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芹菜素脂质体的制备、修饰、表征及抗氧化活性研究

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食品工业科技 2024年

作者：代思雨汤颖刘念何璐谷淼冯琛博任瑾方正杰徐州医科大学药学院徐州检验检测中心

目的为提高芹菜素水溶性、稳定性，促进其充分发挥抗氧化生物活性，本研究拟制备芹菜素脂质体(Apigeninliposomes，AP-L)，并用壳聚糖(Chitosan，CS)修饰脂质体表面。方法比较离心法和过滤法两种包封率测定方法的适用性。以包封率为... 详细信息

目的为提高芹菜素水溶性、稳定性，促进其充分发挥抗氧化生物活性，本研究拟制备芹菜素脂质体(Apigeninliposomes，AP-L)，并用壳聚糖(Chitosan，CS)修饰脂质体表面。方法比较离心法和过滤法两种包封率测定方法的适用性。以包封率为评价指标，比较薄膜分散-超声法和乙醇注入-超声法两种AP-L制备方法，并通过单因素实验和响应面试验优化AP-L制备工艺。通过静电吸附方式将壳聚糖吸附于脂质体表面，得到壳聚糖芹菜素脂质体(Chitosanapigeninliposomes，CS-AP-L)。考察修饰前后脂质体的外观、微观形态、粒径大小及分布、电位、包封率和稳定性的变化。通过DPPH和ABTS自由基清除实验考察芹菜素水分散体(Apigenindispersion，AP-D)、AP-L和CS-AP-L的抗氧化能力。结果离心法测定脂质体包封率更准确。薄膜分散-超声法制备AP-L包封率更高。AP-L最佳制备工艺为：芹菜素6mg，芯材质量比1:24，磷脂胆固醇比6：1，乙醇6.3mL，磷酸盐缓冲液(phosphatebuffer，PBS)20mL，水化温度50℃，超声时间20min。AP-L粒径为157.34±1.87nm，多分散系数(polydispersityindex，PDI)为0.240±0.025，包封率为(66.50±1.00)%，CS-AP-L粒径为564.22±39.7nm，PDI为0.292±0.022，包封率为(60.17±1.97)%。稳定性试验显示常温保存30d后，AP-L渗漏率为(21.92±4.84)%，CS-AP-L渗漏率为(10.64±0.28)%，CS-AP-L更稳定。DPPH和ABTS清除实验表明，AP-L和CS-AP-L均可以提高芹菜素的自由基清除能力，且CS-AP-L的自由基清除能力更强。结论本研究制备的CS-AP-L粒径大小合适，分布均匀，包封率较高、稳定性较好，具有促进芹菜素抗氧化活性的潜力，可为开发芹菜素衍生产品提供参考依据。

关键词：芹菜素脂质体包封率稳定性抗氧化能力壳聚糖

和厚朴酚在乳腺癌细胞上皮间质转化中的作用研究

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中国临床药理学杂志 2024年第17期40卷 2488-2492页

作者：李谌王钰锦州医科大学附属第一医院分子检测中心辽宁锦州121000

目的探讨和厚朴酚对乳腺癌上皮间质转化(EMT)的作用及其机制。方法将MDA-MB-231细胞随机分为对照组(正常培养)、低剂量组(40μmol·L^(-1)和厚朴酚)、中剂量组(50μmol·L^(-1)和厚朴酚)、高剂量组(60μmol·L^(-1)和厚朴酚)、si-NC组(... 详细信息

