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蛋白质分离纯化技术研究进展

广东化工 2011年第4期38卷 35-36页

作者：傅小伟金益英周石磊崔砾砾黄斌中国计量学院生命科学学院浙江杭州310018 杭州娃哈哈集团有限公司研发中心浙江杭州310018

蛋白质是维持人类健康方面的一种重要物质,它与人类生活密切相关,因此,对其质量和纯度要求也越来越高。文章分析了膜分离、高效液相色谱、毛细管电泳和分子印迹技术等技术的基本原理及分离模式,并对其应用于蛋白质分离纯化的研究进展进... 详细信息

蛋白质是维持人类健康方面的一种重要物质,它与人类生活密切相关,因此,对其质量和纯度要求也越来越高。文章分析了膜分离、高效液相色谱、毛细管电泳和分子印迹技术等技术的基本原理及分离模式,并对其应用于蛋白质分离纯化的研究进展进行了综述。

关键词：蛋白质分离纯化高效

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生物絮凝反应器处理水产养殖废水的中试研究

上海海洋大学学报 2016年第6期25卷 884-893页

作者：王晓用谭洪新罗国芝刘文畅庞云程丽妹上海海洋大学水产与生命学院上海201306 上海水产养殖工程技术研究中心上海201306 水产动物遗传育种上海市协同创新中心上海201306

运用序批式生物絮凝反应器,研究不同混合液悬浮固体浓度（MLSS,1 500 mg/L、3 000 mg/L和5 000mg/L）下反应器对循环水养殖系统吉富罗非鱼（GIFT Oreochromis niloticus）养殖废水的处理效果。结果表明：反应器内氨氮（TAN）、亚硝氮（N... 详细信息

运用序批式生物絮凝反应器,研究不同混合液悬浮固体浓度（MLSS,1 500 mg/L、3 000 mg/L和5 000mg/L）下反应器对循环水养殖系统吉富罗非鱼（GIFT Oreochromis niloticus）养殖废水的处理效果。结果表明：反应器内氨氮（TAN）、亚硝氮（NO-2-N）和硝氮（NO-3-N）出水浓度分别为（0.29-0.39）mg/L、（0.005-0.006）mg/L、（7.11-7.60）mg/L,平均去除率分别为82.20%-86.20%、98.40%±0.89%、38.40%-40.00%（P〉0.05）,体积去除负荷为（2.51-2.64）g/（m^3·d）、0.56 g/（m^3·d）、（8.52-9.78）g/（m^3·d）;溶解性无机氮（DIN）的去除率为43.20%-44.60%,体积去除负荷为（10.25-11.61）g/（m^3·d）。三组絮体蛋白质含量差异不显著,分别为30.00%±1.32%、29.87%±0.67%、31.00%±0.75%;粗脂肪含量分别为9.51%±0.94%、4.37%±0.42%、3.65%±0.22%,MLSS 1500 mg/L组显著高于其他两组（P〈0.05）。微生物群落结构分析表明反应器中生物絮体主要为变形菌门（44.66%、44.51%、44.29%）,其次是拟杆菌门（13.89%、13.98%、14.07%）;优势菌属包括Alishewanella、Blastocatella、Amaricoccus、Rhodobacteraceaeunclassified、Terrimonas、Devosia等。实验表明中试生物絮凝反应器具有较好的脱氮效果,有助于实现养殖废水的资源化应用。

关键词：生物絮凝技术序批式反应器水产养殖混合液悬浮固体浓度水处理

FAT/CD36适应性变化在有氧运动改善骨骼肌胰岛素敏感性中的作用

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FAT/CD36适应性变化在有氧运动改善骨骼肌胰岛素敏感性中的作用

牛乳铁蛋白肽(LfcinB)在苏云金芽胞杆菌中的融合表达

第十一届全国体育科学大会

作者：苏亚娟孙婧瑜同济大学运动与健康研究中心同济大学生命科学与技术学院

研究目的:随着社会老龄化的发展,老年人糖尿病的发病率急剧上升。研究表明,衰老能够诱导胰岛素抵抗的发生。胰岛素抵抗是高血压、肥胖、2型糖尿病、非酒精性脂肪肝等代谢性疾病的主要危险因素。骨骼肌作为能量代谢的主要器官,随着年龄... 详细信息

