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结核病新疫苗临床研究进展

中华结核和呼吸杂志 2019年第10期42卷 783-790页

作者：卢锦标赵爱华王国治徐苗中国食品药品检定研究院结核病疫苗室北京102629 中国食品药品检定研究院生物制品检定所北京102629

疫苗的免疫预防是最具成本-效益的卫生干预措施之一.卡介苗接种对婴幼儿有一定保护效果,但对青少年和成人效果堪忧.要实现世界卫生组织制定的"2015年后全球结核病战略"目标,迫切需要研发有效的结核病新疫苗.本文综述了近年来进入临床研... 详细信息

疫苗的免疫预防是最具成本-效益的卫生干预措施之一.卡介苗接种对婴幼儿有一定保护效果,但对青少年和成人效果堪忧.要实现世界卫生组织制定的"2015年后全球结核病战略"目标,迫切需要研发有效的结核病新疫苗.本文综述了近年来进入临床研究阶段的结核病新疫苗,以飨读者.

关键词：临床研究新疫苗结核病世界卫生组织卡介苗接种成本-效益保护效果卫生干预

BC02复合佐剂成分协同增强机体固有免疫应答的分析

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中国生物制品学杂志 2022年第1期35卷 11-18页

作者：李军丽付丽丽杨阳王国治赵爱华中国食品药品检定研究院结核病疫苗和过敏原产品室北京102629

目的探讨复合佐剂BC02(BCG CpG DNA combination adjuvant system 02)组成成分对机体固有免疫应答的协同增强作用。方法将C57BL/6小鼠随机分为4组,分别肌肉注射Al(OH)3佐剂、BC01佐剂和BC02复合佐剂及PBS溶液(对照)。免疫后6 h,将各组... 详细信息

目的探讨复合佐剂BC02(BCG CpG DNA combination adjuvant system 02)组成成分对机体固有免疫应答的协同增强作用。方法将C57BL/6小鼠随机分为4组,分别肌肉注射Al(OH)3佐剂、BC01佐剂和BC02复合佐剂及PBS溶液(对照)。免疫后6 h,将各组部分小鼠解剖取腹股沟淋巴结进行全基因组转录谱分析。免疫后24、48、72和96 h,将各组剩余小鼠解剖取右后肢内侧注射部位肌肉组织,经组织HE和免疫荧光染色,分析注射部位炎性细胞招募情况。同时,采用qPCR法对信号通路中富集的显著性差异表达基因(significantly differentially expressed genes,SDEG)进行验证分析。结果SDEG数据经IPA(Ingenuity Pathway Analysis)软件进行GO富集和信号通路网络分析后发现,BC02复合佐剂组成成分具有协同增强免疫细胞活化网络激活、免疫细胞招募信号网络激活、巨噬细胞吞噬功能、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)信号通路网络激活和CCL2相互作用网络激活作用。BC02复合佐剂组成成分也具有协同增强佐剂在注射部位炎性细胞招募的能力。结论BC02复合佐剂组成成分Al(OH)3无机盐佐剂及BC01生物佐剂具有协同增强机体固有免疫应答的作用。

关键词： BC02 复合佐剂固有免疫应答表达谱基因芯片

结核分枝杆菌特异性IFNγ体外释放试验全血检测试剂盒的质量评价

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中国生物制品学杂志 2020年第2期33卷 160-163页

作者：杨蕾王国治都伟欣王春花沈小兵苏城卢锦标中国食品药品检定研究院结核病疫苗室北京102629

目的评价结核分枝杆菌特异性IFNγ体外释放试验(interferon γ release assay,IGRA)全血检测试剂盒的质量。方法采用10个结核分枝杆菌特异性IGRA全血检测试剂盒检测参考样品,以参考样品检测值和样品浓度进行线性回归,获得线性回归方程... 详细信息

目的评价结核分枝杆菌特异性IFNγ体外释放试验(interferon γ release assay,IGRA)全血检测试剂盒的质量。方法采用10个结核分枝杆菌特异性IGRA全血检测试剂盒检测参考样品,以参考样品检测值和样品浓度进行线性回归,获得线性回归方程及相关系数(R^2)。按各试剂盒说明书判定参考样品,以阳性的最低参考样品浓度作为相应试剂盒的最低检测浓度。结果 10个结核分枝杆菌特异性IGRA全血检测试剂盒的R2均高于0. 9,最低检测浓度分布在0. 4~2 IU/mL之间。结论结核分枝杆菌特异性IGRA全血检测试剂盒的质量稳定,线性分析和最低检测浓度检测可用于该试剂盒IFNγ测定部分的质量控制。

