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均相时间分辨荧光法测定人胰岛素生物学活性

药学学报 2022年第10期57卷 3223-3228页

作者：王绿音杨艳枫张孝明吕萍张慧李晶梁成罡中国食品药品检定研究院激素室国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京102629 中国药科大学江苏南京211198

建立基于均相时间分辨荧光免疫分析技术的人胰岛素体外生物学活性测定方法。利用CHO-INSR B1284转基因细胞,通过均相时间分辨荧光免疫分析系统检测人胰岛素的体外生物学活性;对靶细胞铺板密度、药物的量效范围、刺激时间等关键参数进行... 详细信息

建立基于均相时间分辨荧光免疫分析技术的人胰岛素体外生物学活性测定方法。利用CHO-INSR B1284转基因细胞,通过均相时间分辨荧光免疫分析系统检测人胰岛素的体外生物学活性;对靶细胞铺板密度、药物的量效范围、刺激时间等关键参数进行优化;验证方法的专属性、相对准确度、中间精密度、线性与范围,以及细胞的传代稳定性;以重组人胰岛素国家标准品为参比品,将本研究建立的方法应用于其他人胰岛素类似物原料药、制剂的生物学活性测定。结果表明人胰岛素及其类似物存在剂量效应曲线,R^(2)>0.995,符合四参数方程y=(A-D)/[1+(x/C)^(B)]+D。本方法专属性良好,64%、80%、100%、125%、156%共5个效价浓度的待测品相对效价(n=8)的几何均值、相对偏倚、几何变异系数(GCV,%)均符合《中华人民共和国药典》2020版四部通则9401的要求;且方法可适用于其他胰岛素类似物的生物学活性测定。该方法操作简便、耗时短、准确度高、精密度好,可用于胰岛素类产品的生物学活性评价和质量控制。

关键词：生物学活性人胰岛素转基因细胞均相时间分辨荧光技术方法学验证

基于甲型流感病毒血凝素及联用其他保守表位的通用流感疫苗研究进展

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中华微生物学和免疫学杂志 2023年第11期43卷 813-822页

作者：邓玉莹刘书珍李岚舒赵晨燕黄维金中国食品药品检定研究院生物制品检定所艾滋病性病病毒疫苗室国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法与标准化重点实验室北京102629

流感病毒每年造成大量感染及死亡病例,对人类健康构成重大威胁,接种疫苗是预防流感病毒感染的最有效措施。然而,目前的季节性流感疫苗只能预防密切匹配的流行毒株,即使有了广泛的监测和每年的重新制定,每年更新的疫苗仍然比快速演变的... 详细信息

流感病毒每年造成大量感染及死亡病例,对人类健康构成重大威胁,接种疫苗是预防流感病毒感染的最有效措施。然而,目前的季节性流感疫苗只能预防密切匹配的流行毒株,即使有了广泛的监测和每年的重新制定,每年更新的疫苗仍然比快速演变的病毒落后一步,往往导致匹配度不高或疫苗效力低。由于甲型流感病毒的进化变异相对复杂,利用一系列创新技术开发通用流感疫苗对流感病毒提供广泛和持久的保护,是预防流感流行的新思路和新手段。本文对近3年来以血凝素(hemagglutinin,HA)为靶位的通用疫苗研究进行全面整理,综述了基于流感病毒全HA、HA茎部、串联HA和其他保守表位的通用疫苗设计方法及其在疫苗研究中取得的最新进展,同时比较了不同技术优劣和免疫程序及策略的影响等,并强调了有待克服的潜在挑战,为成功开发通用疫苗提供经验和借鉴。

关键词：甲型流感病毒血凝素保守表位通用流感疫苗

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液相色谱和质谱技术在疫苗质控中的应用

中国生物制品学杂志 2023年

作者：吴燕马霄中国食品药品检定研究院百白破疫苗和毒素室国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室

