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Nestin-GFP小鼠胚胎干细胞的建系及体外神经分化

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中山大学学报（医学科学版） 2011年第2期32卷 155-163页

作者：王紫菲赖文玉柯琼李付贵王涛张秀明李伟强项鹏中山大学干细胞与组织工程研究中心广东广州510080 中山大学附属第二医院儿科广东广州510120

【目的】建立Nestin-GFP转基因小鼠的胚胎干细胞(mESC)系,并观察其示踪ES细胞系的神经分化过程。【方法】将E3.5的Nestin-GFP小鼠囊胚接种于小鼠胚胎成纤维细胞上(MEF经γ射线照射失去增殖活性)。4～6d后将自囊胚长出的内细胞团(ICM)继... 详细信息

【目的】建立Nestin-GFP转基因小鼠的胚胎干细胞(mESC)系,并观察其示踪ES细胞系的神经分化过程。【方法】将E3.5的Nestin-GFP小鼠囊胚接种于小鼠胚胎成纤维细胞上(MEF经γ射线照射失去增殖活性)。4～6d后将自囊胚长出的内细胞团(ICM)继续培养并传代扩增,检测所得细胞Oct-4、SSEA-1和AKP等胚胎干细胞特异性标志物的表达及在体内外向三胚层分化的能力;之后,诱导细胞向神经元样细胞及神经胶质样细胞分化,利用免疫荧光检测其标志性抗原。【结果】免疫组化可见Nestin-GFP小鼠胚胎干细胞表达未分化细胞特异性标志Oct-4、SSEA-1,AKP染色呈强阳性,并具有向体内外三胚层分化潜能;在体外诱导其向神经分化,第6d可见到明显的绿色荧光,并与免疫组化Nestin表达部位基本吻合。第12d及第16d分别可见神经元及神经胶质细胞特异性标志物表达,而此时Nestin的表达较前明显下降。【结论】成功建立了Nestin-GFP小鼠胚胎干细胞系,该细胞具有自我更新的特性及多向分化潜能,并可用于在体外更直观的监测神经分化的阶段性变化并由此进行调控。

关键词： Nestin 胚胎干细胞绿色荧光蛋白神经分化

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膀胱组织工程研究进展

生物医学工程学杂志 2020年第2期37卷 200-206页

作者：张秀珍陈秋竹张艺琪(综述) 解慧琪(审校) 四川大学华西医院干细胞与组织工程研究室成都610041

膀胱作为储尿排尿器官具有重要的生理功能,许多病理原因导致的膀胱损伤往往需要进行膀胱重建。临床上膀胱重建的金标准是胃肠道代膀胱术,但是胃肠道的结构和功能与膀胱有着本质的区别,导致肠段置换术易产生血尿、排尿困难、结石、肿瘤... 详细信息

膀胱作为储尿排尿器官具有重要的生理功能,许多病理原因导致的膀胱损伤往往需要进行膀胱重建。临床上膀胱重建的金标准是胃肠道代膀胱术,但是胃肠道的结构和功能与膀胱有着本质的区别,导致肠段置换术易产生血尿、排尿困难、结石、肿瘤等并发症。近年来,随着组织工程及再生医学的诞生及发展,为膀胱缺损修复提供了新的思路和技术手段。本文就膀胱组织工程的三个方面--种子细胞、支架材料及生长因子的最新进展进行了综述。

关键词：膀胱组织工程种子细胞支架材料生长因子

Foxp3基因多态性与原因不明复发性自然流产易感性的关系

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中华妇产科杂志 2011年第10期46卷 763-768页

作者：吴再归游泽山张彩李珠玉苏秀梅张秀明李银广中山大学附属第一医院妇产科广州510080 干细胞与组织工程研究所广东省潮州市人民医院妇产科

目的探讨转录因子Foxp3基因多态性与原因不明复发性自然流产（URSA）易感性的关系。方法分别采用PCR-限制性片段长度多态性技术（针对Foxp3基因的rs3761548、rs2294021位点）和PCR-等位基因特异性扩增技术（针对rs2232365、rs5902434位... 详细信息

