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METTL3通过YTHDF2/AKT1/PPARγ调控人骨髓间充质干细胞成脂分化的机制研究

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中国病理生理杂志 2024年第5期40卷 777-785页

作者：潘志鹏陈玲游若兰黄慧芳福建医科大学附属协和医院中心实验室福建福州350001 福建医科大学医学技术与工程学院福建福州350122

目的:探讨N^(6)-甲基腺苷(m^(6)A)甲基化酶甲基转移酶样蛋白3(METTL3)在体外调控人骨髓间充质干细胞(MSCs)向脂肪细胞分化的作用机制。方法:构建METTL3、AKT丝氨酸/苏氨酸激酶1(AKT1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)和YTH m^(6)... 详细信息

目的:探讨N^(6)-甲基腺苷(m^(6)A)甲基化酶甲基转移酶样蛋白3(METTL3)在体外调控人骨髓间充质干细胞(MSCs)向脂肪细胞分化的作用机制。方法:构建METTL3、AKT丝氨酸/苏氨酸激酶1(AKT1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)和YTH m^(6)A RNA结合蛋白F2(YTHDF2)慢病毒载体,包装慢病毒并感染MSCs;采用成脂分化试剂盒诱导各组MSCs分化为脂肪细胞,利用油红O染色检测各组的脂肪细胞形成情况;采用分子克隆技术构建METTL3突变重组载体以证实METTL3的m^(6)A关键位点对靶基因的调控作用;利用放线菌素D作用于YTHDF2过表达的MSCs以探究阅读蛋白YTHDF2对AKT1 mRNA和蛋白表达的影响;采用RNA pull-down结合银染和Western blot实验检测可能发生甲基化修饰的片段与识别蛋白的结合情况。结果:m^(6)A甲基化酶METTL3以PPARγ/AKT1依赖的方式抑制骨髓MSCs的脂肪形成,并且以m^(6)A修饰阅读蛋白YTHDF2依赖的方式抑制AKT1的蛋白表达。YTHDF2可识别并结合发生m^(6)A修饰的AKT1编码序列(CDS),降低其表达水平,抑制MSCs脂肪形成过程。结论:m^(6)A甲基化酶METTL3通过YTHDF2/AKT1/PPARγ通路调控人骨髓MSCs成脂分化过程。本研究为从肿瘤微环境角度寻找急性髓系白血病治疗新靶点提供了理论依据。

关键词：急性髓系白血病间充质干细胞 METTL3蛋白成脂分化

CTAGE15与食管鳞状细胞癌(ESCC)患者预后相关并抑制ESCC细胞的恶性表型

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南京医科大学学报（自然科学版） 2024年第5期44卷 634-642页

作者：张博为韩卓莹马天云赵珏莹张莉罗超王其龙南京医科大学附属淮安第一医院中心实验室江苏淮安223300

目的:探讨皮肤T细胞淋巴瘤相关抗原15(cutaneous T cell lymphoma associated antigen 15,CTAGE15)在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)中的表达与患者临床预后的关系及其对ESCC细胞增殖、迁移及侵袭等能力的影响。方法:Kaplan-Meier分析公共数据库中CTAGE15与ESCC患者预后的关系。qRT-PCR检测正常食管上皮细胞、ESCC细胞和临床120例随访信息完整的ESCC患者肿瘤组织及邻近正常组织中CTAGE15表达,COX生存风险分析方法研究ESCC患者的生存风险因素,多变量相关性分析CTAGE15表达与ESCC患者临床病理之间的关系,同时采用Kaplan-Meier分析CTAGE15对ESCC患者预后的影响。利用小干扰RNA沉默ESCC细胞中CTAGE15的表达,检测细胞增殖、迁移及侵袭能力的变化。结果:公共数据库中CTAGE15表达水平与患者总生存期(P<0.05)和疾病特异性生存期(P<0.05)显著相关,GTAGE15高表达患者生存期较好。qRT-PCR结果表明临床ESCC组织及ESCC细胞中CTAGE15表达显著高于正常食管上皮组织及正常食管上皮细胞,且CTAGE15表达水平与ESCC患者T分期与N分期显著相关(P<0.05),CTAGE15高表达患者T分期、N分期较GTAGE15低表达患者早。敲低CTAGE15后,ESCC细胞的增殖、迁移及侵袭能力显著增强(P<0.05)。结论:CTAGE15与ESCC患者预后成正相关,且能够抑制ESCC细胞的增殖、迁移及侵袭等能力。

