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胰岛β细胞铁过载模型的建立及铁过载对胰岛β细胞损伤的研究

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中国病理生理杂志 2019年第12期35卷 2150-2155页

作者：张丽娜侯乐乐刘祖霖李平甘黄思琪孟哲欧辉江转南梁立阳中山大学孙逸仙纪念医院儿科

目的:通过枸橼酸铁铵(FAC)与大鼠胰岛素瘤细胞株INS-1共培养,构建铁过载INS-1细胞模型,并观察铁过载对胰岛细胞铁沉积、存活、胰岛素分泌、氧化应激以及线粒体损伤的影响。方法:体外培养INS-1细胞,不添加FAC作为对照组,加入不同浓度(5... 详细信息

目的:通过枸橼酸铁铵(FAC)与大鼠胰岛素瘤细胞株INS-1共培养,构建铁过载INS-1细胞模型,并观察铁过载对胰岛细胞铁沉积、存活、胰岛素分泌、氧化应激以及线粒体损伤的影响。方法:体外培养INS-1细胞,不添加FAC作为对照组,加入不同浓度(5、10、20、40、80、160和320μmol/L)的FAC干预INS-1细胞,分别培养24 h、48 h和72 h,建立铁过载INS-1细胞模型,测定细胞内的不稳定铁池(LIP),CCK8法分析细胞活力的改变,筛选出后续实验组所用FAC浓度,ELISA法检测胰岛素分泌功能,活性氧簇(ROS)探针染色流式细胞术检测ROS的生成,JC-1试剂盒检测线粒体膜电位,透射电子显微观察线粒体的变化。结果:加入不同浓度FAC处理后,铁过载组INS-1细胞内的LIP水平明显高于对照组(P<0.05)。随着FAC浓度的升高及干预时间的延长,INS-1细胞的活力逐渐降低(P<0.05)。选取80、160和320μmol/L FAC作用48 h作为后续实验的铁过载组。胰岛素分泌随FAC浓度的增加出现先升高后降低,160和320μmol/L组与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。INS-1细胞内ROS的水平较对照组均显著增加(P<0.05)。线粒体膜电位随着铁浓度的增加而降低(P<0.05)。铁过载后INS-1细胞的线粒体肿胀,内嵴扩张,失去正常结构,随着FAC浓度增加,线粒体结构破坏更加明显。结论:与FAC共培养48 h可成功建立INS-1细胞铁过载模型。铁过载可显著破坏线粒体结构和功能,增加细胞内ROS的水平。胰岛β细胞的存活对铁敏感,即使低剂量的铁也损伤胰岛β细胞,但只有细胞数量减少到一定程度,才会减少胰岛素的分泌。

关键词：铁过载胰岛β细胞氧化应激

儿童血液病合并侵袭性真菌病164例临床分析

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中国实验血液学杂志 2019年第5期27卷 1672-1677页

作者：廖雄宇邱坤银吴若豪郭淑仪王健黄科徐宏贵黎阳方建培周敦华中山大学孙逸仙纪念医院儿科

目的:探讨儿童侵袭性真菌病(invasive fungal disease,IFD)的临床特点和防治方法。方法:回顾性分析本中心2012年1月至2015年1月符合IFD诊断标准的164例临床资料,了解其发病率、临床特征、相关因素,治疗方法和预后。结果:在本院收治的1 ... 详细信息