目的探讨转录因子Foxp3基因多态性与原因不明复发性自然流产（URSA）易感性的关系。方法分别采用PCR-限制性片段长度多态性技术（针对Foxp3基因的rs3761548、rs2294021位点）和PCR-等位基因特异性扩增技术（针对rs2232365、rs5902434位点），检测146例URSA患者（URSA组）和112例健康妇女（对照组）血中Foxp3基因上述4个位点的基因型分布。结果（1）rs3761548和rs2232365位点：URSA组和对照组妇女中，rs3761548位点的3种基因型频率分别为C／C基因型10．3％、22．3％，A／C基因型38．4％、40．2％，A／A基因型51．4％、37．5％，rs2232365位点的基因型频率分别为A／A基因型5．5％、15．2％，A／G基因型47．9％、50．0％，G／G基因型46．6％、34．8％，分别比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）；rs3761548A和rs2232365G等位基因明显增加URSA的发病风险（OR=1．73、1．61，P均〈0．05）。（2）rs5902434位点：3种基因型在两组的分布分别为ATT/ATT基因型7．5％、12．5％，del／ATT基因型42．5％、50．0％，del／del基因型50．0％、37．5％，分别比较，差异均无统计学意义（P=0．10）；但缺失型等位基因del频率URSA组明显高于对照组（分别为71．2％、62．5％；OR=1．49，P=0．04）。（3）rs2294021位点：3种基因型（C／C、T／C、rr／T）和T、C等位基因频率在URSA组和对照组的分布无差异（P=0．18、0．08）。（4）单体型分析：del-A-G单体型明显增加URSA的发病风险（OR=2．51，P〈0．01），而del-C-G和A。r11-A-A单体型则对URSA的发病具有保护作用（OR=0．18、0．22，P均〈0．01）。结论Foxp3基因的功能性多态位点可能通过改变Foxp3基因的表达或其功能而增加URSA的发病风险。

关键词：流产习惯性叉头转录因子类多态现象遗传 T淋巴细胞调节性疾病遗传易感性

肝脏类器官在肝脏疾病模型与移植治疗中的应用潜力

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中国组织工程研究 2025年第8期29卷 1684-1692页

作者：袁维勃刘婵余丽梅遵义医科大学附属医院贵州省细胞工程重点实验室贵州省遵义市563003 遵义医科大学教育部省部共建组织损伤修复与再生医学协同创新中心贵州省遵义市563000 遵义医科大学附属医院贵州省干细胞临床应用与新药研发工程研究中心贵州省遵义市563003 遵义医科大学附属医院贵州省生物治疗人才基地贵州省遵义市563003 遵义医科大学附属医院遵义市干细胞与再生医学工程研究中心贵州省遵义市563003

背景:肝脏类器官对阐明肝脏疾病的确切病理机制及对肝脏疾病的治疗具有重要的意义。目的:总结目前国内外该领域的基础研究,回顾以往肝脏类器官的构建、疾病建模和移植治疗的重要研究进展,探讨肝脏类器官联合组织工程技术的应用前景。方... 详细信息

背景:肝脏类器官对阐明肝脏疾病的确切病理机制及对肝脏疾病的治疗具有重要的意义。目的:总结目前国内外该领域的基础研究,回顾以往肝脏类器官的构建、疾病建模和移植治疗的重要研究进展,探讨肝脏类器官联合组织工程技术的应用前景。方法:检索PubMed数据库及中国知网数据库收录的相关文献,英文检索词为“liver,organoids,liver diseases”,中文检索词为“肝,类器官,肝脏疾病”,主要检索时限为2018年4月至2024年4月,通过人工阅读排除重复文献等,最终纳入94篇文献进行归纳分析。结果与结论:①肝脏类器官构建的种子细胞主要集中于成体细胞和多能干细胞,通过辅助各种细胞因子参与信号引导作用和细胞外基质提供3D微环境,促进类器官的产生,但是整体成熟度不高,有望通过结合组织工程技术改善这一问题;②体外疾病建模方面主要在简单疾病和单基因遗传病领域研究较多,类器官高度保留患者遗传特性,有望通过结合CRISPR-Cas9基因矫正和其他新兴技术模拟更复杂的肝脏疾病并阐明更深层次的病理机制;③体内移植治疗方面,肝脏类器官能够安全有效的植入,表现出惊人的肝功能替代潜力及组织再生能力,并且还可能通过与其他组织工程材料结合达到治疗目的。

