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甲型流感病毒NP及相关宿主因子研究进展

中国病原生物学杂志 2024年第3期19卷 360-366页

作者：高三利孙欣王盛羽宋鸿遵义医科大学微生物学教研室贵州遵义563000 遵义医科大学贵州省普通高等学校传染病与生物安全特色重点实验室

甲型流感病毒(influenza A virus,IAV)严重威胁人类健康。病毒核心是核糖核蛋白复合物(viral ribonucleoprotein complexes,vRNPs),是病毒基因组转录和复制的最小功能单位。核蛋白(nucleoprotein,NP)是vRNP的重要组成部分之一,在流感病... 详细信息

甲型流感病毒(influenza A virus,IAV)严重威胁人类健康。病毒核心是核糖核蛋白复合物(viral ribonucleoprotein complexes,vRNPs),是病毒基因组转录和复制的最小功能单位。核蛋白(nucleoprotein,NP)是vRNP的重要组成部分之一,在流感病毒整个生命周期起着关键作用。机体存在多种宿主因子通过NP影响病毒增殖。本文就通过NP影响vRNP核输入、病毒基因组转录和复制、vRNP核输出以及vRNP组装这几个方面的宿主因子进行综述,以期为治疗IAV新靶点的发现及新药物的研发提供参考。

关键词：甲型流感病毒核蛋白NP 宿主因子病毒增殖相互作用综述

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乳酸调控巨噬细胞功能促进登革病毒2型感染

中华微生物学和免疫学杂志 2024年第5期44卷 396-405页

作者：胡欢覃燕春黄贞植周璐吴家红商正玲贵州医科大学基础医学院免疫学教研室安顺550025 贵州医科大学基础医学院寄生虫教研室安顺550025

目的探究外源性乳酸对Raw264.7细胞、小鼠骨髓来源巨噬细胞(mouse bone marrow-derived macrophages,BMDMs)及THP-1细胞中登革病毒2型(dengue virus type 2,DENV-2)复制的影响及乳酸与细胞活化之间的关系。方法培养和诱导BALB/c小鼠骨... 详细信息

目的探究外源性乳酸对Raw264.7细胞、小鼠骨髓来源巨噬细胞(mouse bone marrow-derived macrophages,BMDMs)及THP-1细胞中登革病毒2型(dengue virus type 2,DENV-2)复制的影响及乳酸与细胞活化之间的关系。方法培养和诱导BALB/c小鼠骨髓中的BMDMs,流式细胞术检测F4/80+CD11b+细胞纯度。qRT-PCR检测不同时间点DENV-2感染BMDMs中葡萄糖转运体1(glucose transporter type 1,GLUT1)、己糖激酶2(hexokinase 2,HK2)、乳酸转运体4(monocarboxylate transporters 4,MCT4)的mRNA表达水平,比色法检测细胞上清液中乳酸含量。使用CCK-8法评估不同浓度乳酸对Raw264.7细胞、BMDMs及THP-1细胞活力的影响,qRT-PCR检测不同浓度乳酸对不同MOI DENV-2感染细胞中病毒E基因、CD163、TGF-β、CD86、视黄酸诱导基因Ⅰ(retinoic acid-inducible geneⅠ,RIG-Ⅰ)、IFN-β、干扰素刺激基因15(interferon-stimulated gene 15,ISG15)及ISG56的mRNA表达水平,流式细胞术检测CD86和CD206蛋白的表达。结果BMDMs纯度为(87.53±1.66)%。DENV-2(MOI=3)感染BMDMs后,GLUT1 mRNA转录水平在12 h一过性增高,在24 h降低(P0.05)。结论本研究发现外源性乳酸能促进DENV-2在人源及鼠源巨噬细胞中的感染,该现象与细胞M2型极化有关。

关键词：乳酸巨噬细胞登革病毒病毒复制 M2型极化干扰素信号通路

氧化石墨烯纳米颗粒在小鼠骨骼肌和人血液中诱导的免疫反应与毒性效应

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南方医科大学学报 2024年第4期44卷 617-626页

作者：孙益明黄爱兰赵志宋晨赖桂华蚌埠医科大学人体解剖学教研室安徽蚌埠233030 蚌埠医科大学食品质量与安全教研室安徽蚌埠233030 蚌埠医科大学第一附属医院骨科安徽蚌埠233030 南方医科大学人体解剖学教研室广东省组织工程构建与检测重点实验室广东广州510515

