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表达和纯化人巨噬细胞弹性蛋白酶的催化区以高通量筛选酶抑制剂

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Acta Pharmacologica Sinica 2002年第2期23卷 51-59页

作者：程东航沈强钱静钱蓁叶其壮中国 201203 中国科学院上海生命科学研究院药物研究所国家新药筛选中心中国科学院上海生命科学研究院药物研究所国家新药筛选中心上海

获得具有催化活性的人巨噬细胞弹性蛋白酶的催化区(hMECD),并建立有效的高通量筛选方法筛选其仰制剂.方法:在大肠杆菌中表达hMECD,并根据酶活性以比色法建立高通量筛选模型.对一批共8560个纯化合物和混合物进行了高通量筛选.结果:构建... 详细信息

获得具有催化活性的人巨噬细胞弹性蛋白酶的催化区(hMECD),并建立有效的高通量筛选方法筛选其仰制剂.方法:在大肠杆菌中表达hMECD,并根据酶活性以比色法建立高通量筛选模型.对一批共8560个纯化合物和混合物进行了高通量筛选.结果:构建了有效的大肠杆菌表达系统.存在于包涵体中的表达蛋白在体外重折叠复性,经阴离子交换柱层析的方法纯化,1L大肠杆菌培养物可得到23mg纯化的活性蛋白.该蛋白的重折叠复性和酶活性需要钙锌离子,但高浓度的锌离子则抑制其重折叠复性和活性.hMECD剪切合成底物包括一个硫酯和几个荧光发生的肽类底物,并在pH8.0显示最强的活性.对8560个化合物和混合物的高通量筛选发现了27个纯化合物和14个天然产物在20mg/L的浓度下具有大于80％的抑制活性.结论:建立了有效的人巨噬细胞弹性蛋白酶的催化区表达和纯化的方法.该重组蛋白抑制剂的高通量筛选模型具有有效、可信和快速的特点.

关键词：基质金属蛋白酶人巨噬细胞弹性蛋白酶基因表达高通量筛选

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甲硫氨酰氨肽酶的研究进展

中国药学杂志 2004年第11期39卷 804-808页

作者：罗群力李静雅叶其壮南发俊中国科学院上海生命科学研究院上海药物研究所国家新药筛选中心

目的总结近年来甲硫氨酰氨肽酶作为抗肿瘤、抗感染药物靶点的研究进展。方法查阅近几年国内外有关文献资料并进行分析综述。结果人源Ⅱ型甲硫氨酰氨肽酶是抗肿瘤血管生成药物TNP-470在细胞内的分子靶点,细菌和真菌体内的甲硫氨酰氨... 详细信息

目的总结近年来甲硫氨酰氨肽酶作为抗肿瘤、抗感染药物靶点的研究进展。方法查阅近几年国内外有关文献资料并进行分析综述。结果人源Ⅱ型甲硫氨酰氨肽酶是抗肿瘤血管生成药物TNP-470在细胞内的分子靶点,细菌和真菌体内的甲硫氨酰氨肽酶可以作为抗感染药物的靶点。结论研究甲硫氨酰氨肽酶及其抑制剂对于发现新型抗肿瘤和抗感染药物有重要意义。

关键词：甲硫氨酰氨肽酶抗肿瘤抗感染抑制剂

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人一型胶原酶抑制剂的高通量筛选＜英文>

Acta Pharmacologica Sinica 2000年第11期21卷 63-68页

作者：叶其壮南发俊胡梁言钱蓁钱静上海 200031 中国中国科学院上海生命科学研究院中国科学院上海生命科学研究院上海药物研究所国家新药筛选中心

目的:以重组胶原酶催化区建立高通量药物筛选模型,筛选胶原酶抑制剂.方法:在大肠杆菌中表达了人的一型胶原酶的催化区,并以此建立了高通量药物筛选模型.对一批共2720个纯化合物进行了高通量筛选.结果:胶原酶催化区的高通量筛选中,完成2... 详细信息

目的:以重组胶原酶催化区建立高通量药物筛选模型,筛选胶原酶抑制剂.方法:在大肠杆菌中表达了人的一型胶原酶的催化区,并以此建立了高通量药物筛选模型.对一批共2720个纯化合物进行了高通量筛选.结果:胶原酶催化区的高通量筛选中,完成2720个纯化合物的筛选只用了2小时10分,每个化合物的用量是4μg.高通量筛选发现66个化合物在20 mg/L的浓度下具有大于60％的抑制活性,其中有44个化合物的抑制活性被随后的多浓度测试所证实.筛选发现的最好化合物的IC50为4.3μmol/L,共有IC50小于20μmol/L的化合物15个.结论:重组胶原酶催化区的高通量药物筛选模型具有快速、微量、准确的特点.

