检索结果-南通市图书馆

重组外膜蛋白OmpK规模化高密度培养和诱导表达

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生物技术 2013年第3期23卷 60-62页

作者：陶家发赖迎迢孙承文任燕中国水产科学研究院珠江水产研究所农业部渔用药物创制重点实验室广东省水产动物免疫技术重点实验室广东广州510380

目的:为提高重组外膜蛋白Ompk规模化培养得率。方法:利用高密度培养,进行不同时间补料和升温诱导表达,测定不同培养方法的菌体量和蛋白诱导表达效果。结果:经5、50、500 L发酵罐多批次培养效果比较,采用培养4 h开始补料,6 h开始诱导表... 详细信息

目的:为提高重组外膜蛋白Ompk规模化培养得率。方法:利用高密度培养,进行不同时间补料和升温诱导表达,测定不同培养方法的菌体量和蛋白诱导表达效果。结果:经5、50、500 L发酵罐多批次培养效果比较,采用培养4 h开始补料,6 h开始诱导表达培养,工程菌体和外膜蛋白得率效果最佳。在5、50、500L发酵罐菌体得率分别为17.2、14.8、26.6 g/L,均高于普通发酵培养的菌体得率(平均得率不到5 g/L);在50、500L发酵罐外膜蛋白得率分别为61.6、198.0 mg/L,均高于其它批次。结论:初步确定了重组蛋白工程菌高密度规模化诱导表达培养方法。

关键词：高密度培养外膜蛋白 Ompk基因亚单位疫苗

杂交鳢TRAF2基因克隆、组织分布及对病原菌感染的应答分析

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基因组学与应用生物学 2021年第1期40卷 101-108页

作者：孔璐璐赵飞谭爱萍刘付翠邓玉婷姜兰中国水产科学研究院珠江水产研究所农业农村部渔用药物创制重点实验室广东省水产动物免疫技术重点实验室广州510380 上海海洋大学水产与生命学院上海201306

肿瘤坏死因子受体相关因子2 (tumor necrosis factor receptor-associated factor 2, TRAF2)是一种重要的胞内信号接头蛋白,参与激活NF-κB和MAPK信号通路,在免疫防御、炎症反应和细胞凋亡等过程发挥关键作用。为了探索杂交鳢(Channa ma... 详细信息

肿瘤坏死因子受体相关因子2 (tumor necrosis factor receptor-associated factor 2, TRAF2)是一种重要的胞内信号接头蛋白,参与激活NF-κB和MAPK信号通路,在免疫防御、炎症反应和细胞凋亡等过程发挥关键作用。为了探索杂交鳢(Channa maculate♀×Channa argus♂) TRAF2功能及其对两种病原菌感染的应答机制,本研究克隆获得杂交鳢TRAF2 (命名为CmaTRAF2)基因的完整开放阅读框(ORF),长度为1 566 bp,预测编码521个氨基酸,与龟壳攀鲈(Anabas testudineus)、杜氏鰤(Seriola dumerili) TRAF2蛋白序列相似性最高,都达到91%。与其他TRAF2相似,CmaTRAF2具有一个RING结构域、一个锌指结构域、一个TRAF结构域。系统发育分析表明CmaTRAF2与其他硬骨鱼类TRAF2聚为一支,其中与龟壳攀鲈TRAF2的亲缘性关系最近。实时荧光定量PCR检测分析显示CmaTRAF2在健康杂交鳢所检测的9种组织中广泛分布,其中脾脏中表达量最高,头肾中的表达量次之,肝脏中的表达量最低。采用鰤诺卡氏菌(Nocardia seriolae)腹腔注射感染杂交鳢后,肝脏、脾脏和头肾中CmaTRAF2的表达在感染后不同时间点总体呈现为上调趋势,且分别在10 h、1 d和2 d时达到最大值(P免疫应答反应。本研究可为进一步探索鱼类TRAF2的免疫防御和信号转导机制提供基础资料。

关键词：杂交鳢肿瘤坏死因子受体相关因子2 应答分析鰤诺卡氏菌舒伯特气单胞菌

中华鲟ASDIGIRR与ASTRAF6基因的克隆与表达

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水产学报 2021年第8期45卷 1296-1306页

作者：张利凤汤东东郑楚文邓丹郭慧芝张书环张文兵许巧情李宁求长江大学动物科学学院中国水产科学研究院珠江水产研究所广东省水产动物免疫技术重点实验室贵州中医药大学基础医学院

