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口岸截获国内未见分布种小异甲蠊(Diplopterina parva)形态学与分子生物学鉴定

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中国媒介生物学及控制杂志 2022年第6期33卷 859-864页

作者：刘德星李婷婷魏晓雅岳巧云邱德义柯明剑聂维忠陈健珠海国际旅行卫生保健中心(拱北海关口岸门诊部)国家医学媒介生物检测重点实验室(广东) 广东珠海519020 中山海关技术中心卫生检疫实验室广东中山528400 中山火炬职业技术学院广东中山528436 秦皇岛海关河北秦皇岛066002

目的利用形态学与分子生物学的方法对中山港口岸进口集装箱中截获的2只蜚蠊进行种类鉴定。方法2021年11月在中山港口岸来自尼日利亚的集装箱截获了1只雌性蜚蠊和1只蜚蠊若虫,通过形态学方法检索雌性蜚蠊的形态特征,并同时提取2只蜚蠊... 详细信息

目的利用形态学与分子生物学的方法对中山港口岸进口集装箱中截获的2只蜚蠊进行种类鉴定。方法2021年11月在中山港口岸来自尼日利亚的集装箱截获了1只雌性蜚蠊和1只蜚蠊若虫,通过形态学方法检索雌性蜚蠊的形态特征,并同时提取2只蜚蠊基因组DNA,用线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)的基因片段进行PCR扩增和测序,测序结果在GenBank中进行比对,采用邻接法构建系统进化树。结果雌性蜚蠊形态鉴定为小异甲蠊,2只蜚蠊的COⅠ基因序列在GenBank中未比对出相似度>98%的同源物种,但是2只蜚蠊COⅠ基因序列相互比对相似度>98%,可判定该蜚蠊若虫与雌性成虫同为小异甲蠊(Diplopterina parva)。经查证国内未见该种蜚蠊分布。结论中山港口岸进口集装箱截获的2只蜚蠊通过形态学和分子生物学的方法鉴定均为小异甲蠊,为国内未见分布种。

关键词：国内未见分布种小异甲蠊形态学鉴定分子生物学鉴定中山口岸

首次截获2种国内未见分布拉丁蠊属(Latindiinae:Latindia)蜚蠊的形态学鉴定

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中国媒介生物学及控制杂志 2022年第5期33卷 742-747页

作者：李婷婷刘德星陈健魏晓雅邱德义柯明剑岳巧云中山海关技术中心卫生检疫实验室广东中山528400 珠海国际旅行卫生保健中心(拱北海关口岸门诊部) 国家医学媒介生物检测重点实验室(广东)广东珠海519020 中山火炬职业技术学院广东中山528400

目的对中山港口岸截获的2只蜚蠊进行形态学鉴定。方法2021年3月9日和5月11日,先后在广东中山港口岸来自法属圭亚那的进口原木中截获蜚蠊各1只,通过形态特征比较初步确定到属,利用原木来源地信息查找南美洲地区该属的文献资料,根据文献... 详细信息

目的对中山港口岸截获的2只蜚蠊进行形态学鉴定。方法2021年3月9日和5月11日,先后在广东中山港口岸来自法属圭亚那的进口原木中截获蜚蠊各1只,通过形态特征比较初步确定到属,利用原木来源地信息查找南美洲地区该属的文献资料,根据文献描述确定具体种类。结果3月9日截获的雄性蜚蠊为多恩拉丁蠊(Latindia dohrniana Saussure&Zehntner,1894),5月11日截获的雄性蜚蠊为未被描述的拉丁蠊1新种(Latindia sp.nov.)。结论拉丁蠊属在国内未见记录,截获的多恩拉丁蠊和Latindia sp.nov.亦为国内未记录种,本发现为今后口岸截获该属蜚蠊的鉴定提供了参考。

关键词：拉丁蠊形态鉴定首次截获

基于微滴式数字聚合酶链式反应技术检测巴尔通体

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中国动物传染病学报 2024年

作者：石筱毓陈健刘德星李婷婷魏晓雅聂维忠郑传发岳巧云赖梅凤邱德义毕水莲中山火炬职业技术学院中山海关技术中心国家医学媒介生物监测重点实验室珠海国际旅行卫生保健中心(拱北海关口岸门诊部) 广东药科大学公共卫生学院中山海关技术中心食品检验室中华人民共和国秦皇岛海关

建立巴尔通体（Bartonella）微滴式数字聚合酶链式反应（droplet digital polymerase chian reaction， ddPCR）的检测方法。以ssrA为靶基因，选择具有巴尔通体属特异性的引物和探针，通过优化引物浓度、探针浓度和退火温度对拷贝数的... 详细信息