关键词：高通量筛选药物筛选基质金属蛋白酶

新方法随机筛选血管内皮生长因子受体1激酶的抑制剂

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Acta Pharmacologica Sinica 2002年第2期23卷 25-31页

作者：庄书斐,周彩红,钱静,钱蓁,SHIBUYA Masabumi,叶其壮国家新药筛选中心中国科学院上海生命科学院药物研究所国家新药筛选中心中国科学院上海生命科学院药物研究所国家新药筛选中心中国科学院上海生命科学院药物研究所国家新药筛选中心中国科学院上海生命科学院药物研究所东京大学药物研究所基因研究系上海中国 201203 上海中国 201203 上海中国 201203 上海中国 201203 东京日本

目的:利用重组血管内皮细胞生长因子(VEGF)受体1激酶蛋白质建立大规模随机筛选分子模型.方法:重组人源VEGF受体1激酶蛋白质的催化活性通过酶联免疫法检测96孔板上的底物磷酸化程度得到.用大规模随机筛选寻找抑制剂,并在稳定表达VEGF受体... 详细信息

目的:利用重组血管内皮细胞生长因子(VEGF)受体1激酶蛋白质建立大规模随机筛选分子模型.方法:重组人源VEGF受体1激酶蛋白质的催化活性通过酶联免疫法检测96孔板上的底物磷酸化程度得到.用大规模随机筛选寻找抑制剂,并在稳定表达VEGF受体1的细胞系上研究它们的性质.结果:在研究VEGF受体1激酶蛋白质大肠杆菌表达体系的基础上,建立了大规模筛选模型.通过对2800个有机化合物的筛选,找到了两个二取代呋喃类的VEGF受体1激酶抑制剂(A1和A5).其中化合物A1能抑制底物磷酸化,而化合物A5则对激酶的自磷酸化和底物磷酸化都能抑制.同时A1和A5都能影响转染细胞上的受体磷酸化作用.结论:利用重组受体激酶建立的分子模型为寻找抗肿瘤血管生成抑制剂提供了一个简单而有效的方法.

关键词：蛋白质酪氨酸激酶药物筛选生长因子受体类血管内皮

以K562细胞为靶点的抗肿瘤药物筛选模型的建立(英文)

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Acta Pharmacologica Sinica 2001年第9期22卷 55-60页

作者：钱静周彩红钱蓁南发俊叶其壮中国 201203 中国科学院上海生命科学院上海药物研究所国家新药筛选中心中国科学院上海生命科学院上海药物研究所国家新药筛选中心上海

目的:建立以白血病细胞系K562为靶点的高通量抗肿瘤药物筛选模型。方法:在96孔细胞培养板上,运用四唑氮化合物(MTS)和电子耦联剂(PMS)连用的方法,对K562细胞增殖情况进行检测。对在化合物影响下K562细胞增殖变化的检测条件进行了优化。... 详细信息

目的:建立以白血病细胞系K562为靶点的高通量抗肿瘤药物筛选模型。方法:在96孔细胞培养板上,运用四唑氮化合物(MTS)和电子耦联剂(PMS)连用的方法,对K562细胞增殖情况进行检测。对在化合物影响下K562细胞增殖变化的检测条件进行了优化。结果:采用这一细胞水平的高通量抗肿瘤药物筛选模型,完成了800个小分子有机化合物的筛选,每个化合物的用量是500ng。11个化合物在浓度为5mg/L时可抑制细胞增殖达80％以上,其中9个通过多浓度复筛得到了确认。抑制活性最强的化合物的IC50为170nmol/L,共有7个化合物显示IC50低于10μmol/L。结论:采用K562细胞系进行高通量筛选是快速、经济、有效、实用的发现新型抗肿瘤药物的方法。

关键词：抗肿瘤药物筛选试验 K562细胞细胞培养药物筛选抗肿瘤药

体外检测氟喹诺酮类药物光毒性的可靠性(英文)

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Acta Pharmacologica Sinica 2003年第5期24卷 71-77+98页

作者：张婷李俊岭马小超欣坚屠曾宏中国科学院上海生命科学研究院上海药物研究所新药研究国家重点实验室中国科学院上海生命科学研究院上海药物研究所新药研究国家重点实验室上海 200031 中国

目的:比较四个氟喹诺酮类抗生素的光毒性来确定体外实验的可靠性。方法:用体内Wistar大鼠光毒性实验,Balb/c小鼠光毒性实验和体外中国仓鼠V79细胞微核实验,NIH3T3 MTT实验在不同的UVA照射条件下测定四个氟喹诺酮类抗生素的光毒性。结果... 详细信息

目的:比较四个氟喹诺酮类抗生素的光毒性来确定体外实验的可靠性。方法:用体内Wistar大鼠光毒性实验,Balb/c小鼠光毒性实验和体外中国仓鼠V79细胞微核实验,NIH3T3 MTT实验在不同的UVA照射条件下测定四个氟喹诺酮类抗生素的光毒性。结果:在所有实验中,司帕沙星、洛美沙星显示出较强的光毒性,与对照组相比,均有非常显著性差异(P药物光毒性有良好的相关性,因此体外检测氟喹诺酮类药物光毒性是可靠的。

