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恒河猴血管内皮细胞离心沉淀移植替代角膜内皮细胞的研究

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中华眼科杂志 2013年第11期49卷 1006-1013页

作者：朱勤胡敏孙晓梅刘海杨忠昆代解杰胡竹林云南省第二人民医院眼科中心昆明650021 中国医学科学院昆明医学生物研究所灵长类研究中心

目的探讨恒河猴血管内皮细胞（RMVEC）移植替代角膜内皮细胞（CEC）治疗角膜内皮损伤的可行性.方法实验研究.体外培养增殖RMVEC并用5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）标记.将恒河猴9只采用随机数字表法分为两组：实验组（6只）、对照组（3只... 详细信息

目的探讨恒河猴血管内皮细胞（RMVEC）移植替代角膜内皮细胞（CEC）治疗角膜内皮损伤的可行性.方法实验研究.体外培养增殖RMVEC并用5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）标记.将恒河猴9只采用随机数字表法分为两组：实验组（6只）、对照组（3只）.实验组将体外培养的BrdU标记的RMVEC利用离心沉淀法移植到撕除后弹力层的恒河猴角膜内表面后缝回植床;对照组将撕除后弹力层的术眼角膜植片原位缝回植床.术后观察各组角膜植片透明情况.术后30、60、90 d分别摘取术眼行病理切片、抗BrdU单克隆抗体免疫组织化学染色、扫描电镜及透射电镜观察RMVEC在角膜植片内表面的分布及细胞超微形态结构.结果在实验观察期内,实验组角膜植片比对照组角膜植片有较好的透明性,未出现新生血管及大泡性角膜病变.病理学检查发现实验组角膜内表面可见细胞层,抗BrdU单克隆抗体免疫组织化学染色阳性,证实该细胞为培养的BrdU标记的血管内皮细胞;对照组角膜内表面未见细胞样结构.扫描电镜下可见实验组角膜植片内表面可见RMVEC分布均匀,生长良好,呈不规则多边形,表面可见微绒毛,RMVEC间可见少量白细胞,小梁网处部分细胞碎片聚集;对照组角膜内表面呈纤维物质样,未见细胞生长.透射电镜：培养的RMVEC及实验组角膜内表面的RMVEC呈不规则扁圆状,细胞间大量桥粒链接,胞质内细胞器丰富,可见特征性WP小体,提示其具备活体血管内皮细胞的特征与活性,对照组角膜内表面未见细胞结构.结论 RMVEC能够在撕除后弹力层的角膜内表面生长并替代CEC的功能,可能成为治疗角膜内皮损伤的一种新思路.

关键词：内皮,血管细胞移植内皮,角膜细胞,培养的恒河猴

改良前房注射法移植血管内皮细胞替代角膜内皮细胞的实验观察

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中华眼科杂志 2014年第4期50卷 277-284页

作者：朱勤胡竹林孙晓梅胡敏刘海杨忠昆云南省第二人民医院眼科中心昆明650021 中国医学科学院昆明医学生物研究所灵长类研究中心

目的探讨血管内皮细胞（VEC）移植治疗角膜内皮损伤的可行性.方法实验研究.体外培养增殖VEC.将恒河猴12只,按照随机数字表随机分为两组：实验组（6只）、对照组（6只）.实验组通过超声乳化破坏角膜内皮细胞层之后,将体外培养的VEC利... 详细信息

目的探讨血管内皮细胞（VEC）移植治疗角膜内皮损伤的可行性.方法实验研究.体外培养增殖VEC.将恒河猴12只,按照随机数字表随机分为两组：实验组（6只）、对照组（6只）.实验组通过超声乳化破坏角膜内皮细胞层之后,将体外培养的VEC利用前房注射法移植到恒河猴角膜内表面;对照组超声乳化破坏角膜内皮细胞层后不注射VEC.术后7、14、30、60、90 d分别行术眼前节照相;术前及术后7、14、30、60、90 d分别用A超测量角膜厚度、Goldman眼压计测量眼压,对数据进行独立样本t检验及方差分析;术后30、60、90 d分别摘取术眼行病理切片HE染色、扫描电镜观察VEC在角膜植片内表面的分布.结果实验组角膜比对照组有较好的透明度,未出现大泡性角膜病变,术后3个月时实验组角膜缘可见少量新生血管.术眼前房深度均正常;术后3个月时,实验组角膜厚度为（500±14） μm,明显低于对照组角膜厚度[（618±11）μm],同时期实验组和对照之间角膜植片厚度值变化差异有统计学意义（术后1、2、3个月t值分别为-3.256、-4.419、-12.896,均P＜0.05）;同时期实验组和对照之间眼压变化差异无统计学意义（术后1、2、3个月t值分别为-1.179、-2.166、-2.536,均P＞0.05）;实验组角膜内表面可见细胞层;对照组角膜内表面未见细胞样结构.扫描电镜：实验组角膜植片内表面可见VEC分布均匀,生长良好,呈不规则多边形,表面可见微绒毛,VEC间可见少量白细胞,小梁网处部分细胞碎片聚集;对照组角膜内表面呈纤维物质样,未见细胞生长.结论超声乳化法能很好的建立恒河猴角膜内皮损伤模型;前房注射法能够将VEC移植到角膜内表面,且细胞能在撕出后弹力层的角膜内表面生长,并在一定程度上发挥屏障作用维持角膜的脱水状态和透明性.移植手术对前房角的组织结构形态在短期内不产生病理性影响.

