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表达GⅡ.4型诺如病毒VP1复制缺陷型腺病毒构建与鉴定

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生物学杂志 2023年第6期40卷 7-11页

作者：施鹏林晓晨周艳李娇春宋泽鑫鲁辰星谭银珍胡晓青陈蓉李鸿钧中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

人诺如病毒(norovirus,NoV)在体外难以培养,不宜采用经典疫苗的方式进行疫苗研发,以腺病毒为载体的重组腺病毒疫苗为诺如病毒疫苗的研发提供另一种路线选择。构建表达人GⅡ.4型诺如病毒VP1蛋白的重组腺病毒为该技术路线的疫苗研发奠定... 详细信息

人诺如病毒(norovirus,NoV)在体外难以培养,不宜采用经典疫苗的方式进行疫苗研发,以腺病毒为载体的重组腺病毒疫苗为诺如病毒疫苗的研发提供另一种路线选择。构建表达人GⅡ.4型诺如病毒VP1蛋白的重组腺病毒为该技术路线的疫苗研发奠定基础。首先使用PCR扩增诺如病毒VP1片段,通过酶切、连接、转化,克隆含VP1基因的pshuttle-CMV-VP1穿梭质粒,再与腺病毒骨架质粒进行同源重组,重组质粒鉴定正确后使用PacⅠ酶切线性化,转染至HEK293细胞进行病毒包装,包装成复制缺陷型的完整腺病毒颗粒命名为rAd-VP1,病毒传代后进行滴度测定,并感染HEK293细胞,通过Western Blot方法鉴定重组腺病毒外源蛋白VP1的表达情况。结果表明,包装传代后的重组腺病毒浓缩后滴度达到CCID_(50)=5×10^(9)/mL,并且能在HEK293细胞成功表达VP1蛋白。研究为rAd-VP1的动物免疫评价和诺如病毒的疫苗研发提供基础。

关键词：诺如病毒主要结构蛋白VP1 腺病毒载体同源重组病毒包装

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树突状细胞疫苗的研究进展

中国生物制品学杂志 2022年第10期35卷 1242-1248页

作者：李兴航(综述) 李琦涵(审校) 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

树突状细胞(dendritic cell,DC)是一类强大的抗原提呈细胞,也是适应性免疫应答的关键步骤,对于诱导T、B细胞介导的细胞免疫和体液免疫是必需的。由于其特殊的免疫学功能,在DC疫苗的研究中备受关注。目前已有一种基于DC的疫苗Sipuleucel-... 详细信息

树突状细胞(dendritic cell,DC)是一类强大的抗原提呈细胞,也是适应性免疫应答的关键步骤,对于诱导T、B细胞介导的细胞免疫和体液免疫是必需的。由于其特殊的免疫学功能,在DC疫苗的研究中备受关注。目前已有一种基于DC的疫苗Sipuleucel-T获批上市,还有多项DC疫苗正在临床试验阶段。本文对DC的生物学特征和功能、DC疫苗的类型以及DC疫苗面临的挑战和前景作一综述。

关键词：树突状细胞疫苗肿瘤预防治疗

应用R语言BUGSnet程序包实现贝叶斯网状Meta分析

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中国循证医学杂志 2022年第5期22卷 600-608页

作者：向虹岳磊赵红李华谢天宏杨婷王杰张宇昊谢忠平中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

BUGSnet程序包是一款功能强大、用于实现贝叶斯网状Meta分析的R语言程序包。该程序包基于JAGS软件并可根据公认的报告规范(PRISMA、ISPOR-AMPC-NCA和NICE-DSU)进行高质量的贝叶斯网络Meta分析。本文借助类固醇佐剂治疗天疱疮的网状Meta... 详细信息

BUGSnet程序包是一款功能强大、用于实现贝叶斯网状Meta分析的R语言程序包。该程序包基于JAGS软件并可根据公认的报告规范(PRISMA、ISPOR-AMPC-NCA和NICE-DSU)进行高质量的贝叶斯网络Meta分析。本文借助类固醇佐剂治疗天疱疮的网状Meta分析实例展示BUGSnet程序包处理连续性数据或二分类数据实现贝叶斯网状Meta分析的操作流程。

关键词：网状Meta分析 R软件 BUGSnet程序包贝叶斯推理

1株柯萨奇病毒A组10型毒株在KMB17细胞上的遗传稳定性分析

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中国生物制品学杂志 2022年第7期35卷 813-817页