关键词： CTAGE15 假基因食管鳞状细胞癌预后

敲降低密度脂蛋白受体相关蛋白表达对肝癌血管异常化的影响及其机制

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中华肿瘤杂志 2024年第5期46卷 399-408页

作者：武强詹琳琳王宇贺钰超陈璐陈子叶李广涛刘东明包旭刘潇濛郭华宋天强天津医科大学肿瘤医院肝胆肿瘤科国家恶性肿瘤临床医学研究中心天津市肿瘤防治重点实验室天津300060 天津医科大学肿瘤医院肿瘤细胞生物学实验室国家恶性肿瘤临床医学研究中心天津市肿瘤防治重点实验室天津300060 北京清华长庚医院临床转化科学中心北京102218

目的探讨低密度脂蛋白受体相关蛋白(LDLR)表达对肝癌血管异常化的影响及其机制。方法从Oncomine癌症基因芯片数据库提取87例肝癌组织的基因转录组信息,分析肝癌组织中LDLR的表达水平与癌胚抗原(CEA)和CD31表达水平的相关性。采用短发卡... 详细信息

目的探讨低密度脂蛋白受体相关蛋白(LDLR)表达对肝癌血管异常化的影响及其机制。方法从Oncomine癌症基因芯片数据库提取87例肝癌组织的基因转录组信息,分析肝癌组织中LDLR的表达水平与癌胚抗原(CEA)和CD31表达水平的相关性。采用短发卡RNA靶基因慢病毒转染的方法,构建LDLR敲降的MHCC-97H和HLE肝癌细胞。通过转录组测序、实时荧光定量聚合酶链反应、蛋白免疫印迹法检测LDLR敲降后肝癌细胞的差异基因及其表达水平变化。通过富集分析明确LDLR参与的基因相关信号通路。通过对肝癌细胞条件培养基中CEA含量的检测评估LDLR对CEA的影响。采用血管生成实验检测LDLR对人脐静脉内皮细胞血管生成能力的影响,以及CEA在LDLR调控血管生成过程中的作用。收集2019年1月至2022年12月于天津医科大学肿瘤医院手术切除的肝癌组织标本176例,采用免疫组织化学染色检测176例肝癌组织中LDLR及146例肝癌组织中CEA和CD31的表达水平,分析肝癌组织中LDLR的表达水平与肝癌组织中CEA和CD31的表达水平、血清CEA和丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平的相关性。结果Oncomine数据库分析显示,发生门静脉转移的肝癌患者肝癌组织中LDLR和CEA的表达呈负相关(r=-0.64,P=0.001),而CEA和CD31的表达呈正相关(r=0.46,P=0.010);转录组测序结果显示,LDLR敲降组与对照组MHCC-97H细胞的差异表达基因共有1032个,其中517个基因表达上调,515个基因表达下调。CEA相关细胞黏附分子5(CEACAM5)在LDLR敲降组细胞中上调明显。基因本体论功能富集分析显示,差异基因最明显富集在血管生成的功能上。京都基因与基因组百科全书信号通路富集分析显示,涉及的相关通路主要包括细胞粘着斑、细胞外基质受体相互作用等。LDLR敲降组条件培养基中CEA含量为43.75±8.43,高于对照组(1.15±0.14,P实验结果显示,在5 h,用LDLR敲降组MHCC-97H细胞的条件培养基培养HUVEC细胞形成的血管主结点数、主分段数和网格总面积分别为(295.3±26.4)个、(552.5±63.8)个和(2239781.0±138211.9)平方像素,均高于对照组[分别为(113.3±23.5)个、(194.8±36.5)个和(660621.0±280328.3)平方像素,均P<0.01];用LDLR敲降组HLE细胞的条件培养基培养HUVEC细胞形成的血管主结点数、主分段数和网格总面积分别为(245.3±42.4)个、(257.5±20.4)个和(2535754.5±249094.2)平方像素,均高于对照组[分别为(113.3±23.5)个、(114.3±12.2)个和(1565456.5±219259.7)平方像素,均P<0.01];在对照组MHCC-97H细胞条件培养基中加入CEA培养HUVEC细胞形成的血管主结点数、主分段数和网格总面积分别为(178.9±12.0)个、(286.9±12.3)个和(1966990.0±126249.5)平方像素,均高于对照组[分别为(119.7±22.1)个、(202.7±33.7)个和(1421191.0±189837.8)平方像素,均P<0.01]。肝癌组织中LDLR的表达与CEA的表达无相关性,与肝癌组织中CD31的表达、血清CEA水平、血清ALT水平均呈负相关(r=-0.167,P=0.044;r=-0.061,P=0.032;r=-0.147,P=0.05)。肝癌组织中CEA的表达与CD31的表达呈正相关(r=0.192,P=0.020),血清CEA水平与血清ALT水平呈正相关(r=0.164,P=0.029)。结论肝癌细胞敲降LDLR可通过释放CEA促进肝癌血管异常化。