关键词：内皮,血管内皮,角膜内皮细胞细胞移植显微镜检查,电子,扫描

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树鼩EB病毒有关补体结合抗体的研究

中国医学科学院学报 1982年第5期4卷 313-315页

作者：吴小闲唐恩华谢广珍文喻玲刘名英朱宝友梁梧生代长柏肖慧芳代宗祥中国医学科学院医学生物学研究所中国医学科学院医学生物学研究所昆明

EB病毒的有关补体结合抗体(简称补结抗体)分布于各种灵长类。有人用间接免疫荧光法也检出黑猩猩和旧大陆猴的EB病毒壳抗原(EB-VCA)抗体,新大陆猴和原猴类则无此抗体。EB病毒有关抗体的来源和本质还不清楚。本文观察原猴类中树鼩的血清E... 详细信息

EB病毒的有关补体结合抗体(简称补结抗体)分布于各种灵长类。有人用间接免疫荧光法也检出黑猩猩和旧大陆猴的EB病毒壳抗原(EB-VCA)抗体,新大陆猴和原猴类则无此抗体。EB病毒有关抗体的来源和本质还不清楚。本文观察原猴类中树鼩的血清EB病毒有关补结抗体动态,初步探讨它的特异性及与树鼩自身疱疹病毒感染间的关系。材料和方法 (一)血清来源采自云南中部的树鼩(Tupaiabelangeri chinensis)。从1:5稀释度开始试验。 (二)补结试验方法含EB病毒的B95-8细胞株(本院肿瘤所提供)和不含EB病毒的BJAB细胞株(本院病毒所提供)的粗制抗原用常规传代细胞制备,PBS洗涤并配成约10~7细胞/毫升,用液氮冻融或

关键词：细胞株抗原简称中和抗体 EB

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狨猴的常见疾病及死因的分析研究

中国实验动物学报 1995年第1期3卷 16-19页

作者：梁梧生代解杰谢晋孙晓梅高家红仝品芬张水仙中国医学科学院医学生物学研究所全国医学灵长类研究中心

本文对棉顶狨猴、普通狨猴和鞍背狨猴在实验室笼养条件下，进行了近８年狨猴的发病类型及致死原因的分析研究，结果表明引起狨猴死亡的常见疾病是：肺炎、痢疾、消耗性综合症、产后大出血等。并根据狨猴的疾病摸索了一套有效的防治方案... 详细信息

本文对棉顶狨猴、普通狨猴和鞍背狨猴在实验室笼养条件下，进行了近８年狨猴的发病类型及致死原因的分析研究，结果表明引起狨猴死亡的常见疾病是：肺炎、痢疾、消耗性综合症、产后大出血等。并根据狨猴的疾病摸索了一套有效的防治方案，这对于狨猴的饲养与繁殖，保证科学实验用健康的狨猴群体具有重要的意义。

关键词：狨猴死因痢疾消耗性综合症肺炎

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棕肩狨猴人工饲养与繁殖的初步研究

中国实验动物学报 1993年第1期1卷 56-59页

作者：梁梧生代解杰练幼辉黄晓琴陆劲松童品芬中国医学科学院医学生物学研究所全国医学灵长类研究中心

本文对棕肩狨猴在实验室笼养条件下,进行了饲养繁殖与育仔的初步研究,发现控制好一定的温度、相对湿度、光照、营养和良好的管理,对于该狨猴的繁殖与育仔的成功具有十分重要的作用。该品种狨猴在国内繁殖成功尚属首次。