中华鲟是处在硬骨鱼类与软骨鱼类之间的中国古老的珍稀鱼类之一,但在人工繁殖和养殖过程中,容易受到不同疾病的危害,因此,需要深入研究其免疫调控,为其疾病预防提供理论依据。单个免疫球蛋白白细胞介素-1受体相关分子(SIGIRR)和肿瘤坏... 详细信息

中华鲟是处在硬骨鱼类与软骨鱼类之间的中国古老的珍稀鱼类之一,但在人工繁殖和养殖过程中,容易受到不同疾病的危害,因此,需要深入研究其免疫调控,为其疾病预防提供理论依据。单个免疫球蛋白白细胞介素-1受体相关分子(SIGIRR)和肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)是toll样受体(TLR)信号通路的2个重要的信号转导元件。本研究鉴定了中华鲟的SIGIRR和TRAF6的同源物,分别命名为ASDIGIRR (Acipenser sinensis DIGIRR)和ASTRAF6 (A. sinensis TRAF6),并研究它们在正常组织中的表达和Poly(I:C)诱导后的表达模式。结果显示,ASDIGIRR和ASTRAF6在健康鲟的10个组织中均有表达,且分别在肠道和头肾组织中表达量最高;用Poly (I:C)孵育中华鲟脾脏细胞后,ASDIGIRR在3 h时的表达量显著下调,在6 h时恢复至正常水平,后在24 h显著上调达到最高值,随后开始下调,至48 h时仍显著高于对照组,而ASTRAF6在6 h达到最高表达量,维持到24 h后再下调,48 h时下降至最低水平。研究表明,ASDIGIRR和ASTRAF6在中华鲟抵御病原入侵的免疫防御过程中起着重要作用。

关键词：中华鲟 ASDIGIRR ASTRAF6 Poly (I:C) 基因克隆基因表达

杂交鳢PKCθ基因克隆及其在两种病原菌感染后的表达分析

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基因组学与应用生物学 2020年第5期39卷 1990-1998页

作者：刘付翠赵飞何山谭爱萍张瑞泉邓玉婷姜兰中国水产科学研究院珠江水产研究所农业农村部渔用药物创制重点实验室广东省水产动物免疫技术重点实验室广州510380 上海海洋大学水产与生命学院上海201306

为初步探索鱼类PKCθ基因在抵御病原菌感染过程中的作用,本研究进行了杂交鳢(Channa maculata♀×***♂)PKCθ(CmaPKCθ)基因克隆及其在舒伯特气单胞菌(Aeromonas schubertii)、鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)感染后的表达分析。克隆... 详细信息

为初步探索鱼类PKCθ基因在抵御病原菌感染过程中的作用,本研究进行了杂交鳢(Channa maculata♀×***♂)PKCθ(CmaPKCθ)基因克隆及其在舒伯特气单胞菌(Aeromonas schubertii)、鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)感染后的表达分析。克隆获得CmaPKCθ的完整开放阅读框(ORF)长度为2151 bp,预测编码716个氨基酸,具有保守的C1、C2样、C3和C4结构域。Blast分析表明CmaPKCθ氨基酸序列与尖吻鲈(Lates calcarifer)PKCθ的同源性最高,达92%。氨基酸多重序列比对显示CmaPKCθ具有保守的磷酸化位点和泛素化位点。系统进化树结果显示杂交鳢与其他鱼类的PKCθ聚为一个分支,其中与尖吻鲈PKCθ亲缘关系最近。实时荧光定量PCR结果表明,CmaPKCθ在健康杂交鳢的所有被检组织中广泛表达,其中在肝脏中表达水平最高,其次为脾脏、胸腺和头肾,在肌肉中的表达量最低。舒伯特气单胞菌和鰤鱼诺卡氏菌分别感染杂交鳢后,其肝脏、脾脏和头肾分别在第5天、第5天、第12小时和第10天、第2天、第3天时达到表达峰值(p研究结果可为病原菌和鱼体的免疫互作机制研究及其病害防控提供参考。

关键词：杂交鳢 PKCθ 基因克隆病原菌表达分析

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病毒调控细胞自噬信号分子及其通路研究进展

基因组学与应用生物学 2020年第12期39卷 5631-5639页

作者：明月付小哲林强梁红茹刘礼辉牛银杰李宁求中国水产科学研究院珠江水产研究所农业农村部渔用药物创制重点实验室广东省水产动物免疫技术重点实验室广州510380 上海海洋大学水产与生命学院上海201306