研究目的:随着社会老龄化的发展,老年人糖尿病的发病率急剧上升。研究表明,衰老能够诱导胰岛素抵抗的发生。胰岛素抵抗是高血压、肥胖、2型糖尿病、非酒精性脂肪肝等代谢性疾病的主要危险因素。骨骼肌作为能量代谢的主要器官,随着年龄的增长,骨骼肌的质量和功能出现衰退,导致胰岛素抵抗的发生。因此,提高老年人骨骼肌胰岛素敏感性是预防衰老相关疾病的重要措施。然而,除了运动干预之外,目前尚未有成熟的骨骼肌衰退治疗方法。近年来,相关学者发现脂质代谢紊乱是衰老诱导骨骼肌胰岛素敏感性下降的重要因素。衰老导致过量脂肪酸流入骨骼肌细胞,脂肪酸在骨骼肌细胞内的过量沉积,导致骨骼肌脂肪酸氧化能力下降,线粒体生物合成发生障碍,线粒体功能损伤,慢肌纤维向快肌纤维转变增多以及肌萎缩等变化,这些变化均与骨骼肌脂肪酸代谢紊乱有关,最终引起胰岛素抵抗的发生。传统观点认为,外源性脂肪酸通过自由扩散的方式实现向骨骼肌细胞内的转运;然而,近年来研究发现,一些膜蛋白,如脂肪酸转位酶（Fatty Acid Translocase,FAT/CD36）、脂肪酸结合蛋白（fatty acid binding protein,FABPpm）及脂肪酸转运蛋白（fatty acid transport protein4,FATP4）在协助脂肪酸跨过细胞膜,向细胞膜内转运过程中起到了重要作用。其中,FAT/CD36广泛存在于骨骼肌中,与骨骼肌细胞内脂肪酸的异位沉积密切相关。我们前期研究结果表明,外源性脂肪酸通过激活FAT/CD36的转位机制,对骨骼肌细胞内的脂肪酸摄取与氧化平衡起到了重要的调控作用。然而,静息状态下FAT/CD36可能不是最为重要的脂肪酸转运载体,肉碱脂酰转移酶-1（carnitine acyltransferase-1,CPT-1）可能更为重要;在运动等能量消耗较大时,与其它脂肪酸转运载体相比,FAT/CD36对骨骼肌脂肪酸代谢的调控作用更为明显。因此,本研究着重探讨FAT/CD36在运动改善老年小鼠骨骼肌胰岛素敏感性中的作用及作用机制。以期该成果为与衰老有关的代谢性疾病病理研究及运动康复治疗提供新证据。研究方法:8周龄C57BL/6雄性小鼠（上海斯莱克实验动物有限公司）于同济大学实验动物中心饲养并训练。小鼠自由进食饮水,环境温度20℃-24℃,相对湿度40%-60%,通风良好,昼夜12 h/12 h循环照明。所有操作均严格遵守同济大学道德伦理委员会的要求。小鼠自然饲养至56周龄后,随机分为老年对照组（AS,n=10）和老年运动组（AE,n=10）。老年对照组无特殊运动训练,老年运动组进行16周中等强度运动训练。RT-PCR法检测FAT/CD36及其它脂肪酸转运载体m RNA表达水平。Westernblotting法检测FAT/CD36蛋白表达及胰岛素信号通路磷酸化水平。实验数据采用SPSS 20.0软件处理,结果以平均数±标准误（MEAN±SEM）表示。组间比较采用独立样本t检验,显著性差异水平设置为P＜0.05。研究结果:（1）与AS组相比,AE组小鼠高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平显著增加（P＜0.01）,血清甘油三酯（TG）、总胆固醇（T-CHO）及低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）含量无显著性差异;（2）与AS组相比,AE组小鼠骨骼肌AKT/ERK磷酸化水平明显升高（P＜0.05）;（3）与AS组相比,AE组FAT/CD36 mRNA及蛋白水平明显降低（P＜0.05）,而FABPpm、FATP4等其它脂肪酸转运载体m RNA水平无显著性变化（P＞0.05）,说明与其它脂肪酸转运载体相比,FAT/CD36在运动改善老年小鼠骨骼肌胰岛素敏感性中可能发挥了更为重要的作用;（4）过氧化物酶增殖物激活受体γ共化合物1α（peroxisome proliferator activated receptorγcoactivator-1α,PGC-1α）含量的增加不仅能够诱导线粒体的生物发生,促进脂肪酸氧化代谢,还可以增加FAT/CD36的含量。我们研究结果显示,与AS组相比,AE组小鼠骨骼肌PGC-1α和过氧化物酶体增殖物激活受体-γ（peroxisome proliferator-activated receptor-γ,PPAR-γ）m RNA表达水平无显著性变化,说明PGC-1α、PPARγ可能不是运动调控FAT/CD36表达的主要转录因子。研究结论:运动可能通过减少FAT/CD36的m RNA及蛋白表达水平,激活AKT/ERK信号通路,从而改善衰老诱导的骨骼肌胰岛素敏感性下降。在今后的研究中,可以选取运动初期、运动中期以及运动末期等多个时间点,从而可以更清晰地反映出FAT/CD36的表达在运动适应中的变化趋势,进一步说明FAT/CD36在运动防治衰老诱导的骨骼肌胰岛素抵抗

