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TNF-α诱导滑膜MSCsMSCs与BMSCs凋亡的比较研究

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中国修复重建外科杂志 2016年第4期30卷 473-478页

作者：欧阳毅王鹏宋斌侯景义陈仲邓海权沈慧勇吴燕峰李卫平杨睿中山大学孙逸仙纪念医院骨外科广州510120 中山大学孙逸仙纪念医院生物治疗中心

目的通过比较TNF-α诱导滑膜MSCs（synovium-derived MSCs,SMSCs）与BMSCs凋亡,探讨SMSCs的抗凋亡能力。方法取患者自愿捐赠的滑膜组织及骨髓,分别采用组织贴壁法和密度梯度离心法分离培养SMSCs和BMSCs并传代,取第3-5代细胞行细胞免疫... 详细信息

目的通过比较TNF-α诱导滑膜MSCs（synovium-derived MSCs,SMSCs）与BMSCs凋亡,探讨SMSCs的抗凋亡能力。方法取患者自愿捐赠的滑膜组织及骨髓,分别采用组织贴壁法和密度梯度离心法分离培养SMSCs和BMSCs并传代,取第3-5代细胞行细胞免疫表型及三系分化鉴定后进行实验。实验分为4组,其中SMSCs、BMSCs凋亡诱导组（SMSCs、BMSCs实验组）用20 ng/m L TNF-α和10μg/m L放线菌酮对细胞进行凋亡诱导,其对应对照组以正常培养基培养。倒置相差显微镜下观察凋亡诱导细胞形态变化;培养24 h取各组细胞,采用细胞计数试剂盒8及流式细胞术检测细胞存活率及凋亡率,Western blot法检测细胞半胱氨酶天冬氨酶蛋白酶降解产物8、3（Cleaved Caspase-8、3）的表达。结果经细胞表型及三系分化鉴定培养获得的细胞均符合MSCs鉴定标准。倒置相差显微镜观察示,随凋亡诱导培养时间延长,两实验组细胞形态及生长均较对应的对照组差。培养24 h,两对照组细胞存活率均为100%,未见细胞凋亡;SMSCs、BMSCs实验组细胞存活率分别降至60.13%±8.63%及46.55%±10.54%,均显著低于对照组（P〈0.05）,SMSCs实验组细胞存活率显著高于BMSCs实验组（t=3.152,P=0.006）。SMSCs和BMSCs对照组细胞凋亡率分别为1.12%±0.24%和1.35%±0.31%,两实验组分别增高至36.54%±8.63%及53.77%±11.52%,均显著高于对照组（P〈0.05）,且SMSCs实验组细胞凋亡率显著低于BMSCs实验组（t=3.785,P=0.001）。两对照组细胞Cleaved Caspase-8、3蛋白几乎不表达,且SMSCs实验组和BMSCs组细胞Cleaved Caspase-8、3蛋白明显高表达;其中BMSCs实验组明显高于SMSCs实验组（t=13.870,P=0.000;t=7.309,P=0.000）。结论经TNF-α诱导培养,SMSCs凋亡明显少于BMSCs,具有更强的抗凋亡能力。

关键词：滑膜MSCs BMSCs TNF-α 细胞凋亡

不同浓度丁酸钠诱导未成熟树突状细胞分化的免疫学功能比较

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中国药学杂志 2011年第24期46卷 1874-1878页

作者：刘璐李琳闵军王捷曾育杰伍衡陈双褚忠华中山大学孙逸仙纪念医院胃肠外科广州510120 中山大学孙逸仙纪念医院妇产科广州510120 中山大学孙逸仙纪念医院肝胆外科广州510120

目的探讨不同浓度丁酸钠诱导对于体外培养的树突状细胞(dendritic cells,DC)免疫刺激活性的影响。方法通过重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和人重组白细胞介素4(IL-4)体外诱导的人单个核细胞来源的DC,按照0.5、0.75、1、1.25... 详细信息