建立巴尔通体（Bartonella）微滴式数字聚合酶链式反应（droplet digital polymerase chian reaction， ddPCR）的检测方法。以ssrA为靶基因，选择具有巴尔通体属特异性的引物和探针，通过优化引物浓度、探针浓度和退火温度对拷贝数的影响，从而确定检测方法的反应体系和反应条件，对该方法的灵敏性、重复性和特异性等方面进行评价。利用ddPCR方法对口岸监管区域收集的40份鼠形动物样本进行检测，并与实时荧光定量PCR方法进行比较。巴尔通体ddPCR的最佳引物浓度为500 nmol/L，探针浓度为150 nmol/L，退火温度为57℃。ddPCR方法灵敏度高，检测限可至3.1拷贝/μL；重复性好，结果稳定，组间重复变异系数CV%<12%，组内重复变异系数CV%<4%；特异性好，与博卡病毒阳性样本、钩端螺旋体阳性样本、鼠伤寒沙门氏菌（ATCC 14028）、肺炎克雷伯氏菌（ATCC 700603）、铜绿假单胞菌（ATCC 27853）、副溶血性弧菌（ATCC 17802）、大肠埃希氏菌（ATCC 25922）、单核细胞增生李斯特菌（ATCC 19115）、金黄色葡萄球菌（ATCC 6538）、粪肠球菌（ATCC 29212）、蜡样芽孢杆菌（ATCC 10876）等病原体未出现交叉反应。对40份鼠形动物的肾脏样本检测中，ddPCR方法的阳性检出率为47.5%，实时荧光定量PCR的阳性检出率为40%，两种方法通过Kappa分析具有较高的一致性。巴尔通体ddPCR检测方法特异性强、重复性好，灵敏度高，可为巴尔通体提供新的检测方法。

关键词：巴尔通体微滴式数字聚合酶链式反应(ddPCR) ssrA基因

QuEChERS-高效液相色谱-质谱/质谱法同时测定水产品中磺胺类和氯霉素类药物

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食品安全质量检测学报 2018年第20期9卷 5403-5409页

作者：张朋杰张宪臣容裕棠黄伟蓉卢俊文杨芳李蓉中山海关检验检疫技术中心中山528403

目的建立QuEChERS-高效液相色谱-质谱/质谱法同时测定水产品中磺胺类药物和氯霉素类药物含量的分析方法。方法样品用乙腈提取,经QuEChERS方法去脂净化后,用甲醇和0.02%的甲酸水溶液作为流动相进行梯度洗脱, Waters Atlantis T3色谱柱进... 详细信息

目的建立QuEChERS-高效液相色谱-质谱/质谱法同时测定水产品中磺胺类药物和氯霉素类药物含量的分析方法。方法样品用乙腈提取,经QuEChERS方法去脂净化后,用甲醇和0.02%的甲酸水溶液作为流动相进行梯度洗脱, Waters Atlantis T3色谱柱进行色谱分离,高效液相色谱-质谱/质谱电喷雾电离多反应监测正负离子模式测定,内标法定量。结果 23种药物标准曲线的相关系数均大于0.99,加标平均回收率为61.4%～116.2%。结论本方法操作简单、方便高效,可同时测定水产品中磺胺类和氯霉素类药物,适合于实验室多项目的快速检测。

关键词： QuEChERS 液相色谱-质谱/质谱法水产品磺胺类药物氯霉素类药物同时测定

驻非洲传染病监测哨点发热患者虫媒传染病监测与分析

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热带医学杂志 2020年第9期20卷 1232-1235页

作者：吴锦顺周艳萍李小波祝琰汪海波珠海国际旅行卫生保健中心广东珠海519020 中山国际旅行卫生保健中心广东中山528404 广州海关技术中心卫生检疫实验室广东广州510700

目的对我国驻非洲传染病监测哨点发热患者的虫媒传染病发病情况进行分析,为口岸虫媒传染病的早期预警和防控提供理论指导。方法收集2017年我国驻安哥拉传染病监测哨点发热患者的血液样本,以实时荧光RT-PCR法检测黄热病毒、登革病毒、基... 详细信息