液相色谱（liquid chromatography,LC）技术具有分离效率高、速度快的特点，质谱技术具有灵敏度强、选择性好的特点，实现了LC和质谱技术在生物大分子领域的广泛应用。近年来，LC和质谱技术在疫苗领域的应用逐渐普及起来，并在疫苗的质... 详细信息

液相色谱（liquid chromatography,LC）技术具有分离效率高、速度快的特点，质谱技术具有灵敏度强、选择性好的特点，实现了LC和质谱技术在生物大分子领域的广泛应用。近年来，LC和质谱技术在疫苗领域的应用逐渐普及起来，并在疫苗的质量控制中发挥越来越重要的作用。本文对LC和质谱技术在灭活疫苗、病毒样颗粒（virus-like particles,VLPs）疫苗、多糖疫苗和多糖-蛋白质结合疫苗中的应用作一综述。

关键词：液相色谱质谱液相色谱串联质谱质量控制

人血清中福氏2a及宋内志贺菌O-特异性多糖抗体IgG含量间接ELISA定量检测方法的验证及应用

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中国生物制品学杂志 2023年第6期36卷 714-718,723页

作者：李红石刚郭丽娜陈琼付宏斌王国东胡小华朱卫华王斌叶强中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京102629 北京智飞绿竹生物制药有限公司北京100176

目的验证人血清中福氏2a及宋内志贺菌O-特异性多糖(分别简称福氏2a多糖及宋内多糖)抗体IgG含量的ELISA定量检测方法,并用于福氏宋内痢疾双价疫苗免疫前后人血清样本的检测。方法将参考血清及质控血清按一定比例混合,制备成10份不同浓度... 详细信息

目的验证人血清中福氏2a及宋内志贺菌O-特异性多糖(分别简称福氏2a多糖及宋内多糖)抗体IgG含量的ELISA定量检测方法,并用于福氏宋内痢疾双价疫苗免疫前后人血清样本的检测。方法将参考血清及质控血清按一定比例混合,制备成10份不同浓度的血清样本(编号为S1~S10),采用企业提供的间接ELISA定量检测方法检测样本,连续测定6 d,计算多糖抗体IgG回收率和变异系数(coefficient of variation,CV),并以回收率CV低于20%的相应参考血清含量作为定量限(limit of quantitation,LOQ)。采用相同检测方法连续6 d测定血清样本S10及质控血清,每天重复检测3次,计算CV;采用参考血清进行多糖竞争抑制ELISA试验,计算血清对多糖的抑制率。采用企业提供的方法检测参考血清,确定线性范围,获得曲线方程,计算相关系数(R^(2))。采用验证的方法检测1842份福氏宋内痢疾双价疫苗免疫前后的人血清样本。结果10份血清样本中福氏2a和宋内多糖抗体IgG回收率分别为73.21%~222.68%和83.67%~123.56%;试验间及试验内精密性CV均方法具有良好的准确性、精密性及特异性,可用于痢疾疫苗免疫血清的检测。

关键词：多糖抗体IgG 酶联免疫吸附试验志贺菌痢疾疫苗

UHPLC-MS分析人促红素产品中CHO宿主细胞蛋白残留

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药物分析杂志 2023年第8期43卷 1402-1407页

作者：于雷秦玺张晓夕史新昌李响周勇中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050 赛默飞世尔科技(中国)有限公司上海201210

目的:利用超高效液相色谱-质谱联用技术(UHPLC-MS)分析人促红素(human erythropoietin,hEPO)产品中CHO宿主细胞蛋白(host cell protein,HCP)残留。方法:将hEPO原液和蛋白标准品一起进行变性、还原烷基化、酶切处理;采用Accucore Vanquis... 详细信息

