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多胺生物合成抑制诱导HL_(60)细胞凋亡相关基因的克隆及表达

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中华肿瘤杂志 1998年第4期20卷 274-276页

作者：冯立新范慕贞中日友好临床医学研究所生化及分子生物学室

目的克隆多胺生物合成抑制剂二氟甲基鸟氨酸（ＤＦＭＯ）诱导ＨＬ６０细胞凋亡的相关基因，分析该基因表达及诱导凋亡的活性。方法采用差示杂交法筛选目的基因克隆；以Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交、形态观察、流式细胞光度法（ＦＣＭ）分析及... 详细信息

目的克隆多胺生物合成抑制剂二氟甲基鸟氨酸（ＤＦＭＯ）诱导ＨＬ６０细胞凋亡的相关基因，分析该基因表达及诱导凋亡的活性。方法采用差示杂交法筛选目的基因克隆；以Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交、形态观察、流式细胞光度法（ＦＣＭ）分析及ＤＮＡ电泳梯形图，分别证明转染细胞中该基因表达及凋亡诱导。结果成功地克隆了ＤＦＭＯ诱导ＨＬ６０细胞凋亡的相关基因ｄＦ４，并证明了ｄＦ４在转染细胞中的表达及其诱导凋亡的活性。结论提示本研究克隆的ｄＦ４基因可能是与调控ＨＬ６０细胞凋亡有关的基因。

关键词：多胺 HL60细胞细胞凋亡基因表达 DFMO 白血病

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DNA计算机的研究和展望

生物化学与生物物理进展 2001年第2期28卷 156-159页

作者：陈惟昌陈志华邱红霞王自强中日友好临床医学研究所生物物理研究室北京100029 中日友好临床医学研究所生物化学及分子生物学研究室北京100029

DNA计算机是计算机科学和分子生物学互相结合、互相渗透而产生的新兴交叉研究领域 .目前已取得较大进展 .DNA计算机是以编码的DNA序列为运算对象 ,通过分子生物学的运算操作以解决复杂的数学难题 .DNA计算机的重要特点是信息容量的巨量... 详细信息

DNA计算机是计算机科学和分子生物学互相结合、互相渗透而产生的新兴交叉研究领域 .目前已取得较大进展 .DNA计算机是以编码的DNA序列为运算对象 ,通过分子生物学的运算操作以解决复杂的数学难题 .DNA计算机的重要特点是信息容量的巨量性和密集性 ,和处理操作的高度并行性 ,通过强力搜索策略迅速得出正确的答案 ,从而使其运算速度大大超过常规计算机的计算速度 .介绍了DNA计算机的近期进展和工作原理及其分子生物学的运算操作过程 .并对DNA计算机的未来发展前景及在生物信息学中的意义 ,进行了分析和讨论 .

关键词： DNA计算机 NP完全问题并行处理强力搜索策略互补DNA链

二氟甲基鸟氨酸及反义bcl-2协同诱导HL60细胞凋亡

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中华肿瘤杂志 2000年第2期22卷 105-108页

作者：贺俊崎范慕贞房青中日友好临床医学研究所生化及分子生物学室北京100029

目的　观察二氟甲基鸟氨酸 (DFMO)及反义bcl 2调控bcl 2基因表达对HL6 0细胞凋亡的诱导作用。方法　构建反义bcl 2逆转录病毒重组体 ,建立产病毒细胞系 ,转染HL6 0细胞 ,用形态观察、生长曲线、FCM分析、集落形成、DNA电泳图谱、分子杂... 详细信息