关键词：衰老运动干预 FAT/CD36 骨骼肌胰岛素敏感性

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中国生物工程杂志 2016年第8期36卷 23-30页

作者：刘婧莹刘晨浪张允雷王世奇夏立秋张友明湖南师范大学生命科学学院微生物分子生物学国家重点实验室培育基地长沙410081

牛乳铁蛋白肽(bovine lactoferrincin,Lfcin B)来源于牛乳铁蛋白(bovine lactoferrin),是目前已知所有乳铁蛋白肽中活性最高的。前期研究表明,可以通过大肠杆菌表达体系和毕赤酵母表达体系表达有活性的Lfcin B,但得到的产物难以纯化,产... 详细信息

牛乳铁蛋白肽(bovine lactoferrincin,Lfcin B)来源于牛乳铁蛋白(bovine lactoferrin),是目前已知所有乳铁蛋白肽中活性最高的。前期研究表明,可以通过大肠杆菌表达体系和毕赤酵母表达体系表达有活性的Lfcin B,但得到的产物难以纯化,产量也不理想,所以研究构建新型的Lfcin B表达体系有很重要的意义。苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)能在芽胞形成的同时产生一种δ-内毒素组装成的杀虫晶体,在发酵完成后细胞裂解,将芽胞和晶体释放到培养基中。基于Bt的这种优势,将Lfcin B与分子量为35k Da的Cry60Ba晶体蛋白作融合表达。通过PCR扩增和酶切连接,将Lfcin B基因连接到cry60Ba的下游,构建融合基因并转入无晶体Bt菌株中表达,得到了工程菌4Q7/p PFT60Ba-Lfcin B。利用GYS培养发酵48h,再经过超声破碎、包涵体纯化,SDSPAGE分析表明,工程菌表达了一条38k Da左右的蛋白质条带。将纯化的融合蛋白盐酸水解后进行SDS-PAGE分析,得到近似于3k Da的蛋白质条带,挖取目的条带进行胶内酶解和质谱分析,质谱结果显示,挖取的目的条带样品为Lfcin B蛋白的特异性肽段,说明在酸水解过后,融合蛋白Cry60Ba-Lfcin B中的Cry60Ba和Lfcin B分离开,得到单独的Lfcin B蛋白。由此可见,利用晶体蛋白在苏云金芽胞杆菌中进行融合表达可能作为一种新型有效的Lfcin B的高效表达体系,为采用基因工程的方法大量生产具有活性的牛乳铁蛋白肽Lfcin B蛋白奠定基础。

关键词：牛乳铁蛋白肽LfcinB 苏云金芽孢杆菌 Cry60Ba 融合表达

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深水网箱养殖卵形鲳鲹血液指标的雌雄比较

深水网箱养殖卵形鲳鲹血液指标的雌雄比较

植物ABC转运蛋白与次生代谢产物的跨膜转运

第五届广东、湖南、江西、湖北四省动物学学术研讨会

作者：许晓娟李加儿区又君郭根喜陶启友中国水产科学研究院南海水产研究所上海水产大学生命科学与技术学院

卵形鲳鲹（Trachinotus ovatus）,属于鲈形目（Perciformes）、鲹科（Carangidae）、鲳鲹亚科（Trachinotinae）,鲳鲹属（Trachinotus）,俗称黄腊鲳、黄腊鲹、卵鲹、短鳍鲳鲹、金鲳、红杉,红沙等,广泛分布于大西洋、印度洋、太平洋,是... 详细信息

