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潍坊医学院学报 2011年第3期33卷 161-164页

作者：孙晓红于志刚张雪莉庄宝祥张圣明潍坊医学院组织胚胎学教研室山东潍坊261053 潍坊医学院附属潍坊市人民医院血液病科潍坊医学院形态学实验室

目的观察钙离子螯合剂对白血病患者骨髓单个核细胞（BMMNC）生成硫化氢（H2S）的影响.方法采用BAPTA-AM和EGTA螯合细胞内外的钙离子,用敏感硫电极检测细胞外硫离子,计算出H2S含量的变化;免疫组化方法和图像分析系统检测bcl-2,bax的表... 详细信息

目的观察钙离子螯合剂对白血病患者骨髓单个核细胞（BMMNC）生成硫化氢（H2S）的影响.方法采用BAPTA-AM和EGTA螯合细胞内外的钙离子,用敏感硫电极检测细胞外硫离子,计算出H2S含量的变化;免疫组化方法和图像分析系统检测bcl-2,bax的表达变化.结果 BAPTA-AM和EGTA各实验组与对照组比较,H2S生成量均明显降低（P〈0.05）.免疫组化结果显示,bcl-2和bax均表达于细胞浆和胞膜上.图像分析光密度值（OD值）,BAPTA-AM和EGTA各实验组bcl-2蛋白表达与对照组比较,12h,24h和48h均高于对照组（P〈0.05）.bax蛋白的表达在BAPTA-AM和EGTA各实验组与对照组相比,12h,24h和48h均低于对照组（P〈0.05）.结论细胞内外钙离子螯合剂均能减少白血病患者BMMNC生成H2S,H2S生成降低在较短时间内可能抑制细胞凋亡,促进细胞增殖.

关键词：钙离子螯合剂白血病细胞凋亡 H2S

从制造到智造:维生素B12与合成生物学的不解之缘

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科学通报 2025年第1期 44-59页

作者：康倩吕荣玉张大伟中国科学院天津工业生物技术研究所中国科学院天津工业生物技术研究所低碳合成工程生物学重点实验室天津科技大学生物工程学院

合成生物学以生命科学为基础,辅以工程化思维,融合了物理学、化学、计算机科学等学科知识,旨在改造、设计、构建新型的生物体系.维生素B12作为横跨医学、化学和生物学三学科的“明星小分子”,近百年来一直备受研究人员的重视,其生物制... 详细信息

合成生物学以生命科学为基础,辅以工程化思维,融合了物理学、化学、计算机科学等学科知识,旨在改造、设计、构建新型的生物体系.维生素B12作为横跨医学、化学和生物学三学科的“明星小分子”,近百年来一直备受研究人员的重视,其生物制造在合成生物学发展的推动下不断创新.本文探讨了自1926年维生素B12小分子被发现至今的重要研究成果和内容,其中囊括在早期医学、化学研究时期,维生素B12相关研究的重要诺奖级成果;天然合成维生素B12菌株挖掘、催化途径解析及遗传工具开发;人工重组合成维生素B12菌株和体系的构建及优化等重要内容.聚焦近30年来,合成生物学系统研究方法的提出和推进对维生素B12生物制造有显著促进作用.这些进展推动了维生素B12从简单的天然菌种“制造”过程走向更具设计性、智能化的人工菌种与人工体系的“智造”过程转变.此外,维生素B12复杂的天然合成途径成为经典的研究范本,为合成生物学发展提供了优秀的经典案例,与合成生物学的发展结下“不解之缘”.

关键词：合成生物学维生素B12 生物制造细胞工厂无细胞合成

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非洲爪蟾PAPC多克隆抗体的制备及其特异性鉴定(英文)

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生物化学与生物物理进展 2007年第2期34卷 222-228页

作者：胡锐颖徐鹏陈跃磊娄鑫丁小燕中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所中国科学院分子细胞生物学重点实验室中国科学院研究生院上海200031

非洲爪蟾ParaxialProtocadherin(PAPC)是一个在爪蟾Spemann组织者特异表达的膜蛋白.它在爪蟾原肠运动阶段的汇聚延伸运动和体节发生阶段的体节边界形成,以及早期听泡的形态发生和细胞特化过程中都有重要的作用.为了研究PAPC基因在早期... 详细信息