作者：许丹菡张捷丛山日张名冯昌增黄小琴孙浩杨昭庆马绍辉中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的分析柯萨奇病毒A组10型毒株在人胚肺二倍体细胞(KMB17)上增殖的遗传稳定性。方法将V6-19/XY/CHN/2017毒株适应于KMB17细胞,并连续传代培养至15代。分别提取适应前及适应后第5、10、15代病毒RNA,分段对全基因组序列进行RT-PCR扩增、... 详细信息

目的分析柯萨奇病毒A组10型毒株在人胚肺二倍体细胞(KMB17)上增殖的遗传稳定性。方法将V6-19/XY/CHN/2017毒株适应于KMB17细胞,并连续传代培养至15代。分别提取适应前及适应后第5、10、15代病毒RNA,分段对全基因组序列进行RT-PCR扩增、测序及拼接,利用Maga 7.0、Geneious 6.1.4等软件进行系统进化及同源性分析。结果命名该KMB17细胞适应株为K6-19/XY/CHN/2017,各子代病毒感染性滴度为7.25~7.75 lgCCID_(50)/mL。适应前后4个子代病毒的全基因核苷酸和氨基酸序列同源性分别为99.99%~100%和99.95%~100%。适应前与适应后第5、10代毒株均无核苷酸和氨基酸序列突变,第15代毒株VP4区域发生1个核苷酸突变(VP4172 A→G)及1个氨基酸突变(VP458 Ile→Val)。结论CV-A10能较好地适应KMB17细胞,K6-19/XY/CHN/2017在KMB17细胞上适应后可保持较高的病毒滴度和遗传稳定性,为后续疫苗研发奠定了实验基础。

关键词：柯萨奇病毒A组10型 KMB17细胞分子特征遗传稳定性

SARS-CoV-2疫苗序贯免疫的研究进展

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中华实验和临床病毒学杂志 2022年第3期36卷 327-336页

作者：李兴航李琦涵中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

严重急性呼吸系统综合症冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)感染造成的新型冠状病毒肺炎(coronavirus disease 2019,COVID-19)是人类本世纪来面临的威胁最大的传染病之一。目前,全球范围内有4类疫苗已经获批上市或授权紧急使用—灭活疫苗、mRNA疫苗、腺病毒载体疫苗和重组蛋白疫苗。随着COVID-19大流行的持续,已进行全程免疫人群的抗体水平逐渐降低,加强免疫是必要的措施,而序贯免疫策略似乎是一种更好的疫苗接种策略。本文将对四类不同技术路线疫苗在序贯免疫中的研究进行综述。

关键词：新型冠状病毒新型冠状病毒肺炎序贯免疫疫苗

表达SARS-CoV-2 Delta突变株S蛋白受体结合域和N蛋白的重组腺病毒的构建及鉴定

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中国生物制品学杂志 2023年第9期36卷 1025-1031页

作者：宋泽鑫周艳林晓晨赵永美施鹏王学付张朝武李鸿钧中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所、云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的构建表达严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory symptom coronavirus 2,SARS-CoV-2)Delta突变株S蛋白受体结合域(receptor binding domain,RBD)和N蛋白的重组腺病毒,并进行鉴定。方法将SARSCoV-2 RBD和N基因片段分别克隆至pcDNA3.0BA载体上,构建重组质粒pcDNA3.0BA-RBD-N,PCR扩增RBD-CMVN片段,连接至穿梭载体pShuttle-CMV上,将穿梭质粒pShuttle-RBD-N与pAdeasy-1进行同源重组,获得重组质粒pAdeasy-1-RBD-N,转染HEK293细胞进行重组腺病毒Ad-RBD-N包装,RT-PCR法检测重组腺病毒中RBD和N基因在HEK293细胞中的转录,Western blot和免疫荧光法检测重组腺病毒中RBD和N蛋白的表达。将Ad-RBD-N通过肌肉注射免疫12只雌性BALB/c小鼠,免疫剂量为5×10^(9)copies/只,免疫后14 d经尾静脉采血,ELISA法检测血清抗体效价。结果重组腺病毒RBD和N基因能在HEK293细胞中正常转录,RBD和N蛋白能在MA104细胞中正常表达。免疫重组腺病毒的小鼠可产生针对RBD和N蛋白的特异性IgG抗体。结论成功构建了表达SARS-CoV-2 Delta突变株S蛋白RBD和N蛋白的重组腺病毒,为Delta突变株疫苗的后续研究奠定了基础。