目的探讨不同浓度丁酸钠诱导对于体外培养的树突状细胞(dendritic cells,DC)免疫刺激活性的影响。方法通过重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和人重组白细胞介素4(IL-4)体外诱导的人单个核细胞来源的DC,按照0.5、0.75、1、1.25、1.5 mmol.L-15种浓度丁酸钠体外诱导分化,并分别以流式细胞仪,FITC-dxtran内吞检测、MLR、ELISA法检测DC的凋亡率、表面标志、内吞能力、刺激淋巴细胞增殖能力和IL-10、IL-12、INF-γ分泌的变化。结果 1.25、1.5 mmol.L-1丁酸钠有较高的细胞毒性。0.5、0.75、1 mmol.L-1丁酸钠均可抑制DC表面成熟表型的表达。其中以1.0 mmol.L-1丁酸钠诱导下DC不成熟表型表达效果最稳定。虽然不同浓度丁酸钠诱导下的DC内吞能力无显著差异(P>0.05),但1.0 mmol.L-1丁酸钠与0.5、0.75 mmol.L-1丁酸钠相比较其IL-10分泌量(3.29±0.21)最大,抑制淋巴细胞增殖能力(1.53±1.04)最强(P<0.05)。结论 1.0 mmol.L-1丁酸钠是诱导DC稳定不成熟状态的最佳浓度。

关键词：树突状细胞丁酸钠免疫耐受

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三氧化二砷在肝癌综合治疗中的应用

中国中西医结合杂志 2003年第12期23卷 931-932页

作者：李江涛区庆嘉吴一冲周修静黄东全高维实中山大学孙逸仙纪念医院普外科

近年来，三氧化二砷（As_2O_3）因其在难治性和耐药性急性早幼粒细胞性白血病（APL）的治疗中疗效显著而引起注意，As_2O_3在治疗实体瘤包括肝癌的基础研究也逐渐增多，我们的研究表明其在体外可明显抑制肝癌细胞增殖。但临床用于肝癌... 详细信息

近年来，三氧化二砷（As_2O_3）因其在难治性和耐药性急性早幼粒细胞性白血病（APL）的治疗中疗效显著而引起注意，As_2O_3在治疗实体瘤包括肝癌的基础研究也逐渐增多，我们的研究表明其在体外可明显抑制肝癌细胞增殖。但临床用于肝癌治疗的报道极少，疗效及不良反应有待总结。经医院药事委员会同意，试将其用其于肝癌的化疗中。

关键词：三氧化二砷肝癌综合治疗不良反应复发

糖尿病患者盆腔淋巴结清扫术后淋巴囊肿感染致脓毒性休克13例临床分析

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中华急诊医学杂志 2021年第6期30卷 737-743页

作者：张萌曾志芬吴文霞张润锦何旺中山大学孙逸仙纪念医院全科医学科广州510120 中山大学孙逸仙纪念医院泌尿外科广州510120

目的分析糖尿病患者盆腔淋巴结清扫术后淋巴囔肿感染致脓毒性休克的临床特征和诊疗经过,提高其抢救成功率。方法回顾性研究2015.1-2020.1新诊断膀胱癌、前列腺癌、肾癌、宫颈癌、子宫内膜癌及卵巢癌,入住中山大学孙逸仙纪念医院泌尿外... 详细信息

目的分析糖尿病患者盆腔淋巴结清扫术后淋巴囔肿感染致脓毒性休克的临床特征和诊疗经过,提高其抢救成功率。方法回顾性研究2015.1-2020.1新诊断膀胱癌、前列腺癌、肾癌、宫颈癌、子宫内膜癌及卵巢癌,入住中山大学孙逸仙纪念医院泌尿外科及妇科的糖尿病患者,均按专科规范行包含盆腔淋巴结清扫术在内的手术治疗,共计462例:148例术后盆腔淋巴囊肿形成,其中89例发生感染,之中的13例发展为脓毒性休克。比较淋巴囊肿感染者中休克和非休克患者的年龄、性别、糖尿病病程、BMI、糖基化血红蛋白、手术切除的淋巴结个数、术后引流管留置时间、淋巴囊肿最大直径及与辅助化疗的相隔时间;分析13例脓毒性休克患者始发症状和发病后首次血象、发病至引流穿刺的时间及最终转归;分析感染的淋巴囊液病原学培养和药敏结果。结果分类变量检验显示休克和非休克患者相比,糖基化血红蛋白(P=0.018)、辅助化疗(P=0.014)和囊肿大小(P<0.001)差异有统计学意义;13例脓毒性休克患者中就诊时11例首发症状仅为轻中度的发热或腹痛;初次血象白细胞总数均在2万以下;从发病至穿刺的时间平均为33 h。13例患者中,有5例发展为多器官功能衰竭,其中1例死亡;有2例病情反复难以控制,经影像学检查证实脓腔和周围脏器连通;12例患者好转后仅1例对残留的淋巴囊肿预处置,其中4例再发囊肿感染1-2次,之中2例进展为脓毒性休克,1例死亡。病原菌以革兰氏阴性菌常见,主要是大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌及铜绿假单胞菌,哌拉西林/他唑巴坦、碳青酶烯类及替加环素均为敏感药物,头孢他定、头孢曲松和左氧氟沙星耐药率均为50%以上。结论血糖控制不佳、化疗和较大的淋巴囊肿(d≥5 cm)是糖尿病患者盆腔淋巴结清扫术后发生淋巴囊肿感染致脓毒性休克的高危因素;大多数休克患者始发症状及白细胞总数均没有显著的示警意义,导致从感染发生到穿刺引流时间较长,延误处置;早期诊断、及时穿刺引流和广谱抗生素治疗是救治成功的关键。治疗效果欠佳时脓腔贯通周围脏器感染的可能性要被考虑。糖尿病患者在发生术后淋巴囊肿感染致脓毒性休克后,应积极干预处置较大的残留淋巴囊肿,避免再次发生危及生命的严重感染。

