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华支睾吸虫3-磷酸甘油酸激酶基因的扩增、克隆及表达

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2004年第5期22卷 306-308页

作者：吴德余新炳徐劲吴忠道陈守义何东苟中山大学中山医学院病原生物学部广州510089

目的　构建编码华支睾吸虫 3 磷酸甘油酸激酶基因的原核表达载体 ,并分析其在大肠埃希菌中的表达。　方法　用Trizol法从华支睾吸虫 3 成虫体内提取总RNA ,并将其反转录成cDNA。根据华支睾吸虫磷酸甘油酸激酶的已知基因 ,利用DNAclub... 详细信息

目的　构建编码华支睾吸虫 3 磷酸甘油酸激酶基因的原核表达载体 ,并分析其在大肠埃希菌中的表达。　方法　用Trizol法从华支睾吸虫 3 成虫体内提取总RNA ,并将其反转录成cDNA。根据华支睾吸虫磷酸甘油酸激酶的已知基因 ,利用DNAclub和PCRdesign软件设计合成一对特异引物 ,从合成的cDNA中 ,用PCR技术扩增出目的片段。将目的片段和原核表达载体同时双酶切后连接 ,重组体转入JM10 9大肠埃希菌 ,用双酶切、PCR和测序筛选阳性克隆。挑选 1个阳性菌落 ,用异丙基 β D 硫代半乳糖苷诱导表达 ,表达产物进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)鉴定。　结果　用逆转录聚合酶链反应技术扩增出 1条 12 48bp大小的片段 ,PCR产物测序鉴定正确 ;转化后得到 10个克隆 ,双酶切、PCR扩增鉴定 ,其中 6个为阳性克隆 ;表达产物用SDS PAGE鉴定 ,在相对分子质量 70 0 0 0处有 1条与理论预测的融合蛋白大小相一致的特异条带。　结论　成功构建重组原核表达载体pGEX 4T 1 PGK 。

关键词：华支睾吸虫原核表达载体扩增大肠埃希菌酶基因鉴定油酸激酶阳性克隆酶切

基于高通量测序技术分析中国荷斯坦奶牛瘤胃纤毛虫的物种多样性

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河南师范大学学报(自然科学版) 2025年

作者：何金英徐勤辉王宇嘉江奕希黄一菲李曼熊杰冯金梅江汉大学医学部病原生物学教研室中国科学院水生生物研究所淡水生态与生物技术国家重点实验室

瘤胃纤毛虫是反刍动物瘤胃微生态系统的重要组成部分,在调控瘤胃微环境及参与其宿主动物的生理功能等方面具有重要作用.然而,家养反刍动物瘤胃中的瘤胃纤毛虫物种多样性及不同动物个体间瘤胃纤毛虫群落结构的差异仍不清楚.采用基于18S r... 详细信息

瘤胃纤毛虫是反刍动物瘤胃微生态系统的重要组成部分,在调控瘤胃微环境及参与其宿主动物的生理功能等方面具有重要作用.然而,家养反刍动物瘤胃中的瘤胃纤毛虫物种多样性及不同动物个体间瘤胃纤毛虫群落结构的差异仍不清楚.采用基于18S rRNA基因的高通量测序技术,解析了中国荷斯坦奶牛瘤胃内纤毛虫的物种多样性和宿主不同个体间的差异.选取3头成年健康中国荷斯坦奶牛共采集了9个瘤胃液样品,提取样品总DNA后,采用瘤胃纤毛虫18S rRNA基因V5～V8区特异性引物进行扩增,扩增产物使用Ion S5TMXL平台测序.去除低质量序列和嵌合体后,共获得721 250条高质量有效序列,基于97%的序列一致性聚类获得38个操作分类单元（operational taxonomic units,OTU）.不同个体样品间在α多样性Chao1、ACE、Shannon和Simpson指数上,差异不显著.OTUs的物种分布属于纤毛门裂口纲毛口亚纲.在属水平分类上,它们主要分布于10个已知的瘤胃纤毛虫的属,其中内毛属是相对丰度最高的属,同时还检测到一些未被分类和鉴定的瘤胃纤毛虫.同一牧场同一饲喂条件下的不同个体之间,瘤胃纤毛虫的物种多样性没有显著差异,但不同个体之间在均匀度上存在一定的差异.研究结果将为瘤胃纤毛虫的高通量测序分析和综合分类学研究提供参考.