关键词：光毒性氟喹诺酮类洛美沙星司帕沙星

屈洛昔芬对假孕大鼠黄体细胞凋亡和Bax、Bcl-2蛋白表达的影响(英文)

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Acta Pharmacologica Sinica 2001年第2期22卷 63-70页

作者：冷颖冯颖曹霖顾芝萍上海中国 200031 中国科学院上海生命科学研究院中国科学院上海生命科学研究院上海药物研究所新药研究国家重点实验室

目的:研究屈洛昔芬对假孕大鼠黄体细胞凋亡和Bax、Bcl-2蛋白表达的影响。方法:HE染色观察大鼠卵巢黄体组织学变化,TUNEL法检测黄体中凋亡细胞的存在,免疫组织化学方法观察假孕大鼠卵巢黄体中Bax和Bcl-2蛋白的表达。结果:成年假孕大鼠卵... 详细信息

目的:研究屈洛昔芬对假孕大鼠黄体细胞凋亡和Bax、Bcl-2蛋白表达的影响。方法:HE染色观察大鼠卵巢黄体组织学变化,TUNEL法检测黄体中凋亡细胞的存在,免疫组织化学方法观察假孕大鼠卵巢黄体中Bax和Bcl-2蛋白的表达。结果:成年假孕大鼠卵巢黄体自然退化中黄体细胞凋亡出现在假孕第13天,15天时可观察到凋亡细胞的显著增加。Bax和Bcl-2蛋白在黄体细胞中的表达在整个黄体自然退化中无显著改变。20mg·kg-1假孕大鼠第2天口服给予20mg·kg-1屈洛昔芬后,第8天观察时黄体中出现凋亡细胞,且假孕期从(15.5±1.1)天缩短至(12.8±1.6)天。经屈洛昔芬作用后,假孕大鼠黄体中Bax蛋白的表达增加而Bcl-2蛋白表达下降。结论:成年假孕大鼠卵巢黄体自然退化中有细胞凋亡的发生,屈洛昔芬可加速假孕大鼠黄体细胞凋亡的出现并可缩短假孕期。Bax和Bcl-2蛋白的表达在假孕不同时间时无明显改变,而屈洛昔芬所诱导的Bax/Bcl-2的增加可能与该药物对黄体细胞凋亡的促进作用有关。

关键词：屈洛昔芬黄体大鼠假孕凋亡蛋白质类

新型SARS-CoⅤ 3CL蛋白酶荧光多肽底物的设计、制备及其酶动力学研究

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高等学校化学学报 2007年第1期28卷 79-82页

作者：万惠新陈莉莉李欣王昕胡定宇沈旭沈竞康中国科学院上海生命科学研究院上海药物研究所国家新药研究重点实验室上海201203

以邻氨基苯甲酸(Abz)为荧光发射基团、2,4-二硝基苯基乙二胺(Eddnp)为荧光猝灭基团,设计合成了SARS-CoⅤ3CL蛋白酶的新型荧光多肽底物:H2N-E(Eddnp)STLQSGLK(Abz)-CONH2.用液相色谱-质谱(LC-MS)联用技术进行了表征,表明该多肽底物能被SA... 详细信息

以邻氨基苯甲酸(Abz)为荧光发射基团、2,4-二硝基苯基乙二胺(Eddnp)为荧光猝灭基团,设计合成了SARS-CoⅤ3CL蛋白酶的新型荧光多肽底物:H2N-E(Eddnp)STLQSGLK(Abz)-CONH2.用液相色谱-质谱(LC-MS)联用技术进行了表征,表明该多肽底物能被SARS-CoⅤ3CL蛋白酶识别,并在QS之间被专一性酶解.另外,利用该多肽底物的荧光共振能量转移(FRET)特性,对SARS-CoⅤ3CL蛋白酶的酶解动力学性质进行了研究,结果表明,此荧光多肽底物可以作为荧光探针,应用于SARS-CoⅤ3CL蛋白酶活性的测定及其抑制剂的筛选.

关键词：荧光共振能量转移(FRET) SAPS-CoY 3CL蛋白酶荧光探针液相色谱质谱

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合成天然产物曲古抑菌素A的新方法

有机化学 2007年第12期27卷 1509-1515页

作者：赵曦张士磊段文虎中国科学院上海生命科学研究院上海药物研究所上海201203

报道了一条组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A的有效合成路线.通过L-脯氨酸催化对硝基苯甲醛与丙醛的羟醛缩合反应,高立体选择性地构建了目标分子的手性中心,羟醛缩合产物的ee值大于99%,anti∶syn=16∶1.随后的合成过程中无消旋化现象... 详细信息

报道了一条组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A的有效合成路线.通过L-脯氨酸催化对硝基苯甲醛与丙醛的羟醛缩合反应,高立体选择性地构建了目标分子的手性中心,羟醛缩合产物的ee值大于99%,anti∶syn=16∶1.随后的合成过程中无消旋化现象,合成的曲古抑菌素A是单一R型异构体,ee值大于99%.

关键词：曲古抑菌素A 组蛋白去乙酰酶抑制剂 L-脯氨酸合成

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