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农杆菌注射法瞬时转化荔枝果实组织的研究

热带作物学报 2019年第12期40卷 2405-2410页

作者：王树军王果李焕苓孙进华李芳王家保中国热带农业科学院环境与植物保护研究所

为了寻找一种高效的荔枝果实瞬时基因表达方法,本研究以荔枝品种‘新球蜜荔’(***.‘Xinqiumili’)为试材,利用农杆菌注射法对荔枝果实组织进行转化,研究了果实发育时期、菌株种类、注射部位、取样时间、菌液浓度等对转化效率的影响。... 详细信息

为了寻找一种高效的荔枝果实瞬时基因表达方法,本研究以荔枝品种‘新球蜜荔’(***.‘Xinqiumili’)为试材,利用农杆菌注射法对荔枝果实组织进行转化,研究了果实发育时期、菌株种类、注射部位、取样时间、菌液浓度等对转化效率的影响。结果表明:选择果肉已完全包裹种子的Ⅱb期果实进行连体注射,在果柄、果皮、种子、果肉分别注入OD600值为2.4的农杆菌菌株GV3101,4d后取样进行检测,4个组织的GUS染色率较高。本研究成功建立了适用于荔枝果实的基因瞬时表达系统,为今后快速鉴定荔枝果实相关基因功能提供了基础。

关键词：农杆菌注射 ‘新球蜜荔’果实瞬时表达 GUS检测

海南苦楝丛枝病植原体核糖体蛋白基因片段序列分析

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2008年第12期36卷 83-87页

作者：车海彦刘先宝符瑞益叶莎冰罗大全中国热带农业科学院环境与植物保护研究所海南省热带农业有害生物检测监控重点实验室海南儋州571737

【目的】利用分子生物学方法分析采自海南儋州的苦楝丛枝病植原体核糖体蛋白(rp)基因,从亚组水平上确定苦楝丛枝病植原体的分类地位。【方法】利用植原体核糖体蛋白基因通用引物对rpF1/rpR1,应用PCR技术对苦楝丛枝病植原体的核糖体蛋白... 详细信息

【目的】利用分子生物学方法分析采自海南儋州的苦楝丛枝病植原体核糖体蛋白(rp)基因,从亚组水平上确定苦楝丛枝病植原体的分类地位。【方法】利用植原体核糖体蛋白基因通用引物对rpF1/rpR1,应用PCR技术对苦楝丛枝病植原体的核糖体蛋白基因进行扩增,对其核苷酸序列进行测定并分析。【结果】通过PCR扩增得到约1.2 kb的特异片段,测序结果表明该片段长1 240 bp,包括rps19基因的3′区域,rpl22和rps3基因的全部区域。进一步分析发现,该片段与苦楝丛枝病贵州株系(Chinaberry witches'-broom,CWB-GZh)的亲缘关系最近,核苷酸同源性达99.9%。基于核糖体蛋白基因核苷酸序列,构建了海南苦楝丛枝病植原体与其他18个已知分类地位植原体的系统分类树状图,结果表明,引起海南苦楝丛枝病的植原体与16SrⅠ-B亚组植原体越南苦楝黄化、苦楝丛枝贵州株系和苦楝丛枝云南株系在同一条进化枝上。【结论】报道了海南苦楝丛枝病植原体的核糖体蛋白基因序列,海南苦楝丛枝病植原体属于16SrⅠ-B。

关键词：苦楝丛枝病植原体核糖体蛋白基因序列分析

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见血封喉内生真菌的分离鉴定及抑菌活性研究

中草药 2009年第6期40卷 955-957页

作者：戴文君张秀环黄贵修戴好富梅文莉中国热带农业科学院热带生物技术研究所海南海口571101 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所海南儋州571737

