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CCTβ在大鼠脑内的分布及在昆虫细胞中的表达(英文)

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Acta Pharmacologica Sinica 2002年第4期23卷 63-68页

作者：徐侃彦熊缨谢值勤边玮景乃禾杜雨苍 200031中国中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所上海

目的:考察大鼠CTP:磷酸胆碱胞苷转移酶β(CCTβ)在脑内的分布及在昆虫细胞中的表达以研究其活性和特征.方法:用地高辛标记CCTβ探针对大鼠脑切片进行原位杂交;利用杆状病毒表达系统在粉纹夜蛾细胞中表达CCTβ;利用酶测活实验和代谢标记... 详细信息

目的:考察大鼠CTP:磷酸胆碱胞苷转移酶β(CCTβ)在脑内的分布及在昆虫细胞中的表达以研究其活性和特征.方法:用地高辛标记CCTβ探针对大鼠脑切片进行原位杂交;利用杆状病毒表达系统在粉纹夜蛾细胞中表达CCTβ;利用酶测活实验和代谢标记实验,研究表达蛋白的活性和特征,及对细胞磷脂酰胆碱(PC)合成的影响.结果:(1)CCTβ在海马的齿状回、CA1、CA2和CA4区有明显分布.(2)Tn细胞中表达的CCTβ含量是天然脑内的1×10~4倍,它的表达加快了细胞的PC合成.(3)软脂酰磷酸胆碱以及一些离子会抑制CCTβ活性;dCTP是CCTβ另一最适底物.结论:CCTβ在大鼠脑内有与精氨酸加压素片段(4—8)相似的分布.

关键词： CTP 磷酸胆碱胞苷转移酶精氨酸加压素原位杂交海马软脂酰磷酸胆碱杆状病毒

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的体内体外抗人肝细胞癌的作用(英文)

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Acta Pharmacologica Sinica 2001年第9期22卷 65-70页

作者：郭本昌徐永华中国 200031 中国科学院上海生命科学研究院上海生物化学和细胞生物学研究所中国科学院上海生命科学研究院上海生物化学和细胞生物学研究所上海

目的:研究Bcl-2蛋白的过表达对Trail诱导肝癌细胞凋亡的影响,以及Trail蛋白体内和体外对人肝癌细胞的杀伤作用。方法:克隆Trail基因并在大肠杆菌中表达Trail重组蛋白。检测Trail重组蛋白在体内和体外对肿瘤的杀伤作用。用台盼蓝拒染法... 详细信息

目的:研究Bcl-2蛋白的过表达对Trail诱导肝癌细胞凋亡的影响,以及Trail蛋白体内和体外对人肝癌细胞的杀伤作用。方法:克隆Trail基因并在大肠杆菌中表达Trail重组蛋白。检测Trail重组蛋白在体内和体外对肿瘤的杀伤作用。用台盼蓝拒染法检测细胞的凋亡率。将真核细胞表达质粒pcDNA3-Bcl-2转染到人肝癌细胞BEL-7404细胞中,并通过G418400mg/L筛选得到Bcl-2蛋白稳定表达的细胞株。结果:重组蛋白Trail能够有效地杀死人肝癌细胞(包括BEL-7404,SMMC-7721,和BEL-7402等细胞)。在体外,过量表达的Bcl-2蛋白能抑制Trail重组蛋白对人肝癌细胞BEL-7404的杀伤作用。重组蛋白Trail能够有效地抑制人肝癌细胞BEL-7404在裸鼠中形成实体瘤。结论:在体内和体外,Trail重组蛋白能够杀死肝癌细胞。Bcl-2蛋白过表达可以抑制Trail重组蛋白对肝癌细胞BEL-7404的杀伤作用。Trail蛋白是一种潜在的肝癌治疗剂。

关键词：细胞凋亡 bcl-2基因肿瘤坏死因子膜糖蛋白类肝细胞癌分子克隆逆转录聚合酶链反应

广泛表达人Fas配体的转基因小鼠发生轻微类移植物抗宿主疾病(英文)

