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BDNF基因修饰淋巴细胞的蛋白表达及对PC12细胞的增殖和H_2O_2损伤的影响

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中国药理学通报 2003年第11期19卷 1255-1260页

作者：唐小卿冯鉴强郭瑞鲜李平阳叶美红中山大学中山医学院生理学教研室广州512008

目的　研究脑源性神经营养因子 (brain derivedneu rotrophicfactor,BDNF)基因修饰淋巴细胞的蛋白表达及对PC12细胞的增殖和H2 O2 损伤的影响。方法　采用Lipofec tAMINE将重组大鼠BDNFcDNA导入PA317细胞 ,获取高滴度的病毒上清转染大... 详细信息

目的　研究脑源性神经营养因子 (brain derivedneu rotrophicfactor,BDNF)基因修饰淋巴细胞的蛋白表达及对PC12细胞的增殖和H2 O2 损伤的影响。方法　采用Lipofec tAMINE将重组大鼠BDNFcDNA导入PA317细胞 ,获取高滴度的病毒上清转染大鼠淋巴细胞 ,流式细胞仪 (FCM)和免疫组化检测BDNF的表达 ,MTT法检测PC12细胞增殖 ,PI染色流式细胞仪 (FCM)检测PC12细胞凋亡。结果　BDNF基因修饰的大鼠淋巴细胞高表达BDNF蛋白 ,其培养上清可促进PC12细胞增殖并能抑制H2 O2 诱导PC12细胞凋亡。结论　BDNF基因修饰淋巴细胞能高表达和分泌具有生物活性的BDNF。

关键词：逆转录病毒脑源性神经营养因子淋巴细胞 PC12细胞凋亡增殖

云南白族人群Y染色体DYF155S1基因座多态性研究

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人类学学报 2004年第3期23卷 239-247页

作者：黄艳梅伍新尧蔡贵庆童大跃区敬华曾艳红中山大学中山医学院法医系广州510089

揭示云南白族 136例无关男性个体Y染色体小卫星DYF15 5S1基因座多态性。用已建立的Amp FLP和MVR PCR方法分析DYF15 5S1基因座长度多态性、5′端多态性、3′端多态性。DYF15 5S1基因座具有高度多态性 ,基因多样性 (h)达 0 9996。研究表... 详细信息

揭示云南白族 136例无关男性个体Y染色体小卫星DYF15 5S1基因座多态性。用已建立的Amp FLP和MVR PCR方法分析DYF15 5S1基因座长度多态性、5′端多态性、3′端多态性。DYF15 5S1基因座具有高度多态性 ,基因多样性 (h)达 0 9996。研究表明将Amp FLP和荧光MVR PCR结合起来更能充分揭示DYF15 5S1基因座多态性 ,可为遗传学、人类学及法医学的研究提供有效的工具和基础资料。

关键词：云南白族人类学遗传学 Y染色体 DYF155S1 基因座多态性

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RORγt基因启动子的鉴定和特征分析

免疫学杂志 2013年第1期29卷 28-32页

作者：杨丽霞黄朝峰中山大学中山医学院人类病毒研究所广州510080

目的以RORγt转录起始位点5’上游4.8 kb基因序列为研究对象,初步鉴定分析是否存在RORγt单独的启动子,并且探讨β-Catenin/Tcf1信号途经对RORγt启动子转录活性的影响。方法用带有不同长度的5’上游基因的5个报告质粒,与pSV-40-renilla... 详细信息

目的以RORγt转录起始位点5’上游4.8 kb基因序列为研究对象,初步鉴定分析是否存在RORγt单独的启动子,并且探讨β-Catenin/Tcf1信号途经对RORγt启动子转录活性的影响。方法用带有不同长度的5’上游基因的5个报告质粒,与pSV-40-renilla Luc共转染Jurkat、EL-4、NIH 3T3和293T细胞系,与报告质粒的空载相比较,根据荧光强度的相对值的大小确定启动子存在的可能性和所在的位置;利用野生型β-Catenin、激活突变型β-Catenin和Tcf1表达质粒及RORγt启动子报告载体共转染,观察β-Catenin/Tcf1信号途径对RORγt启动子活性的影响。结果不同长度的启动子报告质粒在Jurkat、EL-4、NIH 3T3和293T细胞中均呈现启动子活性,其中所有报告质粒在Juakat和EL-4等T细胞系中的活性均高于其他2个上皮细胞系,而RORγt上游0.5 kb的报告质粒启动子活性在所有的细胞系中均呈最高活性。野生型β-Catenin、激活突变型β-Catenin和Tcf1对RORγt启动子报告有强激活作用。结论 RORγt转录表达由独立启动子控制,β-Catenin/Tcf1信号途径能够增强该启动子的转录活性。