目的分离和鉴定见血封喉Antiaris toxicaria根韧皮部中的内生真菌,并检测其抑菌活性。方法以金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌methicillin-resistantStaphylococcus aureus(MRSA)和白色念珠菌Candida albicans作为指示菌,采用杯碟法对内生真菌发酵上清液进行抑菌试验。结果从见血封喉根的韧皮部中分离出6株内生真菌,经形态鉴定分属于聚端孢霉属(Trichothecium *** Fr.)、枝顶孢霉属(Acremonium *** Fr.)和丝核菌属(Rhizoctonia *** Fr.)。其中内生真菌J6的发酵上清液对MR-SA有抑菌活性,抑菌圈直径为18 mm。结论首次对见血封喉内生真菌进行了研究,内生真菌J6对MRSA有明显的抑菌活性,其抑菌活性成分值得进一步研究。

关键词：见血封喉内生真菌抑菌活性

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一株拮抗放线菌菌株JFA-001的鉴定

植物保护学报 2008年第1期35卷 95-96页

作者：代鹏徐雪莲唐复润黄贵修黄俊生中国热带农业科学院环境与植物保护研究所海南省热带农业有害生物检测监控重点实验室海南儋州571737

放线菌是具有巨大应用价值的微生物类群。近年来，利用放线菌产生的抗生素所制备的新农药已逐渐成为无公害农药的主体，农用抗生素的筛选和应用也已成为农业微生物领域的研究重点，世界各国对放线菌的研究与资源开发非常重视。热带地区... 详细信息

放线菌是具有巨大应用价值的微生物类群。近年来，利用放线菌产生的抗生素所制备的新农药已逐渐成为无公害农药的主体，农用抗生素的筛选和应用也已成为农业微生物领域的研究重点，世界各国对放线菌的研究与资源开发非常重视。热带地区作为一个独特的生态区域，生态环境复杂，植物种类众多，且气候温暖湿润，对放线菌和病原微生物的滋生蔓延十分有利。

关键词：拮抗放线菌农用抗生素鉴定菌株微生物类群无公害农药病原微生物生物领域

芒果炭疽病菌β-微管蛋白基因的克隆及其与多菌灵抗药性发生的关系

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微生物学报 2004年第6期44卷 827-829页

作者：詹儒林郑服丛中国热带农业科学院南亚热带作物研究所湛江524091 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所儋州571737

参照豆科合萌属 (Aeschynomene)作物炭疽病菌的tub1和tub2基因序列设计了 2对引物 ,分别从芒果 (Man gifera)炭疽病菌对多菌灵 (MBC)田间抗药性 (MBCR)和敏感 (MBCS)的菌株中扩增 β_微管蛋白基因。结果只有以tub2为参照设计的引物扩增... 详细信息

参照豆科合萌属 (Aeschynomene)作物炭疽病菌的tub1和tub2基因序列设计了 2对引物 ,分别从芒果 (Man gifera)炭疽病菌对多菌灵 (MBC)田间抗药性 (MBCR)和敏感 (MBCS)的菌株中扩增 β_微管蛋白基因。结果只有以tub2为参照设计的引物扩增到了特异片段。进一步对全基因进行了克隆和测序。该基因序列全长 1344bp ,编码4 4 7aa ,其核苷酸和氨基酸序列与豆科合萌属炭疽病菌的tub2基因高度同源。对芒果炭疽病菌抗、感菌株 β_微管蛋白氨基酸序列进行比较分析 ,发现第 181、2 37和 36 3位氨基酸发生了突变 ,而其它位置 (如第 198位或 2 0 0位 )

关键词：芒果炭疽病菌 β-微管蛋白多菌灵抗药性点突变

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金龟子绿僵菌菌株生长环境变量的优化

生态学杂志 2008年第8期27卷 1322-1326页

作者：杨腊英甘露刘丽文明富黄俊生中国热带农业科学院环境与植物保护研究所海南省热带农业有害生物检测监控重点实验室海南儋州571737 华南热带农业大学农学院海南儋州571737

金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae ***)是一种广谱的昆虫病原真菌,提高菌株的生长速率及产孢量具有重要的意义。分别对2株金龟子绿僵菌菌株MA4与MAlm1的菌丝生长及次代产孢具有影响的培养温度、培养基初始pH、装液比、光照及微量元... 详细信息