目的:探讨儿童侵袭性真菌病(invasive fungal disease,IFD)的临床特点和防治方法。方法:回顾性分析本中心2012年1月至2015年1月符合IFD诊断标准的164例临床资料,了解其发病率、临床特征、相关因素,治疗方法和预后。结果:在本院收治的1 289例血液病患儿中164例发生IFD,发病率为12.7%;感染部位主要为单纯肺部、血液和胃肠道,发生率分别为84.2%、5.5%和3%;共检出真菌35例,其中白色假丝酵母菌、曲霉菌和光滑假丝酵母菌检出率较高,分别为51.5%、20%和14.3%;164例患儿完全缓解36例,部分缓解97例,疾病稳定10例,进展11例,死亡10例,总有效率达81.1%。单因素分析表明,粒细胞缺乏、粒细胞恢复、长期使用糖皮质激素和免疫抑制剂及不同的诊断级别是影响患儿抗真菌疗效的显著因素;多因素分析结果则进一步表明,粒细胞恢复和诊断级别为影响IFD患儿疗效的独立预后因素。164例患儿抗真菌治疗,在开始的12周内的总体活存率为81.7%,其中伊曲康唑、伏立康唑、两性霉素B和卡泊芬净治疗的患儿12周生存率分别为81.4%、80%、69.4%和97.1%,Log-rank检验显示差异具有显著性意义。除卡泊芬净外,其余3种药物均出现不同程度的毒副作用,经对症治疗后患儿均可耐受。结论:本院血液病患儿IFD的发生率为12.7%,肺部为最常见感染部位,且以念珠菌居多。促进粒细胞恢复和尽早的分层诊断有助于IFD的治疗。对于经济条件较好的患儿,卡泊芬净是一种高效、低毒和预后好的抗真菌药物,值得临床推荐使用。

关键词：儿童血液病侵袭性真菌病

IL-8通过激活PKC/ERK信号通路促进肾癌细胞上皮细胞-间质细胞转化

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生物化学与生物物理进展 2012年第10期39卷 981-986页

作者：毕良宽林天歆许可慰韩金利黄海张彩霞董文刘皓黄健中山大学孙逸仙纪念医院泌尿外科广州510120

上皮细胞-间质细胞转化(EMT)在肿瘤转移方面起着非常重要的作用.肾癌发生EMT的具体分子机制尚不清楚.IL-8是一个重要的炎症趋化因子,研究表明肾癌细胞可以分泌IL-8,但IL-8是否参与肾癌细胞EMT的调节目前尚无报道.我们研究发现,IL-8可以... 详细信息

上皮细胞-间质细胞转化(EMT)在肿瘤转移方面起着非常重要的作用.肾癌发生EMT的具体分子机制尚不清楚.IL-8是一个重要的炎症趋化因子,研究表明肾癌细胞可以分泌IL-8,但IL-8是否参与肾癌细胞EMT的调节目前尚无报道.我们研究发现,IL-8可以促进肾癌细胞形态发生间质化改变,IL-8刺激后E-钙黏蛋白表达水平下降,N-钙黏蛋白表达上调.另外,IL-8可以促进肾癌细胞侵袭,但对肾癌细胞增殖的影响并不明显.进一步研究显示,IL-8通过激活蛋白激酶C(PKC)引起细胞外调节性激酶(ERK)磷酸化.因此,我们认为IL-8可能通过PKC/ERK信号通路促进肾癌细胞发生EMT,这可能是肾癌转移的重要机制之一.

关键词：肾癌 IL-8 上皮细胞-间质细胞转化蛋白激酶C 细胞外信号调节性激酶(ERK)

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环孢素治疗免疫相关性皮肤病专家建议

中华皮肤科杂志 2022年第6期55卷 471-479页

作者：中国医师协会皮肤科医师分会自身免疫病专业委员会郭庆不详中山大学孙逸仙纪念医院

环孢素属于钙调磷酸酶抑制剂,是一种强效无细胞毒性的免疫抑制剂。主要作用于T细胞,通过抑制T细胞的增殖和细胞因子转录,发挥免疫抑制作用。皮肤科常用于银屑病、特应性皮炎等病的治疗,也有用于系统性红斑狼疮、皮肌炎、血管炎等病治疗... 详细信息

环孢素属于钙调磷酸酶抑制剂,是一种强效无细胞毒性的免疫抑制剂。主要作用于T细胞,通过抑制T细胞的增殖和细胞因子转录,发挥免疫抑制作用。皮肤科常用于银屑病、特应性皮炎等病的治疗,也有用于系统性红斑狼疮、皮肌炎、血管炎等病治疗的报道。国内有关专家在检索和研究国内外环孢素治疗免疫相关性皮肤病文献(主要是随机对照临床试验、专家共识或专家建议)的基础上经反复讨论,提出的环孢素治疗常见免疫相关性皮肤病的专家建议。