关键词： RORγt 启动子分析转录调控 β-Catenin Tcf1信号途径

脊髓背角Ⅱ板层长时程增强诱导及维持过程中的突触形态计量学研究

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生理学报 2004年第3期56卷 397-402页

作者：项旭映张红梅胡能伟周利君张彤刘先国中山大学中山医学院生理学教研室广州510089

本研究用体视学方法探讨了在C纤维诱发电位长时程增强(long-term potentiation,LTP)的诱导及维持过程中的脊髓背角Ⅱ板层的突触形态变化。结果显示:(1)在LTP形成后30min,Ⅱ板层内的突触后致密物质(postsynaptic density,PSD)增厚,突触... 详细信息

本研究用体视学方法探讨了在C纤维诱发电位长时程增强(long-term potentiation,LTP)的诱导及维持过程中的脊髓背角Ⅱ板层的突触形态变化。结果显示:(1)在LTP形成后30min,Ⅱ板层内的突触后致密物质(postsynaptic density,PSD)增厚,突触间隙增宽;(2)在LTP形成后3h,PSD厚度、突触间隙宽度及突触界面曲率都有明显增加;(3)在LTP诱导和维持全过程中,总突触的数密度比对照组有明显增高。(4)在LTP形成后3h和5h,穿孔性突触的数密度与对照组比较有明显增高。上述结果显示:PSD增厚是LTP诱导阶段的主要形态学变化。突触界面曲率增大及穿孔突触数目增多是LTP维持阶段的主要形态学基础。

关键词：长时程增强脊髓背角突触

ClC-3氯通道对H_2O_2诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞凋亡的影响

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中国药理学通报 2006年第10期22卷 1175-1179页

作者：周园周家国丘钦英黎小妍刘捷关永源中山大学中山医学院药理教研室广东广州510080

目的研究C lC-3氯通道蛋白过表达对H2O2诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞凋亡的影响。方法蛋白免疫印迹法检测C lC-3蛋白表达;形态学方法、DNA琼脂糖电泳、MTT法和流式细胞仪观察和分析H2O2诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞形态学改变、DNA断裂、... 详细信息

目的研究C lC-3氯通道蛋白过表达对H2O2诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞凋亡的影响。方法蛋白免疫印迹法检测C lC-3蛋白表达;形态学方法、DNA琼脂糖电泳、MTT法和流式细胞仪观察和分析H2O2诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞形态学改变、DNA断裂、细胞存活率、凋亡率及C lC-3蛋白过表达对其影响。结果C lC-3蛋白过表达减轻H2O2诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞形态学改变、DNA断裂及细胞凋亡率,增加细胞存活。结论提示C lC-3氯通道蛋白过表达保护H2O2诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞凋亡。

关键词：氯通道 CIC-3 凋亡 H2O2

肝再生磷酸酶3在肿瘤发生中的作用与靶向治疗

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中国生物化学与分子生物学报 2016年第2期32卷 153-162页

作者：张明明王海河中山大学中山医学院生化系广州510080

磷酸激酶因参与多种信号通路的异常激活导致肿瘤生成和发展而受到重视,但与磷酸激酶功能相对的磷酸酶却因与底物作用的瞬时性、缺乏底物特异性等多种原因较少得到深入研究。近年来,随着研究手段的不断进步,越来越多的结果显示,磷酸酶在... 详细信息

磷酸激酶因参与多种信号通路的异常激活导致肿瘤生成和发展而受到重视,但与磷酸激酶功能相对的磷酸酶却因与底物作用的瞬时性、缺乏底物特异性等多种原因较少得到深入研究。近年来,随着研究手段的不断进步,越来越多的结果显示,磷酸酶在疾病的发生发展中同样扮演了重要角色,如肝再生磷酸酶3(PRL-3),其异常高表达在实验动物、细胞培养和患者中均被证实与癌症发生、转移和预后密切相关。目前,关于其作用机制研究虽有一定进展,但仍有许多问题需要进一步解释。本文总结了迄今为止对PRL-3结构、功能和基因表达调控的研究进展,分析了PRL-3在癌症转移中的作用机制,并简要归纳了靶向PRL-3进行癌症治疗的一些最新现状。

关键词：肝再生磷酸酶3 癌症癌症转移细胞信号通路靶向治疗小分子抑制物

Zeiss LSM710激光扫描共聚焦显微镜的使用和管理

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实验室研究与探索 2012年第8期 228-230+239页

