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白细胞介素-4对肠道期旋毛形线虫感染的保护作用

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2024年第3期42卷 354-359,366页

作者：骆泽妮吴安琪汪志锴潘晋孙希萌首都医科大学基础医学院病原生物学系北京100069 首都医科大学基础医学院北京100069

目的探讨小鼠白细胞介素-4 (IL-4)对肠道期旋毛形线虫感染的保护作用。方法消化旋毛虫保种小鼠肌肉,收集肌幼虫,超声破碎后离心,取上清制备旋毛虫抗原。将10只野生型BALB/c小鼠随机分成未感染组和野生感染组,每组5只;另取4只IL-4敲除(... 详细信息

目的探讨小鼠白细胞介素-4 (IL-4)对肠道期旋毛形线虫感染的保护作用。方法消化旋毛虫保种小鼠肌肉,收集肌幼虫,超声破碎后离心,取上清制备旋毛虫抗原。将10只野生型BALB/c小鼠随机分成未感染组和野生感染组,每组5只;另取4只IL-4敲除(IL-4KO) BALB/c小鼠作为IL-4KO感染组。野生感染组和IL-4KO感染组每鼠灌胃旋毛虫肌幼虫400条,未感染组灌胃等体积PBS。感染旋毛虫后8 d,采集各组小鼠眼眶静脉血,离心收集血清,ELISA检测单核细胞趋化因子1 (MCP-1)含量。剖取十二指肠和近端空肠,制备石蜡切片后进行苏木精-伊红(HE)染色,使用Aperio ImageScope 12.4.3测量测量十二指肠、空肠的肠绒毛和隐窝的长度与杯状细胞的数量和大小,计算肠绒毛长度/隐窝长度的比值(V/C)和杯状细胞数/绒毛长度的比值(GC/V)。分离肠系膜淋巴结中的淋巴细胞,与旋毛虫抗原(10μg/ml)共培养72 h,收集细胞上清,高通量液相蛋白芯片(Luminex)技术检测IL-1β、IL-12p70、IL-2、IL-5、IL-6、干扰素γ (IFN-γ)、肿瘤坏死因子α (TNF-α)的含量。使用SPSS 26.0统计软件对数据进行分析,两两比较采用独立样本t检验,多样本比较采用单因素方差分析。结果 ELISA结果显示,未感染组、野生感染组、 IL-4KO感染组小鼠血清中MCP-1含量分别为(344.90±21.80)、(350.50±38.30)、(467.94±190.01) pg/ml,IL-4KO感染组高于野生感染组(t=0.681,P 组小鼠的十二指肠和空肠肠黏膜完整、绒毛结构正常,无炎症改变;野生感染组、IL-4KO感染组小鼠的十二指肠和空肠肠黏膜均出现空泡状的杯状细胞、绒毛长度变短,炎症明显,IL-4KO感染组炎症更为严重。IL-4KO感染组小鼠十二指肠和空肠V/C分别为2.62±0.12、2.78±0.25,均低于野生感染组的3.46±0.05、3.65±0.12 (F=24.09、20.46,P 组空肠V/C为4.69±0.16,高于野生感染组(F=25.43,P 组十二指肠和空肠GC/V分别为9.66±0.88、7.33±0.88,均高于野生感染组的5.33±1.20、4.33±0.33 (F=17.12、16.78,均P 组十二指肠和空肠杯状细胞大小分别为(12.39±1.17)、(11.05±0.60)μm,均大于野生感染组的(8.33±0.44)、(8.44±0.58)μm (F=18.47、16.22,均P 组小鼠淋巴细胞培养上清中IL-1β、IL-12p70、IL-2、IL-5、IL-6、IFN-γ、TNF-α的含量分别为(0.45±0.03)、(1.03±0.04)、(1.00±0.38)、(0.64±0.16)、(0.62±0.24)、(0.57±0.09)、(0.94±0.31) pg/ml,IL-4KO感染组的含量分别为(0.80±0.37)、(2.70±0.94)、(49.76±16.40)、(25.25±3.26)、(12.51±4.86)、(51.20±8.93)、(15.86±2.74) pg/ml;除IL-1β (F=0.87,P> 0.05)外,IL-4KO感染组均高于野生感染组(F=5.52、24.73、48.72、5.00、123.10、50.55,P <0.05或0.01)。结论 IL-4在旋毛虫感染肠道期起免疫保护作用,能够降低小鼠血清中MCP-1含量,减缓十二指肠及空肠的炎症反应,抑制炎性细胞因子的分泌。