关键词：环孢菌素自身免疫疾病银屑病红斑狼疮,系统性皮肌炎硬皮病,局部性皮肤疾病,水疱大疱性

羊水炎症因子与紧急子宫颈环扎术孕妇妊娠结局的关系

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中华妇产科杂志 2024年第7期59卷 522-529页

作者：吴琳祥包琳祝丽琼郭颖琛刘勇谭剑平陈慧张建平刘颖琳中山大学孙逸仙纪念医院妇产科广州510120 中山大学孙逸仙纪念医院儿科广州510120

目的探讨羊水和外周血中炎症因子水平与紧急子宫颈环扎术孕妇妊娠结局的关系,寻找预测术后不良妊娠结局的指标。方法采用病例对照研究,收集2013年1月1日至2019年7月31日于中山大学孙逸仙纪念医院住院,妊娠16~28周因子宫颈外口扩张行紧... 详细信息

目的探讨羊水和外周血中炎症因子水平与紧急子宫颈环扎术孕妇妊娠结局的关系,寻找预测术后不良妊娠结局的指标。方法采用病例对照研究,收集2013年1月1日至2019年7月31日于中山大学孙逸仙纪念医院住院,妊娠16~28周因子宫颈外口扩张行紧急子宫颈环扎术的孕妇,选取其中围术期行羊膜腔穿刺术并检测羊水中炎症因子的孕妇共85例。根据是否抱婴回家,分为不良结局组(28例)与活产组(57例)。采用单因素logistic回归分析寻找不良妊娠结局的相关危险因素,进一步行多因素logistic回归分析建立预测不良妊娠结局的列线图。结果(1)与活产组比较,不良结局组孕妇行紧急子宫颈环扎术的孕周较早[分别为(23.7±1.8)、(22.9±1.9)周],宫口扩张程度较大(中位数分别为2.0、3.0 cm),分娩孕周较早[分别为(32.8±4.0)、(25.2±2.0)周]、延长孕周时间较短(中位数分别为65.0、13.5 d),分别比较,差异均有统计学意义(P均0.05)。(2)单因素logistic回归分析显示,羊水WBC、TNF-α、IL-1β、IL-2受体(IL-2R)、IL-6、IL-8、IL-10、术后外周血CRP、环扎术孕周及宫口扩张程度与不良结局相关(P均<0.05),多因素logistic回归分析显示,仅羊水WBC、TNF-α为不良结局的独立危险因素。(3)结合临床实践,综合羊水TNF-α、WBC、环扎术孕周及宫口扩张程度构建多因素logistic回归模型,绘制列线图及校准曲线,提示该多因素logistic回归模型对不良结局的预测价值良好,曲线下面积为0.811(95%CI:0.697~0.926),预测不良结局的敏感度为0.792,特异度为0.852,阳性预测值为0.679,阴性预测值为0.912。结论紧急子宫颈环扎术围术期羊水WBC、TNF-α、IL-1β、IL-2R、IL-6、IL-8、IL-10与不良结局相关,其中羊水WBC及TNF-α关系最密切。而围术期母体外周血检查指标与不良结局无明显相关性。综合羊水TNF-α、WBC、环扎术孕周及宫口扩张程度构建的列线图对不良结局有良好的预测作用。

关键词：宫颈功能不全羊水细胞因子类环扎术宫颈妊娠结局

环形RNA及其编码的隐肽是极具潜力的肿瘤疫苗

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科学通报 2024年第33期69卷 4787-4788页

作者：毕艾薇邓雯黄迪苏士成中山大学孙逸仙纪念医院生物治疗技术中心广州510120 中山大学孙逸仙纪念医院乳腺肿瘤中心广州510120

近10年来,肿瘤免疫治疗快速发展,目前已进入精准诊疗阶段.抗原靶点的选择是肿瘤个性化免疫治疗的关键环节.靶点特异性、免疫原性等特征与免疫治疗的抗肿瘤疗效和副作用紧密相关[1].肿瘤新抗原是肿瘤细胞变异而编码产生的可以激活免疫系... 详细信息

近10年来,肿瘤免疫治疗快速发展,目前已进入精准诊疗阶段.抗原靶点的选择是肿瘤个性化免疫治疗的关键环节.靶点特异性、免疫原性等特征与免疫治疗的抗肿瘤疗效和副作用紧密相关[1].肿瘤新抗原是肿瘤细胞变异而编码产生的可以激活免疫系统的“非己”多肽.