作者：段妍关苑君蓝秀健张选红吴珏珩中山大学中山医学院

介绍了Zeiss LSM 710激光扫描共聚焦显微镜(Laser Scanning Confocal Microscopy,LSCM)的配置和技术参数,样品制备要求,图像采集的参数设置原则,日常维护和共享管理等方面。针对LSM 710的主要功能列举了生物医学领域的一些应用实例,如... 详细信息

介绍了Zeiss LSM 710激光扫描共聚焦显微镜(Laser Scanning Confocal Microscopy,LSCM)的配置和技术参数,样品制备要求,图像采集的参数设置原则,日常维护和共享管理等方面。针对LSM 710的主要功能列举了生物医学领域的一些应用实例,如多通道荧光图像采集和自动叠加、荧光共定位分析、Z轴扫描和三维重建,光谱扫描等。LSCM避免了非焦平面杂散光的干扰,其分辨率比普通光学显微镜大大提高,能够进行光学切片和三维重建等,在生物医学领域应用十分广泛。中山医学院的ZeissLSM 710实行开放共享使用,使用率高,已成为学院和各附属医院相关领域常规科研仪器之一。

关键词：激光共聚焦显微镜 Zeiss LSM710 使用和管理

交叉酶切联合MALDI-TOF/MS分析重组蛋白二硫键分布的方法建立

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中山大学学报（自然科学版） 2011年第5期50卷 93-99页

作者：徐祖敏程锐杨霞杨中汉刘少军黎明涛蔡卫斌高国全中山大学中山医学院生化教研室广东广州510080 中山医学院蛋白质组学实验室广东广州510080

以Kringle环为分子模型,应用MALDI-TOF/MS联合特异性蛋白酶酶切技术,探讨建立蛋白质二硫键分布和定位分析的研究方法。采用pET22b(+)原核表达体系诱导表达重组人纤溶酶原K5蛋白(rhK5),经Ni2+-NTA resin亲和层析纯化,并通过SDS-PAGE和Wes... 详细信息

以Kringle环为分子模型,应用MALDI-TOF/MS联合特异性蛋白酶酶切技术,探讨建立蛋白质二硫键分布和定位分析的研究方法。采用pET22b(+)原核表达体系诱导表达重组人纤溶酶原K5蛋白(rhK5),经Ni2+-NTA resin亲和层析纯化,并通过SDS-PAGE和Western-blot进行初步鉴定;采用MTT法分析rhK5对微血管内皮细胞的抑制活性;联合应用交叉酶切(Trypsin Gold单切或Trypsin Gold及Endoproteinase ASP-N双酶切)和基质辅助激光解析-飞行时间质谱(MALDI-TOF/MS)分析rhK5的二硫键分布;并应用生物信息学方法和圆二色谱法进一步验证rhK5二级结构。应用原核体系高效表达具有生物活性的rhK5蛋白,经交叉酶切联合MAL-DI-TOF/MS证实rhK5中的6个半胱氨酸正确配对形成了3对二硫键(Cys462:541,Cys483:524和Cys512:536),圆二色谱法测定发现rhK5为典型的β折叠型结构。上述研究结果为分析基因工程重组蛋白质中半胱氨酸配对及二硫键分布提供了方法学基础。

关键词：基因工程重组蛋白蛋白质结构二硫键基质辅助激光解析电离飞行时间质谱

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广东省阳春市广州管圆线虫流行病学调查

中国人兽共患病学报 2009年第1期25卷 87-88,91页

作者：张赟黄迪丁雪陈代雄詹希美广州医学院病原生物学教研室广州510182 中山大学中山医学院寄生虫学教研室广州510080

广州管圆线虫是一种人兽共患寄生虫病的病原体,成虫寄生于鼠肺动脉内,幼虫偶可寄生人体内引起嗜酸性粒细胞增多性脑膜炎。近年来我国广州管圆线虫病发病人数有增多的趋势,而且分布范围越来越广。1997年浙江温州和2002年福建长乐等地出... 详细信息

广州管圆线虫是一种人兽共患寄生虫病的病原体,成虫寄生于鼠肺动脉内,幼虫偶可寄生人体内引起嗜酸性粒细胞增多性脑膜炎。近年来我国广州管圆线虫病发病人数有增多的趋势,而且分布范围越来越广。1997年浙江温州和2002年福建长乐等地出现广州管圆线虫病暴发流行后,2006年北京市又出现160例广州管圆线虫病的暴发流行,2007年3月广东省广宁县也报告有1次6人发病。[第一段]

关键词：广州管圆线虫病流行病学调查广东省人兽共患寄生虫病阳春市粒细胞增多性发病人数暴发流行