关键词：严重急性呼吸综合征冠状病毒2 S蛋白受体结合域 N蛋白腺病毒

巨噬细胞极化在单纯疱疹病毒1型感染中的作用研究进展

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病毒学报 2023年第6期39卷 1757-1767页

作者：张豪博张莹中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

巨噬细胞具有功能可塑性,使其能够根据微环境线索不同极化为不同表型,主要分为两种类型,即促炎M1型巨噬细胞和抗炎M2型巨噬细胞,它们在单纯疱疹病毒1型(Herpes simplex virus-1,HSV-1)感染的疾病发展中行使不同的功能。当巨噬细胞出现... 详细信息

巨噬细胞具有功能可塑性,使其能够根据微环境线索不同极化为不同表型,主要分为两种类型,即促炎M1型巨噬细胞和抗炎M2型巨噬细胞,它们在单纯疱疹病毒1型(Herpes simplex virus-1,HSV-1)感染的疾病发展中行使不同的功能。当巨噬细胞出现极化失衡时,可以通过多种因素对其失衡状态进行调节,靶向调节巨噬细胞的极化状态对于治疗HSV-1感染具有重要意义。本文对巨噬细胞极化及其在HSV-1感染中的作用研究进展进行总结,以期为HSV-1感染的进一步研究及治疗提供参考依据。

关键词：单纯疱疹病毒1型巨噬细胞极化表型

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云南省柯萨奇病毒A组6型全基因组特征分析

中国生物制品学杂志 2022年第8期35卷 922-927页

作者：张名冯昌增刘红波王晓辉许丹菡丛山日何陆涛张光贤马绍辉中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的分析2015年云南省4株柯萨奇病毒A组6型(Coxsackievirus A6,CV-A6)分离株的全基因组特征。方法取手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)患儿粪便样本,制备悬液,接种至人横纹肌肉瘤细胞,CV-A6致细胞病变(CPE)后,收集病毒液,提取... 详细信息

目的分析2015年云南省4株柯萨奇病毒A组6型(Coxsackievirus A6,CV-A6)分离株的全基因组特征。方法取手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)患儿粪便样本,制备悬液,接种至人横纹肌肉瘤细胞,CV-A6致细胞病变(CPE)后,收集病毒液,提取RNA,经RT-PCR分段扩增获得全基因组片段,并进行测序。采用Geneious 9.1.4和Mega 7.0、Simplot等生物学软件进行核苷酸和氨基酸序列比对、系统进化及重组分析,并构建系统进化树。结果4株CV-A6分离株之间核苷酸和氨基酸序列一致性分别为94.8%~97.9%和97.3%~98.4%,与近几年国内流行的CV-A6株核苷酸和氨基酸序列一致性分别为94.6%~97.9%和97.4%~99.1%;分离株在5′UTR、2A、2C、3A、3D、3′UTR区可能存在与毒力和临床表型相关的12个位点。结论4株云南分离株属于CV-A6血清型,为D3a基因亚型。

关键词：柯萨奇病毒A组6型全基因组序列分析

3种ELISA方法与微量细胞中和试验检测SARS-CoV-2抗体滴度的相关性分析

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中国生物制品学杂志 2023年第6期36卷 719-723页

作者：蒋国润赵恒廖芸范胜涛李丹丹张莹于丽王丽春李琦涵徐兴丽中国医学科学院、北京协和医学院医学生物学研究所、云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的分析不同方法检测严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory symptom coronavirus 2,SARSCoV-2)疫苗免疫后抗体滴度的相关性,为其特异性抗体检测提供方法学依据。方法采用微量细胞中和试验及3种ELISA方法(分别以S蛋白... 详细信息

目的分析不同方法检测严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory symptom coronavirus 2,SARSCoV-2)疫苗免疫后抗体滴度的相关性,为其特异性抗体检测提供方法学依据。方法采用微量细胞中和试验及3种ELISA方法(分别以S蛋白、N蛋白和灭活全病毒颗粒为抗原)检测SARS-CoV-2灭活疫苗临床试验血清样品的IgG抗体阳转率及中和抗体滴度,并进行微量细胞中和试验与3种ELISA方法的相关性分析。结果中和抗体、S抗体、N抗体和全病毒抗体检测所得抗体阳转率分别为84.3%、91.3%、65.2%和46.6%,抗体几何平均滴度分别为16.6、945.9、72.7和18.8。3种ELISA方法(分别以S蛋白、N蛋白和灭活全病毒颗粒为抗原)与微量细胞中和试验检测结果的相关系数(r)分别为0.494、0.371和0.181。结论检测SARS-CoV-2 S抗体水平能在很大程度上反映以抗体水平升高为特征的体液免疫反应的激活情况。

关键词：严重急性呼吸综合征冠状病毒2 中和抗体 S抗体 N抗体全病毒抗体