金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae ***)是一种广谱的昆虫病原真菌,提高菌株的生长速率及产孢量具有重要的意义。分别对2株金龟子绿僵菌菌株MA4与MAlm1的菌丝生长及次代产孢具有影响的培养温度、培养基初始pH、装液比、光照及微量元素等环境因素进行了测定。经过优化得到2菌株最佳培养条件分别为:MA4菌株在28℃、pH7、装液比为75ml/250ml、加入微量元素Mn全光照培养时生长最好、次代产孢量最高;MAlm1菌株在28℃、pH9、装液比为75ml/250ml、加入微量元素Cu、黑暗培养时生长最好、次代产孢量最高。

关键词：金龟子绿僵菌环境因子菌丝生长量次代产孢量

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解淀粉芽胞杆菌JNC2摇瓶发酵条件优化

草业科学 2019年第8期36卷 2159-2167页

作者：梁艳琼吴伟怀习金根李锐郑金龙黄兴贺春萍易克贤中国热带农业科学院环境与植物保护研究所/农业部热带农林有害生物入侵检测与控制重点开放实验室/海南省热带农业有害生物检测监控重点实验室

以菌体量和发酵滤液抑制柱花草炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides)活性为指标,通过单因素和正交试验方法对解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)JNC2菌株的最适发酵培养基成分及发酵条件进行研究。结果表明:JNC2菌株最佳... 详细信息

以菌体量和发酵滤液抑制柱花草炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides)活性为指标,通过单因素和正交试验方法对解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)JNC2菌株的最适发酵培养基成分及发酵条件进行研究。结果表明:JNC2菌株最佳培养基为木糖2%,蛋白胨0.4%,酵母粉0.8%,氯化铵0.6%,硫酸镁0.2%;最佳发酵条件为初始pH 6.0,250 mL三角瓶装液量为60 mL,接种量体积分数7%,发酵温度34℃,转速200 r·min^–1,发酵时间72 h,优化后发酵滤液的抑菌活性显著提高了32.61%。

关键词：解淀粉芽孢杆菌发酵条件优化抑菌活性 Colletotrichum gloeosporioides

禾谷孢囊线虫果胶酸裂解酶新基因Ha-pel-1的鉴定与表达特征分析

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中国农业科学 2017年第19期50卷 3723-3732页

作者：李新顾晓川龙海波彭焕黄文坤彭德良中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室中国热带农业科学院橡胶研究所中国热带农业科学院环境与植物保护研究所农业部热带作物有害生物综合治理重点实验室

【目的】禾谷孢囊线虫(Heterodera avenae)是一种严重危害麦类作物的重要植物病原线虫,对农业生产造成巨大的经济损失,然而其致病机制和有效防控方法还有待进一步研究。通过克隆禾谷孢囊线虫的果胶酸裂解酶新基因Ha-pel-1,并对其表达特... 详细信息