关键词：肝细胞癌低密度脂蛋白受体相关蛋白癌胚抗原血管生成

建立与高通量测序试剂匹配的简化版院内流程体系

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中华病理学杂志 2024年第9期53卷 938-943页

作者：陈学书陈海星李觅钟银雪张富娟欧阳伟炜刘宓贵州医科大学附属肿瘤医院分子病理实验室贵阳550000 贵州医科大学附属医院病理科贵阳550000 贵州医科大学附属肿瘤医院胸部肿瘤科贵阳550000

目的基于本实验室测序平台, 建立与肿瘤基因高通量测序试剂性能匹配的, 符合本实验室可实施的简化版的验证流程体系, 为临床实验室应用提供实操依据。方法标准流程选取来自不同厂家的6例DNA标准品和2例RNA标准品, 从甲醛固定石蜡包埋(fo... 详细信息

目的基于本实验室测序平台, 建立与肿瘤基因高通量测序试剂性能匹配的, 符合本实验室可实施的简化版的验证流程体系, 为临床实验室应用提供实操依据。方法标准流程选取来自不同厂家的6例DNA标准品和2例RNA标准品, 从甲醛固定石蜡包埋(formalin fixation and paraffin-embedding, FFPE)的肿瘤样本中提取DNA和RNA, 按杂交捕获实验流程制备文库后进行高通量测序, 通过6次测序分别进行重复实验、不同投入量、常见干扰物质等研究, 从下机数据质控、变异类型、肿瘤突变负荷和微卫星不稳定检出情况进行评估。基于标准流程的结果, 用同一方法原理、检测范围相近的试剂盒检测不同的参考品, 制定用时短、耗资低的简化流程, 通过准确性、特异度和灵敏度评估, 并参加国家卫生健康委临床检验中心(NCCL)室间质量评价活动。结果标准流程试剂验证评估合格, 参加NCCL室间质评合格, 但耗时长耗资大;简化流程试剂准确性、特异度、灵敏度评估合格, 参加NCCL室间质评合格。结论基于本实验室建立了简化可行的肿瘤基因检测试剂盒性能确认流程, 为院内开展肿瘤基因检测及其临床应用提供了实验室依据。

关键词：肿瘤基因高通量测序室间质评简化版流程体系

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吲哚菁绿导航腹腔镜胃癌根治术的应用实践

中国肿瘤临床 2024年第13期51卷 663-669页

作者：黄昌明梁寒郑朝辉陈起跃钟情丘韬远福建医科大学附属协和医院胃外科福建医科大学附属协和医院普外科福建医科大学消化系统肿瘤教育部重点实验室福州市350001 天津医科大学肿瘤医院胃癌中心国家恶性肿瘤临床医学研究中心天津市恶性肿瘤临床医学研究中心天津市消化系统肿瘤重点实验室

吲哚菁绿(indocyanine green,ICG)近红外光成像技术在腔镜胃癌根治术中具有重要研究价值,在国内外引起广泛关注和研究。然而,目前临床实践中关于ICG近红外光成像技术在腔镜胃癌根治术中的应用仍处于探索阶段,尚缺乏统一标准。本文介绍了... 详细信息

吲哚菁绿(indocyanine green,ICG)近红外光成像技术在腔镜胃癌根治术中具有重要研究价值,在国内外引起广泛关注和研究。然而,目前临床实践中关于ICG近红外光成像技术在腔镜胃癌根治术中的应用仍处于探索阶段,尚缺乏统一标准。本文介绍了ICG荧光成像的机制以及ICG在腹腔镜胃癌根治术中的适应证和禁忌证,详细阐述了ICG分子荧光影像技术在腹腔镜胃癌根治术的应用方法、流程以及临床应用,将应用实践进行总结归纳,希望有助于ICG引导的腹腔镜胃癌根治术的推广与进一步的规范化。

关键词：吲哚菁绿近红外光成像腹腔镜胃癌胃癌根治术

miR⁃21⁃5p靶向BNC2调控食管癌的恶性生物行为的研究

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海南医学院学报 2024年第16期30卷 1236-1245页

作者：邓雨函阳梦吴振华李卉热则耶·麦麦提祖农孙晓宏新疆医科大学附属肿瘤医院新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学中心实验室新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学基础医学院新疆乌鲁木齐830011

