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胆碱脱氢酶的变性及其构象研究

Acta Biochimica et Biophysica Sinica 1997年第1期29卷 82-87页

作者：傅晓红蔡澎林其谁中国科学院上海生物化学研究所分子生物学国家重点实验室中国科学院上海生物化学研究所分子生物学国家重点实验室 200031

增溶胆碱脱氢酶（CDH）在较低的pH条件下易于失活,底物胆碱的存在有助于提高其pH稳定性。热变性酶蛋白分子中β结构所占比例上升,α螺旋结构比例下降,其中β结构的变化主要来自于β回折和310螺旋的贡献,底物对CDH的热变性具有一定的保... 详细信息

增溶胆碱脱氢酶（CDH）在较低的pH条件下易于失活,底物胆碱的存在有助于提高其pH稳定性。热变性酶蛋白分子中β结构所占比例上升,α螺旋结构比例下降,其中β结构的变化主要来自于β回折和310螺旋的贡献,底物对CDH的热变性具有一定的保护作用。在完全SDS变性和有底物保护的蛋白质分子中310螺旋的比例分别为33%和31.2%,β回折比例分别为29%和10.6%,此外在α螺旋、无规卷曲等所占的比例方面,在底物保护下经变性处理的CDH蛋白的构象都与天然胆碱脱氢酶相近。

关键词：胆碱脱氢酶胆碱变性构象

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脱脂蛋白A-Ⅰ模型多肽与脂质体的相互作用

Acta Biochimica et Biophysica Sinica 1997年第1期29卷 8-16页

作者：王庆达崔大敷林其谁中国科学院上海生物化学研究所分子生物学国家重点实验室中国科学院上海生物化学研究所分子生物学国家重点实验室 200031

根据脱脂蛋白的脂结合区序列合成了2个两亲性多肽Ampl和Amp2,Amp2以缬氨酸残基取代了Ampl第4位的赖氨酸残基。内源荧光光谱、包埋钙氯黄素的脂质体的渗漏、碘化物和丙烯酰胺对多肽色氨酸残基的淬灭、圆二色谱以及用自旋标记的磷脂测定... 详细信息

根据脱脂蛋白的脂结合区序列合成了2个两亲性多肽Ampl和Amp2,Amp2以缬氨酸残基取代了Ampl第4位的赖氨酸残基。内源荧光光谱、包埋钙氯黄素的脂质体的渗漏、碘化物和丙烯酰胺对多肽色氨酸残基的淬灭、圆二色谱以及用自旋标记的磷脂测定多肽色氨酸残基的插膜深度等研究均表明,Ampl与脂双层的作用强于Amp2,推测A类两亲性α螺旋以长轴平行于膜平面的方式埋膜,而且两亲性多肽亲水/疏水界面上的带正电残基与脂双层中带负电的磷脂头的静电作用对多肽与磷脂的亲和力有重要意义。

关键词：两亲性多肽脂质体多肽-磷脂相互作用脱脂蛋白

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头孢菌素酰化酶

生物化学与生物物理进展 1998年第3期25卷 238-242页

作者：李勇王恩多中国科学院上海生物化学研究所分子生物学国家重点实验室

氨基头孢烷酸（７ａｍｉｎｏｃｅｐｈａｌｏｓｐｏｒａｎｉｃａｃｉｄ，７ＡＣＡ）是医药工业合成大多数头孢菌素的重要原料．头孢菌素酰化酶（ｃｅｐｈａｌｏｓｐｏｒｉｎａｃｙｌａｓｅ，ＣＡ）催化头孢菌素Ｃ（ＣＰＣ）和戊二... 详细信息

氨基头孢烷酸（７ａｍｉｎｏｃｅｐｈａｌｏｓｐｏｒａｎｉｃａｃｉｄ，７ＡＣＡ）是医药工业合成大多数头孢菌素的重要原料．头孢菌素酰化酶（ｃｅｐｈａｌｏｓｐｏｒｉｎａｃｙｌａｓｅ，ＣＡ）催化头孢菌素Ｃ（ＣＰＣ）和戊二酰７氨基头孢烷酸（ＧＬ７ＡＣＡ）的水解反应，生成７ＡＣＡ．根据ＣＡ催化底物的不同，可将其划分为两类：ＣＰＣ酰化酶和ＧＬ７ＡＣＡ酰化酶．由ＣＡ的同源性、分子质量大小和基因结构，可以把头孢菌素酰化酶划分为五种；讨论了酶的基本性质．通过ＣＡ与Ｎ端亲核水解酶（Ｎｔｎ水解酶）的比较，推测ＣＡ属于Ｎｔｎ水解酶，并由此可以进一步理解它们的生理功能．