关键词：饲养繁殖狨猴笼养人工饲养光照品种温度初步研究首次营养

EB病毒转化B淋巴细胞建立的永生细胞株长期传代遗传稳定性的研究

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中华医学遗传学杂志 2008年第3期25卷 276-279页

作者：李彦涵黄小琴林克勤陶玉芬易文姚宇峰史磊褚嘉祐中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所遗传室昆明650118

目的研究EB病毒转化外周血B淋巴细胞建成的永生细胞株在传代过程中遗传特性是否发生改变。方法对10株永生细胞株进行30代的长期传代培养，采用染色体显带、微卫星DNA及端粒酶活性检测技术，观察不同传代次数的永生细胞株二倍性、染色体... 详细信息

目的研究EB病毒转化外周血B淋巴细胞建成的永生细胞株在传代过程中遗传特性是否发生改变。方法对10株永生细胞株进行30代的长期传代培养，采用染色体显带、微卫星DNA及端粒酶活性检测技术，观察不同传代次数的永生细胞株二倍性、染色体核型、微卫星DNA及端粒酶活性的改变。结果永生细胞株在30代以内，在染色体二倍性、核型、微卫星DNA方面保持稳定，未检测出端粒酶活性。结论经EB病毒转化的永生细胞株在有限代次内遗传特征是稳定的。

关键词：永生细胞株染色体二倍性微卫星DNA 端粒酶活性遗传稳定性

HPV53进化关系分析及B细胞与T细胞抗原表位预测

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协和医学杂志 2024年第6期15卷 1364-1371页

作者：蓝锶菡冯敏中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118

目的基于全长序列分析人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)53不同分离株的进化关系,并对代表性分离株病毒蛋白(E1、E2、E4、E6、E7、L1和L2)的理化性质、二级结构及B细胞与T细胞抗原表位进行预测。方法检索美国国立生物技术信息中心... 详细信息

目的基于全长序列分析人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)53不同分离株的进化关系,并对代表性分离株病毒蛋白(E1、E2、E4、E6、E7、L1和L2)的理化性质、二级结构及B细胞与T细胞抗原表位进行预测。方法检索美国国立生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information,NCBI)数据库,获取HPV53全长序列并构建进化树。采用ProtParam软件分析蛋白的理化性质,PSIPRED和SOPMA软件预测其二级结构。采用ABCpred和IEDB软件预测B、T细胞抗原表位,并结合肽段柔韧性、亲水性、表面可及性、抗原性及Vaxijen评分等参数进一步筛选潜在的优势抗原表位;最后对潜在优势抗原表位与13个高危型HPV进行同源性分析。结果检索NCBI数据库共下载54条HPV53全长序列,经去重后保留48条,来自不同国家/地区的HPV53分离株可划分为A、B、C三个主要进化分支。三个分支代表株病毒的蛋白理化性质相似,E1、E6和E7蛋白的二级结构以α螺旋为主,E2、E4、L1和L2以无规则卷曲为主。经预测和筛选后,共得到6个B细胞潜在优势抗原表位和9个T细胞潜在优势抗原表位,同源性分析发现,E4和E6区域的B细胞抗原表位TTPIRPPPPPRPWAPT和CYRCQHPLTPEEKQLH,及L2区域的T细胞抗原表位SGVHSYEEIPMQ与HPV56具有较高同源性(均>90%)。结论通过生物信息学方法分析和预测发现HPV53分离株可分为A、B、C三个主要进化分支,其理化性质相似,二级结构存在部分小差异,且病毒蛋白中含有B、T细胞抗原表位,为HPV53相关多肽形式的疫苗和抗体药物开发提供了更多理论依据。

关键词：人乳头瘤病毒53型进化分析 B细胞 T细胞抗原表位预测

人乳头瘤病毒16型E6和E7细胞毒性T淋巴细胞表位的预测与筛选

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中华肿瘤防治杂志 2024年第19期31卷 1163-1169页

作者：崔湘杰苏羽豪朱兰芳史磊史荔陶玉芬中国医学科学院医学生物学研究所史荔实验室云南昆明650031

目的以人乳头瘤病毒16型(HPV16)E6和E7癌蛋白为靶抗原,通过生物信息学方法及小鼠体内实验,筛选出能被人与鼠主要组织相容性复合体(MHC)共呈递的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)优势表位。方法在美国国家生物技术信息中心(NCBI)网站上获取HPV16 E... 详细信息

