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橡胶树甲基化过滤文库的构建

遗传 2010年第10期32卷 1071-1076页

作者：黄关青华玉伟高战黄华孙中国热带农业科学院橡胶研究所、农业部橡胶树生物学重点开放实验室、国家橡胶树育种中心海南儋州571737

为高通量富集橡胶树基因编码序列,文章首次利用大肠杆菌McrBC限制修饰系统构建了巴西橡胶树基因组甲基化过滤文库。该文库未扩增和扩增后的滴度分别为2.6×106pfu/mL和9×109pfu/mL,阳性克隆率为86.4%,插入片段大小为1～2.5kb,平均长度... 详细信息

为高通量富集橡胶树基因编码序列,文章首次利用大肠杆菌McrBC限制修饰系统构建了巴西橡胶树基因组甲基化过滤文库。该文库未扩增和扩增后的滴度分别为2.6×106pfu/mL和9×109pfu/mL,阳性克隆率为86.4%,插入片段大小为1～2.5kb,平均长度为1.2kb。随机挑选100个克隆进行测序,共拼接出81个非冗余序列,其中包括6个重叠群(Contigs)和75个单一序列(Singlets),冗余度为17.35%。Blast分析发现,39.5%非冗余序列与Nr库中功能基因同源,14.81%与EST数据库中序列同源,32.1%序列为未知序列,且部分序列为开花调控、抗虫和抗病等功能相关的同源基因。橡胶树甲基化文库的建立为橡胶树重要功能基因发现和克隆提供一条重要途径。

关键词：巴西橡胶树甲基化过滤基因富集文库构建

巴西橡胶树响应低温逆境的生理特征及其调控机制

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植物生理学报 2012年第4期48卷 318-324页

作者：王祥军李维国高新生吴春太张晓飞中国热带农业科学院橡胶研究所国家橡胶树育种中心农业部橡胶树生物学重点开放实验室海南儋州571737

低温是非传统植胶区巴西橡胶树(Hevea brasiliensis)种植的重要限制因子。低温能够引起巴西橡胶树细胞结构、原生质胶体特性、水分状况、细胞渗透压、光合作用、呼吸作用、物质代谢和保护酶系统等发生一系列改变,最终影响植株的生长发... 详细信息

低温是非传统植胶区巴西橡胶树(Hevea brasiliensis)种植的重要限制因子。低温能够引起巴西橡胶树细胞结构、原生质胶体特性、水分状况、细胞渗透压、光合作用、呼吸作用、物质代谢和保护酶系统等发生一系列改变,最终影响植株的生长发育。目前已从巴西橡胶树中克隆出一些抗寒相关基因,但是巴西橡胶树响应低温胁迫的调控机制仍不十分清楚。本文综述了巴西橡胶树对低温逆境响应的生理特征及其应答调控机制,以期为深入研究巴西橡胶树抗寒机制提供参考。

关键词：巴西橡胶树低温生理特征调控机制

以HbFT2基因为可视化标记的高效烟草遗传转化体系的构建与应用

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植物生理学报 2020年第7期56卷 1513-1522页

作者：李季畅姣 NAY CHI Ko Ko 华玉伟黄天带黄华孙中国热带农业科学院橡胶研究所农业农村部橡胶树生物学重点开放实验室海口571101

GUS、GFP、Luc和花青素合成调控基因等在遗传转化过程中常用作报告基因,但是它们只能对转化事件进行跟踪检测,无法对转化植株的生育期进行调控。本研究首先用橡胶树(Hevea brasiliensis)开花调控基因HbFT2替换pCAMBIA2301载体中的GUS构... 详细信息

GUS、GFP、Luc和花青素合成调控基因等在遗传转化过程中常用作报告基因,但是它们只能对转化事件进行跟踪检测,无法对转化植株的生育期进行调控。本研究首先用橡胶树(Hevea brasiliensis)开花调控基因HbFT2替换pCAMBIA2301载体中的GUS构建pCAMBIA2301-35S-nos-FT2过表达载体,然后通过农杆菌介导遗传转化体系转化烟草(Nicotiana tabacum),结果发现所有提早开花烟草均为转基因植株,而且这些转基因植株全生育期较野生型烟草大幅缩短2~3个月。同时,本研究利用该载体对橡胶树花青素合成调控基因HbAN1的功能在烟草中进行了快速验证。因此, HbFT2基因可以作为可视化标记快速筛选全生育期的烟草转化植株。