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Acta Pharmacologica Sinica 2001年第4期22卷 25-33页

作者：马映华费俭胡佳华周筱刚夏国宏郭礼和中国科学院上海生命科学研究院生物化学和细胞生物学研究所中国科学院上海生命科学研究院生物化学和细胞生物学研究所上海中国 200031

目的:建立Fas配体(FasL/CD95L)转基因小鼠并研究FasL广泛表达的生理效应。方法:原核显微注射法产生转基因小鼠,巢式PCR和Southern-blot鉴定转基因的整合及其完整性,半定量RT-PCR分析FasL mRNA水平,免疫荧光检测FasL蛋白质的表达,组织切... 详细信息

目的:建立Fas配体(FasL/CD95L)转基因小鼠并研究FasL广泛表达的生理效应。方法:原核显微注射法产生转基因小鼠,巢式PCR和Southern-blot鉴定转基因的整合及其完整性,半定量RT-PCR分析FasL mRNA水平,免疫荧光检测FasL蛋白质的表达,组织切片染色检查形态学变化,流式细胞仪检测脾脏αβT细胞百分比。结果:获得2只含置于CMV启动子控制下人FasL cDNA的建立者小鼠。F1代杂合体小鼠的大部分组织可检测到人FasL中等程度的表达。转基因小鼠发育正常,但脾、睾丸、肺和肝局部区域形态异常,具有轻微类移植物抗宿主疾病特征。与野生型对照相比,来源于二个建立者的转基因小鼠αβT细胞在脾脏的百分比分别减少了约32％和24％。结论:广泛表达FasL可导致轻微类移植物抗宿主疾病。

关键词： Fas配体移植物抗宿主病转基因小鼠流式细胞术逆转录聚合酶链反应反义DNA 荧光抗体技术

人α半乳糖苷酶和α1,2岩藻糖基转移酶协同抑制NIH3T3细胞与人血清的异种免疫反应(英文)

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Acta Pharmacologica Sinica 2003年第9期24卷 40-46+111页

作者：闫景莲余路阳郭礼和中国科学院上海生命科学研究院生物化学和细胞生物学研究所中国科学院上海生命科学研究院生物化学和细胞生物学研究所上海 200031 中国

目的:研究人α半乳糖苷酶和人α1,2岩藻糖基转移酶在NIH3T3细胞上协同性地抑制Gal抗原表位的表达和相关异种反应性。方法:流式细胞术比较G抗原、H抗原和人天然抗体(IgG和IgM)的表达水平,蛋白质印迹检测G抗原糖蛋白的表达,四唑盐(MTT)比... 详细信息

目的:研究人α半乳糖苷酶和人α1,2岩藻糖基转移酶在NIH3T3细胞上协同性地抑制Gal抗原表位的表达和相关异种反应性。方法:流式细胞术比较G抗原、H抗原和人天然抗体(IgG和IgM)的表达水平,蛋白质印迹检测G抗原糖蛋白的表达,四唑盐(MTT)比色试验检测NIH3T3细胞在人血清介导的裂解作用下的活力。结果:转染人α半乳糖苷酶和人α1,2岩藻糖基转移酶的NIH3T3细胞中G抗原的表达及其与人天然抗体(IgG和IgM)的结合能力都显著下降,其抗人血清介导的细胞裂解反应能力有效提高。结论:人α半乳糖苷酶和α1,2岩藻糖基转移酶能够相互协同抑制Gal抗原表位表达和相关异种排斥反应。

关键词： α半乳糖苷酶 α-L-岩藻糖基转移酶 Gal alpha 1,3 Gal NIH3T3细胞异种移植免疫球蛋白M 免疫球蛋白G 补体

反义猪α(1,3)半乳糖转移酶转基因小鼠的人鼠异种反应性降低(英文)

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Acta Pharmacologica Sinica 2001年第3期22卷 41-48页