目的对我国驻非洲传染病监测哨点发热患者的虫媒传染病发病情况进行分析,为口岸虫媒传染病的早期预警和防控提供理论指导。方法收集2017年我国驻安哥拉传染病监测哨点发热患者的血液样本,以实时荧光RT-PCR法检测黄热病毒、登革病毒、基孔肯雅病毒、寨卡病毒、西尼罗病毒、裂谷热病毒核酸;以实时荧光PCR法检测疟原虫、Q热立克次氏体、班氏丝虫、钩端螺旋体、血吸虫核酸。结果 142例发热患者中共检出各类传染病核酸阳性59例,包括疟原虫核酸阳性57例、登革热核酸阳性1例、疟原虫合并登革热核酸阳性1例。虫媒传染病核酸阳性患者与阴性患者在性别比、年龄阶段、来自地区以及出境时长等因素比较差异均无统计学意义(P>0.05),而在职业组成和四周内旅行史方面差异有统计学意义(P卫生检疫部门提前应对,实施精准检疫,有效防止传染病跨境传播。

关键词：监测哨点虫媒传染病流行病学

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广东省中山市非法入境冷冻动物产品统计分析

中国动物检疫 2021年第3期38卷 59-62页

作者：郑传发吴冰黄紫乐李勇张静刘琼瑜王勇邱德义中山海关技术中心广东中山528403

2019—2020年,广东省中山市执法部门查获了大量非法入境冷冻动物产品。为了解这些非法入境冷冻动物产品来源分布及组成特点,对其种类、数量、来源地进行统计分析。结果显示:2019—2020年,中山市共查获冻品约5847 t;走私冷冻动物产品涵... 详细信息

2019—2020年,广东省中山市执法部门查获了大量非法入境冷冻动物产品。为了解这些非法入境冷冻动物产品来源分布及组成特点,对其种类、数量、来源地进行统计分析。结果显示:2019—2020年,中山市共查获冻品约5847 t;走私冷冻动物产品涵盖了鸡、猪、牛、羊、马等常见养殖动物种类,主要为动物副产品,其中最多的为冻鸡爪(33.61%)和冻猪蹄(26.82%);来源地遍及全球,其中主要来源地为美国(34.40%)和巴西(27.18%);48.41%的走私冷冻动物产品来自相关动物疫病疫区,还有6.50%无法确定产地。结果表明,中山市走私冷冻动物产品数量大、种类多、来源广、品质低,既影响了我国相关贸易政策的实施,也对我国生态安全、公共卫生安全及畜牧业健康发展带来了极大威胁,需要严厉打击。

关键词：走私冷冻动物产品检验统计分析风险分析

广东省中山市查获走私动物产品中致病微生物污染调查

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中国国境卫生检疫杂志 2021年第6期44卷 434-436页

作者：郑传发吴冰刘琼瑜黄紫乐李勇邱德义陈健中山海关技术中心广东中山528400

目的调查广东省中山市查获的走私动物产品中食源性致病菌污染情况。方法2019年9月—2020年12月期间查获的走私动物产品,根据动物产品的不同品种、批次分别采集样品,参照有关国家标准检测样品中金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特菌、... 详细信息

目的调查广东省中山市查获的走私动物产品中食源性致病菌污染情况。方法2019年9月—2020年12月期间查获的走私动物产品,根据动物产品的不同品种、批次分别采集样品,参照有关国家标准检测样品中金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特菌、沙门菌、空肠弯曲菌、大肠埃希菌O157:H7等5种食源性致病菌。结果共采集了20个种类892批次走私动物产品样品,检测到310株致病菌,检出率为34.75%,其中135株金黄色葡萄球菌,检出率为15.13%;113株单核细胞增生李斯特菌,检出率为12.67%;45株沙门菌,检出率为5.04%;17株空肠弯曲菌,检出率为1.91%;未检出大肠埃希菌O157:H7。冻牛肚、冻牛肉的致病菌检出率最高,分别为45.83%和44.57%;来自叙利亚、印度的动物产品中致病菌检出率高,分别为53.33%、48.00%;散装产品的致病菌检出率最高,为100.00%,包装完整的动物产品致病菌检出率最低,为19.52%。结论中山市查获的走私动物产品致病菌污染率较高,散装动物产品致病微生物污染情况最严重,存在较高的食品安全风险。

关键词：动物产品走私致病菌食源性疾病

中山市城区白纹伊蚊对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗药性及其抗性基因突变分析

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中国媒介生物学及控制杂志 2024年

作者：杨罗菊岳巧云刘德星胡佳陈健邱德义中山海关技术中心国家医学媒介生物监测重点实验室珠海国际旅行卫生保健中心(拱北海关口岸门诊部) 中山火炬职业技术学院东坑镇社区卫生服务中心疾控办(东莞) 广州海关技术中心

目的调查2020年中山市中心城区白纹伊蚊对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗性现状，并探究中山市白纹伊蚊野外种群电压门控钠离子通道基因（VGSC）击倒抗性（kdr）突变情况，为病媒生物的有效防治提供依据。方法 2020年7-10月，在中山市城区5个... 详细信息