【目的】禾谷孢囊线虫(Heterodera avenae)是一种严重危害麦类作物的重要植物病原线虫,对农业生产造成巨大的经济损失,然而其致病机制和有效防控方法还有待进一步研究。通过克隆禾谷孢囊线虫的果胶酸裂解酶新基因Ha-pel-1,并对其表达特性进行分析,为后续探究Ha-pel-1的基因功能及其与寄主的互作提供理论依据,并为探讨禾谷孢囊线虫防控途径提供新思路。【方法】采用同源克隆结合RACE技术从禾谷孢囊线虫中克隆出一个新的果胶酸裂解酶基因;采用DNAMAN、Clustal、Signal P 4.0 Server和GSDS等相关生物信息学软件和在线工具分析该基因的核苷酸和氨基酸序列,并使用MEGA 5.0构建系统进化树;采用原位杂交和半定量PCR方法确定该基因的在禾谷孢囊线虫中的表达部位及其在线虫不同龄期中的表达情况。【结果】从禾谷孢囊线虫中成功克隆出一个果胶酸裂解酶基因Ha-pel-1(Gen Bank登录号GQ998895),该基因c DNA全长1 717 bp,包含一个长度为1 563 bp的开放阅读框,编码一个长度为521个氨基酸残基的蛋白,其理论分子量为57.5 k D,理论等电点为8.52。从线虫基因组DNA中扩增获得长度为7 199 bp的Ha-pel-1基因组全长,基因结构显示分析发现,Ha-pel-1基因组包含14个外显子和13个内含子,除第3个内含子剪接位点是GC-AG外,其余12个内含子都符合真核生物基因剪接位点GT-AG规则。同源比对结果表明,预测蛋白Ha-PEL-1的C端与大豆孢囊线虫果胶酸裂解酶HG-PEL-1、甜菜孢囊线虫果胶酸裂解酶HS-PEL-1均有67%的一致性和83%的相似性;此外,其N端信号肽后比报道的其他植物寄生线虫果胶酸裂解酶多出一段长度为254个氨基酸残基的序列,这段序列中,靠近N端的184个氨基酸残基与数据库中的蛋白均无相似性,而靠近C端有70个氨基酸残基(Lys205—Glu274)与韦塞尔斯布朗病毒NS5蛋白(注册号3ELD)的甲基转移酶区域有32%的一致性和47%的相似性。氨基酸序列分析发现,预测蛋白Ha-PEL-1包含一个长度为20个氨基酸残基的信号肽和4个果胶酸裂解酶第3家族(PL3)的高度保守区域以及多个保守的半胱氨酸残基;系统进化分析发现,Ha-pel-1及其他已报道的线虫果胶酸裂解酶基因与细菌和真菌来源的PEL聚在一个大的分支中;原位杂交结果显示Ha-pel-1主要在禾谷孢囊线虫亚腹食道腺中表达;半定量RT-PCR确定Ha-pel-1在寄生前和寄生后的2龄幼虫中大量表达。【结论】通过对禾谷孢囊线虫中一个新果胶酸裂解酶基因Ha-pel-1的克隆和表达特征分析,揭示该基因与禾谷孢囊线虫的侵染和寄生过程密切相关。

关键词：禾谷孢囊线虫果胶酸裂解酶基因克隆原位杂交发育表达分析

水杨酸壳聚糖复合涂膜对芒果采后病害防治效果的研究

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广东农业科学 2009年第3期36卷 121-122,126页

作者：高兆银佘露杨凤珍李敏胡美姣中国热带农业科学院环境与植物保护研究所海南儋州571737 热带农业有害生物检测监控中心海南儋州571737 海南大学环境与植物保护学院海南儋州571737

研究了不同浓度水杨酸壳聚糖复合涂膜对台农1号芒果采后病害的防治效果,结果表明:水杨酸壳聚糖复合涂膜能够延缓芒果后熟进程,延长芒果贮藏时间,效果优于单一的壳聚糖涂膜;水杨酸壳聚糖复合涂膜对炭疽病和蒂腐病均有一定的抑制效果,在... 详细信息

研究了不同浓度水杨酸壳聚糖复合涂膜对台农1号芒果采后病害的防治效果,结果表明:水杨酸壳聚糖复合涂膜能够延缓芒果后熟进程,延长芒果贮藏时间,效果优于单一的壳聚糖涂膜;水杨酸壳聚糖复合涂膜对炭疽病和蒂腐病均有一定的抑制效果,在水杨酸浓度为0.5～2.0 mmol/L的条件下,随着水杨酸浓度的增加,防治效果越来越明显,其中以2.0 mmol/L水杨酸壳聚糖复合涂膜处理的效果最好,其对炭疽病和蒂腐病的防效分别为42.15%和87.19%,对蒂腐病的防治效果比炭疽病更明显。

关键词：水杨酸壳聚糖复合涂膜芒果采后病害