关键词：结核分枝杆菌 IFNγ体外释放试验质量评价

BC02复合佐剂成分协同增强巨噬细胞固有免疫应答的分析

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中国生物制品学杂志 2018年第9期31卷 941-948页

作者：李军丽付丽丽王国治杨晓明赵爱华中国食品药品检定研究院结核病疫苗室北京102629

目的初步分析BC02(BCG Cp G DNA combination adjuvants system 02)复合佐剂构成成分在巨噬细胞激活过程中的协同加强作用。方法采用夹心ELISA和RT-PCR法分别检测BC02复合佐剂及其构成成分[Al(OH)3佐剂及BC01(BCG Cp G DNA compound adj... 详细信息

目的初步分析BC02(BCG Cp G DNA combination adjuvants system 02)复合佐剂构成成分在巨噬细胞激活过程中的协同加强作用。方法采用夹心ELISA和RT-PCR法分别检测BC02复合佐剂及其构成成分[Al(OH)3佐剂及BC01(BCG Cp G DNA compound adjuvants system 01)佐剂]对小鼠巨噬细胞RAW264.7分泌的TNF-α及单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)细胞因子水平和m RNA转录水平的影响。信号通路蛋白磷酸化芯片检测经BC01和BC02刺激45 min后,RAW264.7细胞中核转录因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)和促分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路的变化情况。结果 BC02对巨噬细胞的刺激存在剂量和时间依赖性,最佳浓度和培养时间分别为1/10人用剂量[(7.5μg/m L BC01+20μg/m L Al(OH)3]和24 h。Al(OH)3无机盐佐剂能协同增强BC01生物佐剂对RAW264.7细胞的刺激活性,同时,TLR-9抑制剂ODN 2088与NLRP3抑制剂MCC 950单独或联合处理RAW264.7细胞,均能显著降低BC02刺激RAW264.7细胞分泌TNF-α和MCP-1细胞因子的能力。信号通路蛋白磷酸化芯片结果表明,BC02复合佐剂显著上调NF-κB信号通路中NF-κB-p105/p50、NF-κB-p65及NF-κB-p100/p52等关键蛋白分子的磷酸化水平;同时,也能显著上调MAPK信号通路中p38 MAPK、c-Jun、SPAK/JNK及EIK-1等关键蛋白分子的磷酸化水平。结论 BC02复合佐剂中BC01生物佐剂与Al(OH)3无机盐佐剂成分在激活小鼠巨噬细胞参与固有免疫应答中具有协同加强作用。

关键词：复合佐剂固有免疫应答核转录因子-κB信号通路促分裂原活化蛋白激酶信号通路

我国卡介苗生产用菌种工作种子批及成品过度皮肤反应试验

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中国生物制品学杂志 2018年第8期31卷 813-816页

作者：李军丽付丽丽赵爱华寇丽杰王国治中国食品药品检定研究院结核病疫苗室北京102629

目的进行我国皮内注射用卡介苗生产用菌种工作种子批及成品的过度皮肤反应试验,探讨在菌种及成品检定项目下是否需要增加过度皮肤反应试验。方法对种子批及种子批制备的样品进行复溶和连续10倍稀释,分别经体重不低于250 g的健康豚鼠皮... 详细信息