目的调查2020年中山市中心城区白纹伊蚊对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗性现状，并探究中山市白纹伊蚊野外种群电压门控钠离子通道基因（VGSC）击倒抗性（kdr）突变情况，为病媒生物的有效防治提供依据。方法 2020年7-10月，在中山市城区5个不同生境采集白纹伊蚊成蚊和幼蚊，经过实验室饲养后，挑选雌性成蚊利用成蚊接触筒法测定其对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗药性水平；用PCR扩增中山市白纹伊蚊种群VGSC基因片段，并分析其kdr突变情况。使用SPSS 25.0统计学软件进行统计学分析，多组间比较采用R×C列联表卡方检验或Fisher确切概率法，两两比较采用Bonferroni法。结果生物测定结果显示，中山市城区白纹伊蚊野外种群对0.03%溴氰菊酯、0.08%顺式氯氰菊酯、0.07%高效氯氟氰菊酯、0.4%氯菊酯、0.4%高效氯氰菊酯类杀虫剂的24 h死亡率范围分别为9.48%～50.82%、6.89%～40.69%、2.61%～38.13%、0.88%～50.00%和17.95%～94.00%。除金字山种群对0.4%高效氯氰菊酯表现为可疑抗性外，其余均表现为抗性。共检测了318只白纹伊蚊VGSC基因，结果显示，中山市种群1532位点未出现突变，1534位点已发生突变。1534位点存在4种突变等位基因，包括TTG/L、TCC/S、TCG/S和TGC/C,TTG/L出现频率最高（57.23%）；有9种基因型，分别为野生型纯合子TTC/TTC(F/F)，野生/突变型杂合子TTC/TCC(F/S)、TTC/TCG(F/S)、TTC/TTG(F/L)和TTC/TGC(F/C)，突变型纯合子TTG/TTG(L/L)、TCC/TCG(S/S)和TCC/TCC(S/S)，突变型杂合子TTG/TCC(L/S)，以突变型纯合子L/L占比最高，为41.83%。结论中山市中心城区白纹伊蚊种群对拟除虫菊酯类杀虫剂已经产生了较高程度的抗性，有必要持续监测蚊虫抗药性，并根据抗药性现状采取针对性的防治措施，降低相关蚊媒传染病的发生风险。

关键词：白纹伊蚊生物测定抗药性击倒抗性拟除虫菊酯

一步法多重巢式荧光RT-PCR检测新型冠状病毒和甲、乙型流感病毒

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中华检验医学杂志 2022年第11期45卷 1144-1149页

作者：郑夔孙芳芳姚粲璨戴俊师永霞李小波黄吉城广州海关技术中心卫生检疫研究所广州510403

目的建立一种可单管同时检测新型冠状病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒和人源基因内标的一步法多重巢式荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法。方法收集2020年2月至2022年2月广州白云机场海关入境人员新型冠状病毒核酸阳性样本30份和33... 详细信息

目的建立一种可单管同时检测新型冠状病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒和人源基因内标的一步法多重巢式荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法。方法收集2020年2月至2022年2月广州白云机场海关入境人员新型冠状病毒核酸阳性样本30份和336份排查样本,以及2020年发生新型冠状病毒肺炎疫情前3年期间同样来自广州白云机场海关入境人员的其他呼吸道病原体阳性样本64份和呼吸疾病国家重点实验室提供的呼吸道病原体阳性毒株7份。选取新型冠状病毒ORF和N基因,以及甲、乙型流感病毒M基因的核苷酸保守区域,设计和筛选出多重巢式荧光PCR引物和探针组合,同时引入人源基因内标的巢式扩增引物和探针,建立一套多重巢式荧光RT-PCR检测方法,应用制备的假病毒阳性质控品和样本盘,评估方法的敏感度、特异度,并进行临床样本应用性验证。结果所建立的一步法多重巢式荧光RT-PCR方法可特异性检出新型冠状病毒和甲、乙型流感病毒,新型冠状病毒的最低检出限约为125拷贝/ml,甲、乙型流感病毒的最低检出限约为250拷贝/ml;检测101份各类呼吸道病原体阳性样本,显示新型冠状病毒和甲、乙型流感病毒的检测敏感度分别为96.67%、92.86%和96.15%,三者的特异度均为100%,超过300份临床样本的应用性检测中,未见假阳性检出。结论建立了一套新型冠状病毒、甲、乙型流感病毒和人源基因内标的一步法多重巢式荧光RT-PCR方法,该方法具有良好的灵敏度和特异性,可用于新型冠状病毒和甲、乙型流感病毒的大批量样本快速筛查。

关键词：新型冠状病毒流感病毒核酸检测多重聚合酶链反应