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表面多孔颗粒填料在手性拆分与生物大分子色谱分析中的应用研究进展

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药学进展 2016年第8期40卷 604-609页

作者：夏敏苏梦翔狄斌中国药科大学药物分析教研室江苏南京210009 中国药科大学蛋白质化学与结构生物学重点实验室江苏南京210009

新型固定相填料的研发一直是液相色谱实现高效快速分离的基础。表面多孔颗粒填料柱凭借着在非高压系统(<40MPa)下依然可高速高效分离的特性,近年来在手性拆分及生物大分子色谱分析领域崭露头角。从表面多孔颗粒填料的结构特性,探讨了其... 详细信息

新型固定相填料的研发一直是液相色谱实现高效快速分离的基础。表面多孔颗粒填料柱凭借着在非高压系统(生物大分子色谱分析领域崭露头角。从表面多孔颗粒填料的结构特性,探讨了其用于色谱分析的优势和局限性,并综述其在手性拆分和多肽及蛋白质类生物大分子色谱分析领域的应用研究进展。

关键词：表面多孔颗粒填料核壳结构液相色谱系统手性拆分生物大分子色谱分析

过表达FGFR2重组HEK293细胞株的构建和鉴定

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中国医药工业杂志 2017年第1期48卷 38-42页

作者：欧阳曼王海龙赵影李小燕陈小佳暨南大学生物医药研究院暨南大学细胞生物学系基因工程药物国家工程研究中心广东省生物工程药物重点实验室广东广州510632

构建含有成纤维细胞生长因子受体蛋白2(FGFR2)基因序列的重组慢病毒表达载体,与慢病毒包装质粒共转染包装细胞293T,获得过表达FGFR2的重组病毒颗粒;用重组病毒颗粒感染人胚肾细胞(HEK)293细胞,并用嘌呤霉素(20?g/ml)进行筛选,最终获得... 详细信息

构建含有成纤维细胞生长因子受体蛋白2(FGFR2)基因序列的重组慢病毒表达载体,与慢病毒包装质粒共转染包装细胞293T,获得过表达FGFR2的重组病毒颗粒;用重组病毒颗粒感染人胚肾细胞(HEK)293细胞,并用嘌呤霉素(20?g/ml)进行筛选,最终获得过表达FGFR2的重组细胞株。蛋白质免疫印迹(Western Blot)试验结果显示,该重组细胞株与空白对照HEK293细胞相比能高表达FGFR2,实时荧光定量核苷酸扩增试验(QPCR)和酶联免疫反应(ELISA)检测结果表明FGFR2蛋白下游相关通路的u PA等分子的转录和分泌水平上调,克隆形成试验也证实重组HEK293细胞促增殖能力增强。结果表明,该重组过表达FGFR2的细胞模型可用于下一步的功能研究以及靶向FGFR2药物的筛选。

关键词：成纤维细胞生长因子受体2 慢病毒包装过表达重组细胞株

基于生物网络功能模块整合组方规律分析四黄止痢颗粒治疗仔猪腹泻的作用机制

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畜牧兽医学报 2023年第7期54卷 3031-3043页

作者：周炜炜王雪峰张梦洁杨娟孙悦龙张祖烽张宇欣豆佳红王梓颖戴小枫李秀梅中国农业科学院饲料研究所农业农村部饲料生物技术重点实验室北京100081 哈尔滨商业大学药学院哈尔滨150076 天津科技大学生物工程学院天津300457

从功能模块水平研究中药复方四黄止痢颗粒治疗仔猪腹泻的分子作用机制,并阐释其配伍规律。使用TCMSP、TCMID、HERB数据库筛选方中黄连、黄柏、大黄、黄芩、板蓝根、甘草6味中药的有效成分,收集相关药物靶点;使用GeneCards、NCBI、OMIM... 详细信息