目的进行我国皮内注射用卡介苗生产用菌种工作种子批及成品的过度皮肤反应试验,探讨在菌种及成品检定项目下是否需要增加过度皮肤反应试验。方法对种子批及种子批制备的样品进行复溶和连续10倍稀释,分别经体重不低于250 g的健康豚鼠皮内接种0.1 m L复溶疫苗、1∶10稀释菌液、1∶100稀释菌液,连续4周观察注射部位的反应情况,测量皮肤反应直径,记录皮肤坏死与结节形成情况,并与相同稀释度的有关参考品及国外卡介苗制品进行比较。分析皮肤反应直径大小与卡介苗制品浓度、沉降率及活菌数的相关性。结果国内皮内注射用卡介苗生产用菌种工作种子批复溶疫苗、1∶10稀释菌液注射4周后的皮肤反应直径分别为(3.28±0.41)和(2.76±0.36)mm,1∶100稀释菌液已完全愈合,未测出。47批国内皮内注射用卡介苗制品的复溶疫苗、1∶10稀释菌液的皮肤反应直径分别为(3.92±0.45)和(2.61±0.69)mm,1∶100稀释菌液有31批未测出,16批的反应直径为(0.72±1.02)mm,与卡介苗活菌数国家参考品及生产用菌种工作种子批反应直径无差异。国外卡介苗制品3个浓度皮肤反应直径分别为(4.66±0.60)、(3.70±0.68)和(1.99±1.73)mm,反应程度高于国产卡介苗制品。皮肤反应直径大小与沉降率呈正相关(P=0.000),与卡介苗制品浓度及活菌数无显著相关性。结论过度皮肤反应可能主要与菌种有关;在确定的菌种情况下,可能与疫苗制造过程中颗粒大小的均匀度、浓度及活菌数的相关性更大;我国卡介苗规程通过对浓度、沉降率、活菌数的控制,可以从生产过程中控制成品引起皮肤反应的程度。目前在我国卡介苗规程中设置过度皮肤反应试验的意义并不大。

关键词：卡介苗过度皮肤反应

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4种结核分枝杆菌皮肤变态反应原的动物试验

中国生物制品学杂志 2018年第7期31卷 741-743,747页

作者：都伟欣卢锦标王国治沈小兵苏城杨蕾陈保文中国食品药品检定研究院结核病疫苗室北京100050

目的通过不同分枝杆菌致敏豚鼠皮试反应的大小评价4种结核分枝杆菌皮肤变态反应原的诊断效果。方法用结核分枝杆菌和卡介苗分别致敏豚鼠,致敏成功后采用轮圈法于每只豚鼠皮内分别注射TB-PPD、BCGPPD、重组结核分枝杆菌ESAT6-CFP10变态... 详细信息

目的通过不同分枝杆菌致敏豚鼠皮试反应的大小评价4种结核分枝杆菌皮肤变态反应原的诊断效果。方法用结核分枝杆菌和卡介苗分别致敏豚鼠,致敏成功后采用轮圈法于每只豚鼠皮内分别注射TB-PPD、BCGPPD、重组结核分枝杆菌ESAT6-CFP10变态反应原(简称EC)和重组结核分枝杆菌11k Da变态反应原(简称11k Da)4种皮肤变态反应原各0.1 mL。记录注射后24及48 h注射局部红肿反应的纵径和横径,计算其均值。结果在不同分枝杆菌致敏豚鼠中,4种皮试试剂各自24及48 h皮试反应大小差异均无统计学意义(P>0.05)。在结核分枝杆菌致敏豚鼠中,TB-PPD和BCG-PPD皮试反应均为阳性,48 h局部红肿直径分别为(11.1±1.4)和(8.7±2.4)mm,差异有统计学意义(P0.05),但两者反应强度均高于TB-PPD和BCG-PPD。在卡介苗致敏豚鼠中,TB-PPD和BCG-PPD皮试反应均为阳性,48 h局部红肿直径分别为(11.8±1.3)和(11.4±1.5)mm,差异无统计学意义(P>0.05)。而EC和11kDa皮试反应均为0。结论 EC和11kDa可有效鉴别结核分枝杆菌感染和卡介苗接种,而TB-PPD和BCG-PPD均不能对其进行有效鉴别。

关键词：结核分枝杆菌变态反应原豚鼠皮试试验

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结核病DNA疫苗及其作用机制研究进展

中国人兽共患病学报 2022年第3期38卷 226-235页

作者：李军丽赵爱华中国食品药品检定研究院生物制品检定所结核病疫苗和过敏原产品室北京102629

为实现到2050年在全球范围内根除结核病(Tuberculosis,TB)这一宏伟目标,迫切需要开发新的TB疫苗和疫苗接种策略。虽然卡介苗(Bacille Calmette-Guérin,BCG)在保护儿童免受粟粒性结核和结核性脑膜炎等方面获得了成功,但其对成人肺结核(P... 详细信息