关键词：肝脏类器官干细胞种子细胞肝脏疾病疾病建模体内移植综述

人参皂苷Rg_1延缓造血干细胞衰老与p16^(INK4a)表达关系的研究

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中国中药杂志 2011年第5期36卷 608-613页

作者：周玥杨斌姚欣王亚平重庆医科大学干细胞与组织工程研究室重庆400016

目的:探讨人参皂苷单体Rg1延缓造血干细胞(HSC)衰老与p16INK4a的表达调控关系,为寻找延缓HSC衰老途径提供理论和实验依据。方法:免疫磁性分选法分离纯化Sca-1+HSC后分组。对照组常规培养;衰老组运用三丁基过氧化氢(t-BHP)复制衰老模型;... 详细信息

目的:探讨人参皂苷单体Rg1延缓造血干细胞(HSC)衰老与p16INK4a的表达调控关系,为寻找延缓HSC衰老途径提供理论和实验依据。方法:免疫磁性分选法分离纯化Sca-1+HSC后分组。对照组常规培养;衰老组运用三丁基过氧化氢(t-BHP)复制衰老模型;Rg1组在对照组基础上加入10μmol.L-1 Rg1共培养;Rg1延缓衰老组给予10μmol.L-1 Rg1预处理后,复制衰老模型;Rg1治疗衰老组,衰老模型复制后,给予10μmol.L-1Rg1抗衰老处理。衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)细胞化学染色、流式细胞术分析细胞周期和造血祖细胞混合集落(CFU-Mix)培养确定Rg1延缓或治疗Sca-1+HSC衰老生物学作用。RT-PCR及Western blotting检测衰老相关基因p16INK4a mRNA及蛋白的表达。结果:Rg1延缓衰老组,Rg1治疗衰老组与衰老组相比,SA-β-gal染色阳性细胞百分比降低,G1期细胞比例下降,生成造血祖细胞混合集落数增加,p16INK4a mRNA及蛋白的表达下降;Rg1延缓衰老组的SA-β-gal染色阳性细胞百分比、G1期比例、p16INK4a mRNA及蛋白的表达均低于Rg1治疗衰老组,形成造血祖细胞混合集落数高于Rg1治疗衰老组。结论:Rg1具有延缓和治疗Sca-1+HSC衰老的作用,Rg1延缓衰老比治疗衰老效果更好。Rg1可能通过调控p16INK4a的表达发挥其对抗t-BHP诱导的Sca-1+HSC衰老的作用。

关键词：人参皂苷Rg1 p16INK4a 造血干细胞衰老

第三方骨髓来源间充质干细胞治疗异基因造血干细胞移植后难治性迟发性出血性膀胱炎20例临床研究

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中华血液学杂志 2022年第6期43卷 488-493页

作者：赵珂黄芬陈小湧昌媛许娜史鹏程刘慧孙竞项鹏刘启发范志平南方医科大学南方医院血液科广州510515 中山大学干细胞与组织工程研究中心广州510120

目的观察第三方骨髓来源间充质干细胞(MSC)治疗异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后难治性迟发性出血性膀胱炎(LOHC)的疗效和安全性.方法回顾性分析2018年7月至2020年6月allo-HSCT后发生难治性LOHC 20例患者在常规治疗基础上联合第三方... 详细信息