目的探讨和厚朴酚对乳腺癌上皮间质转化(EMT)的作用及其机制。方法将MDA-MB-231细胞随机分为对照组(正常培养)、低剂量组(40μmol·L^(-1)和厚朴酚)、中剂量组(50μmol·L^(-1)和厚朴酚)、高剂量组(60μmol·L^(-1)和厚朴酚)、si-NC组(转染si-NC)、si-NF2组(转染si-NF2)、DMSO组(等剂量二甲基亚砜处理)、抑制药组(12μmol·L^(-1)Hippo通路抑制药Verteporfin)。用四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验检测细胞存活情况;用Transwell实验检测细胞迁移情况;用蛋白质印迹法检测EMT相关蛋白的表达水平。将BALB/c雌性小鼠随机分为模型组(构建移植瘤模型)、低剂量实验组(建模后灌胃给予100 mg·kg^(-1)和厚朴酚)、高剂量实验组(建模后灌胃给予200 mg·kg^(-1)和厚朴酚),每组10只。治疗结束后检测肿瘤体积和质量,并用蛋白质印迹法检测EMT相关蛋白的表达水平。结果对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组的细胞存活率分别为(100.00±4.02)%、(80.14±6.51)%、(64.05±6.21)%和(53.70±5.19)%,细胞迁移数量分别为(276.30±14.77)、(219.40±12.50)、(162.20±9.53)和(100.10±6.50)个,神经纤维蛋白2(NF2)相对表达水平分别为0.52±0.04、0.60±0.06、0.65±0.07和0.78±0.10,细胞程序性死亡-配体1(PD-L1)蛋白相对表达水平分别为0.70±0.06、0.47±0.04、0.41±0.05和0.36±0.03。低、中、高剂量组的上述指标与对照组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05)。模型组、低剂量实验组、高剂量实验组小鼠的肿瘤体积分别为(922.02±109.61)、(743.04±64.04)和(605.00±72.63)mm^(3),肿瘤质量分别为(0.87±0.10)、(0.66±0.10)和(0.53±0.11)g,PD-L1蛋白相对表达水平分别为0.74±0.08、0.51±0.05和0.42±0.05,N-钙黏着蛋白(N-cadherin)蛋白表达水平分别为0.75±0.07、0.60±0.10和0.51±0.04。低、高剂量实验组的上述指标与模型组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论和厚朴酚可能通过调节NF2-Hippo信号通路作用于PD-L1抑制乳腺癌细胞EMT。

关键词：和厚朴酚乳腺癌神经纤维蛋白2-Hippo/Yes相关蛋白1通路细胞程序性死亡-配体1 上皮间质转化

儿童肝移植术后肠道淋巴增殖性疾病3例临床病理分析

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临床与实验病理学杂志 2024年第7期40卷 762-765页

作者：杨炼李雯雯徐曼朱进重庆医科大学分子医学检测中心重庆400016

目的探讨儿童肝移植术后肠道淋巴增殖性疾病(posttransplant lymphoproliferative disorder, PTLD)的临床病理特征与处理策略。方法收集3例肝移植后发生于肠道PTLD的临床资料,采用免疫组化、原位杂交和基因重排检测,分析其临床病理特... 详细信息

目的探讨儿童肝移植术后肠道淋巴增殖性疾病(posttransplant lymphoproliferative disorder, PTLD)的临床病理特征与处理策略。方法收集3例肝移植后发生于肠道PTLD的临床资料,采用免疫组化、原位杂交和基因重排检测,分析其临床病理特征,并复习相关文献。结果 3例患者均于移植术后半年内发生肠道PTLD,肠壁全层见体积较大的肿瘤细胞弥漫分布。3例EBER均弥漫阳性,基因重排检测B细胞IgH和IgK基因克隆性重排,其中1例还同时发生T细胞TCRγ基因重排。患者均经他克莫司、利妥昔单抗和抗感染治疗,2例于诊断2个月内死亡,1例随访13个月预后良好。结论肝移植后肠道PTLD临床表现复杂,移植后密切监控血清EBV水平,结合影像学、病理检查早期诊断PTLD,有助于临床制定个体化治疗策略以提高患者预后。

关键词：移植后淋巴增殖性疾病肝移植弥漫大B细胞淋巴瘤儿童 EBV

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非小细胞肺癌同源重组修复通路基因与临床特征的相关性分析

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重庆医科大学学报 2024年第7期49卷 871-876页