目的:探讨miR-21-5p靶向肌成纤维细胞的身份转录因子(BNC2)调控食管癌(esophageal cancer,ESCA)细胞增殖、迁移、侵袭机制。方法:应用实时定量PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)方法检测食管癌组织中miR-21-5P和BNC2的相对表达量并用统计学分析其是否存在表达差异。用miR-21-5p mimics和miR-21-5P inhibitor和阴性对照(NC包括mimcs NC、inhibitor NC)分别转染ECA109、KYSE30两个食管癌细胞系后,进行细胞功能试验CCK8,Transwell等实验方法观察当miR-21-5p过表达或敲低时细胞的增殖、迁移和侵袭能力是否受到影响。通过生物信息学方法预测分析miR-21-5P的靶基因并通过双荧光素酶实验、qRT-PCR和Western blot实验验证miR-21-5p与靶向基因的负向调控关系。结果:qRT-PCR结果显示,相对于癌旁组织,BNC2在食管癌组织中的表达量显著性降低,而miR-21-5P则显著性升高,CCK8、Transwell实验结果显示,当miR-21-5P过表达时,细胞的增殖、迁移和侵袭能力增强,反之细胞功能受到抑制。也就是说,miR-21-5P在食管恶性肿瘤中起着促癌基因的功能作用。通过生物信息学方法预测miR-21-5P的靶基因为BNC2,双荧光素酶实验结果表明miR-21-5P与野生型BNC2′-UTR靶向结合,qRT-PCR和WB实验结果表示在食管癌细胞中,当miR-21-5P过表达时,BNC2的表达量降低,当miR-21-5P被敲低时,BNC2的表达量升高。这些结果显示miR-21-5P与BNC2存在靶向关系。结论:在食管癌中,miR-21-5p直接靶向BNC2,其调节作用可能从而导致癌症的增殖迁移和侵袭作用。

关键词：食管癌 miR⁃21⁃5P BNC2 预后肿瘤微环境

基于黏性末端链置换扩增的电化学发光/电化学比率传感器用于miRNA检测

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分析化学 2024年第5期52卷 743-750页

作者：金小亚张莹林悦林振宇温州医科大学附属第一医院感染内科院内感染管理处福建医科大学附属第一医院中心实验室福建省肿瘤精准诊疗重点实验室福州大学化学学院食品安全与生物分析教育部重点实验室福建省食品安全分析与检测技术重点实验室

基于黏性末端链置换（TMSD）非酶扩增技术构建了一种简单、高灵敏的电化学发光/电化学比率传感方法用于miRNA的检测。本方法以修饰在电极上的亚甲基蓝（MB）产生的EC信号作为内参比信号，并将Ru（phen）32+嵌入到通过分支杂交链式反应（... 详细信息

基于黏性末端链置换（TMSD）非酶扩增技术构建了一种简单、高灵敏的电化学发光/电化学比率传感方法用于miRNA的检测。本方法以修饰在电极上的亚甲基蓝（MB）产生的EC信号作为内参比信号，并将Ru（phen）32+嵌入到通过分支杂交链式反应（bHCR）产生的DNA纳米微粒中作为ECL探针。目标物存在时，MB脱离电极表面并使ECL信标修饰在电极上，从而使EC信号减弱，ECL信号增强，采用ECL和EC信号比值（ECL/EC）作为输出信号，降低了潜在干扰，提高了传感器的重现性和灵敏度。体系的ECL/EC比值与miRNA-21的浓度在10 fmol/L～500 pmol/L范围内具有良好的响应，检出限为6.5 fmol/L。与单一使用ECL信号的方法相比，在测定1 pmol/L的miRNA目标物时，响应信号的相对标准偏差从8.2%下降到4.1%。本方法成功应用于复杂细胞样品中miRNA-21的检测。

关键词：电化学电化学发光比率传感器黏性末端链置换 miRNA

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生理学报 2024年第2期76卷 215-223页

作者：武生云程珂茹周妍芸汪引芳上海中医药大学附属普陀医院中心实验室上海200062 安徽医科大学基础医学院合肥230032

本研究旨在探讨微管相关肿瘤抑制因子1(microtubule associated tumor suppressor 1,MTUS1)对血红素诱导的血管内皮细胞凋亡的影响,并探讨其对血红素加氧酶1(hemeoxygenase 1,HMOX1)表达的影响及具体机制。采用RNA测序、RT-qPCR和Wester... 详细信息