卵形鲳鲹（Trachinotus ovatus）,属于鲈形目（Perciformes）、鲹科（Carangidae）、鲳鲹亚科（Trachinotinae）,鲳鲹属（Trachinotus）,俗称黄腊鲳、黄腊鲹、卵鲹、短鳍鲳鲹、金鲳、红杉,红沙等,广泛分布于大西洋、印度洋、太平洋,是一种暖水性中上层鱼类,幼鱼阶段常栖息在河口海湾,群聚性较强,成鱼时向外海深水移动。卵形鲳鲹是海水养殖优质的种质资源,近年来已被开发成为海湾深水网箱养殖的重要对象之一。该鱼的肉无刺,肉质细嫩,味道鲜美,为名贵食用鱼类,养殖经济效益显著。本研究分别测定了雌、雄卵形鲳鲹的部分血液性状和生化指标,并作了比较分析,以期为研究该鱼深水网箱健康养殖的适宜生态生理状态参数提供依据。结果表明,雌、雄成鱼的红细胞数量（RBC）、白细胞数量（WBC）、血比容、血沉等血液性状不存在显著性差异。生化指标中雌、雄成鱼的血糖（GLU）含量分别为（10.24±1.25）mmol·L、（17.36±1.34） mmol·L,存在极显著差异;肌酐（CREA）、低密度脂蛋白胆同醇（LDL-C）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、谷草/谷丙比值（AST/ALT）、γ-谷氨酰转肽酶（γ-GT）、钾（K）、钠（Na）等指标存在显著性差异;尿酸（UA）、尿素氮（BUN）、甘油三酯（TRIG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLB）、A/G、氯（Cl）、磷（P）、钙（Ca）等指标差异不显著。

关键词：卵形鲳鲹血液性状生化指标

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中国农业科技导报 2007年第3期9卷 32-37页

作者：金宏滨刘东辉左开井苗志奇陈玉辉孙小芬唐克轩上海交通大学农业与生物学院植物生物技术研究中心生命科学技术学院复旦-交大-诺丁汉植物生物技术研发中心上海200030 沈阳医学院复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室复旦一交大一诺丁汉植物生物技术研发中心

ABC(ATP-Binding Cassette)转运蛋白是目前已知最大、功能最广泛的蛋白家族,参与生物体内多种物质的转运,因其在生物体内与肿瘤细胞耐药性等一些重要的生理过程密切相关而引起了人们的广泛关注。研究发现,在已完成全基因组测序的生物中,... 详细信息

ABC(ATP-Binding Cassette)转运蛋白是目前已知最大、功能最广泛的蛋白家族,参与生物体内多种物质的转运,因其在生物体内与肿瘤细胞耐药性等一些重要的生理过程密切相关而引起了人们的广泛关注。研究发现,在已完成全基因组测序的生物中,ABC转运蛋白在拟南芥和水稻中数量最多,推测与植物次生代谢产物的跨膜转运相关。植物产生生物碱、萜类化合物、酚类等大量次生代谢产物,保护植物体免受环境中生物和非生物胁迫的损伤。这些化合物的累积和排泌被高度调节,ABC转运蛋白在其中起着重要的作用。本综述介绍了植物ABC转运蛋白及其在植物次生代谢产物累积和跨膜转运中的研究进展。

关键词：次生代谢产物植物ABC转运蛋白萜类生物碱酚

人β-肿瘤坏死因子的高效表达及其IMAC柱的快速纯化

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中国肿瘤生物治疗杂志 1997年第3期 205-205页

作者：邱莲女马志章周晴丁仁瑞陈常庆中国科学院上海生物工程研究中心!上海200233 杭州大学生命科学学院免疫工程实验室!杭州310012

TNF-β是一种有前途用于肿瘤生物治疗的细胞因子.TNF-β缺失N端24个aa,可使它们在体外的细胞毒活性增加2～6倍,而对小鼠致死率却降低5倍,这为重组人TNF-β提供了新的思路.本文将人TNF-βN端缺失23个aa的基因序列插入到一种新型的表达载... 详细信息