目的观察第三方骨髓来源间充质干细胞(MSC)治疗异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后难治性迟发性出血性膀胱炎(LOHC)的疗效和安全性.方法回顾性分析2018年7月至2020年6月allo-HSCT后发生难治性LOHC 20例患者在常规治疗基础上联合第三方骨髓来源MSC治疗.MSC以每次1×10^(6)/kg、每周1次输注,直至症状改善或连用4次无效停用.在MSC治疗前及治疗后第8周应用定量PCR法检测患者尿液标本中BK病毒(BKV)、JC病毒(JCV)、巨细胞病毒(CMV).结果①20例难治性LOHC患者中,男15例、女5例,中位年龄35(15~56)岁;急性淋巴细胞白血病(ALL)5例,急性髓系白血病(AML)9例,骨髓增生异常综合征(MDS)5例,母细胞性浆细胞样树突细胞瘤(BPDCN)l例;HLA全相合移植4例,HLA不全相合移植16例.②MSC输注中位次数为3(2~8)次.17例患者获得完全缓解,1例获得部分缓解,总缓解率为90.0%.移植后中位随访397.5(39~937)d,13例存活、7例死亡,死亡原因包括急性GVHD 1例、感染5例、血栓性微血管病(TMA)1例.③MSC输注后第8周尿BKV-DNA及CMV-DNA拷贝数较治疗前显著降低(11342.1×10^(8)拷贝/L对5.2×10^(8)拷贝/L,P=0.016;3170.0×10^(4)拷贝/L对0.2×10^(4)拷贝/L,P=0.006),而JCV-DNA与治疗前相比无明显改变(P=0.106).④未发生MSC输注相关不良反应.结论第三方骨髓来源MSC对allo-HSCT后难治性LOHC具有显著疗效且安全性良好.

关键词：难治性迟发性出血性膀胱炎异基因造血干细胞移植间充质干细胞

白细胞介素10工程化修饰人脐带间充质干细胞优效治疗炎症性肠病

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中国组织工程研究 2025年第23期29卷 4878-4887页

作者：冯乙芮高天芸王亚萍黄亚红王斌南京大学医学院附属鼓楼医院临床干细胞研究室南京大学生命科学学院江苏省南京市210008 南京大学医学院附属鼓楼医院临床干细胞研究室江苏省南京市210008 临床干细胞研究室南京鼓楼医院南京中医药大学鼓楼临床医学院江苏省南京市210008 南京大学生命科学学院江苏省南京市210008

背景:间充质干细胞来源广泛、易体外增殖,并可分泌一系列免疫调节因子抑制炎症、促进组织修复再生,广泛应用于各种疾病治疗研究。但是对于多种疾病,间充质干细胞的治疗效果有限。针对疾病特定发病机制或者干预靶点进行工程化修饰间充质... 详细信息

背景:间充质干细胞来源广泛、易体外增殖,并可分泌一系列免疫调节因子抑制炎症、促进组织修复再生,广泛应用于各种疾病治疗研究。但是对于多种疾病,间充质干细胞的治疗效果有限。针对疾病特定发病机制或者干预靶点进行工程化修饰间充质干细胞是未来细胞治疗的重要发展方向。目的:白细胞介素10是一种典型的抗炎细胞因子,有助于调节免疫反应并诱导巨噬细胞向抗炎表型极化,该研究探讨白细胞介素10基因工程化修饰人脐带间充质干细胞对炎症性肠病的治疗效果。方法:通过电转染建立稳定过表达人白细胞介素10基因的人脐带间充质干细胞,并基于细胞治疗产品标准筛选出临床级细胞。给予C57BL/6J小鼠自由饮用5%葡聚糖硫酸钠盐水溶液建立急性结肠炎模型,分别在造模前1 d(尾静脉途径)与造模后第4天(腹腔途径)注射空质粒转染的人脐带间充质干细胞或过表达人白细胞介素10基因的人脐带间充质干细胞(1×10~6个/只)。在造模后第6天取结肠组织进行苏木精-伊红染色评估组织学变化,免疫荧光染色检测增殖细胞核抗原与CD31的表达。结果与结论:构建的稳定过表达白细胞介素10的工程化人脐带间充质干细胞,满足临床级人脐带间充质干细胞质量标准;人脐带间充质干细胞对小鼠急性结肠炎具有修复效果,过表达白细胞介素10基因的人脐带间充质干细胞的治疗效果更加优效,更显著地抑制急性结肠炎小鼠的体质量下降(P组织损伤(P细胞介素10基因人脐带间充质干细胞组结肠组织切片中增殖细胞核抗原阳性细胞与CD31阳性细胞显著多于人脐带间充质干细胞组,表明过表达白细胞介素10基因的人脐带间充质干细胞可能通过显著促进肠组织细胞增殖和血管再生进而促进结肠组织修复。

