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表达纯化糖原合成酶激酶3β的两种方法比较

南方医科大学学报 2011年第3期31卷 397-402页

作者：许少飞徐杰黎明涛中山大学中山医学院蛋白质组学研究中心广东广州510080 中山大学中山医学院人体解剖学教研室广东广州510080

目的建立一套高纯度、高活性表达糖原合成酶激酶3β的技术。方法分别采用大肠杆菌和杆状病毒昆虫细胞蛋白表达系统表达糖原合成酶激酶3β,通过His和GST标签两步纯化目的蛋白,SDS-PAGE观察目的蛋白的纯度,激酶反应观察目的蛋白的活性。... 详细信息

目的建立一套高纯度、高活性表达糖原合成酶激酶3β的技术。方法分别采用大肠杆菌和杆状病毒昆虫细胞蛋白表达系统表达糖原合成酶激酶3β,通过His和GST标签两步纯化目的蛋白,SDS-PAGE观察目的蛋白的纯度,激酶反应观察目的蛋白的活性。结果大肠杆菌表达纯化的糖原合成酶激酶3β占纯化后总蛋白的量为54%,昆虫细胞表达纯化的糖原合成酶激酶3β占纯化后总蛋白的量为96%;昆虫细胞来源的目的蛋白比大肠杆菌来源的目的蛋白活性高一倍左右。结论相比大肠杆菌表达的糖原合成酶激酶3β,昆虫细胞表达的目的蛋白具有更高的纯度和活性。

关键词：糖原合成酶激酶3β 大肠杆菌表达系统杆状病毒昆虫细胞表达系统

上调c-Jun和抑制磷酸化p44/42的活性参与苯妥英诱导的培养的大鼠小脑颗粒神经元凋亡(英文)

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Acta Pharmacologica Sinica 2003年第6期24卷 61-70+143页

作者：赵灵芝苏兴文黄奕俊邱鹏新颜光美中山大学中山医学院药理教研室中山大学中山医学院药理教研室广州 510089 中国

目的:研究苯妥英(diphenylhydantoin,DPH)(100μmol/L)对体外培养的小脑颗粒神经元(CGN)毒性的细胞内信号机制。方法:比较DPH对体外培养的大脑皮质神经元(CN)和小脑颗粒神经元的作用;考查信号通路抑制剂对苯妥英诱导的小脑颗粒神经元存... 详细信息

目的:研究苯妥英(diphenylhydantoin,DPH)(100μmol/L)对体外培养的小脑颗粒神经元(CGN)毒性的细胞内信号机制。方法:比较DPH对体外培养的大脑皮质神经元(CN)和小脑颗粒神经元的作用;考查信号通路抑制剂对苯妥英诱导的小脑颗粒神经元存活的作用;采用相关信号通路中蛋白分子的抗体及其活性部位磷酸化特异性抗体蛋白质印迹法检测信号分子c-Jun,p44/42,JNK,p38的活性及表达;RT-PCR检测c-jun mRNA的表达。结果:DPH 100μmol/L可选择性诱导CGN凋亡,而对CN无明显毒性;JNK/p38抑制剂SB203580 10μmol/L和MLK抑制剂CEP-110041μmol/L可明显抑制苯妥英诱导的小脑颗粒神经元的凋亡;DPH可诱导CGN中c-Jun的活性及表达,c-jun mRNA亦随之上调;SB203580 10μmol/L和CEP-11004 1μmol/L可抑制DPH引起的c-Jun活性的上调;DPH不影响JNK和p38的活性表达量;DPH不影响p44/42的表达,但可明显抑制p44/42的活性。结论:DPH对体外培养的CGN的神经毒性源于其介导的CGN的凋亡,在此过程中c-Jun的表达及活性被上调,p44/42活性被抑制。

关键词：苯妥英细胞凋亡小脑大脑皮质神经元 SB203580 CEP-11004 c-Jun p42/44 MAP激酶蛋白质印迹法

交叉酶切联合MALDI-TOF/MS分析重组蛋白二硫键分布的方法建立

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中山大学学报（自然科学版） 2011年第5期50卷 93-99页

作者：徐祖敏程锐杨霞杨中汉刘少军黎明涛蔡卫斌高国全中山大学中山医学院生化教研室广东广州510080 中山医学院蛋白质组学实验室广东广州510080

以Kringle环为分子模型,应用MALDI-TOF/MS联合特异性蛋白酶酶切技术,探讨建立蛋白质二硫键分布和定位分析的研究方法。采用pET22b(+)原核表达体系诱导表达重组人纤溶酶原K5蛋白(rhK5),经Ni2+-NTA resin亲和层析纯化,并通过SDS-PAGE和Wes... 详细信息