关键词：糖尿病盆腔淋巴结清扫术淋巴囊肿感染脓毒性休克危险因素早期诊断治疗和预处理

改良单孔腹腔镜下膀胱前列腺根治性切除-原位回肠新膀胱术应用分析

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中华医学杂志 2010年第22期90卷 1542-1546页

作者：黄健林天歆许可慰韩金利叶枫黄海江春张彩霞姚友生谢文练刘浩中山大学孙逸仙纪念医院泌尿外科广州510120 中山大学孙逸仙纪念医院体检中心

目的观察单孔腹腔镜-内镜手术在膀胱前列腺根治性切除-原位回肠新膀胱术中的可行性及治疗效果.方法对2008年11月至2009年8月收治的8例男性膀胱癌患者采用自制多通道套管进行改良单孔腹腔镜下膀胱前列腺根治性切除-原位回肠新膀胱术.... 详细信息

目的观察单孔腹腔镜-内镜手术在膀胱前列腺根治性切除-原位回肠新膀胱术中的可行性及治疗效果.方法对2008年11月至2009年8月收治的8例男性膀胱癌患者采用自制多通道套管进行改良单孔腹腔镜下膀胱前列腺根治性切除-原位回肠新膀胱术.多通道套管由2个胶圈和1个外科手套构成,手套手指连接着2个穿刺套管和2个活瓣圈,多通道套管经下腹部正中小切口置入,腹腔镜器械经该套管置入进行操作.另经脐上置入1个套管用于放置腹腔镜,依次行腹腔镜下双侧扩大盆腔淋巴结清扫、膀胱前列腺根治性切除、体外构建回肠新膀胱及腹腔镜下新膀胱尿道吻合术.收集围手术期及术后资料并进行分析.结果所有患者手术均顺利完成,无一例中转常规腹腔镜手术或开放手术.平均手术时间为399 min（355-455 min）,平均出血量为154 ml（90～210 ml）,平均术后住院时间为15 d（14-18 d）.其中1例患者术后出现谵妄,经保守治疗恢复正常.无一例发生操作通道相关并发症.术后病理示所有病例手术标本切缘均为阴性,平均清扫淋巴结20个.患者平均随访6.1个月（2.0～10.0个月）,未发现肿瘤复发、转移.结论改良单孔腹腔镜下膀胱前列腺根治性切除-原位回肠新膀胱术技术上可行,减少了4个手术套管,手术并发症发生率低,短期随诊肿瘤控制效果好,长期根治效果尚待观察.

关键词：膀胱肿瘤腹腔镜检查膀胱切除术前列腺切除术单孔腹腔镜-内窥镜手术

AMSS-PCR在肺癌突变基因检测中的价值研究

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中国肺癌杂志 2018年第11期21卷 815-820页

作者：金柯谢绚潘越江王科喜陈柏深吴多光沈卓坚王铭辉张惠忠中山大学孙逸仙纪念医院胸外科广州510120

背景与目的肺癌驱动基因检测具有重要意义,目前检测方法多样,临床适用性有差异。本研究旨在比较基于扩增阻碍突变系统-聚合酶链反应(Amplification Refractory Mutation System-polymerase chain reaction,ARMS-PCR)技术的试剂盒与一代... 详细信息