近年来,病毒的复制增殖与细胞自噬两者之间的关系已成为人们研究的焦点,已有大量研究表明两者之间存在密切联系。细胞自噬是机体为抵抗外界干扰,维持正常能量代谢水平的一种发生在真核生物体内的相对保守的过程。而病毒因其不能自主复... 详细信息

近年来,病毒的复制增殖与细胞自噬两者之间的关系已成为人们研究的焦点,已有大量研究表明两者之间存在密切联系。细胞自噬是机体为抵抗外界干扰,维持正常能量代谢水平的一种发生在真核生物体内的相对保守的过程。而病毒因其不能自主复制增殖,依赖于相关宿主细胞代谢为其提供能量与原材料。研究发现,病原体入侵细胞可以抑制或诱发细胞自噬的发生,而细胞自噬的发生又与细胞内代谢水平密切相关,反过来细胞代谢改变影响病毒的复制增殖。本研究主要从自噬与病毒的相互关系、病毒启动自噬的信号分子、病毒调控自噬的信号通路这三个方面阐述病毒调控细胞自噬信号分子及其通路研究进展,旨在探讨细胞自噬及其调控与病毒增殖的关系,为抗病毒药物、疫苗的研制提供新的思路。

关键词：病毒自噬信号分子自噬信号通路

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鱼体健康状况评价研究进展

水生生物学报 2019年第1期43卷 226-232页

作者：王淼衣萌萌卢迈新中国水产科学研究院珠江水产研究所农业部热带亚热带水产资源利用与养殖重点实验室广州510380

鱼体的生长速度、摄食状况、器官和组织的发育、抗病力、环境适应能力以及对环境变化的自我调节能力等,都与鱼体健康状况密切相关。随着水产养殖业的迅速发展,如何科学地评价鱼体的健康状况显得愈发重要。文章综述了目前常用的几种鱼体... 详细信息

鱼体的生长速度、摄食状况、器官和组织的发育、抗病力、环境适应能力以及对环境变化的自我调节能力等,都与鱼体健康状况密切相关。随着水产养殖业的迅速发展,如何科学地评价鱼体的健康状况显得愈发重要。文章综述了目前常用的几种鱼体健康状况评价方法及存在的问题,探讨了利用现代计算机技术及生物技术,开发鱼体健康状况评价新方法的可行性,以期为水产养殖鱼体的健康评价提供新思路。

关键词：鱼体健康定性评价定量评价

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病毒感染影响宿主细胞葡萄糖代谢研究进展

病毒学报 2016年第6期32卷 800-809页

作者：吴仕伟付小哲林强刘礼辉梁红茹黄志斌李宁求中国水产科学研究院珠江水产研究所农业部渔用药物创制重点实验室广东省水产动物免疫技术重点实验室广州510380 上海海洋大学水产与生命学院上海201306 淡水水产健康养殖湖北省协同创新中心武汉430070

病毒挟持宿主细胞代谢以实现自身的复制和增殖,糖类作为宿主细胞最主要能量来源及大分子物质合成重要碳源,在病毒增殖过程中其代谢受到严密调控。本文从病毒感染影响葡萄糖转运、糖代谢(糖酵解、磷酸戊糖途径、糖异生)以及胰岛素信号通... 详细信息

病毒挟持宿主细胞代谢以实现自身的复制和增殖,糖类作为宿主细胞最主要能量来源及大分子物质合成重要碳源,在病毒增殖过程中其代谢受到严密调控。本文从病毒感染影响葡萄糖转运、糖代谢(糖酵解、磷酸戊糖途径、糖异生)以及胰岛素信号通路等3个方面概述病毒感染影响宿主细胞葡萄糖代谢研究进展,以期为病毒影响细胞葡萄糖代谢研究提供参考。

关键词：病毒感染葡萄糖转运糖代谢机制

体外诱导嗜水气单胞菌对喹诺酮类耐药及其耐药机制研究

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华南农业大学学报 2014年第1期35卷 12-16页

作者：邓玉婷薛慧娟姜兰谭爱萍吴雅丽王伟利罗理赵飞中国水产科学研究院珠江水产研究所/农业部渔用药物创制重点实验室/广东省水产动物免疫技术重点实验室广东广州510380 上海海洋大学水产与生命学院上海201306