非洲爪蟾ParaxialProtocadherin(PAPC)是一个在爪蟾Spemann组织者特异表达的膜蛋白.它在爪蟾原肠运动阶段的汇聚延伸运动和体节发生阶段的体节边界形成,以及早期听泡的形态发生和细胞特化过程中都有重要的作用.为了研究PAPC基因在早期胚胎发育过程中的表达及其生物学功能,需要制备PAPC抗体.应用谷胱甘肽S-转移酶(glutathioneStransferase,GST)表达系统表达GST-PAPC融合蛋白,亲和纯化后用以免疫新西兰大白兔,获得PAPC多克隆抗体.免疫印迹分析发现,以1∶3000稀释的该多克隆抗体为一抗时,能够在转染了全长PAPC质粒的HEK293T细胞的蛋白质抽提物中,特异地识别出150ku的印迹条带.同时,GST-PAPC融合蛋白可以竞争性抑制该抗体对全长PAPC质粒转染细胞的蛋白质抽提物的特异性条带.用1∶500稀释的该抗体为一抗进行免疫荧光分析时,发现,PAPC多克隆抗体能够识别在HEK293T细胞中过表达以及爪蟾动物极细胞中过表达的PAPC蛋白,荧光信号定位在细胞膜上.免疫印迹分析证明,PAPC抗体能够识别爪蟾胚胎中内源表达的PAPC蛋白.

关键词：非洲爪蟾 Pasaxial Protocadhefin(PAPC) 原核表达多克隆抗体免疫印迹免疫荧光

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过量表达Stat3诱导COS7细胞显著的形态变化

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2003年第8期35卷 717-722页

作者：颜晔夏彩虹曹新民景乃禾中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所分子细胞生物学重点实验室、干细胞生物学重点实验室上海200031 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所分子细胞生物学重点实验室、干细胞生物学重点实验室中国科学院上海生命科学研究院分子细胞生物学研究所新加坡117609

信号转导和转录激活蛋白Stat3在细胞的生长、分化、存活和运动过程中扮演重要角色。通过免疫细胞化学染色 ,免疫沉淀结合免疫蛋白质印迹法 ,以及瞬时转染由Stat3特异识别DNA元件所指导的报道基因等技术 ,证明COS7细胞中存在活性Stat3蛋... 详细信息

信号转导和转录激活蛋白Stat3在细胞的生长、分化、存活和运动过程中扮演重要角色。通过免疫细胞化学染色 ,免疫沉淀结合免疫蛋白质印迹法 ,以及瞬时转染由Stat3特异识别DNA元件所指导的报道基因等技术 ,证明COS7细胞中存在活性Stat3蛋白的表达。Stat3cDNA和报道基因在COS7细胞中的共转染实验表明 ,外源的Stat3蛋白具有DNA结合活性 ,并可增强报道基因的表达。同时 ,过量表达Stat3的COS7细胞呈现显著的细胞形态变化 ,如细胞体积增大、胞体伸出突起 ,有些突起有分枝和伪足。这些结果提示 ,Stat3蛋白在细胞的粘附和迁移 ,以及细胞骨架的重建过程中可能具有重要功能。

关键词： COS7细胞 Stat3 过量表达细胞形态报道基因

CCTβ在大鼠脑内的分布及在昆虫细胞中的表达(英文)

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Acta Pharmacologica Sinica 2002年第4期23卷 63-68页

作者：徐侃彦熊缨谢值勤边玮景乃禾杜雨苍 200031中国中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所上海

目的:考察大鼠CTP:磷酸胆碱胞苷转移酶β(CCTβ)在脑内的分布及在昆虫细胞中的表达以研究其活性和特征.方法:用地高辛标记CCTβ探针对大鼠脑切片进行原位杂交;利用杆状病毒表达系统在粉纹夜蛾细胞中表达CCTβ;利用酶测活实验和代谢标记... 详细信息

目的:考察大鼠CTP:磷酸胆碱胞苷转移酶β(CCTβ)在脑内的分布及在昆虫细胞中的表达以研究其活性和特征.方法:用地高辛标记CCTβ探针对大鼠脑切片进行原位杂交;利用杆状病毒表达系统在粉纹夜蛾细胞中表达CCTβ;利用酶测活实验和代谢标记实验,研究表达蛋白的活性和特征,及对细胞磷脂酰胆碱(PC)合成的影响.结果:(1)CCTβ在海马的齿状回、CA1、CA2和CA4区有明显分布.(2)Tn细胞中表达的CCTβ含量是天然脑内的1×10~4倍,它的表达加快了细胞的PC合成.(3)软脂酰磷酸胆碱以及一些离子会抑制CCTβ活性;dCTP是CCTβ另一最适底物.结论:CCTβ在大鼠脑内有与精氨酸加压素片段(4—8)相似的分布.