关键词：白细胞介素10 人脐带间充质干细胞工程化修饰间充质干细胞炎症性肠病再生修复细胞增殖肠再生

Earle's盐平衡液饥饿诱导DLD-1,HCT-116,A2780,CHO,Hep G2和SMMC7721肿瘤细胞系自噬发生的时间优化（英文）

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中山大学学报（自然科学版） 2016年第4期55卷 108-117页

作者：张文亮张明明刘斌石宏顺王海河中山大学中山医学院生物化学系∥中山大学干细胞与组织工程中心广东广州510080

肿瘤细胞在正常培养条件下自噬水平非常低,很难被监测到。与药物性自噬诱导剂相比,Earle's盐平衡液(EBSS)应用简便,除产生饥饿诱导自噬外,无其他细胞毒性,有利于研究细胞自噬的分子机制和功能。本文应用蛋白免疫印记和细胞免疫荧光技术... 详细信息

肿瘤细胞在正常培养条件下自噬水平非常低,很难被监测到。与药物性自噬诱导剂相比,Earle's盐平衡液(EBSS)应用简便,除产生饥饿诱导自噬外,无其他细胞毒性,有利于研究细胞自噬的分子机制和功能。本文应用蛋白免疫印记和细胞免疫荧光技术探讨了EBSS对DLD-1和HCT-116结直肠癌、A2780和CHO卵巢癌、HepG 2和SMMC7721肝癌细胞系的自噬诱导效果和有效诱导时间。结果显示:EBSS短短几小时处理,能够非常有效地诱导上述6株肿瘤细胞发生自噬,但不同细胞系之间的有效诱导时间却明显不同。其中,DLD-1、HCT-116、CHO和HepG 2细胞系的有效诱导时间仅需2 h;A2780细胞需要稍微延长到4 h;然而SMMC7721却要延长到8 h左右。本研究为其他研究者在应用EBSS诱导肿瘤细胞自噬时提供了实践依据和参考。

关键词：细胞自噬诱导 Earle's盐平衡液 LC3 SQSTM1/p62 癌细胞

心肌营养素1诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞

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中国病理生理杂志 2011年第11期27卷 2061-2066页

作者：彭朝权高雅项鹏杨珂邹丽媛吴晓中山大学附属第三医院心内科广东广州510630 中山大学干细胞与组织工程研究中心广东广州510080

目的:探索心肌营养素1(CT-1)对小型猪骨髓间充质干细胞(MSCs)向心肌样细胞分化的影响。方法:获取、扩增稳定的成体西藏小型猪MSCs,鉴定成脂、成骨潜能。分4组诱导向心肌样细胞分化,包括空白对照组、5-氮杂胞苷(5-Aza)组、CT-1组、5-Aza... 详细信息

目的:探索心肌营养素1(CT-1)对小型猪骨髓间充质干细胞(MSCs)向心肌样细胞分化的影响。方法:获取、扩增稳定的成体西藏小型猪MSCs,鉴定成脂、成骨潜能。分4组诱导向心肌样细胞分化,包括空白对照组、5-氮杂胞苷(5-Aza)组、CT-1组、5-Aza和CT-1合用组。取诱导后4周的细胞加肌动蛋白(α-actin)和心肌肌钙蛋白T(cTnT)抗体,进行免疫荧光染色,最后计数红色荧光阳性染色率。结果:分组诱导分化结果,合用组的诱导分化心肌样细胞α-actin阳性率为29.90%±4.76%,明显大于5-Aza组(17.73%±2.35%,P细胞cTnT阳性率为36.50%±4.09%,明显大于5-Aza组(14.37%±1.65%,P细胞,诱导后的细胞获得部分心肌细胞特异性蛋白的表达。CT-1与5-Aza联合可明显提高诱导率。

关键词：心肌营养素1 间充质干细胞心肌样细胞