目的探讨氧化石墨烯(GO)在小鼠骨骼肌和血液中的免疫反应性,评估其毒性效应。方法超声破碎法制备GO纳米颗粒,动态光散射仪测定悬浮于去离子水和PBS的GO纳米颗粒粒径与表面电荷。将不同浓度(0.5、1和2mg/mL)的GO悬浮液或PBS分别注入C57B... 详细信息

目的探讨氧化石墨烯(GO)在小鼠骨骼肌和血液中的免疫反应性,评估其毒性效应。方法超声破碎法制备GO纳米颗粒,动态光散射仪测定悬浮于去离子水和PBS的GO纳米颗粒粒径与表面电荷。将不同浓度(0.5、1和2mg/mL)的GO悬浮液或PBS分别注入C57BL/6小鼠腓肠肌,HE和免疫荧光染色评价小鼠体内炎症和免疫反应性。采用扫描电镜、分光光度计和血栓弹性描记图(TEG)观察GO对体外人血红细胞形态、溶血和凝血的影响。结果动态光散射研究显示,与水悬浮液相比,GO颗粒的PBS悬浮液具有更优的胶体分散性、稳定性、表面电荷效应及体内微环境模拟性。HE和免疫荧光染色显示,小鼠腓肠肌中GO植入区周围的炎症浸润、肌纤维变性以及巨噬细胞、单核细胞、树突状细胞和CD4^(+)T细胞的浸润程度(包括F4/80^(+)、CD11b^(+)、CD11c+的平均阳性荧光面积百分比和CD3^(+)CD4^(+)细胞数等)均明显高于对照组(P<0.05),且呈明显的剂量和时间依赖性。扫描电镜观察显示,相比低浓度(0.002和0.02mg/mL)的GO和PBS,较高浓度(0.2、2和20mg/mL)的GO可使体外红细胞形态发生明显改变并引起红细胞溶血(P<0.05)。TEG显示,相较低浓度组和PBS组,高浓度GO组的多项血液凝固参数(K,α,R和MA)出现明显异常。结论GO可持久诱导炎症和免疫反应性,因而具有一定的骨骼肌肌肉毒性和体外血液毒性。

关键词：氧化石墨烯免疫反应肌肉毒性血液毒性

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乙型肝炎低表面抗原患者乙肝病毒血清学标志物与乙肝病毒前基因组RNA的相关性分析

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福建医药杂志 2024年第4期46卷 35-38页

作者：黎环林勇福建医科大学孟超肝胆医院福州350001 福建医科大学传染病学教研室福州350001

目的研究血清乙肝病毒前基因组RNA(HBV pgRNA)检测结果与慢性乙型肝炎(CHB)低表面抗原患者不同乙肝病毒的血清学指标之间的相关性。方法收集福建医科大学孟超肝胆医院慢性乙型肝炎低表面抗原患者共计148例纳入研究。临床样本进行HBsAg、... 详细信息

目的研究血清乙肝病毒前基因组RNA(HBV pgRNA)检测结果与慢性乙型肝炎(CHB)低表面抗原患者不同乙肝病毒的血清学指标之间的相关性。方法收集福建医科大学孟超肝胆医院慢性乙型肝炎低表面抗原患者共计148例纳入研究。临床样本进行HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBV DNA、HBV pgRNA的测定,检测数据采用多因素logistic回归分析、分层分析以及HBsAg、HBsAb(ROC曲线)评价血清HBV pgRNA的预测价值。结果血清HBsAg滴度对HBV pgRNA的影响具有统计学意义(P学意义。HBeAg阴性患者中,HBsAg滴度对HBV pgRNA的影响有统计学意义(P学意义(P>0.05)。HBsAg曲线下面积为0.934,有统计学意义(P学意义(P<0.001),HBsAb大于1.44,pgRNA低于检测下限。结论慢性乙型肝炎低表面抗原患者在接受抗病毒治疗过程中,临床指标如血清HBsAg滴度及HBV pgRNA滴度对病情的转归有较好的预测价值。HBsAg和HBV pgRNA滴度越低,HBsAb滴度越高,预示病情稳定、不易复发。

关键词：慢性乙型肝炎 HBsAg HBsAb HBV DNA 前基因组RNA

自转录活性调节区测序技术在增强子发现研究中的应用

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遗传 2024年第8期46卷 589-602页

作者：王纪龙李青战廷正广西医科大学寄生虫学教研室南宁530021 广西医科大学细胞生物学教研室南宁530021 广西高校区域性疾病基础研究重点实验室(广西医科大学) 南宁530021

自转录活性调节区测序(self-transcribing active regulatory region sequencing,STARR-seq)是一种可发现并同时验证全基因组增强子活性的高通量测序方法。其原理为:将待验证序列插入质粒载体并电转入细胞中,该序列在作为增强子提高靶... 详细信息