关键词： CTP 磷酸胆碱胞苷转移酶精氨酸加压素原位杂交海马软脂酰磷酸胆碱杆状病毒

广泛表达人Fas配体的转基因小鼠发生轻微类移植物抗宿主疾病(英文)

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Acta Pharmacologica Sinica 2001年第4期22卷 25-33页

作者：马映华费俭胡佳华周筱刚夏国宏郭礼和中国科学院上海生命科学研究院生物化学和细胞生物学研究所中国科学院上海生命科学研究院生物化学和细胞生物学研究所上海中国 200031

目的:建立Fas配体(FasL/CD95L)转基因小鼠并研究FasL广泛表达的生理效应。方法:原核显微注射法产生转基因小鼠,巢式PCR和Southern-blot鉴定转基因的整合及其完整性,半定量RT-PCR分析FasL mRNA水平,免疫荧光检测FasL蛋白质的表达,组织切... 详细信息

目的:建立Fas配体(FasL/CD95L)转基因小鼠并研究FasL广泛表达的生理效应。方法:原核显微注射法产生转基因小鼠,巢式PCR和Southern-blot鉴定转基因的整合及其完整性,半定量RT-PCR分析FasL mRNA水平,免疫荧光检测FasL蛋白质的表达,组织切片染色检查形态学变化,流式细胞仪检测脾脏αβT细胞百分比。结果:获得2只含置于CMV启动子控制下人FasL cDNA的建立者小鼠。F1代杂合体小鼠的大部分组织可检测到人FasL中等程度的表达。转基因小鼠发育正常,但脾、睾丸、肺和肝局部区域形态异常,具有轻微类移植物抗宿主疾病特征。与野生型对照相比,来源于二个建立者的转基因小鼠αβT细胞在脾脏的百分比分别减少了约32％和24％。结论:广泛表达FasL可导致轻微类移植物抗宿主疾病。

关键词： Fas配体移植物抗宿主病转基因小鼠流式细胞术逆转录聚合酶链反应反义DNA 荧光抗体技术

人α半乳糖苷酶和α1,2岩藻糖基转移酶协同抑制NIH3T3细胞与人血清的异种免疫反应(英文)

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Acta Pharmacologica Sinica 2003年第9期24卷 40-46+111页

作者：闫景莲余路阳郭礼和中国科学院上海生命科学研究院生物化学和细胞生物学研究所中国科学院上海生命科学研究院生物化学和细胞生物学研究所上海 200031 中国

目的:研究人α半乳糖苷酶和人α1,2岩藻糖基转移酶在NIH3T3细胞上协同性地抑制Gal抗原表位的表达和相关异种反应性。方法:流式细胞术比较G抗原、H抗原和人天然抗体(IgG和IgM)的表达水平,蛋白质印迹检测G抗原糖蛋白的表达,四唑盐(MTT)比... 详细信息

目的:研究人α半乳糖苷酶和人α1,2岩藻糖基转移酶在NIH3T3细胞上协同性地抑制Gal抗原表位的表达和相关异种反应性。方法:流式细胞术比较G抗原、H抗原和人天然抗体(IgG和IgM)的表达水平,蛋白质印迹检测G抗原糖蛋白的表达,四唑盐(MTT)比色试验检测NIH3T3细胞在人血清介导的裂解作用下的活力。结果:转染人α半乳糖苷酶和人α1,2岩藻糖基转移酶的NIH3T3细胞中G抗原的表达及其与人天然抗体(IgG和IgM)的结合能力都显著下降,其抗人血清介导的细胞裂解反应能力有效提高。结论:人α半乳糖苷酶和α1,2岩藻糖基转移酶能够相互协同抑制Gal抗原表位表达和相关异种排斥反应。

关键词： α半乳糖苷酶 α-L-岩藻糖基转移酶 Gal alpha 1,3 Gal NIH3T3细胞异种移植免疫球蛋白M 免疫球蛋白G 补体

反义猪α(1,3)半乳糖转移酶转基因小鼠的人鼠异种反应性降低(英文)

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Acta Pharmacologica Sinica 2001年第3期22卷 41-48页

作者：马映华周筱刚胡佳华费俭夏国宏郭礼和中国科学院上海生命科学研究院生物化学和细胞生物学研究所中国科学院上海生命科学研究院生物化学和细胞生物学研究所上海中国 200031

目的:研究体内α(1,3)半乳糖转移酶α(1,3)GT反义抑制降低Galα(1,3)Gal(Gal表位)异种抗原的作用。方法:原核显微注射法产生转基因小鼠,PCR和Southern-blot鉴定转基因的整合,RT-PCR检测小鼠α(1,3)GT的表达,组织学染色检查脾脏形态,免... 详细信息