从功能模块水平研究中药复方四黄止痢颗粒治疗仔猪腹泻的分子作用机制,并阐释其配伍规律。使用TCMSP、TCMID、HERB数据库筛选方中黄连、黄柏、大黄、黄芩、板蓝根、甘草6味中药的有效成分,收集相关药物靶点;使用GeneCards、NCBI、OMIM数据库获取仔猪腹泻的疾病靶点;比较分析药物靶点和疾病靶点的交集并用韦恩图表示,将其上传至STRING数据库进行蛋白相互作用分析;采用Cytoscape软件绘制靶点蛋白相互作用网络图(protein-protein interaction network,PPI);应用MCODE插件对PPI网络进行功能模块识别;运用David数据库对功能模块进行KEGG通路富集分析。结果表明:1)网络分析筛选活性成分180个,主要包括生物碱、黄酮、蒽醌、苷类成分;药物靶点蛋白88个,猪腹泻相关靶点470个,二者的交集靶点35个。2)蛋白互作网络分析表明,由17个靶点蛋白组成的模块1是中药复方四黄止痢颗粒的功能模块。3)KEGG富集分析表明,模块1主要涉及的通路包括TNF、IL-17以及NF-κB等17个信号通路。4)归经分析表明,四黄止痢颗粒主要作用于脾、胃等11个脏腑经络。综上所述,生物碱、黄酮、蒽醌、苷类成分是四黄止痢颗粒的物质基础,主要通过作用于功能模块1调控TNF、IL-17、NF-κB等信号通路,调节脾、胃等脏腑经络,从蛋白靶点、信号通路以及经络等多个水平上发挥治疗仔猪腹泻的作用。

关键词：生物网络功能模块四黄止痢颗粒仔猪腹泻作用机制

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稳定表达Mcm6-GFP细胞株的建立

中国细胞生物学学报 2010年第3期32卷 461-464页

作者：李金龙蔡于琛胡志明高基民南方医科大学生物技术学院生物治疗研究所广州510515 华南肿瘤学国家重点实验室广州510060 中山大学肿瘤防治中心广州510060

采用RT-PCR的方法扩增人Mcm6基因,克隆入真核表达载体pEGFP-N3,成功构建了pEGFP-Mcm6真核表达质粒,酶切及DNA测序证实了构建质粒序列的正确性。脂质体介导转染Hela细胞后,荧光显微镜可检测到绿色荧光信号,通过G418筛选最终获得了稳定表... 详细信息

采用RT-PCR的方法扩增人Mcm6基因,克隆入真核表达载体pEGFP-N3,成功构建了pEGFP-Mcm6真核表达质粒,酶切及DNA测序证实了构建质粒序列的正确性。脂质体介导转染Hela细胞后,荧光显微镜可检测到绿色荧光信号,通过G418筛选最终获得了稳定表达的细胞株,Western blot验证了稳定表达细胞株中Mcm6-GFP融合蛋白的表达。本实验成功建立了稳定表达Mcm6-GFP融合蛋白的细胞株,为动态观察Mcm6细胞定位的变化,进一步研究抗肿瘤药物的作用机制提供了有效的分子工具。

关键词： Mcm6 GFP 融合蛋白:稳定表达

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A型流感病毒M2蛋白研究进展

动物医学进展 2007年第7期28卷 56-60页

作者：万春和刘明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

M2蛋白是A型流感病毒所特有的一种结构保守的非糖基化的跨膜蛋白,主要在病毒脱壳时酸化病毒粒子的内部环境,在表面血凝素糖蛋白合成过程中作为质子通道调节高尔基体跨膜转移通道的pH。其核苷酸序列高度保守,几乎不发生变异。其25位~43... 详细信息

M2蛋白是A型流感病毒所特有的一种结构保守的非糖基化的跨膜蛋白,主要在病毒脱壳时酸化病毒粒子的内部环境,在表面血凝素糖蛋白合成过程中作为质子通道调节高尔基体跨膜转移通道的pH。其核苷酸序列高度保守,几乎不发生变异。其25位~43位氨基酸多肽是金刚烷胺类抗流感病毒药物的作用靶位,氨基酸极小变异都可能导致流感病毒抗药性的产生。M2蛋白胞外区域的氨基酸残基多肽（M2e）的特异性抗体可以在感染流感病毒的动物血清中检测出来,将M2e与相关佐剂联合使用可极大的提高机体对流感病毒的免疫力,在病毒感染中起重要作用,是一种潜在的交叉保护性抗原,常被用来探索具有广谱性和持久性的流感＂通用疫苗＂。