目的:利用超高效液相色谱-质谱联用技术(UHPLC-MS)分析人促红素(human erythropoietin,hEPO)产品中CHO宿主细胞蛋白(host cell protein,HCP)残留。方法:将hEPO原液和蛋白标准品一起进行变性、还原烷基化、酶切处理;采用Accucore Vanquish C18色谱柱串联超高效液相色谱和Q ExactiveTM Plus组合型四极杆OrbitrapTM质谱仪对样品进行分离和检测;使用BioPharma Finder 4.1软件中的HCP工作流程进行定性及定量分析。结果:10种HCP在4批hEPO原液样品中均被检测到,且不同样品中HCP总量有较大差异,从25×10^(-6)至约1000×10^(-6);含量>50×10^(-6)的HCP,CV值均产品中HCP进行定性定量分析,不同来源hEPO样品中HCP种类和含量均有差异。

关键词：人促红素 CHO细胞表达系统宿主细胞蛋白超高效液相色谱-质谱联用技术中国仓鼠全蛋白库

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首批重组胰蛋白酶国家标准品的研制

中国生物制品学杂志 2023年第6期36卷 663-667页

作者：王绿音张慧吕萍李晶梁成罡中国食品药品检定研究院激素室、国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京102629

目的研制首批重组胰蛋白酶国家标准品,以规范并提高重组胰蛋白酶的质量。方法通过酶底物反应鉴别、HPLC鉴别、N-末端氨基酸序列测定、质谱分子量测定对重组胰蛋白酶进行定性及结构确证;HPLC法测定纯度;参照《中国药典》三部(2020版)通则... 详细信息

目的研制首批重组胰蛋白酶国家标准品,以规范并提高重组胰蛋白酶的质量。方法通过酶底物反应鉴别、HPLC鉴别、N-末端氨基酸序列测定、质谱分子量测定对重组胰蛋白酶进行定性及结构确证;HPLC法测定纯度;参照《中国药典》三部(2020版)通则3603中的相关方法,对待标品进行比活性测定,并对待标品进行均一性及稳定性考察。结果确证了重组胰蛋白酶的结构,并确定了首批重组胰蛋白酶标准品比活性为5169 U/mg,含β-胰蛋白酶80%、α-胰蛋白酶9%。12支待标品的α、β-胰蛋白酶纯度和保留时间的RSD均小于2.0%。于25℃,相对湿度(relative humidity,RH)80%条件下放置10 d,α、β-胰蛋白酶纯度无明显下降,于40℃,RH 80%条件下放置10 d,β-胰蛋白酶纯度略有下降,α-胰蛋白酶纯度略有升高;光照(4000 lx)条件下放置10 d,β-胰蛋白酶纯度略有下降。结论研制了结构准确且纯度较高的重组胰蛋白酶国家标准品,可用于重组胰蛋白酶纯度系统适用性试验。

关键词：重组胰蛋白酶国家标准品纯度系统适用性无动物源性原辅料

全自动移液工作站在肺炎疫苗多重调理吞噬实验中的应用

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中国生物制品学杂志 2022年第2期35卷 194-199页

作者：杜慧竟张全仓李江姣叶强中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点试验室北京102629 帝肯(上海)贸易有限公司上海200122

目的用全自动移液工作站代替人工进行多重调理吞噬实验(multiplexed opsonophagocytic killing assay,MOPA)部分操作步骤。方法用两台全自动移液工作站(1号和3号)分步进行11份13价肺炎球菌疫苗免疫血清样本的MOPA检测,通过与人工操作的... 详细信息

目的用全自动移液工作站代替人工进行多重调理吞噬实验(multiplexed opsonophagocytic killing assay,MOPA)部分操作步骤。方法用两台全自动移液工作站(1号和3号)分步进行11份13价肺炎球菌疫苗免疫血清样本的MOPA检测,通过与人工操作的检测结果比较验证其准确性;通过5次试验内和5次试验间平行检测验证其重复性。结果1号工作站检测11份血清样本的13个型别滴度结果与手动操作结果的相关系数均在0.90以上,除6B和9V型,滴度差值80%以上均在3倍以内;1号工作站对6份样本5次试验内平行检测,每份血清样本的滴度均在均值的3倍以内;3号工作站预稀释和人工预稀释的11份血清滴度值相差均在3倍以内;3份血清5次试验内平行检测,每份血清的滴度均在均值的3倍以内;11份血清5次试验间平行检测,每份血清的滴度均在均值的3倍以内。结论全自动移液工作站实验准确性和重复性良好,有望代替人工完成部分MOPA实验步骤。