作者：马映华周筱刚胡佳华费俭夏国宏郭礼和中国科学院上海生命科学研究院生物化学和细胞生物学研究所中国科学院上海生命科学研究院生物化学和细胞生物学研究所上海中国 200031

目的:研究体内α(1,3)半乳糖转移酶α(1,3)GT反义抑制降低Galα(1,3)Gal(Gal表位)异种抗原的作用。方法:原核显微注射法产生转基因小鼠,PCR和Southern-blot鉴定转基因的整合,RT-PCR检测小鼠α(1,3)GT的表达,组织学染色检查脾脏形态,免... 详细信息

目的:研究体内α(1,3)半乳糖转移酶α(1,3)GT反义抑制降低Galα(1,3)Gal(Gal表位)异种抗原的作用。方法:原核显微注射法产生转基因小鼠,PCR和Southern-blot鉴定转基因的整合,RT-PCR检测小鼠α(1,3)GT的表达,组织学染色检查脾脏形态,免疫荧光检测Gal表位,流式细胞仪分析人血清中异种天然抗体(IgM和IgG)和补体(C3c)对鼠源细胞的结合。结果:猪反义α(1,3)半乳糖转移酶转基因小鼠发育正常,但部分杂合体小鼠脾脏有细胞坏死特征。转基因小鼠细胞表面Gal表位数量明显减少。与野生型对照相比,转基因小鼠多种组织的细胞对人血清异种天然抗体的结合降低30％-60％,对补体的结合降低40％-50％。结论:通过反义基因抑制α(1,3)半乳糖转移酶的表达能有效降低人异种反应性。

关键词：表位半乳糖转移酶类异种移植荧光抗体技术反义DNA 逆转录聚合酶链反应 DNA印迹法猪

人α-半乳糖苷酶的表达抑制NIH 3T3细胞主要异种抗原表位Galα(1,3)Gal的生成(英文)

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Acta Pharmacologica Sinica 2003年第10期24卷 35-40+110-111页

作者：闫景莲余路阳朱丽华郭礼和中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所上海 200031 中国

目的:检测人α-半乳糖苷酶在NIH3T3细胞系中对Gal抗原表位生成的抑制作用。方法:流式细胞术比较G抗原、H抗原和人天然抗体(IgG和IgM)的表达水平,Western blot检测G抗原糖蛋白的表达。四唑盐(MTT)比色试验检测NIH3T3细胞在人血清介导的... 详细信息

目的:检测人α-半乳糖苷酶在NIH3T3细胞系中对Gal抗原表位生成的抑制作用。方法:流式细胞术比较G抗原、H抗原和人天然抗体(IgG和IgM)的表达水平,Western blot检测G抗原糖蛋白的表达。四唑盐(MTT)比色试验检测NIH3T3细胞在人血清介导的裂解作用下的活力。结果:克隆了人α-半乳糖苷酶并在NIH3T3细胞上建立了永久细胞系,Western blot结果表明,在表达人α-半乳糖苷酶的NIH3T3细胞中,人的天然抗体与细胞表面糖蛋白的结合能力显著降低,甚至完全消失,同时凝集素Gs-IB4结合分析也进一步证明人α半乳糖苷酶的稳定表达能有效地抑制NIH3T3细胞上Gal抗原表位的生成,流式细胞检测结果则表明,由Gal抗原表位与人IgG,IgM和3C3c介导的异种反应性分别降低了73.4％,22.3％和47.9％,随后发生的细胞裂解反应也被显著抑制。结论:人α-半乳糖苷酶能够有效抑制鼠成纤维细胞NIH 3T3细胞表面Gal抗原表位的生成以及Gal抗原表位与人天然抗体共同介导的免疫排斥。