关键词： A型流感病毒 M2蛋白疫苗

基于网络药理学和分子对接预测大黄治疗胃癌的作用机制

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中国医科大学学报 2023年第1期52卷 6-11,17页

作者：何欣刘云鹏李冬阳车晓芳中国医科大学附属第一医院肿瘤内科沈阳110001 辽宁省肿瘤药物与生物治疗重点实验室沈阳110001

目的通过网络药理学和分子对接方法探讨大黄在胃癌中的抗肿瘤机制。方法通过TCMSP网站收集大黄的活性成分及对应的靶点,利用肿瘤与癌症基因组图谱(TCGA)数据库、GeneCards网站得到胃癌相关基因,两者取交集,利用Cytoscape软件绘制胃癌... 详细信息

目的通过网络药理学和分子对接方法探讨大黄在胃癌中的抗肿瘤机制。方法通过TCMSP网站收集大黄的活性成分及对应的靶点,利用肿瘤与癌症基因组图谱(TCGA)数据库、GeneCards网站得到胃癌相关基因,两者取交集,利用Cytoscape软件绘制胃癌-大黄-活性成分-靶点的网络图。通过Metascape网站对交集靶点进行功能、同路富集分析以及蛋白-蛋白相互作用网络分析,利用MCODE算法确定关键基因簇,最后利用分子对接方法找到可能的作用靶点。结果通过筛选得到大黄的主要活性成分16个,共获得46个治疗胃癌的潜在靶点,京都基因和基因组数据库(KEGG)通路、基因本体论(GO)分类富集分析结果显示,大黄治疗胃癌的机制涉及多个生物学过程,包括凋亡、程序性细胞死亡、MAPK通路调节、细胞周期、PI3K-Akt等信号通路。蛋白-蛋白互作后发现关键基因簇包括BCL2、CASP8、AR、IL1B、CASP3、PRKCA、TP53、CDKN1A、PCNA,主要为凋亡相关基因,进一步分子对接验证了其与对应活性成分之间亲合度均较高,其中PKCNA与芦荟大黄素亲合度最高。结论大黄治疗胃癌通过多成分、多靶点、多通路协同起效,本研究为后续进一步研究提供了充分的理论依据。

关键词：大黄胃癌网络药理学作用机制分子对接

葡糖酰胺(O-GlcNAc)修饰:细胞内糖基化的前世今生

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中国生物化学与分子生物学报 2020年第9期36卷 987-1001页

作者：李静谭忠平北京市DNA损伤应答重点实验室首都师范大学生命科学学院北京100048 中国医学科学院北京协和医学院药物研究所北京100050

糖基化是一种古老的蛋白质翻译后修饰,常见于细胞外的糖被结构和细胞内部的内质网和高尔基体内。近年来,一种细胞内的糖基化修饰逐渐被大家所认识,这就是氧连接的N-乙酰葡糖胺(O-linkedβ-N-acetylglucosamine,O-GlcNAc)。它是唯一发生... 详细信息

糖基化是一种古老的蛋白质翻译后修饰,常见于细胞外的糖被结构和细胞内部的内质网和高尔基体内。近年来,一种细胞内的糖基化修饰逐渐被大家所认识,这就是氧连接的N-乙酰葡糖胺(O-linkedβ-N-acetylglucosamine,O-GlcNAc)。它是唯一发生在细胞内的参与信号转导的糖修饰,一般发生于细胞质和细胞核中。自从20世纪80年代发现O-GlcNAc以来,生物学家和化学家一直在研究它修饰的位点和行使的生物学功能。O-GlcNAc修饰发生在丝氨酸和苏氨酸上,因此可以与磷酸化之间形成阴阳关系并参与信号转导过程。但由于其低丰度易水解的特点导致难以鉴定位点,又使研究人员难以见其真容。本文将回顾O-GlcNAc修饰的发现历史,介绍近年来发展的化学生物学手段对其位点的鉴定,并着重阐释该修饰在细胞周期以及表观遗传等生物过程中的功能。随着学科交叉及质谱技术的发展,古老而弥新的糖基化修饰将绽放出新的花蕾。