关键词：旋毛形线虫白细胞介素-4 肠道期感染抵抗作用

硫代乙酰胺诱导的小鼠肝内胆管癌模型特点研究

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中国药理学通报 2024年第5期40卷 992-998页

作者：张玉梅琼沈玉先安徽医科大学基础医学院药理学教研室生物药物研究所安徽合肥230032

目的建立硫代乙酰胺(thioacetamide,TAA)诱导的小鼠肝内胆管癌(intrahepatic cholangiocarcinoma,ICC)模型并探讨该模型的特点及形成机制,为ICC的病理机制和治疗药物的研究提供实验基础。方法C57BL/6J小鼠分为正常对照组和TAA组,正常对... 详细信息

目的建立硫代乙酰胺(thioacetamide,TAA)诱导的小鼠肝内胆管癌(intrahepatic cholangiocarcinoma,ICC)模型并探讨该模型的特点及形成机制,为ICC的病理机制和治疗药物的研究提供实验基础。方法C57BL/6J小鼠分为正常对照组和TAA组,正常对照组小鼠饮用灭菌水,模型组小鼠饮用600 mg·L^(-1)的TAA溶液,连续饮用32周。眼球取血,检测血清中ALT、AST、DBIL和TBIL的水平;观察两组小鼠肝脏形态;HE、天狼猩红、Masson和普鲁士蓝染色观察肝脏组织病理改变;免疫组化检测CK7、CK19、Ki67、CD68、TNF-α和α-SMA的表达水平;RT-qPCR和Western blot检测ICC相关标志物mRNA和蛋白的水平;免疫荧光双标记检测肝脏组织中HNF4α+CK19+双阳性细胞。结果与正常对照组比较,TAA组小鼠肝脏表面呈细颗粒状、质硬,肝内呈肿块性病变;病理检查结果显示,肝组织有炎症细胞浸润,肿瘤细胞排列成管状,肝组织有明显的纤维化;血清中ALT、AST、DBIL和TBIL水平升高;肝脏组织中ICC标志物CK7、CK19及细胞增殖标志物Ki67表达上调;免疫细胞标志分子CD68和TNF-α表达增多,肝星状细胞活化标志物α-SMA的阳性染色增多;肝组织中出现HNF4α+CK19+双表型细胞。结论TAA可用于诱导小鼠ICC模型,该模型具有炎症免疫细胞浸润、纤维化及ICC分子标志物增高等特点,这与人类的ICC非常相似,可用于评价内源性分子和外源性药物对ICC作用的研究。

关键词：硫代乙酰胺肝内胆管癌小鼠模型肝纤维化炎症

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Apelin-13对创伤后应激障碍模型小鼠行为学和海马自噬通路的影响

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中华行为医学与脑科学杂志 2024年第1期33卷 2-8页

作者：周阳孟子钧韩雨清蒯锦霞包海军徐州医科大学基础医学院法医学教研室徐州221000

目的研究Apelin-13对创伤后应激障碍(posttraumatic stress disorder,PTSD)模型小鼠行为学的影响及其神经机制。方法32只SPF级雄性C57BL/6J小鼠,6周龄,采用随机数字表法分为4组(每组n=8):对照组、模型组、生理盐水组、Apelin-13组。采... 详细信息