本研究旨在探讨微管相关肿瘤抑制因子1(microtubule associated tumor suppressor 1,MTUS1)对血红素诱导的血管内皮细胞凋亡的影响,并探讨其对血红素加氧酶1(hemeoxygenase 1,HMOX1)表达的影响及具体机制。采用RNA测序、RT-qPCR和Western blot分析MTUS1敲低后人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)中血红素结合相关蛋白、cAMP反应元件结合蛋白(cAMP response element-binding protein,CREB)和核呼吸因子2(nuclear respiratory factor 2,NRF2)表达的变化,及MTUS1敲低对血红素诱导的HMOX1表达变化,CREB和NRF2过表达对MTUS1敲低介导的293T细胞中HMOX1表达变化的影响;CCK8及Western blot检测MTUS1或者HMOX1敲低对血红素诱导的HUVEC凋亡和存活的影响,NRF2过表达对MTUS1敲低介导的血红素诱导的293T细胞存活的影响。结果显示:小分子干扰RNA有效敲低HUVEC中MTUS1表达(P<0.01),HUVEC中MTUS1敲低后,血红素结合相关蛋白中HMOX1下调显著(P<0.01);MTUS1敲低能够抑制血红素诱导的HUVEC中HMOX1上调(P<0.01),并能促进血红素诱导的HUVEC凋亡;HMOX1敲低能促进血红素诱导的HUVEC凋亡(P<0.01);MTUS1敲低能抑制HUVEC中CREB和NRF2表达,NRF2过表达能部分逆转MTUS1敲低引起的293T细胞中HMOX1下调,并能部分逆转MTUS1敲低加剧的血红素诱导的293T细胞凋亡效应,但是CREB过表达不能。上述结果提示MTUS1部分通过NRF2上调HUVEC中HMOX1表达,从而抑制血红素诱导的血管内皮细胞凋亡。

关键词：血红素血红素加氧酶-1 人脐静脉内皮细胞凋亡核呼吸因子2

结直肠癌患者组蛋白H3K9me3和H3K27me3的表达及临床意义

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肿瘤研究与临床 2024年第2期36卷 88-93页

作者：薛耀勤梁国军赵玉山温树伟任来峰山西省肿瘤医院、中国医学科学院肿瘤医院山西医院、山西医科大学附属肿瘤医院介入科太原030013 山西省肿瘤医院、中国医学科学院肿瘤医院山西医院、山西医科大学附属肿瘤医院中心实验室太原030013

目的探讨组蛋白H3K9me3和H3K27me3在结直肠癌中的表达及临床意义。方法回顾性病例对照研究。回顾性分析2008年5月至2017年7月山西省肿瘤98例结直肠癌患者临床资料,其中未转移单纯手术组35例,同时性肝寡转移组29例,广泛转移组34例。选择2... 详细信息

目的探讨组蛋白H3K9me3和H3K27me3在结直肠癌中的表达及临床意义。方法回顾性病例对照研究。回顾性分析2008年5月至2017年7月山西省肿瘤98例结直肠癌患者临床资料,其中未转移单纯手术组35例,同时性肝寡转移组29例,广泛转移组34例。选择2017年进行结肠镜检查的33例结直肠良性病变患者作为对照组。采用免疫组织化学方法检测各组H3K9me3及H3K27me3蛋白的表达;分析不同临床病理特征的结直肠癌患者H3K9me3及H3K27me3蛋白的表达情况;采用Kaplan-Meier法进行生存分析,并行log-rank检验。结果结直肠癌组H3K9me3蛋白阳性表达率为11.2%(11/98),低于对照组[60.6%(22/33)](χ^(2)=33.33,P0.2的患者[22.4%(11/49)比4.2%(2/48),χ^(2)=6.98,P=0.008]。H3K9me3阳性和阴性结直肠癌患者中位总生存(OS)时间分别为77.0个月(95%CI:10.6~143.3个月)、34.0个月(95%CI:25.5~42.5个月),两组OS差异无统计学意义(P=0.078);H3K27me3阳性和阴性结直肠癌患者中位OS时间分别为39.0个月(95%CI:15.3~62.7个月)、34.0个月(95%CI:24.3~43.7个月),两组OS差异无统计学意义(P=0.524)。结论H3K9me3和H3K27me3在结直肠癌组织中的表达均低于结直肠良性病变组织,且随着肝转移、广泛转移的发生逐渐降低。H3K9me3和H3K27me3可能是潜在的抑癌因子。

关键词：结直肠肿瘤组蛋白肝转移蛋白质修饰 H3K9me3 H3K27me3