以Kringle环为分子模型,应用MALDI-TOF/MS联合特异性蛋白酶酶切技术,探讨建立蛋白质二硫键分布和定位分析的研究方法。采用pET22b(+)原核表达体系诱导表达重组人纤溶酶原K5蛋白(rhK5),经Ni2+-NTA resin亲和层析纯化,并通过SDS-PAGE和Western-blot进行初步鉴定;采用MTT法分析rhK5对微血管内皮细胞的抑制活性;联合应用交叉酶切(Trypsin Gold单切或Trypsin Gold及Endoproteinase ASP-N双酶切)和基质辅助激光解析-飞行时间质谱(MALDI-TOF/MS)分析rhK5的二硫键分布;并应用生物信息学方法和圆二色谱法进一步验证rhK5二级结构。应用原核体系高效表达具有生物活性的rhK5蛋白,经交叉酶切联合MAL-DI-TOF/MS证实rhK5中的6个半胱氨酸正确配对形成了3对二硫键(Cys462:541,Cys483:524和Cys512:536),圆二色谱法测定发现rhK5为典型的β折叠型结构。上述研究结果为分析基因工程重组蛋白质中半胱氨酸配对及二硫键分布提供了方法学基础。

关键词：基因工程重组蛋白蛋白质结构二硫键基质辅助激光解析电离飞行时间质谱

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细胞外囊泡在口腔鳞状细胞癌诊疗中的作用

中国组织工程研究 2025年第7期29卷 1523-1530页

作者：曹玥叶鑫健李碧瑶张苡宁冯剑颖浙江中医药大学口腔医学院浙江省杭州市310053 浙江大学医学院附属口腔医院·浙江大学口腔医学院·浙江省口腔疾病临床医学研究中心·浙江省口腔生物医学研究重点实验室·浙江大学癌症研究院浙江省杭州市310006

背景:细胞外囊泡在不同的生理和病理生理条件下由多种细胞类型(包括肿瘤细胞)分泌到细胞外环境中,存在着广泛的生物学信号及细胞之间的信号传导。肿瘤衍生的细胞外囊泡可能会加剧癌症的进展、存活、侵袭和促进血管生成。目的:综述细胞... 详细信息

背景:细胞外囊泡在不同的生理和病理生理条件下由多种细胞类型(包括肿瘤细胞)分泌到细胞外环境中,存在着广泛的生物学信号及细胞之间的信号传导。肿瘤衍生的细胞外囊泡可能会加剧癌症的进展、存活、侵袭和促进血管生成。目的:综述细胞外囊泡在口腔鳞状细胞癌诊疗中的研究进展。方法:由第一作者在Pub Med、万方和中国知网数据库中进行文献检索,关键词为“EVs,Oral squamous cell carcinoma,Diagnosis and treatment,Biopsy,Tissue engineering”及“细胞外囊泡,口腔鳞状细胞癌,诊疗,活检,组织工程”,最终纳入63篇文献进行分析。结果与结论:(1)在口腔鳞状细胞癌唾液活检中,细胞外囊泡作为肿瘤细胞与周围微环境间的信息传递工具,携带包括可溶性蛋白、脂质、DNA和RNA在内的多种生物分子,对口腔鳞状细胞癌的进展起着至关重要的作用,这些微小囊泡不仅在肿瘤的生长和扩散中扮演着关键角色,还提供了有关肿瘤生物学特性的重要信息。(2)唾液活检作为一种非侵入性诊断方法,通过分析其中的细胞外囊泡,可以为口腔鳞状细胞癌的早期诊断和靶向治疗开辟新的可能性。(3)研究发现,细胞外囊泡内含的生物活性分子,如micro RNAs(mi RNAs)和特定蛋白质,能作为口腔鳞状细胞癌的生物标志物,提高早期诊断的准确性。细胞外囊泡中的特定蛋白质如EHD2,CAVIN1,PF4V1和CXCL7等显示了作为新型预测性生物标志物的潜力。(4)此外,文章还强调了细胞外囊泡在口腔鳞状细胞癌治疗中的应用潜力,通过工程化改造,细胞外囊泡可以作为新一代纳米级药物输送系统,增强肿瘤靶向治疗的效率和特异性。(5)未来的研究将进一步深入探索细胞外囊泡在口腔鳞状细胞癌治疗中的作用及其机制,有望改善患者的生存率和生活质量。

关键词：细胞外囊泡口腔鳞状细胞癌诊疗活检组织工程药物载体 miRNA 外泌体唾液检测顺铂耐药

PEI-g-MPEG/白细胞介素-10基因传递系统转染背根神经节细胞的体外性能研究

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高分子学报 2010年第1期20卷 79-86页

作者：裴媛媛王伟伟刘先国帅心涛中山大学中山医学院生物医学工程中心广州510080 中山大学化学与化学工程学院广州510275 中山大学中山医学院疼痛研究中心广州510080