关键词：头孢菌素酰化酶 7-氨基头孢烷酸

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~3H-胸腺嘧啶核苷参入法测定胰岛素促生长活性

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 1997年第1期29卷 88-91页

作者：史民景乃禾冯佑民中国科学院上海生物化学研究所分子生物学国家重点实验室中国科学院上海生物化学研究所分子生物学国家重点实验室 200031

利用3H-胸腺嘧啶核苷参入方法,在24孔板和96孔板培养的小鼠乳腺癌细胞GR2H6中,建立了胰岛素促细胞生长活性的测定体系。无血清培养条件下,胰岛素可以刺激GR2H6细胞的DNA合成,其最大刺激比对照组提高了3～5倍,半最大刺激所需剂量(ED50)可... 详细信息

利用3H-胸腺嘧啶核苷参入方法,在24孔板和96孔板培养的小鼠乳腺癌细胞GR2H6中,建立了胰岛素促细胞生长活性的测定体系。无血清培养条件下,胰岛素可以刺激GR2H6细胞的DNA合成,其最大刺激比对照组提高了3～5倍,半最大刺激所需剂量(ED50)可达100～200 ng/ml左右。这一方法具有操作简便、周期较短和便于进行大量样品分析和测试等优点,它为研究胰岛素促生长功能与结构的关系提供了适当的新研究体系。

关键词：胰岛素促生长活性生物测活系统 ~3H-胸腺嘧啶核苷

一个未知的特异结合雌激素效应元件编码链的单链结合蛋白

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 1996年第4期28卷 404-411页

作者：朱国璋刘峻张友端张永莲中国科学院上海生物化学研究所分子生物学国家重点实验室

本文介绍一个不是雌激素受体（ＥＲ）却能专一地结合雌激素效应元件（ＥＲＥ）编码单链的单链结合蛋白，对此蛋白在细胞中的定位、组织中的分布、热稳定性、同二价金属离子的关系作一初步研究。发现其受雌激素负调控。此蛋白在人病理样... 详细信息

本文介绍一个不是雌激素受体（ＥＲ）却能专一地结合雌激素效应元件（ＥＲＥ）编码单链的单链结合蛋白，对此蛋白在细胞中的定位、组织中的分布、热稳定性、同二价金属离子的关系作一初步研究。发现其受雌激素负调控。此蛋白在人病理样品２９例乳癌中同ＥＲ的含量似有一定的负相关关系，讨论了上述结果的意义。

关键词：雌激素效应元件雌激素受体单链结合蛋白

酵母转录因子PHO81基因的上游序列功能分析

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 1999年第1期31卷 85-91页

作者：夏赞贤敖世洲中国科学院上海生物化学研究所分子生物学国家重点实验室

利用ＰＨＯ８１ｌａｃＺ融合基因，对它的上游进行缺失分析，发现有两个区域对ＰＨＯ８１基因的表达是必需的：－４０１～－２８９ｂｐ和－１０１２～－８０１ｂｐ。比较ＰＨＯ８１和ＰＨＯ５，ＰＨＯ８４基因上游，未发现有较高同源... 详细信息

利用ＰＨＯ８１ｌａｃＺ融合基因，对它的上游进行缺失分析，发现有两个区域对ＰＨＯ８１基因的表达是必需的：－４０１～－２８９ｂｐ和－１０１２～－８０１ｂｐ。比较ＰＨＯ８１和ＰＨＯ５，ＰＨＯ８４基因上游，未发现有较高同源性的序列存在，但在－４０１～－２８９ｂｐ区域有ＰＨＯ４蛋白结合位点的核心序列５′ＣＡＣＧＴＧ／Ｔ３′，以及ＣＡＣＧＴＧ／Ｔ两侧富含Ａ／Ｔ的序列（可能是ＰＨＯ２结合位点）。推测－４０１～－２８９ｂｐ包含了ＰＨＯ８１的上游激活序列（ＵＡＳ），－１０１２～－８０１ｂｐ可能起增强的作用。用酵母总蛋白质对－１０１２～－８０１ｂｐ进行凝胶阻抑电泳分析，证明有未知的蛋白因子结合在这个区域。

关键词： PHO81上游序列缺失分析凝胶阻抑电泳分析

磷脂组成对脱脂蛋白模型多肽与脂质体相互作用的影响

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 1996年第6期28卷 624-632页

作者：王庆达崔大敷林其谁中国科学院上海生物化学研究所分子生物学国家重点实验室

根据脱脂蛋白的脂结合区序列合成了两个两亲性多肽Ａｍｐ１和Ａｍｐ２，在Ａｍｐ２中缬氨酸残基取代了Ａｍｐ１第４位的赖氨酸残基。用内源荧光谱发射峰的蓝移、包埋的钙氯黄素在脂质体中的渗漏、丙烯酰胺对多肽色氨酸残基的淬灭等手段... 详细信息