目的以人乳头瘤病毒16型(HPV16)E6和E7癌蛋白为靶抗原,通过生物信息学方法及小鼠体内实验,筛选出能被人与鼠主要组织相容性复合体(MHC)共呈递的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)优势表位。方法在美国国家生物技术信息中心(NCBI)网站上获取HPV16 E6和E7的参考蛋白序列,通过免疫表位数据库(IEDB)网站中的MHC-Ⅰ加工和MHC-Ⅰ结合方法,预测出人类白细胞抗原(HLA)-A*02:01、HLA-A*11:01、HLA-A*24:02限制性和C57BL/6小鼠H-2b限制性的CTL表位,根据评分筛选出两者共同呈递的CTL表位。同时,构建表达HPV16 E6和E7的DNA疫苗(pVAX1-E6E7Com),免疫小鼠后分离脾淋巴细胞,以预测得到的CTL表位作为抗原,与小鼠脾淋巴细胞共培养40 h后,通过酶联免疫斑点法来评估各CTL表位诱导的特异性T细胞免疫应答的能力。所有实验数据均通过单因素方差分析和Dunnett t检验进行组间比较。结果预测筛选获得10条人鼠共呈递的抗原肽。酶联免疫斑点法检测结果表明,实验组的每种表位均能诱导小鼠淋巴细胞产生特异性免疫应答,与阳性参考肽(E7-^(49)RAHYNIVTF^(57))相比,实验组中每种表位差异均无统计学意义(均P>0.05),其中E6-^(38)VYCKQQLL^(45)(175.60±52.88)、E6-^(49)VYDFAFRDL^(57)(202.20±108.50)、E6-^(86)YCYSLYGTTL^(95)(157.00±44.46)和E7-^(77)RTLEDLLMGTL^(87)(162.20±49.35)激发的特异性斑点数比阳性参考肽E7-^(49)RAHYNIVTF^(57)(156.20±97.40)的斑点数量多。结论通过这种生物信息学方法预测和筛选得到的10个CTL表位均具有一定的免疫原性,可作为HPV16型治疗性疫苗的优势候选表位。

关键词：人乳头瘤病毒16型 E6 E7 细胞毒性T淋巴细胞表位

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α-突触核蛋白的核易位机制及其功能

中国生物化学与分子生物学报 2020年第10期36卷 1138-1144页

作者：李国祥杜廷福马开利中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所药物安全性评价研究中心昆明650118 中国医学科学院&北京协和医学院医学灵长类研究中心&神经科学中心北京100005

α-突触核蛋白(alpha-synuclein,α-Syn)是一种脑内含量丰富的可溶性蛋白质,既能参与正常突触功能的维持和囊泡运输,又与多种神经退行性疾病有关,然而其确切的功能目前仍未完全清楚。已有研究表明,在生理条件下,α-突触核蛋白主要定位... 详细信息

α-突触核蛋白(alpha-synuclein,α-Syn)是一种脑内含量丰富的可溶性蛋白质,既能参与正常突触功能的维持和囊泡运输,又与多种神经退行性疾病有关,然而其确切的功能目前仍未完全清楚。已有研究表明,在生理条件下,α-突触核蛋白主要定位在细胞质中,少部分能定位在细胞核中,具有多种生物学功能。在帕金森病(Parkinson’s disease,PD)、阿尔兹海默病(Alzheimer’s disease,AD)患者大脑及氧化应激的细胞中,均发现α-突触核蛋白趋向于向细胞核中聚集。α-突触核蛋白核易位受到多种因素的精密调控,除自身氨基酸序列外,还受到其129位丝氨酸磷酸化(S129)水平、点突变(A53T,A30P,G51D)、细胞内Ca2+水平的影响,以及核输入蛋α(importin-α)、三结构域蛋白28(tripartite motif-containing protein 28,TRIM28)等多种蛋白质的精密调控,其异常的核易位则与细胞毒性相关。核易位的α-突触核蛋白能和组蛋白去乙酰化酶及组蛋白甲基化酶相互作用,从而改变组蛋白乙酰化和甲基化水平,最终影响染色质的稳定性。此外,α-突触核蛋白能与DNA相互作用,从而改变DNA构象、参与DNA损伤修复及基因表达调控。本文综述了α-突触核蛋白的结构特征,生理及病理条件下的细胞核内定位现象,详细的核易位机制及其在胞核中的功能研究进展,将有助于了解α-突触核蛋白生理功能及其在疾病发生发展中的作用。

关键词： α-突触核蛋白核易位功能