关键词： HbFT2 可视化标记缩短全生育期烟草遗传转化

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农杆菌vir基因诱导因子研究进展

中国生物工程杂志 2011年第7期31卷 126-132页

作者：邹智中国热带农业科学院橡胶研究所农业部橡胶树生物学重点开放实验室儋州571737

在众多遗传转化法中,农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导法以易操作、低费用、插入片段明确、拷贝数低等独特优点成为植物遗传转化的首选。然而,至今仍有许多物种不能被农杆菌转化。研究表明,农杆菌的转化能力是由位于染色体基因组... 详细信息

在众多遗传转化法中,农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导法以易操作、低费用、插入片段明确、拷贝数低等独特优点成为植物遗传转化的首选。然而,至今仍有许多物种不能被农杆菌转化。研究表明,农杆菌的转化能力是由位于染色体基因组之外Ti质粒上的vir基因决定的。在所有vir基因中,除virA和virG组成型表达外,其它vir基因的表达均需酚类化合物的诱导;糖类物质可增强酚类化合物对vir基因的诱导;低磷酸和酸性pH环境也可促进vir基因的诱导表达。文章论述了酚类化合物、糖类物质、低磷酸、酸性pH和培养温度等因素对农杆菌vir基因诱导表达的影响,以期为更好地利用这一天然载体及为提高转化效率提供依据。

关键词：根癌农杆菌 vir基因诱导表达

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巴西橡胶树转基因研究现状与展望

中国生物工程杂志 2010年第1期30卷 85-92页

作者：邹智杨礼富王真辉袁坤中国热带农业科学院橡胶研究所农业部橡胶树生物学重点开放实验室儋州571737

由于存在遗传背景狭窄、高度杂合化、育种周期长等特点,巴西橡胶树育种进展非常缓慢。转基因技术为拓展其的遗传范围、加速育种进程提供了契机。在过去20年里,橡胶树转基因研究取得了很大进展:成功应用的转化技术包括基因枪法和农杆菌... 详细信息

由于存在遗传背景狭窄、高度杂合化、育种周期长等特点,巴西橡胶树育种进展非常缓慢。转基因技术为拓展其的遗传范围、加速育种进程提供了契机。在过去20年里,橡胶树转基因研究取得了很大进展:成功应用的转化技术包括基因枪法和农杆菌介导法,受体材料包括花药和内珠被愈伤,育种目标涉及到提高胶乳产量、抗死皮和作为生物反应器等。但同时也存在组培程序不够成熟、转化技术和外植体比较单一、转化效率低下等问题。最后,对以后转化体系的优化、转基因育种方向进行了分析和展望。

关键词：橡胶树遗传转化农杆菌介导法基因枪法

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均匀设计优化橡胶树细胞悬浮系培养基

植物生理学通讯 2009年第2期45卷 163-168页

作者：吴紫云华玉伟黄华孙中国热带农业科学院橡胶研究所农业部橡胶树生物学重点开放实验室海南儋州571737

以橡胶树(Hevea brasiliensis)‘热研7-33-97’和杂交种杂交种B1(***×H. nitida)的细胞悬浮系为材料,用目测打分和生物量鲜重作为评判指标,进行KT(X1)、2,4-D(X2)、NAA(X3)3因素各12个水平以及肌醇(X4)、L-天冬酰胺(Asn)(X5)、水解酪蛋... 详细信息