自转录活性调节区测序(self-transcribing active regulatory region sequencing,STARR-seq)是一种可发现并同时验证全基因组增强子活性的高通量测序方法。其原理为:将待验证序列插入质粒载体并电转入细胞中,该序列在作为增强子提高靶基因转录的同时,其本身也作为靶基因被增强转录。通过对转录组进行测序,并对比未插入片段的测序结果,可获得增强子在基因组位置及活性的信息。在传统增强子研究方法中,通过对染色质开放区域和转录活性区域进行测序以预测增强子,但只能逐一验证预测结果,无法高通量验证增强子活性。STARR-seq技术解决了上述缺陷,可在对全基因组增强子高通量挖掘的同时,对其活性进行可靠的验证。自STARR-seq技术发明以来,已被广泛运用于不同物种与细胞中的增强子发现及活性验证研究。本文对传统增强子预测方法以及STARR-seq技术的基本原理、发展历史和具体运用进行了介绍,并对其发展前景进行展望,以期为后续增强子相关领域研究人员提供参考。

关键词：自转录活性区域测序增强子转录调控单核苷酸多态性

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过表达海马LINGO-1对小鼠学习和记忆能力及海马各亚区Spinophilin+树突棘的影响

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陆军军医大学学报 2024年第2期46卷 118-127页

作者：王舜蒋林何琦杨浩王依滢周宇宁梁芯张毅晁凤蕾张蕾唐勇重庆医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室重庆400016

目的脑立体定位注射腺相关病毒特异性过表达海马LINGO-1,探讨其对小鼠空间学习和记忆能力以及海马各亚区体积和Spinophilin+树突棘的影响。方法将7月龄雄性C57小鼠按照简单随机法分为对照组和LINGO-1过表达组,对照组小鼠海马立体定位... 详细信息

目的脑立体定位注射腺相关病毒特异性过表达海马LINGO-1,探讨其对小鼠空间学习和记忆能力以及海马各亚区体积和Spinophilin+树突棘的影响。方法将7月龄雄性C57小鼠按照简单随机法分为对照组和LINGO-1过表达组,对照组小鼠海马立体定位注射携带绿色荧光的空载腺相关病毒(adeno-associated virus, AAV),LINGO-1过表达组小鼠海马立体定位注射同时携带绿色荧光和LINGO-1过表达载体的AAV。运用Morris水迷宫评估小鼠的空间学习和记忆能力,荧光定量PCR及免疫荧光染色方法分别检测小鼠海马内LINGO-1基因表达水平和各亚区荧光强度,体视学三维定量小鼠海马各亚区体积及Spinophilin+树突棘总数。结果对照组和LINGO-1过表达组病毒注射前后体质量差异无统计学意义;LINGO-1过表达诱导小鼠海马LINGO-1的mRNA水平升高、荧光强度增强(P学习与记忆能力。

关键词： LINGO-1 树突棘突触海马学习记忆

反复低血糖增加1型糖尿病小鼠肠GLP-1的表达及分泌

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中国病理生理杂志 2024年第5期40卷 890-898页

作者：靳方馨赵晶晶王岩李敏讷李如江郭军堂山东第二医科大学组织学与胚胎学教研室山东省高校重点实验室山东潍坊261053 山东第二医科大学病理生理学教研室山东潍坊261053

目的:构建1型糖尿病(type 1 diabetes mellitus,T1DM)小鼠反复低血糖(recurrent hypoglycaemia,RH)模型,并探讨低血糖时其胰高血糖素样肽1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)在肠道的表达及意义。方法:以链脲佐菌素诱导C57BL/6J小鼠,形成T1DM,在糖尿病第15天腹腔注射短效胰岛素,每3 d注射1次,连续5次降至低血糖,以构建T1DM-RH模型。建模期间记录小鼠体重、血糖水平及活动状态;ELISA检测模型鼠第5次降糖持续60min后的血浆肾上腺素、胰高血糖素(glucagon,GCG)、生长抑素(somatostatin,SST)和GLP-1水平;免疫荧光检测模型鼠肠GLP-1和胰岛α、δ细胞激素的分泌变化;Western blot检测回肠和结肠的GLP-1及其受体GLP-1R、激素原转化酶1/3(prohormone convertases 1/3,PC1/3)蛋白的表达。结果:血糖、体重符合T1DM鼠标准。RH组连续降糖5次,每次血糖均降至(3.3±0.5) mmol/L,且持续时间>60 min,加之其血浆肾上腺素、血浆GCG水平及RH小鼠降糖期间行为改变,符合糖尿病小鼠RH和低血糖反调节障碍的建模标准。ELISA显示,与T1DM组相比,RH组血浆肾上腺素和GCG水平均下降(P<0.01),血浆SST和活性GLP-1水平显著升高(P<0.01);免疫荧光显示,与T1DM组相比,RH组肠GLP-1表达升高,胰岛SST分泌增多(P<0.01),GCG分泌减少(P<0.01);Western blot显示,与T1DM组相比,RH组肠活性GLP-1和GLP-1R明显升高(P<0.01)。结论:TIDM-RH小鼠肠GLP-1表达升高,与低血糖反调节障碍的形成或加重密切相关。