目的　观察二氟甲基鸟氨酸 (DFMO)及反义bcl 2调控bcl 2基因表达对HL6 0细胞凋亡的诱导作用。方法　构建反义bcl 2逆转录病毒重组体 ,建立产病毒细胞系 ,转染HL6 0细胞 ,用形态观察、生长曲线、FCM分析、集落形成、DNA电泳图谱、分子杂交及免疫组化等方法研究细胞生长特性及细胞凋亡诱导。结果　成功地构建了反义bcl 2逆转录病毒重组体及产病毒细胞系。以此转染HL6 0细胞 ,引起了bcl 2mRNA及蛋白表达下降 ,但生长速率、细胞周期分布及鸟氨酸脱羧酶 (ODC)基因表达水平与亲本细胞比较差别不大 ;无明显的细胞凋亡 ,仅集落形成能力有所减弱。用小剂量DFMO处理反义bcl 2转染的细胞 ,不仅生长受到明显抑制 ,而且可诱导细胞凋亡。结论　DFMO与反义bcl 2对HL6 0细胞增殖抑制及凋亡诱导有协同作用。抑制bcl 2表达能提高肿瘤细胞对DFMO作用的敏感性。

关键词：二氟甲基鸟氨酸反义bcl-2 HL60细胞细胞凋亡

二氟甲基鸟氨酸对人肺癌细胞生长特性的影响及其相关基因ALT-04_(ag)表达调控

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中国医学科学院学报 2002年第4期24卷 377-380,I004页

作者：陈志华柯海萍李红艳房青曹淑兰范慕贞中日友好医院中日友好临床医学研究所生化及分子生物学室北京100029

目的研究抑制多胺生物合成对人肺癌细胞生长特性的影响及该影响与肺癌相关基因ALT-04ag表达调控的关系。方法以细胞形态观察、生长曲线、流式细胞分析、DNA电泳图谱等方法,研究鸟氨酸脱羧酶(ODC)不可逆抑制剂二氟甲基鸟氨酸(DFMO)对人... 详细信息

目的研究抑制多胺生物合成对人肺癌细胞生长特性的影响及该影响与肺癌相关基因ALT-04ag表达调控的关系。方法以细胞形态观察、生长曲线、流式细胞分析、DNA电泳图谱等方法,研究鸟氨酸脱羧酶(ODC)不可逆抑制剂二氟甲基鸟氨酸(DFMO)对人肺鳞癌细胞L78生长特性的影响;根据人肺癌相关抗原ALT-04ag基因片段序列设计引物进行RT-PCR及用抗相关抗原单抗ALT-04进行免疫组化,分别检测ALT-04ag相关基因的mRNA及蛋白表达。结果5mmol/LDFMO作用人肺鳞癌细胞L785d,引起ALT-04ag基因mRNA和蛋白表达下调,并能明显抑制细胞生长、诱导细胞凋亡。同时加入外源性腐胺(Pu)可阻止上述基因及细胞形态的变化。结论抑制多胺生物合成引起的L78细胞生长抑制和细胞凋亡的诱导与肺癌相关抗原基因表达的下调有关。

关键词： ALT-04ag 肺肿瘤二氟甲基鸟氨酸肿瘤相关基因多胺生物合成 DNA电泳图谱

高压液相色谱分析测定正常及癌症病人尿中的多胺

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中国肿瘤临床 1990年第4期17卷 211-214页

作者：李树森吴翚马宇玲李艺钟建范慕贞中日友好医院临床医学研究所生化室

本文用高压液相色谱法(HPLC)分析测定74例肿瘤患者及60例正常人尿中多胺,其结果表明:肿瘤病人尿中腐胺、精眯、精胺及3种多胺总平均值分别为正常人的2.2、4.9、11.2、3.6倍,都有非常明显的统计学差异(P<0.005),特别是肺癌和食管癌更为显... 详细信息

本文用高压液相色谱法(HPLC)分析测定74例肿瘤患者及60例正常人尿中多胺,其结果表明:肿瘤病人尿中腐胺、精眯、精胺及3种多胺总平均值分别为正常人的2.2、4.9、11.2、3.6倍,都有非常明显的统计学差异(P生化指标。