关键词：瘤胃纤毛虫原生生物多样性 18S rRNA基因测序分类学

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广州管圆线虫成虫cDNA文库构建

中国人兽共患病杂志 2003年第2期19卷 34-37页

作者：梁瑜王轶何蔼李道宁俞慕华李卓雅张瑞琳詹希美中山大学中山医学院病原生物学部

目的　构建广州管圆线虫成虫cDNA文库。方法　提取广州管圆线虫成虫总RNA ,用Clontech公司SMARTTMcDNA文库构建试剂盒反转录合成第一链cDNA ,然后通过长距离PCR方法合成双链cDNA并扩增 ;PCR产物与λTripIE× 2载体连接并包装 ,建成未扩... 详细信息

目的　构建广州管圆线虫成虫cDNA文库。方法　提取广州管圆线虫成虫总RNA ,用Clontech公司SMARTTMcDNA文库构建试剂盒反转录合成第一链cDNA ,然后通过长距离PCR方法合成双链cDNA并扩增 ;PCR产物与λTripIE× 2载体连接并包装 ,建成未扩增文库 ;检测未扩增文库滴度和重组效率后 ,进行文库扩增及测定扩增文库的滴度。结果　经测定 ,未扩增文库滴度为 9 7× 1 0 6 pfu/ml,重组效率达 99 2 %以上 ,文库扩增后滴度达 9 1 3× 1 0 9pfu/ml。

关键词：广州管圆线虫成虫 cDNA文库构建广州管圆线虫病

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食源性寄生虫病流行趋势、研究与发展方向

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2015年第6期33卷 436-442页

作者：黄艳余新炳中山大学中山医学院病原生物学教研室广州510080

随着经济发展、生态环境改变、人口和物资流动日趋频繁,饮食来源和方式多样化,食源性寄生虫病流行呈现新的特点,已成为影响食品安全和人民健康的主要因素之一,成为我国及全球亟待解决的重要公共卫生问题之一。本文综述了我国及全球较为... 详细信息

随着经济发展、生态环境改变、人口和物资流动日趋频繁,饮食来源和方式多样化,食源性寄生虫病流行呈现新的特点,已成为影响食品安全和人民健康的主要因素之一,成为我国及全球亟待解决的重要公共卫生问题之一。本文综述了我国及全球较为重要的一些食源性寄生虫病的流行情况,总结了目前食源性寄生虫病流行的特点、趋势,以及食源性寄生虫病的防控技术研究、致病机制研究的现状与缺陷。此外,也对食源性寄生虫病的诊断与检测、基础机制、传播阻断技术及防治策略研究的发展方向和需求提出了一些看法。

关键词：食源性寄生虫流行病学诊断疫苗检测

华支睾吸虫翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)基因的鉴定及其编码区序列克隆

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中国人兽共患病杂志 2004年第2期20卷 117-121页

作者：何东苟余新炳吴忠道徐劲吴德胡旭初陈守义中山大学中山医学院病原生物学部广州510089

目的　通过cDNA文库筛选识别华支睾吸虫新基因 ,并将所发现的华支睾吸虫翻译控制肿瘤蛋白 (csTCTP)编码区克隆到原核表达质粒PGEX - 4T - 1和真核表达质粒 pcDNA3上 ,为进一步研究其功能奠定基础。方法　将插入于 pBlue script质粒上的... 详细信息