作者：杨茜赵洁唐海涛廖鑫牟康李小松沈依帆重庆医科大学附属第一医院临床分子医学检测中心重庆400016

目的:采用基因组不稳定评分(genomic instability score,GIS)描述非小细胞肺癌患者的同源重组修复缺陷(homolo⁃gous recombination deficiency,HRD)状态,探讨HRD状态及同源重组通路基因(homologous recombination repair,HRR)与临床特征的相关性。方法:本研究纳入2020年1月至2022年1月在重庆医科大学附属第一医院接受治疗的335例非小细胞肺癌患者,采用二代测序法检测GIS评分及35个HRR基因,根据杂合性缺失(loss of heterozygosity,LOH)、端粒等位基因失衡(telo⁃meric allelic imbalance,TAI)、大片段迁移(large-scale state transition,LST)综合评估GIS评分。GIS评分及HRR基因与临床特征之间的关系通过Mann-Whitney U检验,Kruskal-Wallis检验和Dunn-Bonferroni检验分析。GIS评分和肿瘤突变负荷(tumor mutation burden,TMB)值的相关性采用Spearman分析。结果:在335例患者中,男性患者、年龄大、分期晚、有吸烟史、鳞癌均会导致GIS评分更高,GIS评分Md(P25,P75)分别是13(4,26.75),12(3,22.5),21.5(12,30),16(4,27)和24(18,38.25)(Z=-5.083,P检测到33个HRR相关基因突变,主要集中在ATM、RECQL4、ATR、FANCM、BRCA1、FANCA、BRIP1、NBN、WRN等基因,其中BRCA2、FANCI、FANCA基因突变均会导致GIS评分升高,GIS评分Md(P25,P75)分别是34(25.25,51),31.5(14.5,50)和22(12,44)(Z=-2.805,P=0.005;Z=-2.216,P=0.027;Z=-2.478,P=0.013)。GIS评分和TMB值之间呈正相关(rs=0.504,P检测可能成为非小细胞肺癌患者靶向治疗及免疫治疗新的生物标志物。

关键词：非小细胞肺癌同源重组修复缺陷基因组不稳定评分同源重组通路

过表达环状RNA HIPK3抑制大鼠小胶质细胞活化的研究

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安徽医科大学学报 2024年第5期59卷 753-760页

作者：周玉婷刘睿王思雯胡圳圳郑大同南京医科大学第二附属医院儿童医学中心南京210003 南京医科大学第二附属医院临床分子检测中心南京210003

目的探讨环状RNA同源域相互作用蛋白激酶3(circHIPK3)与大鼠小胶质(RM)细胞活化的关系。方法体外培养RM细胞,并随机分为正常组和氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)组,RT-qPCR检测各组细胞内circHIPK3表达水平。构建具有嘌呤霉素抗性的circHIPK3慢... 详细信息

目的探讨环状RNA同源域相互作用蛋白激酶3(circHIPK3)与大鼠小胶质(RM)细胞活化的关系。方法体外培养RM细胞,并随机分为正常组和氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)组,RT-qPCR检测各组细胞内circHIPK3表达水平。构建具有嘌呤霉素抗性的circHIPK3慢病毒载体,设置过表达(OE)组和阴性对照(NC)组,根据荧光表达强度选择RM细胞最佳感染复数(MOI),采用嘌呤霉素筛选稳定表达circHIPK3的RM细胞。将OE组和NC组细胞置于OGD/R条件下培养,Western blot检测各组细胞中小胶质细胞活化标志蛋白钙结合衔接分子1(Iba-1)、肿瘤坏死因子受体超家族成员5(CD40)表达水平。通过circRNAdb数据库分析circHIPK3翻译蛋白潜能,利用circBank和Starbase数据库预测circHIPK3潜在结合的微小RNA(miRNA)。结果与正常组相比,OGD/R组RM细胞中circHIPK3的表达水平显著下调(P放阅读框(ORF),可编码由404个氨基酸组成的多肽。miRNA结合分析显示,circHIPK3可能与8个靶向miRNAs结合:hsa-miR-3529-5p、hsa-miR-379-5p、hsa-miR-506-3p、hsa-miR-33、hsa-miR-450b-5p、hsa-miR-551b-3p、hsa-miR-193、hsa-miR-508-3p。结论过表达circHIPK3显著抑制OGD/R诱导的RM细胞活化、circHIPK3有编码多肽潜能,可能通过海绵miRNA发挥功能。

关键词： circHIPK3 环状RNA 小胶质细胞氧糖剥夺/再灌注慢病毒

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MK8719激活STAT6并促进抗炎型小胶质细胞活化在缺血性脑损伤大鼠中发挥保护作用的研究

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重庆医科大学学报 2024年第4期49卷 459-464页

作者：李怡心游艳周杨彭莉重庆医科大学附属第一医院临床分子医学检测中心重庆400016 重庆医科大学附属第二医院病理科重庆400000 重庆医科大学基础医学院重庆400010

目的:观察氧连接N-乙酰葡萄糖胺(O-linked N-acetylglucosamine,O-GlcNAc)水解酶抑制剂MK8719在脑缺血损伤大鼠中的作用。方法:建立大鼠大脑中动脉梗塞模型模拟脑缺血再灌注损伤,通过2,3,5-三苯基氯化四氮唑(2,3,5-Triphenyltetrazolium... 详细信息