根据脱脂蛋白的脂结合区序列合成了两个两亲性多肽Ａｍｐ１和Ａｍｐ２，在Ａｍｐ２中缬氨酸残基取代了Ａｍｐ１第４位的赖氨酸残基。用内源荧光谱发射峰的蓝移、包埋的钙氯黄素在脂质体中的渗漏、丙烯酰胺对多肽色氨酸残基的淬灭等手段比较了Ａｍｐ１与ＡｍＰ２与具有不同磷脂组成的脂质体的相互作用，并研究了温度的影响。Ａｍｐ１与酸性磷脂作用较强，而Ａｍｐ２与中性磷脂（卵磷脂）作用较强。多肽与脂质体的相互作用随脂酰链不饱和程度提高以及温度升高而增强，但随前者增强的程度更大。

关键词：两亲性多肽脂质体多肽-磷脂相互作用磷脂组成

PHO4和PHO2蛋白与PHO81基因调控序列的相互作用

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生物化学与生物物理学报 1999年第2期31卷 83-88页

作者：夏赞贤敖世洲中国科学院上海生物化学研究所分子生物学国家重点实验室

高效表达并纯化了ＰＨＯ４和ＰＨＯ２蛋白，凝胶阻抑电泳分析证明了ＰＨＯ４和ＰＨＯ２蛋白与ＰＨＯ８１上游－４０１～－２８９ｂｐ片段的结合，定点突变ＰＨＯ２的２３０位丝氨酸为天冬氨酸或丙氨酸，不影响ＰＨＯ２蛋白与此片段的结... 详细信息

高效表达并纯化了ＰＨＯ４和ＰＨＯ２蛋白，凝胶阻抑电泳分析证明了ＰＨＯ４和ＰＨＯ２蛋白与ＰＨＯ８１上游－４０１～－２８９ｂｐ片段的结合，定点突变ＰＨＯ２的２３０位丝氨酸为天冬氨酸或丙氨酸，不影响ＰＨＯ２蛋白与此片段的结合。足迹法分析证明了ＰＨＯ４结合在ＰＨＯ８１基因上游的－３５４～－３３３ｂｐ，ＰＨＯ２结合在－３４１～－３３４ｂｐ。因此，这些结果表明－４０１～－２８９ｂｐ包含了ＰＨＯ８１的上游激活序列（ＵＡＳ），ＰＨＯ４和ＰＨＯ２蛋白共同作用在这个区域，调节ＰＨＯ８１基因的转录。

关键词： PHO81 PHO4和PHO2 凝胶阻抑电泳分析足迹法分析上游激活序列

酵母转录因子PHO81锚蛋白重复序列表达和功能分析

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生物化学与生物物理学报 1999年第2期31卷 77-82页

作者：夏赞贤敖世洲中国科学院上海生物化学研究所分子生物学国家重点实验室

酵母转录因子ＰＨＯ８１蛋白含有６个锚蛋白（ａｎｋｙｒｉｎ，ＡＮＫ）重复序列。将ＰＨＯ８１锚蛋白重复序列与谷胱甘肽转移酶（ＧＳＴ）融合表达（ＧＳＴＡＮＫ），表达产物以包含体形式存在。利用氧化型和还原型谷胱甘肽系统对包... 详细信息

酵母转录因子ＰＨＯ８１蛋白含有６个锚蛋白（ａｎｋｙｒｉｎ，ＡＮＫ）重复序列。将ＰＨＯ８１锚蛋白重复序列与谷胱甘肽转移酶（ＧＳＴ）融合表达（ＧＳＴＡＮＫ），表达产物以包含体形式存在。利用氧化型和还原型谷胱甘肽系统对包含体进行复性，得到了可溶性蛋白，亲和纯化后，进行了活性分析。通过免疫共沉淀，分别制备了ＰＨＯ８５ＰＨＯ８０和ＰＨＯ８５ＰＡＰ１激酶复合物，用重组的ＰＨＯ４蛋白作底物，在激酶反应体系中加入ＧＳＴＡＮＫ，发现它能抑制这两个激酶复合物对ＰＨＯ４蛋白的磷酸化。ＰＨＯ８１蛋白的锚蛋白重复序列能与ＰＨＯ８５ＰＨＯ８０或ＰＨＯ８５ＰＡＰ１复合物相互作用，抑制它们的激酶活性，在ＰＨＯ８１蛋白与其它蛋白因子相互作用中起着重要作用。

关键词： PHO81 锚蛋白重复序列复性激酶复合物抑制活性