目的研究Apelin-13对创伤后应激障碍(posttraumatic stress disorder,PTSD)模型小鼠行为学的影响及其神经机制。方法32只SPF级雄性C57BL/6J小鼠,6周龄,采用随机数字表法分为4组(每组n=8):对照组、模型组、生理盐水组、Apelin-13组。采用单一连续刺激(single-prolonged stress,SPS)法制备PTSD模型,生理盐水组和Apelin-13组小鼠在PTSD造模后分别给予侧脑室微量注射0.9%氯化钠溶液(2μL)和Apelin-13(1.5μg/μL,2μL)。采用旷场实验、高架十字迷宫实验、Morris水迷宫实验评估小鼠的行为学改变,采用苏木素-伊红染色观察海马的形态结构,采用Western blot检测海马磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)、磷酸化PI3K(phosphorylated-PI3K,p-PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、磷酸化Akt(phosphorylated-Akt,p-Akt)、叉头框蛋白O3a(forkhead box O3a,FoxO3a)及磷酸化FoxO3a(phosphorylated-FoxO3a,p-FoxO3a)、自噬相关蛋白包括微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)和SQSTM1蛋白(sequestosome 1,p62)的表达。采用SPSS 26.0进行数据分析,水迷宫4 d重复学习训练的逃避潜伏期数据采用重复测量方差分析,其他数据多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD检验和Tamhane检验。结果(1)旷场实验结果显示,4组小鼠在中央区活动路程和停留时间均差异有统计学意义(F=15.37,9.63,均P组小鼠中央区活动路程[(0.06±0.03)m]和停留时间[(2.48±1.02)s]均少于对照组[(0.19±0.05)m,(15.00±8.91)s](均P组小鼠的中央区活动路程[(0.12±0.04)m]和停留时间[(13.56±7.64)s]均高于模型组[(0.06±0.03)m,(2.48±1.02)s]和生理盐水组[(0.06±0.02)m,(2.82±1.52)s](均P组小鼠进入开放臂的次数和停留时间均差异有统计学意义(F=10.74,19.12,均P组小鼠进入开放臂的次数[(4.50±2.51)次]和停留时间[(26.95±17.48)s]均少于对照组[(13.75±4.71)次,(103.75±42.43)s]和Apelin-13组[(10.00±5.18)次,(55.98±19.49)s](均P组小鼠逃避潜伏期的时间和组别交互作用不显著(F=1.15,P=0.34),但时间主效应和组别主效应显著(F=131.65,16.98,均P组小鼠的逃避潜伏期长于对照组和Apelin-13组(均P组小鼠穿越原平台次数和靶象限停留时间均多于模型组和生理盐水组(均P组和生理盐水组小鼠海马CA1区及CA3区神经元排列疏松紊乱,神经元肿胀呈透明空泡化;对照组和Apelin-13组小鼠神经元排列较为致密整齐。(3)Western blot结果显示,4组间的p-PI3K、p-Akt、p-FoxO3a、p62蛋白水平和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比率均差异有统计学意义(F=21.37,37.35,20.71,13.26,37.65,均P组小鼠p-PI3K、p-Akt、p-FoxO3a和p62蛋白水平[(0.92±0.07),(0.90±0.09),(0.89±0.13),(1.03±0.08)]均高于模型组[(0.59±0.04),(0.50±0.07),(0.49±0.11),(0.68±0.04)]和生理盐水组[(0.61±0.06),(0.50±0.08),(0.53±0.11),(0.70±0.05)](均P组小鼠LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比率(0.60±0.06)低于模型组(0.92±0.10)和生理盐水组(0.99±0.05)(均P<0.05)。结论Apelin-13可以改善PTSD小鼠焦虑样行为,提高空间学习记忆能力,其机制可能与上调PI3K/Akt/FoxO3a自噬通路有关。

关键词：创伤后应激障碍 Apelin-13 海马自噬小鼠

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心肌钠通道Na1.5在心律失常中的作用

生理科学进展 2024年

作者：王佳琪张峰慧李玥霖胡慧媛中国医科大学中英联合学院中国医科大学药学院药物毒理学教研室

心律失常（cardiac arrhythmias）是世界范围内发病率和死亡率较高的心血管疾病之一，与心脏中离子通道功能破坏以及电信号在心肌细胞的传导异常有关。心肌钠通道NaV1.5(cardiac sodium channel NaV1.5)参与心肌细胞动作电位的启动和兴... 详细信息

心律失常（cardiac arrhythmias）是世界范围内发病率和死亡率较高的心血管疾病之一，与心脏中离子通道功能破坏以及电信号在心肌细胞的传导异常有关。心肌钠通道NaV1.5(cardiac sodium channel NaV1.5)参与心肌细胞动作电位的启动和兴奋的传导，基因突变所致的NaV1.5通道表达和调控异常是心律失常发生的重要生物学基础。本文综合国内外关于NaV1.5通道结构和功能的介绍及通道异常表达时心律失常的研究现状，为心血管药物的研发和临床应用以及药物心脏毒性等的研究提供重要的理论依据。