目的　通过cDNA文库筛选识别华支睾吸虫新基因 ,并将所发现的华支睾吸虫翻译控制肿瘤蛋白 (csTCTP)编码区克隆到原核表达质粒PGEX - 4T - 1和真核表达质粒 pcDNA3上 ,为进一步研究其功能奠定基础。方法　将插入于 pBlue script质粒上的cDNA进行随机测序 ,在NCBI和ExPasy网站上进行序列分析 ,识别华支睾吸虫新基因 ,并应用Motifsan、Scan prosite等程序对其进行结构域分析。根据PGEX - 4T - 1和pcDNA3上的克隆位点及所发现的csTCTPcDNA编码序列设计引物 ,进行PCR扩增 ,扩增产物回收纯化后克隆到原核表达载体PGEX4T - 1和真核表达载体 pcDNA3上。构建的PGEX4T- 1-csTCTP、pcDNA3-csTCTP重组表达质粒经PCR、双酶切及测序证实。结果　发现华支睾吸虫新基因———csTCTP ,完整阅读框含 5 10个碱基 ,编码 16 9个氨基酸 ,理论分子量为 19 4 5 96Kd。序列分析表明 ,csTCTP编码氨基酸序列与其它物种有较高的同源性 ,Motifscan及Scanprosite程序发现推导的氨基酸序列具有TCTP保守的完整功能域以及两个典型的TCTP完整标签。所构建的重组原核和真核表达质粒经PCR、双酶切及测序证实与目标基因相符。结论　发现华支睾吸虫翻译控制肿瘤蛋白基因 ,并成功构建原核和真核重组表达质粒。

关键词：华支睾吸虫翻译控制肿瘤蛋白 TCTP 基因鉴定编码区序列克隆

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肺炎链球菌R6株全基因组序列的初步分析

中国人兽共患病杂志 2003年第6期19卷 93-94,97页

作者：袁竹青吴忠道中山大学中山医学院病原生物学部，广州510089

肺炎链球菌是常见细菌性感染的主要病原菌之一，能引起肺炎、脑膜炎、中耳炎及败血症等多种疾病。据世界卫生组织统计，全球每年有超过100万人死于肺炎链球菌感染，其中大多数发生在发展中国家。在发达国家如美国，肺炎链球菌仍然是导... 详细信息

肺炎链球菌是常见细菌性感染的主要病原菌之一，能引起肺炎、脑膜炎、中耳炎及败血症等多种疾病。据世界卫生组织统计，全球每年有超过100万人死于肺炎链球菌感染，其中大多数发生在发展中国家。在发达国家如美国，肺炎链球菌仍然是导致死亡的10大原因之一~[1]。近年来素的肺炎链球菌菌株在世界范围内日益增多，如在美国约有40％的肺炎链球菌耐青霉素、在西班牙为50％左右、南非为56％、而在韩国则高达70％~[2，3]。此外，多重耐药株涌现更给临床治疗带来很大困难。

关键词：肺炎链球菌全基因组序列生物学基因组特征跨膜透酶转运蛋白

恶性疟原虫海南株端粒酶催化亚基基因的克隆及序列分析

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中国人兽共患病杂志 2003年第5期19卷 36-37页

作者：陈守义徐劲李军涛武忠銮胡旭初余新炳中山大学中山医学院病原生物学部广州510089 中山大学中山医学院分子医学中心

目的　克隆恶性疟原虫端粒酶基因 ,为今后筛选抗疟药物提供理论依据。方法　根据四膜虫的端粒酶基因序列 ,设计并合成一对引物 ,从恶性疟原虫基因组DNA中扩增出端粒酶基因 ,进行测序及利用生物信息学技术对端粒酶基因进行了分析。结果... 详细信息

目的　克隆恶性疟原虫端粒酶基因 ,为今后筛选抗疟药物提供理论依据。方法　根据四膜虫的端粒酶基因序列 ,设计并合成一对引物 ,从恶性疟原虫基因组DNA中扩增出端粒酶基因 ,进行测序及利用生物信息学技术对端粒酶基因进行了分析。结果　得到了 2 3kp的恶性疟原虫海南株端粒酶基因。结论　恶性疟原虫端粒酶基因的克隆。