以橡胶树(Hevea brasiliensis)‘热研7-33-97’和杂交种杂交种B1(***×H. nitida)的细胞悬浮系为材料,用目测打分和生物量鲜重作为评判指标,进行KT(X1)、2,4-D(X2)、NAA(X3)3因素各12个水平以及肌醇(X4)、L-天冬酰胺(Asn)(X5)、水解酪蛋白(CH)(X6)3因素各6个水平的混合水平均匀设计的结果表明,目测法作为评判细胞生长状况的指标含量优于生物量法,KT、2,4-D和NAA浓度对橡胶树细胞悬浮培养影响较大,用时应该适当保证KT浓度,降低2,4-D含量并提高NAA用量,肌醇、Asn和CH对细胞生长有一定作用,肌醇和Asn能维持细胞的良好生长,抑制细胞生物量的过快增长,Asn作用强于肌醇,CH对细胞生物量的增长有促进作用。

关键词：橡胶树细胞悬浮系均匀设计目测法

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橡胶树中橡胶的生物合成与调控

植物生理学通讯 2009年第12期45卷 1231-1238页

作者：邹智杨礼富王真辉袁坤中国热带农业科学院橡胶研究所/农业部橡胶树生物学重点开放实验室海南儋州571737

介绍橡胶树橡胶生物合成的分子过程、参与合成的主要酶类和辅助因子,以及割胶、生长调节物质(茉莉酸和乙烯等)和基因工程技术调控橡胶合成的研究进展。

关键词：橡胶树橡胶生物合成调控

植物原生质体融合研究进展及其在育种中的应用

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热带作物学报 2012年第8期33卷 1516-1521页

作者：戴雪梅黄天带孙爱花周权男李哲华玉伟中国热带农业科学院橡胶研究所农业部橡胶树生物学重点开放实验室国家橡胶树育种中心海南儋州571737

植物原生质体融合即体细胞杂交是有性杂交的重要有益补充。本文主要介绍植物原生质体融合技术(包括融合方法和融合方式)的研究进展及其在植物育种中的主要应用,并分析和探讨体细胞杂交育种在实践中存在的一些问题,同时对其应用前景作出... 详细信息

植物原生质体融合即体细胞杂交是有性杂交的重要有益补充。本文主要介绍植物原生质体融合技术(包括融合方法和融合方式)的研究进展及其在植物育种中的主要应用,并分析和探讨体细胞杂交育种在实践中存在的一些问题,同时对其应用前景作出展望。

关键词：原生质体融合体细胞杂交育种研究进展应用

巴西橡胶树胶乳磷脂酶A_2的分离纯化及部分酶学性质鉴定

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广西植物 2010年第6期30卷 876-880页

作者：邓治刘实忠校现周中国热带农业科学院橡胶研究所农业部橡胶树生物学重点开放实验室海南儋州571737

通过丙酮沉淀、DEAE-纤维素离子交换柱层析和Sephadex G-100凝胶过滤柱层析等分离纯化技术,对巴西橡胶树胶乳C-乳清磷脂酶A2进行分离纯化。用SDS-PAGE测定其亚基的相对分子量。测定该酶最适温度和pH,动力学常数Km和Vmax。并测定Ca2+和L... 详细信息

通过丙酮沉淀、DEAE-纤维素离子交换柱层析和Sephadex G-100凝胶过滤柱层析等分离纯化技术,对巴西橡胶树胶乳C-乳清磷脂酶A2进行分离纯化。用SDS-PAGE测定其亚基的相对分子量。测定该酶最适温度和pH,动力学常数Km和Vmax。并测定Ca2+和La3+对酶活性的影响。结果显示:该酶被纯化了49.47倍,产率为5.12%。SDS-PAGE检测为单一条带,其亚基相对分子量约43kDa。最适反应温度为37℃,最适反应pH为8.0,Km为0.44mmol·L-1,Vmax为7.22μmol.(***)-1。最适Ca2+浓度为50μmol·L-1,稀土元素La3+离子对磷脂酶A2活性有抑制作用,但加入Ca2+后可缓解La3+对磷脂酶A2活性的抑制作用。胶乳C-乳清磷脂酶A2与其他植物磷脂酶A2在Ca2+的依赖性上存在差异。研究结果为今后探索橡胶树胶乳磷脂酶A2的催化机理、调节机理及生理功能等奠定了基础。

关键词：巴西橡胶树磷脂酶A2 酶的纯化酶的性质