关键词： Na 1.5通道心律失常基因突变调控

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3型固有淋巴细胞在慢性炎症性疾病中的作用

中国免疫学杂志 2024年第9期 2006-2010+2018页

作者：徐峥于明凯张峰波丁剑冰新疆医科大学基础医学院免疫学教研室新疆医科大学第一附属医院

3型固有淋巴细胞（ILC3）分化于淋巴祖细胞，在机体内分布广泛，是连接固有免疫和适应性免疫的桥梁。既往研究认为ILC3主要参与肠道免疫调节，而最新研究表明除在肠道疾病中的作用外，ILC3还参与多种慢性炎症性疾病发生发展。本文就ILC... 详细信息

3型固有淋巴细胞（ILC3）分化于淋巴祖细胞，在机体内分布广泛，是连接固有免疫和适应性免疫的桥梁。既往研究认为ILC3主要参与肠道免疫调节，而最新研究表明除在肠道疾病中的作用外，ILC3还参与多种慢性炎症性疾病发生发展。本文就ILC3在慢性炎症性疾病中的作用进行综述。

关键词： 3型固有淋巴细胞细胞因子免疫调节慢性炎症性疾病

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黏膜免疫佐剂研究进展

中国免疫学杂志 2024年

作者：张芹丁步坚张标广东医科大学基础医学院

黏膜是抗原侵入和机体抵抗外来病原体的重要场所，诱发有效黏膜免疫应答的疫苗在预防外来病原体感染方面具有十分重要的价值。然而，由于黏膜（消化道、呼吸道和泌尿生殖道等）环境十分复杂，使得疫苗抗原经黏膜途径免疫时难以诱发有效... 详细信息

黏膜是抗原侵入和机体抵抗外来病原体的重要场所，诱发有效黏膜免疫应答的疫苗在预防外来病原体感染方面具有十分重要的价值。然而，由于黏膜（消化道、呼吸道和泌尿生殖道等）环境十分复杂，使得疫苗抗原经黏膜途径免疫时难以诱发有效的黏膜免疫应答，阻碍了黏膜疫苗的开发。黏膜免疫佐剂因可以调节或加强疫苗的黏膜免疫应答效应，为黏膜疫苗的研发提供了新的机会。本文主要从细菌毒素、Toll样受体激动剂、细胞因子或趋化因子以及其他新型黏膜佐剂等方面对黏膜免疫佐剂的研究进展进行综述。

关键词：佐剂黏膜免疫 Toll受体激动剂抗原递送复合佐剂

融入BOPPPS的混合式教学模式在医学免疫学中的应用

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中国免疫学杂志 2024年

作者：吴瑗赵汉宁赵祖国冯胜军米娜广东医科大学基础医学院

在信息快速发展的新时代，线上线下混合式教学模式将是今后教学模式发展的一个新方向。BOPPPS教学模式包括导入（B）、学习目标(O)、前测(P)、参与式学习(P)、后测(P)、总结(S)等六个模块。本文将BOPPPS理念融入到医学免疫学线上线下混... 详细信息

在信息快速发展的新时代，线上线下混合式教学模式将是今后教学模式发展的一个新方向。BOPPPS教学模式包括导入（B）、学习目标(O)、前测(P)、参与式学习(P)、后测(P)、总结(S)等六个模块。本文将BOPPPS理念融入到医学免疫学线上线下混合式教学过程中，依托“超星学习通”平台，将教学分为课前、课中、课后三个阶段，BOPPPS的前3个模块导入、学习目标、前测放在课前线上进行，后3个模块参与式学习、后测、总结则融合在课中线下课堂及课后线上开展。在教学过程中注重以学生为中心，师生全程交流互动，极大地提高了教学质量，可为后疫情时代医学院校开展混合式教学提供参考。