关键词： 1型糖尿病低血糖反调节障碍胰高血糖素样肽1 肠道胰腺

BRACO-19和TMPyP4在HBV-1.3mer质粒感染模型对HBV转录和复制的抑制作用

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中国病原生物学杂志 2024年第9期19卷 999-1003,1008页

作者：马海洋贺丽娜吕树娟余莉安徽医科大学基础医学院微生物学教研室安徽合肥230032 动物源性传染病安徽省重点实验室

目的探讨G-四链体小分子配体BRACO-19和TMPyP4对乙型肝炎病毒转录和复制的影响。方法利用含有HBV全基因组1.3倍复制子(HBV 1.3-mer)质粒转染HepG2细胞感染模型,BRACO-19和TMPyP4分别作用48 h,酶联免疫吸附试验检测上清表面抗原(HBsAg)和... 详细信息

目的探讨G-四链体小分子配体BRACO-19和TMPyP4对乙型肝炎病毒转录和复制的影响。方法利用含有HBV全基因组1.3倍复制子(HBV 1.3-mer)质粒转染HepG2细胞感染模型,BRACO-19和TMPyP4分别作用48 h,酶联免疫吸附试验检测上清表面抗原(HBsAg)和e抗原(HBeAg)表达水平,实时荧光定量PCR检测细胞内HBV Total RNA、3.5kbRNA以及DNA表达水平,将HBV DNA用plasmid SafeTMATP-Dependent DNase 37℃作用3 h后,定量PCR检测病毒cccDNA的表达;QGRS Mapper软件分析HBV推定的四链体形成序列(putative quadruplex-forming sequences,PQS),并在HBV 1.3-mer质粒DNA上设计PQS区域上下游引物及非PQS区域对照引物,两种小分子配体分别作用HBV 1.3-mer质粒DNA,qPCR stop试验分别定量PQS和非PQS区域DNA扩增水平,1%琼脂糖凝胶电泳可视化验证。结果20μmol/L BRACO-19和TMPyP4作用HepG2转染模型显著抑制HBsAg和HBeAg的表达水平,HBV的Total RNA、3.5 kb RNA、DNA和cccDNA水平相较于对照组均显著下调。通过不同浓度BRACO-19和TMPyP4作用HBV质粒DNA,qPCR stop试验发现随着BRACO-19和TMPyP4药物浓度递增可以显著抑制DNA聚合酶在基因组中三个HBV PQS区域的扩增。结论小分子配体BRACO-19和TMPyP4均能抑制HBV转染模型中的转录和复制,HBV基因存在富含鸟嘌呤的四链体形成序列,BRACO-19和TMPyP4特异性阻滞DNA聚合酶在HBV的PQS区域复制延伸。

关键词：乙型肝炎病毒 BRACO-19 TMPyP4 PCR stop assay

NLRP3炎症小体在感染性疾病中的作用研究进展

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中国病原生物学杂志 2024年第11期 1371-1376页

作者：高雪涵卫麟娜董品志陈晋柯源张浪浪王海燕覃明罗军敏遵义医科大学基础医学院免疫学教研室遵义医科大学流行病学与卫生统计学教研室

核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(Nucleotide-bindingoligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)是一类存在于胞浆中的大分子蛋白复合物，作为炎症反应的核心，能够感知外源性病原体和内源性危险信号，在多种感染性疾... 详细信息

核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(Nucleotide-bindingoligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)是一类存在于胞浆中的大分子蛋白复合物，作为炎症反应的核心，能够感知外源性病原体和内源性危险信号，在多种感染性疾病的发生发展中发挥重要作用。因此，本文对NLRP3炎症小体的激活机制以及NLRP3炎症小体在感染性疾病中的研究进展予以综述，旨在为感染性疾病的治疗提供新的靶点。

关键词：固有免疫模式识别受体 NLRP3炎症小体感染性疾病综述