目的:观察氧连接N-乙酰葡萄糖胺(O-linked N-acetylglucosamine,O-GlcNAc)水解酶抑制剂MK8719在脑缺血损伤大鼠中的作用。方法:建立大鼠大脑中动脉梗塞模型模拟脑缺血再灌注损伤,通过2,3,5-三苯基氯化四氮唑(2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色评估脑梗死体积,并通过改良的神经损伤评分量表评估大鼠的神经运动障碍减轻,HE和尼式染色用于评估脑损伤后组织改变,组织免疫荧光染色用于评估抗炎型小胶质细胞活化情况。体外培养BV2小胶质细胞并建立氧糖剥夺/复糖复氧模型模拟缺血缺氧再灌注损伤,Western blotting检测总蛋白及核蛋白中的信号转导及转录激活蛋白6(signal transducer and activator of transcription 6,STAT6)、磷酸化STAT6及O-GlcNAc糖基化STAT6表达。酶联免疫吸附检测(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)评估小胶质细胞释放的炎性因子白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)和转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)量。结果:MK8719给药组大鼠梗死灶体积减小,神经运动障碍,抗炎型小胶质细胞比例增加;在体外培养的小胶质细胞中,MK8719组的O-GlcNAc糖基化STAT6、磷酸化STAT6及核STAT6表达增加(P放减少(P放增加(P<0.001)。结论:MK8719对脑缺血损伤大鼠有保护作用,其作用机制可能与STAT6激活诱导的抗炎型小胶质细胞活化有关。

关键词：缺血性脑卒中 MK8719 信号转导及转录激活蛋白6 小胶质细胞

肿瘤类器官在精准肺癌药物筛选中的研发与进展

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中国组织工程研究 2024年第31期28卷 5078-5084页

作者：刘继伟刘伟慈毛文君南京医科大学附属无锡人民医院胸外科南京医科大学无锡医学中心

背景：肺癌是全世界最常见且预后最差的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率长期位居恶性肿瘤前列。肺癌的异质性和耐药问题是导致其预后较差的原因之一。肺癌类器官是由患者来源的肿瘤细胞培养成的体外3D模型，可精准还原原发肿瘤的生物学... 详细信息

背景：肺癌是全世界最常见且预后最差的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率长期位居恶性肿瘤前列。肺癌的异质性和耐药问题是导致其预后较差的原因之一。肺癌类器官是由患者来源的肿瘤细胞培养成的体外3D模型，可精准还原原发肿瘤的生物学特征，可用于肺癌的各项研究。目的：综述肺癌类器官在化疗、靶向治疗及免疫治疗药物敏感性检测中的应用和研究进展，分析其局限性，为推进肺癌的个性化精准医疗提供新的策略。方法：第一作者于2023年7月应用计算机在中国知网和PubMed数据库进行文献检索，文献发表时间为2013-2023年，以“类器官，肺癌类器官，肺癌实验模型，精准医疗，药物敏感性检测，化疗，靶向治疗，免疫治疗”为中文检索词，以“organoid,lung cancer organoid,lung cancer experimental model,precision medicine,drug sensitivity test,chemotherapy,targeted therapy,immunotherapy”为英文检索词，最终纳入84篇文献进行综述。结果与结论：(1)相较于传统肺癌研究模型仅能展现二维层面的细胞活动、缺乏细胞间交流互动及存在物种差异等缺陷，肺癌类器官培养细胞来源多样，培养介质不断被优化，能够从三维层面模拟细胞间互动的同时也能保留原发肿瘤的生物学特征，是一种拥有巨大潜力的新型研究模型，为支持其用于抗癌药物筛选提供了坚实基础。(2)肺癌类器官预测结果与患者实际临床结局高度一致，初步展现出对于指导抗癌用药的重要辅助意义：通过对常见化疗、靶向治疗和免疫治疗药物进行疗效预测和筛选，为患者定制个体化治疗策略；可避免不必要的药物试错和毒副反应；探索可行的替代药物或联合用药方案以改善耐药问题；指导罕见突变类型肺癌的精准治疗，弥补临床空白；通过比较不同药物活性，提供更加全面的药物评价。此外，需注意类器官可能出现内部异质性，故应尽可能多次取材检测，以提高结果的准确性。(3)肺癌类器官在药物筛选等实际应用中存在局限，如培养成功率及纯度不稳定、缺乏血管组织等。为弥补这些不足，需要改进培养条件、加速检测流程，以及发展多类器官系统，模拟药物在多个器官内的整体效应，这些改进将有助于更准确地评估药物的效果和毒性，提高肺癌治疗的精准性。