为实现到2050年在全球范围内根除结核病(Tuberculosis,TB)这一宏伟目标,迫切需要开发新的TB疫苗和疫苗接种策略。虽然卡介苗(Bacille Calmette-Guérin,BCG)在保护儿童免受粟粒性结核和结核性脑膜炎等方面获得了成功,但其对成人肺结核(Pulmonary tuberculosis,PTB)的保护效果仍然存在较大差异(0~80%)。目前,有包括第一代疫苗和第二代疫苗在内的几十种新型TB疫苗已处于临床前或临床研究的不同阶段,而作为第三代疫苗的核酸疫苗随着医药技术的发展也逐渐走入人们的视野。本文主要综述了TB DNA疫苗的免疫学机制、研究现状、免疫增强策略和TB DNA疫苗存在的问题与应用前景,以期为开发更安全、更高效的新型TB DNA疫苗提供新的思路和视角。

关键词：结核分枝杆菌结核病 BCG 核酸疫苗 DNA疫苗

我国卡介苗生产用菌株动物保护效力的历史总结

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中华结核和呼吸杂志 2017年第7期40卷 554-556页

作者：赵爱华徐苗王国治中国食品药品检定研究院结核病疫苗室北京100050

众所周知，卡介苗在长期传代过程中形成了生物学特性、遗传学特性及保护力各异的亚株，尽管卡介苗已经有百年应用史，但迄今缺少系统的卡介苗不同菌株对人体保护力的研究资料。在无人体使用效果的相关数据时，对动物的保护力成为主要的... 详细信息

众所周知，卡介苗在长期传代过程中形成了生物学特性、遗传学特性及保护力各异的亚株，尽管卡介苗已经有百年应用史，但迄今缺少系统的卡介苗不同菌株对人体保护力的研究资料。在无人体使用效果的相关数据时，对动物的保护力成为主要的评价标准，但因免疫剂量与周期、感染毒菌的毒力与攻击量及评价指标的不同，

关键词：动物保护卡介苗菌株生物学特性遗传学特性保护力研究资料使用效果

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国内外卡介菌亚株抗生素敏感特性分析

中国生物制品学杂志 2020年第7期33卷 729-731,737页

作者：付丽丽王国治寇丽杰赵爱华中国食品药品检定研究院结核病疫苗室北京102629

目的分析国内外不同卡介菌亚株的抗生素敏感特性。方法对国内外不同卡介菌亚株采用比例法进行一线抗结核药物[异烟肼(isoniazid,INH)、利福平(rifampicin,RFP)、链霉素(streptomycin,SM)及乙胺丁醇(ethambutol,EMB)]、二线抗结核药物[... 详细信息

目的分析国内外不同卡介菌亚株的抗生素敏感特性。方法对国内外不同卡介菌亚株采用比例法进行一线抗结核药物[异烟肼(isoniazid,INH)、利福平(rifampicin,RFP)、链霉素(streptomycin,SM)及乙胺丁醇(ethambutol,EMB)]、二线抗结核药物[左旋氧氟沙星(levofloxacin,LFX)、丁胺卡那霉素(amikacin,AK)、卷曲霉素(capreomycin,CPM)、乙硫异烟胺(ethionamide,TH)及对氨基水杨酸(p-aminosalicylic acid,PAS)]敏感性分析,采用BACTEC MGIT960培养系统进行一线抗结核药物及吡嗪酰胺(pyrazinamide,PZA)抗生素敏感性分析。结果经比例法分析,不同卡介菌亚株均对一线抗结核药物敏感,除对TH耐药外,对其他二线抗结核药物均敏感;经BACTEC MGIT960系统分析,不同卡介菌亚株对RFP、SM、EMB均敏感,对PZA均耐药;卡介菌亚株BCG Pasteur 1173及BCG Tokyo172对INH敏感,而BCG Danish 1331菌株及中国卡介菌菌种BCG D2 PB302、BCG NIFDC 945 SⅢ均对INH耐药。结论中国生产用卡介菌菌种BCG D2 PB302及BCG NIFDC 945 SⅢ在抗生素敏感性方面与BCG Danish1331菌株一致,与其他亚株有差异。

关键词：卡介菌亚株抗生素敏感性