关键词：癌尿多胺精脒精胺高效液相色谱

鸟氨酸脱羧酶反义RNA对人肺鳞癌细胞恶性表型的逆转

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中华肿瘤杂志 1996年第2期18卷 81-83页

作者：关钧范慕贞曹淑兰北京中日友好临床医学研究所生化及分子生物学研究室

在已获两株有鸟氨酸脱羧酶（ＯＤＣ）反义序列稳定整合的细胞克隆的基础上，进一步研究发现，反义转染细胞的Ｇ０／Ｇ１期细胞数增多，Ｓ期细胞数相应减少；其软琼脂集落形成能力及裸鼠致瘤能力均显著下降。核酸杂交结果显示，在反义转... 详细信息

在已获两株有鸟氨酸脱羧酶（ＯＤＣ）反义序列稳定整合的细胞克隆的基础上，进一步研究发现，反义转染细胞的Ｇ０／Ｇ１期细胞数增多，Ｓ期细胞数相应减少；其软琼脂集落形成能力及裸鼠致瘤能力均显著下降。核酸杂交结果显示，在反义转染细胞中有ＯＤＣ反义ＲＮＡ表达，ＯＤＣｍＲＮＡ含量明显减少。结果表明，人肺鳞癌细胞恶性表型的逆转与ＯＤＣ反义ＲＮＡ有效控制多胺生物合成有关。

关键词：肺肿瘤鳞状细胞癌鸟氨酸脱羧酶 RNA

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线粒体遗传密码及基因组遗传密码的对称分析

生物物理学报 2002年第1期18卷 87-94页

作者：陈惟昌陈志华王自强刘伟左琳中日友好临床医学研究所生物物理研究室中日友好临床医学研究所生物化学及分子生物学研究室北京100029

病毒、细菌和真核生物的氨基酸编码都使用相同的遗传密码 ,表明它们可能有共同的来源。但人和牛的线粒体的遗传密码和基因组的遗传密码相比 ,出现以下不同 :(1)ATA编码甲硫氨酸M而不是异亮氨酸I。(2)TGA不再是终止密码子X而编码色氨酸W... 详细信息

病毒、细菌和真核生物的氨基酸编码都使用相同的遗传密码 ,表明它们可能有共同的来源。但人和牛的线粒体的遗传密码和基因组的遗传密码相比 ,出现以下不同 :(1)ATA编码甲硫氨酸M而不是异亮氨酸I。(2)TGA不再是终止密码子X而编码色氨酸W。(3)AGA和AGG不再是精氨酸R的密码子而变为终止密码子X。应用高维空间拓扑分析的方法 ,对线粒体遗传密码和基因组遗传密码的6维编码空间进行对称性分析 ,得到如下结果 :(1)线粒体遗传密码的起始密码子是2个而不是1个。(2)线粒体遗传密码的终止密码子是4个而不是3个。(3)线粒体遗传密码空间只有2、4、6三种偶数简并度而没1、3两种奇数简并度 ,表明其对称度较高。(4)线粒体遗传密码空间除丝氨酸S分成两个平行的子空间之外 ,终止密码子X亦分成两个平行的子空间 ,表明其连通度较低。(5)线粒体遗传密码与基因组遗传密码相比 ,共有3个简并平面出现变异 ,即 :1001λλ(M和I) ,011λ1λ(W和X) ,以及1011λλ(S和X或S和R)。(6)基因组遗传密码的1、3两种奇数简并度可能来源于线粒体遗传密码的1001λλ平面和011λ1λ平面的对称性破缺。

关键词：基因组线粒体遗传密码高维空间简并度对称破缺拓扑连通性

宫颈癌及宫颈上皮内瘤样病变组织中端粒酶的活性及其与凹空细胞分型的关系

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中华医学杂志 2002年第4期82卷 262-266页

作者：冷冰卞美璐孙霭萍范慕贞陈庆云北京中日友好医院妇产科 100029 中日友好临床医学研究所生化室

目的　研究宫颈上皮内瘤样病变 (CIN)及宫颈癌的组织和脱落细胞中端粒酶的活性变化 ,探索端粒酶激活与凹空细胞分型及人乳头状瘤病毒 (HPV)感染之间的关系。方法　采用端粒酶重复扩增技术 (TRAP) ,检测 2 4例正常宫颈、34例宫颈炎症、78... 详细信息