关键词：肿瘤免疫治疗肿瘤疫苗抗肿瘤疗效免疫原性靶点精准诊疗新抗原副作用

TNF-α诱导滑膜MSCsMSCs与BMSCs凋亡的比较研究

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中国修复重建外科杂志 2016年第4期30卷 473-478页

作者：欧阳毅王鹏宋斌侯景义陈仲邓海权沈慧勇吴燕峰李卫平杨睿中山大学孙逸仙纪念医院骨外科广州510120 中山大学孙逸仙纪念医院生物治疗中心

目的通过比较TNF-α诱导滑膜MSCs（synovium-derived MSCs,SMSCs）与BMSCs凋亡,探讨SMSCs的抗凋亡能力。方法取患者自愿捐赠的滑膜组织及骨髓,分别采用组织贴壁法和密度梯度离心法分离培养SMSCs和BMSCs并传代,取第3-5代细胞行细胞免疫... 详细信息

目的通过比较TNF-α诱导滑膜MSCs（synovium-derived MSCs,SMSCs）与BMSCs凋亡,探讨SMSCs的抗凋亡能力。方法取患者自愿捐赠的滑膜组织及骨髓,分别采用组织贴壁法和密度梯度离心法分离培养SMSCs和BMSCs并传代,取第3-5代细胞行细胞免疫表型及三系分化鉴定后进行实验。实验分为4组,其中SMSCs、BMSCs凋亡诱导组（SMSCs、BMSCs实验组）用20 ng/m L TNF-α和10μg/m L放线菌酮对细胞进行凋亡诱导,其对应对照组以正常培养基培养。倒置相差显微镜下观察凋亡诱导细胞形态变化;培养24 h取各组细胞,采用细胞计数试剂盒8及流式细胞术检测细胞存活率及凋亡率,Western blot法检测细胞半胱氨酶天冬氨酶蛋白酶降解产物8、3（Cleaved Caspase-8、3）的表达。结果经细胞表型及三系分化鉴定培养获得的细胞均符合MSCs鉴定标准。倒置相差显微镜观察示,随凋亡诱导培养时间延长,两实验组细胞形态及生长均较对应的对照组差。培养24 h,两对照组细胞存活率均为100%,未见细胞凋亡;SMSCs、BMSCs实验组细胞存活率分别降至60.13%±8.63%及46.55%±10.54%,均显著低于对照组（P〈0.05）,SMSCs实验组细胞存活率显著高于BMSCs实验组（t=3.152,P=0.006）。SMSCs和BMSCs对照组细胞凋亡率分别为1.12%±0.24%和1.35%±0.31%,两实验组分别增高至36.54%±8.63%及53.77%±11.52%,均显著高于对照组（P〈0.05）,且SMSCs实验组细胞凋亡率显著低于BMSCs实验组（t=3.785,P=0.001）。两对照组细胞Cleaved Caspase-8、3蛋白几乎不表达,且SMSCs实验组和BMSCs组细胞Cleaved Caspase-8、3蛋白明显高表达;其中BMSCs实验组明显高于SMSCs实验组（t=13.870,P=0.000;t=7.309,P=0.000）。结论经TNF-α诱导培养,SMSCs凋亡明显少于BMSCs,具有更强的抗凋亡能力。

关键词：滑膜MSCs BMSCs TNF-α 细胞凋亡

GSK3β抑制在异氟醚后处理减轻SH-SY5Y细胞缺血再灌注损伤中的作用

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中山大学学报（医学科学版） 2014年第5期35卷 690-694,685页