探索非病毒基因载体聚乙二醇-聚乙烯亚胺共聚物(PEI-g-MPEG)介导白细胞介素-10(Interleukin-10,IL-10)体外转染原代培养背根神经节细胞(dorsal root ganglion cells,DRGs)的效果.采用本实验室设计合成的PEI-g-MPEG,与同时携带增强型绿... 详细信息

探索非病毒基因载体聚乙二醇-聚乙烯亚胺共聚物(PEI-g-MPEG)介导白细胞介素-10(Interleukin-10,IL-10)体外转染原代培养背根神经节细胞(dorsal root ganglion cells,DRGs)的效果.采用本实验室设计合成的PEI-g-MPEG,与同时携带增强型绿色荧光蛋白报告基因及IL-10基因的真核表达质粒DNA(pDC316-EGFP/IL-10)形成复合物,以脂质体(lipofectamine)复合体系Lipo/pDNA为对照,通过溴乙啶(ethidiumbromide,EB)排斥实验、凝胶阻滞电泳实验、粒径与电位的测定及扫描电镜等实验方法观察PEI-g-MPEG/pDNA的复合效果.并且检测了复合物对DRGs的毒性、转染效果及IL-10的蛋白表达情况.结果表明,PEI-g-MPEG在N/P(PEI-g-MPEG所含的氮原子和质粒DNA中磷原子的摩尔比)为5时可完全复合pDNA;随着N/P的增大,PEI-g-MPEG/pDNA复合物的粒径逐渐减小,而表面电位逐渐增大;在N/P为15时报告基因转染效果和IL-10蛋白表达情况较好,复合物的形貌呈大小均一的球形.PEI-g-MPEG/IL-10基因传递系统对于神经病理性疼痛的基因治疗具有潜在应用价值.

关键词： PEI-g-MPEG DRGs IL-10 神经病理性疼痛

非编码RNA与间充质干细胞研究的相关计量学分析

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中国组织工程研究 2025年第1期29卷 87-94页

作者：周嘉欣陶疆上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔综合科上海交通大学口腔医学院国家口腔医学中心国家口腔疾病临床医学研究中心上海市口腔医学重点实验室上海市口腔医学研究所中国医学科学院口腔颌面再生医学创新单元上海市200011

背景:非编码RNA作为一类不编码蛋白质的RNA分子,在细胞调控中发挥关键作用。同时,间充质干细胞具有多向分化潜能,对组织修复和再生至关重要。近年来,研究者们对非编码RNA在调控间充质干细胞功能中的作用展开了深入探讨。目的:通过文献... 详细信息

背景:非编码RNA作为一类不编码蛋白质的RNA分子,在细胞调控中发挥关键作用。同时,间充质干细胞具有多向分化潜能,对组织修复和再生至关重要。近年来,研究者们对非编码RNA在调控间充质干细胞功能中的作用展开了深入探讨。目的:通过文献计量学分析方法系统地了解非编码RNA与间充质干细胞相关研究的发展趋势与关键领域。方法:从Web of Science核心合集1990年至今的科学引文索引扩展获取非编码RNA与间充质干细胞相关研究的文献数据,运用VOSviewer和Cite Space计量学软件对年份、国家或地区、研究机构、被引文献和关键词进行发文量、聚类、被引频次、突增性和中介中心性进行分析,揭示该研究领域的知识基础及前沿热点。结果与结论:(1)最终纳入5348篇文献,发表在1997-2021年,相关文献呈现明显的增长趋势,尽管在2022年略有减少,其发文量仍保持较高水平,中国在该领域的研究中占据主导地位,其中上海交通大学为最活跃的机构。(2)对被引文献分析发现,高突增性、高中介中心性、高被引的文献主要与微小RNA、细胞外囊泡和骨代谢等内容相关,这些文献构成了非编码RNA与间充质干细胞研究领域的重要知识基础。(3)对关键词进行突增性分析发现,至今保持高突增性的关键词包括外泌体、环状RNA、细胞外囊泡和损伤。(4)对关键词进行聚类演变分析,发文量仍保持增长趋势的关键词聚类包括:肿瘤微环境、骨关节炎、氧化应激和细胞外囊泡,这些关键词反映了目前以及未来该领域的研究热点。(5)文章结果不仅展示了非编码RNA与间充质干细胞研究领域的研究态势,更重要的是有望为研究人员提供潜在的方向和启示。