背景与目的肺癌驱动基因检测具有重要意义,目前检测方法多样,临床适用性有差异。本研究旨在比较基于扩增阻碍突变系统-聚合酶链反应(Amplification Refractory Mutation System-polymerase chain reaction,ARMS-PCR)技术的试剂盒与一代测序及ARMS-qPCR检测肺癌突变基因的敏感性和特异性,探究突变位点特异扩增法(Amplification Mutation Specific System, AMSS)-PCR技术在肺癌突变基因检测中的应用价值。方法对前期已行ARMS-PCR检测的肿瘤标本进行一代测序及试剂盒检测,比较各种方法的检测结果,并对检测结果进行统计学分析。结果本研究共收集了309例肺癌标本。试剂盒与一代测序符合率97.41%,ARMS-PCR的符合率97.73%。试剂盒与一代测序、试剂盒与实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction, qPCR)、qPCR与一代测序一致性检验的Kappa值分别为0.946、0.953、0.913。试剂盒以一代测序为参照的受试者工作特征曲线(receiver operatingcharacteristiccurve,ROC)曲线下面积为0.976,以qPCR为参照的ROC曲线下面积为0.975。结论 AMSSqPCR技术能够有效检测肺癌突变基因,具有较好的临床应用价值。

关键词：一代测序突变位点特异扩增法扩增阻碍突变系统实时定量聚合酶链式反应肺癌突变基因检测

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转移性前列腺癌新型内分泌治疗现况及进展

中华泌尿外科杂志 2021年第Z1期42卷 1-5页

作者：黄健刘皓中山大学孙逸仙纪念医院泌尿外科

前列腺癌是老年男性常见的恶性肿瘤,发生远处转移患者较局限性患者预后不佳,而多数中国前列腺癌患者在初诊时已发生远处转移。近年来,新型内分泌治疗快速发展,临床随机对照研究证实,转移性前列腺癌早期应用醋酸阿比特龙等新型内分泌治... 详细信息

前列腺癌是老年男性常见的恶性肿瘤,发生远处转移患者较局限性患者预后不佳,而多数中国前列腺癌患者在初诊时已发生远处转移。近年来,新型内分泌治疗快速发展,临床随机对照研究证实,转移性前列腺癌早期应用醋酸阿比特龙等新型内分泌治疗药物可显著改善患者的生存获益及生活质量。如何紧密结合研究进展制订新型内分泌治疗策略,仍需不断优化和探索。本文对转移性前列腺癌中各新型内分泌治疗的现状及最新研究进展进行综述,希望为治疗策略的制订和优化提供帮助。

关键词：前列腺肿瘤转移性新型内分泌治疗雄激素受体信号通路醋酸阿比特龙联合治疗

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肝门部胆管癌外科治疗的单中心经验

中华外科杂志 2023年第5期61卷 381-388页

作者：邓菀颖施祥德叶艳芳唐启彬林浩铭余先焕刘超中山大学孙逸仙纪念医院胆胰外科广州510289 中山大学孙逸仙纪念医院临床研究部广州510120

目的探讨肝门部胆管癌(pCCA)外科治疗的策略和效果。方法回顾性收集2014年1月至2021年12月在中山大学孙逸仙纪念医院胆胰外科接受以根治性切除为目的手术治疗的81例pCCA患者的病历资料。男性50例、女性31例,年龄(62.5±11.5)岁(范围:26... 详细信息