目的　研究宫颈上皮内瘤样病变 (CIN)及宫颈癌的组织和脱落细胞中端粒酶的活性变化 ,探索端粒酶激活与凹空细胞分型及人乳头状瘤病毒 (HPV)感染之间的关系。方法　采用端粒酶重复扩增技术 (TRAP) ,检测 2 4例正常宫颈、34例宫颈炎症、78例CIN及 16例宫颈癌的宫颈组织和脱落细胞中端粒酶的活性。同时采用双盲法检测上述宫颈病变组织中凹空细胞的分布 ,并将其分为Ⅰ型和Ⅱ型。结果　组织中端粒酶阳性率分别为 :正常宫颈组织为 16 7% (4/ 2 4 ) ,炎症组织为 17 6 %(6 / 34) ,CIN1组织为 5 1 6 % (16 / 31) ,CIN2 组织为 72 0 % (18/ 2 5 ) ,CIN3 组织为 86 4 % (19/ 2 2 ) ,宫颈癌组织为 10 0 % (16 / 16 )。端粒酶阳性率CIN明显高于正常宫颈及炎症组织 (P 0 0 5 )。相应的宫颈脱落细胞中端粒酶阳性率同组织标本比 ,差异无显著意义 (P >0 0 5 )。含Ⅰ型、Ⅱ型凹空细胞的宫颈病变组织中端粒酶阳性率分别为 6 6 7%和10 0 % ,两者差异有显著意义 (P 及CIN的发展有密切关系。

关键词：宫颈上皮内瘤样病变宫颈肿瘤端粒末端转移瘤乳头状瘤病毒人

多胺生物合成抑制剂对Hep-2细胞生长及端粒酶活性影响的研究

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中华耳鼻咽喉科杂志 2001年第4期36卷 261-263,T001页

作者：李原范慕贞曹淑兰张小伯中日友好医院耳鼻咽喉科北京100029 中日友好临床医学研究所生化及分子生物室

目的　观察多胺生物合成抑制剂二氟甲基鸟氨酸 (difluoromethylornithine,DFMO)对人喉鳞状细胞癌细胞Hep 2生长特性及端粒酶活性的影响 ,以期为抑制多胺生物合成逆转肿瘤恶性表型的分子机理寻找线索。方法　根据细胞形态、细胞生长曲线... 详细信息

目的　观察多胺生物合成抑制剂二氟甲基鸟氨酸 (difluoromethylornithine,DFMO)对人喉鳞状细胞癌细胞Hep 2生长特性及端粒酶活性的影响 ,以期为抑制多胺生物合成逆转肿瘤恶性表型的分子机理寻找线索。方法　根据细胞形态、细胞生长曲线及流式细胞计 (flowcytometer)观察分析Hep 2细胞生长状况 ;用端粒酶重复序列扩增法 (telomeraserepeatamplificationprotocol,TRAP)检测Hep 2细胞端粒酶活性。结果　DFMO (2 .5mmol/L或 5mmol/L ,5d)处理Hep 2细胞 ,其生长受到明显抑制 ;G1期细胞增多 ,而S期细胞减少 ;细胞形态及FCM证明有细胞凋亡诱导 ;端粒酶活性受到明显抑制。当用腐胺与DFMO同时处理Hep 2细胞时可防止上述变化的发生。结论　多胺生物合成抑制剂可引起Hep 2细胞的增殖抑制及凋亡诱导 ,这些变化与端粒酶活性的抑制有关。

关键词：依氟鸟氨酸生物源多胺类喉肿瘤鳞状细胞癌肿瘤细胞细胞培养端粒末端转移酶端粒酶