关键词：氧连接的N-乙酰葡糖胺糖基化化学生物学细胞周期表观遗传

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蛋白类病毒感染失活剂:“遇敌即杀”的利器

中国科学:生命科学 2023年第1期53卷 2-18页

作者：苏霄洁姜世勃陆路复旦大学医学分子病毒学教育部/卫健委/中国医科院重点实验室暨病原生物学系基础医学院

由包膜病毒,例如人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus, HIV)及严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2, SARS-CoV-2)等引发的传染病,对人类健康和全球公共卫生造成了很大的威胁.目前... 详细信息

由包膜病毒,例如人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus, HIV)及严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2, SARS-CoV-2)等引发的传染病,对人类健康和全球公共卫生造成了很大的威胁.目前已有的抗病毒药物大多数通过作用于病毒入侵细胞时或进入细胞后的生活周期来抑制感染.这些药物在遇到游离的病毒时,并不能导致病毒失去感染性,而是等待病毒感染细胞后发挥抑制作用.蛋白类病毒感染失活剂是一类可直接作用于游离病毒并导致其失去感染性的抗病毒蛋白或多肽,其主要通过与病毒颗粒上包膜蛋白(envelope glycoproteins, Envs)中的一个或多个位点相互作用,引发病毒包膜蛋白功能丧失或病毒基因组释放等,从而使病毒失去感染性.值得注意的是,蛋白类病毒感染失活剂有望比传统的抗病毒药物具有更高的利用率,且在体内应用时比化学类失活剂更安全,因此越来越受到关注.本文选择一些研究较多的代表性病毒,重点介绍了HIV, SARS-CoV及SARS-CoV-2,登革病毒(dengue virus, DENV)及寨卡病毒(Zika virus, ZIKV)的蛋白类病毒感染失活剂研究的最新进展,以及其用于紧急应对新发和再现病毒大暴发、大流行的潜力.

关键词：包膜病毒包膜蛋白病毒感染失活剂新发和再现病毒新型冠状病毒

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合成成骨生长肽的体内外成骨活性

Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2001年第4期33卷 415-420页

作者：费琴明崔大敷陈统一陈中伟复旦大学附属中山医院骨科!上海200032 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所!上海200031

利用固相多肽合成人成骨生长肽 (sOGP) ,纯度达 99.2 % ,HPLC及毛细管电泳均一 ,蛋白质序列分析和质谱分析符合理论值。在体内我们观察了sOGP对兔胫骨骨折愈合的药效 ,用血生化、X射线、骨密度、组织学外骨痂分析、生物力学等方法测得s... 详细信息

利用固相多肽合成人成骨生长肽 (sOGP) ,纯度达 99.2 % ,HPLC及毛细管电泳均一 ,蛋白质序列分析和质谱分析符合理论值。在体内我们观察了sOGP对兔胫骨骨折愈合的药效 ,用血生化、X射线、骨密度、组织学外骨痂分析、生物力学等方法测得sOGP能显著促进新生骨形成 ,明显增加成骨活性蛋白碱性磷酸酶 (ALP)和骨钙素(BGP)的血清水平 ,对兔胫骨不稳定固定的横断骨折愈合具有一定的促进作用。尤其是实验组骨密度和外骨痂中小梁骨成分显著增加的数据 ,具有统计学意义。还观察了sOGP在不同介质中对原代成骨细胞的成骨活性。在体外sOGP低剂量 (10 -11mol/L)对原代成骨细胞有明显的增殖作用 ,表现双向调节。有趣的是sOGP在体外的成骨活性作用必须有血清白蛋白 (BSA)和血清中某些因子的参与

关键词：合成成骨生长肽(sOGP) 兔胫骨骨折愈合原代成骨细胞牛血清白蛋白和血清