关键词：肺癌类器官精准医疗个性化治疗抗癌药物筛选化疗靶向治疗免疫治疗

难治性癫痫相关皮质发育畸形的病理研究及分类进展

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中华病理学杂志 2024年第5期53卷 419-424页

作者：付永娟朴月善首都医科大学宣武医院病理科、国家神经疾病医学中心、首都医科大学癫痫临床诊疗与研究中心北京100053

随着基因检测技术、神经影像学及神经电生理技术的迅猛发展,我们对皮质发育畸形的认识不断深入和更新,尤其是哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路相关的基因突变在局灶性皮质发育不良(FCD)中被陆续发现。同时,2011年国际抗癫痫联盟(IL... 详细信息

随着基因检测技术、神经影像学及神经电生理技术的迅猛发展,我们对皮质发育畸形的认识不断深入和更新,尤其是哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路相关的基因突变在局灶性皮质发育不良(FCD)中被陆续发现。同时,2011年国际抗癫痫联盟(ILAE)发布的有关FCD的分类共识在诊断实践中遇到了问题和挑战。因此,2022年ILAE根据分子遗传学10年来的进展,提出了FCD分类的更新版,主要在分类体系中增加了"白质病变",还建议综合病理组织学、影像学及分子检测结果,进行多层次整合诊断,来实现可靠的、临床相关的和治疗性靶向的组织诊断。

关键词：癫痫皮质发育畸形局灶性皮质发育不良病理分类

稀有人参皂苷对环磷酰胺所致雌性大鼠生殖损伤的改善作用:基于代谢组学

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中华妇产科杂志 2024年第5期59卷 391-400页

作者：陶飞燕马华刚曹雨晴纪雪莹宋林梦薛鹏山东第二医科大学公共卫生学院公共卫生检测检验中心潍坊261201 山东第二医科大学附属医院、潍坊市人民医院生殖医学中心潍坊261200

目的基于代谢组学分析稀有人参皂苷(RGS)对环磷酰胺(CP)所致雌性大鼠生殖损伤的改善作用。方法将24只雌性大鼠分为4组:空白对照(NC)组、RGS组、CP组、CP+RGS组,每组6只,CP组和CP+RGS组腹腔注射CP(30 mg/kg)5 d进行造模,CP+RGS组并予灌胃... 详细信息

目的基于代谢组学分析稀有人参皂苷(RGS)对环磷酰胺(CP)所致雌性大鼠生殖损伤的改善作用。方法将24只雌性大鼠分为4组:空白对照(NC)组、RGS组、CP组、CP+RGS组,每组6只,CP组和CP+RGS组腹腔注射CP(30 mg/kg)5 d进行造模,CP+RGS组并予灌胃RGS(50 mg/kg)进行干预。观察各组大鼠的一般生长状况,计算脏器指数,HE染色后观察卵巢、子宫、肝脏及肾脏的组织病理学变化,检测血清雌二醇、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)和炎症因子白细胞介素(IL)6、IL-1β、肿瘤坏死因子α水平;采集各组大鼠的尿液,使用超高效液相色谱-质谱(UPLC-MS)联用技术对尿液的代谢产物进行代谢组学分析,筛选差异代谢物并富集分析代谢通路。结果与NC组比较,CP组大鼠卵巢指数[(0.054±0.015)%]、子宫指数[(0.293±0.036)%]、雌二醇水平[(62.9±6.4)pmol/L]均显著降低(P均检测到352个代谢物,根据筛选条件发现其中12种是与CP组的生殖损伤相关的差异代谢物,经RGS治疗后向NC组方向改善;RGS的治疗作用与多种代谢通路相关,包括嘌呤代谢、牛磺酸和次牛磺酸代谢通路等。结论RGS可能是通过影响嘌呤代谢等通路,减少炎症发生,进而改善CP对雌性大鼠生殖系统造成的损伤。

关键词：人参皂苷类环磷酰胺生殖器疾病,女(雌)性代谢组学疾病模型,动物