2 浓度培养时可诱导出胞外碳酸酐酶。应用金标免疫分子定位和pH调节对胞外碳酸酐酶分子定位和CO2 诱导机制进行研究 ,结果表明 :胞外碳酸酐酶主要分布于胞壁空间 (细胞质膜与细胞壁之间 ) ,且细胞壁上也有较多分布 ,细胞壁外分布较少。说明胞外碳酸酐酶能从胞壁空间穿过细胞壁。通过CO2 诱导和pH调节(升高 ) ,均可提高碳酸酐酶活性 ,且pH提高幅度越大 ,胞外碳酸酐酶活性也越大 ,说明胞外碳酸酐酶的CO2

关键词：莱茵藻胞外碳酸酐酶分子定位活性诱导

Progress in Research on Intercellular Movement of Protoplasm in Higher Plants

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Acta Botanica Sinica 2002年第9期44卷 1068-1074页

作者：张伟成中国科学院上海植物生理生态研究所上海200032

Since nuclear extrusion was rediscovered in young Allium scale by *** in the years of 1950's systematic investigations on this phenomenon were carried out with various kinds of microscopic techniques and plant materials to collect more effective evidence to clarify the debate about whether the nuclear extrusion is an artifact or normal event. In the cooperative research of S. H. WU and C. H. LOU the normality of the occurrence of nuclear extrusion either in growing part of plant or in senescent tissue has been confirmed. This event is intimately associated with the physiological state of the tissues/cells and may play an important role in redistribution and reutilization of cell contents. Based on the results obtained a hypothesis of intercellular movement of protoplasm as a means of translocation of organic material in plants was suggested. Chromatin extrusion was also discovered in the pollen mother cells (cytomixis) of certain angiosperms by G. C. ZHENG and his team. Intercellular migration of chromatin appears most frequently at the stage of synizesis. Cytomixis has been studied in relation to variation and evolution. Chromosome aberration has been considered to be closely associated with chromatin extrusion. By vital microscopic observations of the live tissues of garlic (Allium sativum L.) bud and wheat (Triticum aestivum L.) ovule combined with cinemicroscopy and video recording it has been uncovered that, not only the nuclear material but also the cytoplasm could traverse the intercellular channels by vigorous contraction and expansion, and they may simultaneously extrude out of a cell but often asynchronously migrate from one cell to another. The involvement of cytoplasmic constituents in intercellular migration was also detected in pollen mother cells with electron microscopy. Regarding the mechanism of intercellular movement a series of experiments provide convincing evidence showing that this kind of movement is an active metabolic proce

关键词： nuclear extrusion plasmodesma

β-1,4-内切木聚糖酶的分离纯化及其性质

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Acta Botanica Sinica 1999年第11期41卷 1212-1216页

作者：邹永龙桑月婵彭建新王国强中国科学院上海植物生理研究所上海200032

通过硫酸铵分级盐析、DEAE-SephadexA50和DEAE－SepharoseCL-6B离子交换层析、FPLC等一系列分离纯化手段，从拟康氏木霉（TrichodermapseudokonigiRifai）固体培养基发酵抽提液中分离得到了Native－PAGE电泳纯的木聚糖酶，SDS-PAGE显示该酶为单肽链结构，分子量约为66kD。该酶的酶反应最适温度为55℃。酶反应的最适pH为4．5。该酶作用于山毛榉木聚糖（Beech－xylan）的Km为20mg/mL，Vmax为3．3μmol·min-1·mg-1。Hg2+、Cu2+对酶反应有较强的抑制作用，而Fe2+、Mn2+对该酶反应则有促进作用。

关键词：拟康氏木霉 β-1.4-内切木聚糖酶分离纯化