关键词：非编码RNA 间充质干细胞计量学分析可视化分析热点前瞻知识基础 CiteSpace 作用机制细胞外囊泡转化应用

ClC-3反义寡核苷酸对ConA诱导的T淋巴细胞增殖的影响

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中国药理学通报 2004年第3期20卷 314-317页

作者：钱艳关永源王冠蕾杨晓茹贺华丘钦英中山大学中山医学院分子医学研究中心广州510080 中山大学中山医学院药理学教研室广州510080

目的　研究ClC 3蛋白在T淋巴细胞增殖过程中的作用。方法　采用脂质体转染技术 ,将寡核苷酸导入细胞 ,免疫印迹 (WesternBlot)方法分析ClC 3蛋白表达 ;[3H] TdR参入法观察ClC 3反义寡核苷酸对细胞增殖的作用。结果　①ClC 3反义寡核苷... 详细信息

目的　研究ClC 3蛋白在T淋巴细胞增殖过程中的作用。方法　采用脂质体转染技术 ,将寡核苷酸导入细胞 ,免疫印迹 (WesternBlot)方法分析ClC 3蛋白表达 ;[3H] TdR参入法观察ClC 3反义寡核苷酸对细胞增殖的作用。结果　①ClC 3反义寡核苷酸浓度依赖性地抑制ConA诱导的ClC 3蛋白的表达 ;②ClC 3反义寡核苷酸浓度依赖性地抑制ConA诱导的T淋巴细胞增殖。结论　ClC

关键词： ClC-3 T淋巴细胞反义寡核苷酸增殖

刀豆蛋白A促进T淋巴细胞增殖与ClC-3蛋白的关系

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中国药理学通报 2003年第10期19卷 1132-1135页

作者：钱艳关永源王冠蕾杨晓茹贺华丘钦英中山大学中山医学院分子医学研究中心广州510089 中山大学中山医学院药理学教研室广州510089

目的　研究刀豆蛋白A(ConA)促进T淋巴细胞增殖与内源性ClC 3蛋白的关系。方法　免疫印迹 (Westernblot)法检测ClC 3蛋白表达 ;[3 H] TdR参入法观察ConA对细胞增殖的影响。结果　①T淋巴细胞上有内源性ClC 3蛋白表达 ,分子量约为 80ku ;... 详细信息

目的　研究刀豆蛋白A(ConA)促进T淋巴细胞增殖与内源性ClC 3蛋白的关系。方法　免疫印迹 (Westernblot)法检测ClC 3蛋白表达 ;[3 H] TdR参入法观察ConA对细胞增殖的影响。结果　①T淋巴细胞上有内源性ClC 3蛋白表达 ,分子量约为 80ku ;②ConA可浓度依赖性地促进T淋巴细胞增殖 ;③ConA刺激T淋巴细胞 2 4、4 8、72h后 ,ClC 3蛋白表达均增加 ;刺激 4 8h后ClC 3蛋白表达增加最多。④ConA可浓度依赖性地增加ClC 3蛋白表达。结论　T淋巴细胞上存在内源性ClC 3蛋白表达 ;ClC

关键词： Cl^-通道 ClC-3 T淋巴细胞增殖免疫印迹

糖尿病发病过程中大鼠主动脉血管平滑肌细胞钙泵活性以及血流动力学变化的研究

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中国药理学通报 2008年第1期24卷 71-74页

作者：程晔朱邦豪区敬华黄玉玲中山大学中山医学院心脑血管研究中心广东广州510080

目的探讨糖尿病发病过程中大鼠主动脉平滑肌细胞钙泵活性变化与血流动力学变化之间的联系以及对糖尿病大血管病变产生和发展的影响。方法用链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病模型,第4、8、12、16周用彩色多普勒对各组主动脉进行血流参数测量。... 详细信息

目的探讨糖尿病发病过程中大鼠主动脉平滑肌细胞钙泵活性变化与血流动力学变化之间的联系以及对糖尿病大血管病变产生和发展的影响。方法用链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病模型,第4、8、12、16周用彩色多普勒对各组主动脉进行血流参数测量。然后处死各组动物取其主动脉并分离得到肌浆网蛋白和胞膜蛋白,分别测定SERCA和PMCA的活性。结果4wk开始随着病程延长糖尿病组大鼠腹主动脉峰值血流速度、平均血流速度较对照组明显降低(P组明显降低(P<0.05)。结论随着糖尿病病程逐渐延长,糖尿病大鼠主动脉血管结构发生改变,功能损坏;PMCA和SERCA活性改变导致的胞内钙离子调控紊乱参与了糖尿病大血管病变的发生和发展。

关键词：糖尿病血流动力学肌浆网钙泵胞膜钙泵大鼠