目的探讨肝门部胆管癌(pCCA)外科治疗的策略和效果。方法回顾性收集2014年1月至2021年12月在中山大学孙逸仙纪念医院胆胰外科接受以根治性切除为目的手术治疗的81例pCCA患者的病历资料。男性50例、女性31例,年龄(62.5±11.5)岁(范围:26~83岁)。就诊时合并黄疸75例,其中60例术前行胆道引流。患者术前1周内血清胆红素水平[M(IQR)]为44.3(41.9)μmol/L(范围:8.0~344.2μmol/L);术前行门静脉栓塞20例。术前通过影像学检查评估Bismuth-Corlette分型,Ⅰ型3例、Ⅱ型6例、Ⅲa型21例、Ⅲb型27例、Ⅳ型24例。主要研究指标为总体生存时间,次要研究指标为无复发生存时间、术后并发症发生率、术后90 d内病死率。采用Kaplan-Meier法计算术后生存时间并绘制生存曲线,采用Log-rank检验进行生存比较,并采用Cox比例风险模型分析pCCA患者的独立预后因素。结果81例pCCA患者中,行大范围肝切除术67例,其中大范围肝切除联合胰十二指肠切除术3例;34例联合肝门部血管切除重建(单纯门静脉切除重建术18例、单纯肝动脉切除重建术9例、门静脉和肝动脉联合切除重建7例);获得R0切除43例。手术时间(627±136)min(范围:565~940 min),术中出血量400(455)ml(范围:200~2800 ml)。围手术期病死率为3.7%(3/81)。根据Clavien-Dindo并发症分级系统,术后Ⅲ~Ⅳ级并发症发生率为23.4%(19/81)。随访截至2022年9月,随访时间为34.0(24.2)个月(范围:0.4~103.6个月)。排除3例围手术期死亡患者,余78例患者的中位生存时间为36.10个月(95%CI:18.23~42.97个月),1、3、5年总体生存率分别为85.3%、46.8%、28.7%。41例R0切除患者的中位生存时间为47.83个月(95%CI:36.90~58.80个月),37例R1、R2切除患者的中位生存时间为20.47个月(95%CI:10.52~30.58个月)。70例R0和R1切除患者的中位无复发生存时间为24.50个月(95%CI:12.15~31.85个月),1、3、5年无复发生存率分别为65.2%、45.7%、29.9%。41例R0切除患者的中位无复发生存时间为38.57个月(95%CI:21.50~55.63个月),29例R1切除患者的中位无复发生存时间为10.83个月(95%CI:2.82~19.86个月)。结论根治性手术切除是治疗pCCA的首选方法,术前精准评估和充分准备可减少手术并发症,积极的手术治疗可提高根治性切除率而使患者获得较好的生存受益。

关键词：胆管肿瘤外科手术肝门部胆管癌根治性切除安全性预后分析

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乌司他丁对心肺复苏后大鼠肠屏障的保护作用

中华急诊医学杂志 2015年第11期24卷 1234-1238页

作者：常瑞明常建星江志鹏温立强余凯杨涛蒋龙元中山大学孙逸仙纪念医院急诊科广州510120 中山大学孙逸仙纪念医院普外科广州510120

目的探讨乌司他丁对心肺复苏后大鼠受损的肠屏障是否有保护作用及其可能机制.方法 21只雄性SD大鼠随机（随机数字法）分为3组：对照组（sham组=7）、心肺复苏组（CPR组=7）和乌司他丁组（ulinastatin,UTI组=7）,戊巴比妥钠（45～ 60 mg... 详细信息

目的探讨乌司他丁对心肺复苏后大鼠受损的肠屏障是否有保护作用及其可能机制.方法 21只雄性SD大鼠随机（随机数字法）分为3组：对照组（sham组=7）、心肺复苏组（CPR组=7）和乌司他丁组（ulinastatin,UTI组=7）,戊巴比妥钠（45～ 60 mg/kg）.腹腔注射麻醉,sham组大鼠麻醉后只行动静脉插管,不经历心搏骤停复苏;CPR组大鼠插管后用致颤法导致心搏呼吸骤停,8 min后行心肺复苏,开始实验前2h经尾静脉注射与UTI组等量的无菌生理盐水,而UTI组大鼠注射UTI（100 000 U/kg）,余程序同CPR组.在复苏成功后48 h大鼠心脏取血测定TNF-α和IL-1β的质量浓度,留取回肠标本行肠黏膜电镜观察、肠黏膜TUNEL染色及western blot监测caspase-3的蛋白水平.结果 CPR组大鼠血清中TNF-α和IL-1β的质量浓度明显升高（与sham组比较,P＜0.01;与UTI组比较,P＜0.05）;UTI组较sham组高,但明显低于CPR组（P＜0.05）.电镜下观察到CPR组肠黏膜上皮细胞间紧密连接明显开放增宽,UTI组开放增宽不明显,sham组成正常形态;sham组未见明显肠黏膜上皮细胞凋亡,CPR组凋亡明显,UTI组黏膜上皮细胞凋亡较CPR组明显减轻;UTI组caspase-3表达较sham组高,但较CPR组低（均P＜0.05）.结论乌司他丁可以减少心肺复苏后大鼠血液中促炎介质的释放,降低肠黏膜caspase-3的表达,减轻肠上皮细胞的凋亡,对心肺复苏后大鼠受损的肠屏障有保护作用.

关键词：乌司他丁心肺复苏肿瘤坏死因子-α 白介素-1β 天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶细胞凋亡肠屏障保护