【目的】探讨在亚抑菌浓度喹诺酮类药物培养后,嗜水气单胞菌Aeromonas hydrophila对喹诺酮类的药物敏感性变化及其耐药机制.【方法】以对喹诺酮类敏感的临床分离嗜水气单胞菌菌株和标准菌ATCC7966为研究对象,分别在含亚抑菌浓度萘啶酸(N... 详细信息

【目的】探讨在亚抑菌浓度喹诺酮类药物培养后,嗜水气单胞菌Aeromonas hydrophila对喹诺酮类的药物敏感性变化及其耐药机制.【方法】以对喹诺酮类敏感的临床分离嗜水气单胞菌菌株和标准菌ATCC7966为研究对象,分别在含亚抑菌浓度萘啶酸(NAL)和环丙沙星(CIP)的培养基上逐步诱导培养.提取诱导菌的DNA,PCR扩增其gryA和parC基因,测序分析其喹诺酮类耐药决定区(QRDR)突变情况;测定诱导菌对诱导药物和11种非诱导药物的最小抑菌浓度(MIC)及添加外排泵抑制剂羰基氰化氯苯腙(CCCP)后的MIC,分析其敏感性变化与基因突变、外排作用的关系.【结果和结论】诱导后菌株对萘啶酸和环丙沙星的MIC分别提高了1 024和64 000倍,对非诱导药物也有不同程度提高;当萘啶酸和环丙沙星诱导浓度分别达到16和32μg/mL或以上后,诱导菌株gyrA基因编码的氨基酸分别发生Asp87→Tyr和Ser83→Arg的变化,但两者parC基因编码的氨基酸均没有发生突变;添加CCCP后,只有氟喹诺酮类药物的MIC值略有下降,提示嗜水气单胞菌对喹诺酮类耐药存在靶基因突变及主动外排作用等多种耐药机制.

关键词：嗜水气单胞菌喹诺酮类体外诱导基因突变外排作用

尼罗罗非鱼致病性类志贺邻单胞菌(Plesiomonas shigelloides)的分离鉴定及其病理学观察

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微生物学报 2015年第1期55卷 96-106页

作者：刘志刚可小丽卢迈新高风英曹建萌朱华平王淼中国水产科学研究院珠江水产研究所农业部热带亚热带水产资源利用与养殖重点实验室广东广州510380

【目的】2013年5月广东番禺某养殖场罗非鱼出现大量死亡现象,临床症状表现为鱼体体色发黑、体表出血、鳞片脱落、鳍条溃烂等,解剖发现腹腔有大量腹水、胆囊肿大、肝呈黄色、脾脏呈暗红色。为确定病原,【方法】从具以上临床症状的病鱼组... 详细信息

【目的】2013年5月广东番禺某养殖场罗非鱼出现大量死亡现象,临床症状表现为鱼体体色发黑、体表出血、鳞片脱落、鳍条溃烂等,解剖发现腹腔有大量腹水、胆囊肿大、肝呈黄色、脾脏呈暗红色。为确定病原,【方法】从具以上临床症状的病鱼组织中分离获得可疑菌株1株,编号PYS1。采用形态特征、生长特性、理化特征、16S rRNA基因序列分析等理化及分子生物学技术鉴定该菌株种类。通过人工回归感染及组织病理学研究确定该菌株的致病性,并开展药物敏感性试验筛选其敏感药物。【结果】结果表明PYS1菌株为类志贺邻单胞菌(Plesiomonas shigelloides),在16S rRNA基因序列构建的分子进化树中与其他鱼源类志贺邻单胞菌聚为一支。药敏试验结果表明该菌株已呈现多重耐药性,仅对少数检测抗生素(头孢曲松、头孢洛克和头孢唑啉等)敏感。人工回归感染结果显示PYS1菌株可使尼罗罗非鱼出现与自然发病鱼相似症状,其对尼罗罗非鱼半致死量为1.425×108CFU/尾,石蜡切片显示其对感染鱼的肠、肝、脾、肾和心脏等组织均可造成损伤。【结论】证明类志贺邻单胞菌为上述养殖场尼罗罗非鱼发病的病原,且为首次报道该菌对尼罗罗非鱼的致病性。

关键词：尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus) 类志贺邻单胞菌(Plesiomonas shigelloides) 致病性组织病理变化