关键词：人α-半乳糖苷酶 Gal表位异种移植 NIH3T3细胞

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判定直系同源关系的进化分析方法

生物化学与生物物理学报 2002年第1期34卷 88-94页

作者：时硕永丁达夫中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所上海200031

如何正确判定基因之间的直系同源 (ortholog)和旁系同源 (paralog)关系 ,仍是基因组功能诠释和比较基因组学中有待更好解决的关键问题。在以前的工作中 ,曾用进化分析方法解决多基因家族的直系 /旁系同源关系的判定问题 ,现进而完整地... 详细信息

如何正确判定基因之间的直系同源 (ortholog)和旁系同源 (paralog)关系 ,仍是基因组功能诠释和比较基因组学中有待更好解决的关键问题。在以前的工作中 ,曾用进化分析方法解决多基因家族的直系 /旁系同源关系的判定问题 ,现进而完整地展开判定直系同源关系的进化分析方法。从 44个同源蛋白质家族的案例观察表明 ,与流行的COG方法 (直系同源蛋白质的聚类 )比较 ,本方法能一般的判定直系同源关系以及能准确的诠释基因组的分子功能

关键词：直系同源旁系同源进化分析比较基因组学

大肠杆菌DsbA蛋白的氧化还原性质和构象变化

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生物化学与生物物理学报 2002年第5期34卷 583-588页

作者：李琦胡红雨中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所上海200031

DsbA蛋白是大肠杆菌周质空间内的巯基 /二硫键氧化酶 ,主要催化底物蛋白质二硫键的形成。利用定点突变结合色氨酸类似物标记技术 ,研究了DsbA蛋白的氧化还原性质和构象变化。结果显示 :(1 )DsbA蛋白的还原态比氧化态的结构更加稳定 ,说... 详细信息

DsbA蛋白是大肠杆菌周质空间内的巯基 /二硫键氧化酶 ,主要催化底物蛋白质二硫键的形成。利用定点突变结合色氨酸类似物标记技术 ,研究了DsbA蛋白的氧化还原性质和构象变化。结果显示 :(1 )DsbA蛋白的还原态比氧化态的结构更加稳定 ,说明DsbA的强氧化性来源于氧化态构象的紧张状态 ;(2 )DsbA氧化和还原态间特殊的荧光变化主要来源于Trp76在不同状态间微观环境的差异 ;(3 )色氨酸类似物标记不会对DsbA蛋白的结构和功能产生明显的影响 ,利用1 9F NMR进一步证实了DsbA氧化还原状态间的构象变化 ,而且这种变化主要影响Trp76的局部环境 ,而对Trp1 2 6的局部环境没有太大的影响

关键词： DsbA蛋白氧化还原性质构象变化定点突变色氨酸类似物标记

基于去折叠自由能的蛋白质结构域划分方法——适用于连续与不连续结构域

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生物化学与生物物理学报 2003年第12期35卷 1090-1098页

作者：谢志群许根俊中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所上海200031

结构域是蛋白质的一个结构层次 ,可以看作是蛋白质结构、折叠、功能、进化和设计的基本单位。大多数的蛋白质都可分为若干个结构域 ,结构域的不同组合使蛋白质具有不同的三级结构并具有不同的功能。蛋白质结构域的划分在理论与应用上都... 详细信息

结构域是蛋白质的一个结构层次 ,可以看作是蛋白质结构、折叠、功能、进化和设计的基本单位。大多数的蛋白质都可分为若干个结构域 ,结构域的不同组合使蛋白质具有不同的三级结构并具有不同的功能。蛋白质结构域的划分在理论与应用上都具有重要意义 ,但目前对结构域的划分还没有一个十分理想的方法。作者曾经发展了一种通过计算去折叠自由能划分蛋白质结构域的方法 ,但该方法只适用于连续双结构域的划分。现在 ,作者通过构造氨基酸残基相互作用矩阵 ,并进行对应分析 (correspondenceanalysis) ,然后根据去折叠自由能和一些经验打分函数对蛋白质进行切割和优选 ,发展了可以同时处理连续和不连续结构域的划分方法。该方法与晶体结构作者手工分析相比较 ,二者的结果有 76 %的相似。

关键词：结构域作用矩阵自由能打分函数划分