关键词：肺炎球菌疫苗多重调理吞噬实验全自动移液工作站疫苗评价

毛细管电泳结合激光诱导荧光检测分析单抗N糖谱的方法学联合验证

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药物分析杂志 2022年第1期42卷 172-178页

作者：王文波武刚于传飞张峰王兰中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京102629

目的:对毛细管电泳结合激光诱导荧光(CE-LIF)检测单抗N糖谱方法进行多家实验室的联合验证。方法:依据国际人用药品注册技术协调会(ICH)Q2;1指导原则和2015年版《中华人民共和国药典》通则9101,开展方法学验证。评价指标包括专属性、线... 详细信息

目的:对毛细管电泳结合激光诱导荧光(CE-LIF)检测单抗N糖谱方法进行多家实验室的联合验证。方法:依据国际人用药品注册技术协调会(ICH)Q2;1指导原则和2015年版《中华人民共和国药典》通则9101,开展方法学验证。评价指标包括专属性、线性、准确度、精密度、定量限、范围和耐用性。结果:验证数据表明,该方法具有良好的特异性、准确性、精密性和耐用性。蛋白量在100~400μg范围内具有良好的线性,R;大于0.97,且回收率在81%~109%范围内。精密性评价结果显示,G0F、Man5、G1F(1,6)、G1F(1,3)和G2F的校正峰面积百分比和迁移时间的RSD值均小于10%。该方法的定量下限为0.016%,可对在0.016%~77.233%范围内的单个色谱峰进行准确定量分析。同时多个条件下的耐用性评价结果表明该方法具有耐用性,峰面积百分比的RSD小于9%,迁移时间的RSD小于0.1%。结论:组织开展了基于CE-LIF的检测单抗N糖谱的方法学联合验证,结果表明方法可行,可用于单抗N糖谱的检测。

关键词：单克隆抗体 N糖谱测定方法学验证毛细管电泳质量控制

高等级病原微生物实验室在生物医药领域的应用研究

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中国药事 2024年第3期38卷 298-306页

作者：代航刘莎叶强陈晨黄洋王劲松姜晶钰牛群史宇辰徐潇陈国庆中国食品药品检定研究院北京102629 首都医科大学基础医学院北京100069 中国医学科学院医学生物学研究所昆明650118

目的:介绍烈性传染病病原体的诊断试剂、疫苗、治疗药物的研发和评价基本情况,突出高等级病原微生物实验室作为科技支撑和产业成果转化的重要作用,阐释高等级病原微生物实验室在生物医药领域的广阔应用前景。方法:分析国内外应对烈性传... 详细信息

目的:介绍烈性传染病病原体的诊断试剂、疫苗、治疗药物的研发和评价基本情况,突出高等级病原微生物实验室作为科技支撑和产业成果转化的重要作用,阐释高等级病原微生物实验室在生物医药领域的广阔应用前景。方法:分析国内外应对烈性传染病流行的重要措施,梳理高等级病原微生物实验室在诊断试剂、疫苗、治疗药物的研发和评价中发挥的重要作用,阐明提前布局医药产业发展、强化高等级实验室能力建设的方法。结果与结论:应充分发挥高等级病原微生物实验室在生物医药领域的基础设施作用,提前布局我国新发突发传染病病原体的检测鉴定、预防控制、药物治疗的前瞻性技术储备。这是应对SARS、MERS、EBHF、COVID-19等高致病性新发突发传染病引发的全球重大公共卫生问题的重要保障,也是有效防范化解生物安全风险,筑牢国家安全的重要举措。高等级病原微生物实验室在生物医药领域具有广阔的应用前景。

关键词：高等级病原微生物实验室传染病体外诊断试剂疫苗治疗药物