关键词：医学免疫学混合式教学 BOPPPS

白纹伊蚊唾液蛋白rAlb-34k2-1诱导的特异性细胞免疫应答对BMDM细胞中DENV-2复制的影响

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中国热带医学 2024年第8期24卷 907-913页

作者：覃燕春李莹胡欢周璐黄贞植吴家红商正玲贵州医科大学基础医学院免疫学教研室贵州贵阳561113 贵州医科大学基础医学院寄生虫学教研室贵州贵阳561113

目的体外探究白纹伊蚊唾液蛋白rAlb-34k2-1诱导的小鼠脾淋巴细胞特异性免疫应答对2型登革病毒(dengue virus type 2,DENV-2)感染小鼠骨髓来源巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages,BMDM)的影响。方法采用CCK-8法分析rAlb-34k2-1蛋白对免疫/未免疫小鼠脾细胞的特异性增殖反应;制备荷载蚊唾液蛋白rAlb-34k2-1、rAalb_CTL1蛋白(蚊唾液C型凝集素蛋白)的抗原提呈细胞(antigen presenting cell,APC),与免疫/未免疫小鼠脾淋巴细胞进行混合淋巴细胞培养,取细胞培养上清处理DENV-2感染的BMDM细胞,实时荧光定量逆转录PCR(real-time quantitative reverse transcription PCR,qRT-PCR)检测DENV-2的核酸变化,分析rAlb-34k2-1蛋白诱导的特异性T淋巴细胞应答对BMDM内DENV-2复制的影响。将免疫/未免疫小鼠脾淋巴细胞与rAlb-34k2-1蛋白预处理的感染BMDM进行共培养,通过qRT-PCR检测培养48、72 h后DENV-2 E基因的表达,分析免疫/未免疫小鼠淋巴细胞对预处理的BMDM中DENV-2复制的影响。结果小鼠脾细胞体外特异性增殖实验显示,与未免疫组比较,rAlb-34k2-1蛋白能导致免疫小鼠脾细胞特异性增殖,刺激指数(stimulation index,SI)>2,P基础。

关键词： rAlb-34k2-1蛋白 2型登革病毒细胞免疫应答

基于蛋白质组学探讨Ppp3cb和Ppm1g在NHE1基因敲除模型鼠海马组织中的表达

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陆军军医大学学报 2024年第11期46卷 1244-1253页

作者：马鹏飞杨攀郑乾张祥明屠秋霞张春林叶兰冯占辉贵州医科大学临床医学院贵阳550000 贵州医科大学基础医学院:分子医学工程研究中心贵阳550025 贵州医科大学基础医学院生物教研室贵阳550025

目的通过NHE1基因敲除模型鼠的海马组织差异蛋白质组学分析,发现并明确Ppp3cb和Ppm1g的表达特征。方法①选取6只2周龄NHE1基因敲除模型鼠作为模型组,同周龄野生型小鼠6只作为对照组,采用琼脂糖凝胶电泳检测其基因型;应用旷场实验和强迫... 详细信息

目的通过NHE1基因敲除模型鼠的海马组织差异蛋白质组学分析,发现并明确Ppp3cb和Ppm1g的表达特征。方法①选取6只2周龄NHE1基因敲除模型鼠作为模型组,同周龄野生型小鼠6只作为对照组,采用琼脂糖凝胶电泳检测其基因型;应用旷场实验和强迫游泳实验对模型组和对照组小鼠进行行为学评估,并按照Racine评分标准对模型鼠进行癫痫发作分级;②通过串联质谱分析技术对模型组和对照组的海马组织进行差异蛋白筛选,基因本体论(Gene Ontology Analysis,GO)分析差异蛋白并进行注释和富集,蛋白网络数据库(search tool for the retrieval of interesting genes,STRING)分析差异蛋白之间的蛋白相互作用(protein-protein interaction,PPI);③应用qPCR和Western blot检测Ppp3cb和Ppm1g的转录和翻译水平,应用免疫组织化学技术分别观察其在组织中的表达量。结果①模型组小鼠NHE1基因未见表达,旷场实验中模型鼠的运动总距离较对照组减少(P=0.0073),跨越的格子数比对照组显著减少(P组织中845个差异表达的蛋白质点,其中有9个蛋白表达上调,7个蛋白表达下调。其中Ppp3cb下调,Ppm1g上调。GO功能注释结果表明,NHE1敲除后,分子功能(MF)富集在蛋白丝氨酸/苏氨酸磷酸酶活性的差异最显著,细胞成分(CC)富集在质膜部分的差异蛋白数量最多,生物过程(BP)富集在负向调节生物过程、免疫系统过程的差异蛋白数量最多。STRING分析显示差异蛋白Ppp3cb和Slc9a1直接作用,Ppm1g通过Ppp3cb和Slc9a1间接作用,Ppp3cb和Ppm1g之间相互作用。③Ppp3cb的转录和翻译水平减少,在组织中的表达量下降,而Ppm1g转录和翻译水平增加,在组织中的表达量上升(P组织中差异蛋白Ppp3cb表达下调,而Ppm1g表达上调,为进一步研究Ppp3cb和Ppm1g参与癫痫发病机制提供了依据。

关键词： NHE1基因敲除癫痫海马蛋白质组学 Ppp3cb Ppm1g