关键词：恶性疟原虫海南株端粒酶亚基基因基因克隆序列分析基因序列

华支睾吸虫乙醛脱氢酶基因的克隆、表达和序列分析

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中山大学学报（医学科学版） 2005年第3期26卷 241-244,249页

作者：吴德吴忠道徐进何东苟余新炳中山大学中山医学院病原生物学部广东广州510080

【目的】通过筛选华支睾吸虫成虫cDNA质粒文库,发现并识别新基因,将发现的新基因编码区克隆到原核表达质粒pGEX鄄4T鄄1并表达出融合蛋白。【方法】用文库通用引物对华支睾吸虫cDNA质粒文库进行PCR扩增,对产物为500bp以上的质粒测序,结果... 详细信息

【目的】通过筛选华支睾吸虫成虫cDNA质粒文库,发现并识别新基因,将发现的新基因编码区克隆到原核表达质粒pGEX鄄4T鄄1并表达出融合蛋白。【方法】用文库通用引物对华支睾吸虫cDNA质粒文库进行PCR扩增,对产物为500bp以上的质粒测序,结果在NCBI和ExPasy网站上进行序列分析,并应用ORFfind、ClustalW、NCBIConservedDomainSearch等程序对其进行开放阅读框(ORF)、进化树及结构域分析。根据载体多克隆位点及新基因ORF设计引物,PCR扩增,产物克隆到目的载体上。筛选并鉴定出阳性克隆,对鉴定过的重组体进行诱导表达,表达产物经SDS鄄PAGE电泳鉴定。【结果】发现CsALDH基因,完整阅读框含1467个碱基,编码489个氨基酸,理论相对分子质量Mr≈52.564×103,理论pI为5.43。序列分析表明,CsALDH基因编码的氨基酸序列与其它物种有较高的同源性,CsALDH与爪蛙属乙醛脱氢酶的同源性为59%,具有乙醛脱氢酶保守功能域。构建的重组原核表达质粒经鉴定与目标基因相符。电泳显示表达产物在Mr≈78×103处有一条特异性条带。【结论】发现华支睾吸虫磷酸甘油醛脱氢酶基因,成功构建重组原核表达质粒并表达出融合蛋白。

关键词：华支睾吸虫乙醛脱氨酶分子克隆原核表达序列分析

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登革病毒在白纹伊蚊细胞内免疫的研究

中华微生物学和免疫学杂志 2003年第8期23卷 613-617页

作者：葛春喜黄炯烈陈观今吴瑜于洪枫中山大学中山医学院病原生物学教研室广州510080

目的　研究白纹伊蚊对登革病毒产生细胞内免疫现象的分子机制。方法　扩增与克隆登革病毒NGC株的前膜蛋白基因prM ,将prM基因以 3种不同表达形式重组入昆虫表达载体pBh spEGFP ,以 3种重组质粒分别转染白纹伊蚊C6 36细胞 ,测定转染后... 详细信息

目的　研究白纹伊蚊对登革病毒产生细胞内免疫现象的分子机制。方法　扩增与克隆登革病毒NGC株的前膜蛋白基因prM ,将prM基因以 3种不同表达形式重组入昆虫表达载体pBh spEGFP ,以 3种重组质粒分别转染白纹伊蚊C6 36细胞 ,测定转染后的细胞对登革病毒感染的免疫效果。结果　构建了包含prM基因的 3种昆虫表达载体 ,Westernblot和荧光显微镜观察证明在C6 36细胞中成功表达了prM EGFP融合蛋白。MTT实验和空斑形成实验反映了C6 36细胞对登革病毒产生了细胞内免疫。结论　 3种重组质粒均可诱导细胞内免疫现象 ,说明无论是否表达prM蛋白 ,只要有prM基因转录就可引起细胞内免疫现象 ;prM基因正义和反义转录形式均可诱导细胞内免疫 ;其形成机制可能是通过RNA干扰作用而产生。

关键词：登革病毒白纹伊蚊细胞内免疫 prM基因