目的:研究体内α(1,3)半乳糖转移酶α(1,3)GT反义抑制降低Galα(1,3)Gal(Gal表位)异种抗原的作用。方法:原核显微注射法产生转基因小鼠,PCR和Southern-blot鉴定转基因的整合,RT-PCR检测小鼠α(1,3)GT的表达,组织学染色检查脾脏形态,免疫荧光检测Gal表位,流式细胞仪分析人血清中异种天然抗体(IgM和IgG)和补体(C3c)对鼠源细胞的结合。结果:猪反义α(1,3)半乳糖转移酶转基因小鼠发育正常,但部分杂合体小鼠脾脏有细胞坏死特征。转基因小鼠细胞表面Gal表位数量明显减少。与野生型对照相比,转基因小鼠多种组织的细胞对人血清异种天然抗体的结合降低30％-60％,对补体的结合降低40％-50％。结论:通过反义基因抑制α(1,3)半乳糖转移酶的表达能有效降低人异种反应性。

关键词：表位半乳糖转移酶类异种移植荧光抗体技术反义DNA 逆转录聚合酶链反应 DNA印迹法猪

人α-半乳糖苷酶的表达抑制NIH 3T3细胞主要异种抗原表位Galα(1,3)Gal的生成(英文)

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Acta Pharmacologica Sinica 2003年第10期24卷 35-40+110-111页

作者：闫景莲余路阳朱丽华郭礼和中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所上海 200031 中国

目的:检测人α-半乳糖苷酶在NIH3T3细胞系中对Gal抗原表位生成的抑制作用。方法:流式细胞术比较G抗原、H抗原和人天然抗体(IgG和IgM)的表达水平,Western blot检测G抗原糖蛋白的表达。四唑盐(MTT)比色试验检测NIH3T3细胞在人血清介导的... 详细信息

目的:检测人α-半乳糖苷酶在NIH3T3细胞系中对Gal抗原表位生成的抑制作用。方法:流式细胞术比较G抗原、H抗原和人天然抗体(IgG和IgM)的表达水平,Western blot检测G抗原糖蛋白的表达。四唑盐(MTT)比色试验检测NIH3T3细胞在人血清介导的裂解作用下的活力。结果:克隆了人α-半乳糖苷酶并在NIH3T3细胞上建立了永久细胞系,Western blot结果表明,在表达人α-半乳糖苷酶的NIH3T3细胞中,人的天然抗体与细胞表面糖蛋白的结合能力显著降低,甚至完全消失,同时凝集素Gs-IB4结合分析也进一步证明人α半乳糖苷酶的稳定表达能有效地抑制NIH3T3细胞上Gal抗原表位的生成,流式细胞检测结果则表明,由Gal抗原表位与人IgG,IgM和3C3c介导的异种反应性分别降低了73.4％,22.3％和47.9％,随后发生的细胞裂解反应也被显著抑制。结论:人α-半乳糖苷酶能够有效抑制鼠成纤维细胞NIH 3T3细胞表面Gal抗原表位的生成以及Gal抗原表位与人天然抗体共同介导的免疫排斥。

关键词：人α-半乳糖苷酶 Gal表位异种移植 NIH3T3细胞

过量表达GABA转运蛋白-1的转基因小鼠对药物诱发癫痫易感(英文)

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Acta Pharmacologica Sinica 2003年第10期24卷 41-45+111页

作者：赵文娟马映华费俭梅镇彤郭礼和中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所上海 200031 中国中国科学院上海生理学研究所

目的:应用过量表达GABA转运蛋白Ⅰ(GAT-1)的转基因小鼠研究GAT-1在癫痫发生中的作用。方法:采用腹腔注射戊四唑(PTZ),印防己毒素(PIC)或红藻氨酸(KA)诱导的癫痫发作为模型,比较GAT-1转基因小鼠和C57BL/6J对照小鼠阵挛性发作和强直性痉... 详细信息

目的:应用过量表达GABA转运蛋白Ⅰ(GAT-1)的转基因小鼠研究GAT-1在癫痫发生中的作用。方法:采用腹腔注射戊四唑(PTZ),印防己毒素(PIC)或红藻氨酸(KA)诱导的癫痫发作为模型,比较GAT-1转基因小鼠和C57BL/6J对照小鼠阵挛性发作和强直性痉挛发生的百分率及潜伏期.结果:GAT-1转基因小鼠不但对不同剂量GABAA受体抑制剂PTZ,PIC,也对谷氨酸受体激动剂KA诱导的癫痫易感.GAT-1抑制剂ethyl nipecotate可明显减轻PTZ诱导的癫痫发作。结论:GAT-1转基因小鼠对癫痫易感证明GABA系统参与了癫痫发生,并且该转基因小鼠模型可作为研究癫痫发生的有用动物模型。

关键词：神经递质转运体载体蛋白质类癫痫 GABA 戊四唑印防己毒素红藻氨酸 ethyl nipecotate 转基因小鼠