TNF-β是一种有前途用于肿瘤生物治疗的细胞因子.TNF-β缺失N端24个aa,可使它们在体外的细胞毒活性增加2～6倍,而对小鼠致死率却降低5倍,这为重组人TNF-β提供了新的思路.本文将人TNF-βN端缺失23个aa的基因序列插入到一种新型的表达载体pRSET C,使590bq的目的基因置于该载体的多聚组氨酸序列和肠激酶酶切位点序列的下游,构建了含hTNF-β基因的pRSET C(简称PC-TNF-β),再转化大肠杆菌BL21(DF3),在T噬菌体后动子控制下,经PTG诱导,hTNF-β得到高水平表达,经SDS-PAGE检测,在分子量约21KD处出现目的蛋白的条带,薄层扫描分析,表达产物占细菌总蛋白的18～26%.表达菌体经超声破碎,高速离心,上清经0.45μm滤膜过滤后,即为hTNF-β粗制品,经固

关键词： IMAC 肠激酶蛋白酶表达载体细胞毒毒素层析色层分析

生物材料对内皮细胞MCP-1表达影响的研究

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生物材料对内皮细胞MCP-1表达影响的研究

2005年上海市医用生物材料研讨会

作者：丁婷婷孙皎章平上海第二医科大学附属九院／上海生物材料研究测试中心上海第二医科大学附属九院／上海生物材料研究测试中心上海华东师范大学生命科学学院免疫学实验室

生物材料在代替人体组织、器官或增进功能方面起着重要作用,而它作为一种异物必然会激活机体的免疫系统,因此免疫相容性是对生物材料进行安全性评价的重要内容,但目前还未见相应的免疫学标准法规及指南公布。当生物材料刺激巨噬细胞后,...

生物材料在代替人体组织、器官或增进功能方面起着重要作用,而它作为一种异物必然会激活机体的免疫系统,因此免疫相容性是对生物材料进行安全性评价的重要内容,但目前还未见相应的免疫学标准法规及指南公布。当生物材料刺激巨噬细胞后,大量细胞因子改变血管壁的通透性,而单核细胞趋化蛋白 -1（MCP-1）将继续介导白细胞向血管内皮细胞的迁移集中,最终导致炎症反应。因此本研究运用RT-PCR的方法检测不同材料对内皮细胞MCP-1表达的影响,在分子水平上评价生物材料的免疫相容性。

关键词：

来源： cnki会议评论

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一起条斑紫菜拟油壶菌病的诊断

渔业科学进展 2021年第4期42卷 177-183页

作者：何礼娟杨慧超李杰唐磊刘聪莫照兰中国海洋大学海洋生命学院山东青岛266003 中国水产科学研究院黄海水产研究所农业农村部海水养殖病害防治重点实验室青岛海洋科学与技术试点国家实验室海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室山东青岛266071 水产科学国家级实验教学示范中心上海海洋大学上海201306

赤腐病(red rot disease)和拟油壶菌病(Oplidiopsis disease)是海上栽培紫菜(Pyropia)的主要病害,常引起紫菜大面积病烂。2019年1月江苏省盐城市大丰区某条斑紫菜(Pyropia yezoensis)栽培海区有134 hm2发生了紫菜病烂,本研究对该起病烂... 详细信息

赤腐病(red rot disease)和拟油壶菌病(Oplidiopsis disease)是海上栽培紫菜(Pyropia)的主要病害,常引起紫菜大面积病烂。2019年1月江苏省盐城市大丰区某条斑紫菜(Pyropia yezoensis)栽培海区有134 hm2发生了紫菜病烂,本研究对该起病烂进行了病害调查和病原鉴定。结果显示,患病紫菜的病症与拟油壶菌病一致,主要表现为发病初期,在叶片边缘、基部和中部出现粉红色的病斑,随着病程发展,病斑逐渐褪色并扩大;发病后期,整个叶片颜色变浅,叶片组织溃烂脱落;在显微镜下可观察到紫菜细胞内寄生1~4个圆球状菌体,菌体内有多个油滴状物质。以病烂紫菜叶片或其匀浆液为感染源,分别在10℃和20℃条件下进行人工感染实验,二者均能使正常紫菜出现拟油壶菌病的病症。对现场采集及人工侵染后的病烂紫菜疑似病原进行cox1基因测序和系统发育学分析。研究表明,所测cox1基因均与紫菜拟油壶菌(Oplidiopsis porphyrae、***、*** ***)聚为一支,相似度为100%。综上所述,该起条斑紫菜的病烂由紫菜拟油壶菌(Oplidiopsis sp.)引起。

关键词：条斑紫菜拟油壶菌病 cox1 紫菜拟油壶菌