作者：郭明炎林道炜徐辉郑晓景何波中山大学孙逸仙纪念医院麻醉科广东广州510120 中山大学孙逸仙纪念医院手术室广东广州510120

【目的】研究糖原合成酶激酶3β(GSK3β)抑制在异氟醚后处理减轻SH-SY5Y细胞缺血再灌注损伤的神经保护中所起的作用。【方法】将SH-SY5Y细胞进行分成3组(n=24):Control组、OGD组及OGD+Isoflurane组。Control组细胞常规培养;OGD组进行1 ... 详细信息

【目的】研究糖原合成酶激酶3β(GSK3β)抑制在异氟醚后处理减轻SH-SY5Y细胞缺血再灌注损伤的神经保护中所起的作用。【方法】将SH-SY5Y细胞进行分成3组(n=24):Control组、OGD组及OGD+Isoflurane组。Control组细胞常规培养;OGD组进行1 h氧糖剥夺(OGD)及20 h模拟再灌注;OGD+Isoflurane组进行1 h的OGD及20 h模拟再灌注,OGD开始时立即暴露于2%异氟醚1 h。检测各组模拟再灌注1 h后LDH释放水平及总GSK3β和磷酸化GSK3β表达水平。将高选择性的GSK3β抑制剂chir 98014或chir 99021分别加入OGD组或OGD+Isoflurane组,检测各组模拟再灌注1 h后LDH释放水平。【结果】OGD组LDH释放水平增高,与Control组相比差异有统计学意义(P0.05),p-GSK3β表达增加,差异有统计学意义(P0.05)。【结论】异氟醚后处理对SH-SY5Y细胞缺血再灌注损伤具有神经保护效应。异氟醚后处理保护效应部分通过抑制GSK3β发挥作用。

关键词： GSK3β SH-SY5Y细胞神经保护后处理异氟醚

Graves病患者外周血树突状细胞和CD4＋CD25＋CD127low/-Tr细胞的变化

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中华微生物学和免疫学杂志 2012年第10期32卷 894-899页

作者：曾华严海燕张智贤倪李佳张锦中山大学孙逸仙纪念医院广州510120

目的观察Graves病患者外周血树突状细胞（dendritic cells，DC）和CD4＋CD25＋CD127low/-调节性T细胞（rrr）在疾病过程中的水平变化。方法根据临床表现以及血清游离甲功三项（FT3、FT4、TSH），将患者分为治疗前组、临床缓解组和稳定... 详细信息

目的观察Graves病患者外周血树突状细胞（dendritic cells，DC）和CD4＋CD25＋CD127low/-调节性T细胞（rrr）在疾病过程中的水平变化。方法根据临床表现以及血清游离甲功三项（FT3、FT4、TSH），将患者分为治疗前组、临床缓解组和稳定组，并设正常对照组。采用流式细胞术测定研究对象外周血（EDTA—K2抗凝）中DC及髓样DC（myeloid dendritic cell，MDC）和浆细胞样DC（plasmacytoid dendritic cell，PDC）两个亚群以及CD4CD4＋CD25＋CD127low/-Tr细胞占CD4＋T细胞的百分比，观察它们在病程中的变化，再进一步探讨检测指标与游离甲功三项的相关性。结果（1）治疗前组、临床缓解组、稳定组和正常对照组的总DC、MDC和MDC／PDC逐渐下降，各组间比较均有统计学差异；（2）治疗前组、临床缓解组、稳定组和正常对照组的PDC依次呈下降趋势，治疗前组仅与正常对照组有统计学差异；（3）治疗前组、临床缓解组、稳定组和正常对照组的CD4＋CD25＋CD127low/-Tr细胞逐渐升高，治疗前组仅与正常对照组有统计学差异；（4）治疗前组PDC和CD4＋CD25＋CD127low/-Tr细胞有相关性；（5）在治疗前组，Dc及其亚群与游离甲功三项有相关性，而CD4＋CD25＋CD127low/-Tr细胞只与V13和FT4有相关性。结论Graves病患者总DC、MDC、MDC／PDC比值明显增高，抗甲亢治疗随着病情好转而下降，因此DC及其亚群的检测有望用来监测Graves病患者病情；而CD4＋CD25＋CD127low/-Tr细胞可作为Graves病发病的新指标。

关键词： Graves 树突状细胞 CD4+CD25+CD127low -Tr细胞