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人钙周期蛋白结合蛋白(hCacyBP)基因的克隆与表达

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生物化学与生物物理学报 2002年第2期34卷 181-186页

作者：刘卫霞吴静赵昭周彦彭小忠袁建刚强伯勤中国医学科学院基础医学研究所、中国协和医科大学基础医学院中国医学科学院基础医学研究?

筛选cDNA文库得到了人的钙周期蛋白结合蛋白基因 ,将此基因的全编码区克隆到原核表达载体pET2 8上 ,诱导目的蛋白质表达以后将重组蛋白质用亲和层析的方法进行纯化 ,得到了纯度很好的重组的目的蛋白质 ,以此作为抗原免疫动物 ,得到抗钙... 详细信息

筛选cDNA文库得到了人的钙周期蛋白结合蛋白基因 ,将此基因的全编码区克隆到原核表达载体pET2 8上 ,诱导目的蛋白质表达以后将重组蛋白质用亲和层析的方法进行纯化 ,得到了纯度很好的重组的目的蛋白质 ,以此作为抗原免疫动物 ,得到抗钙周期蛋白结合蛋白的特异多克隆抗体。Western印迹的结果表明 ,该基因在小鼠多种组织中广泛表达 ;免疫组化的结果表明 ,BT32 5细胞诱导分化后钙周期蛋白结合蛋白分布有变化 ,由分布于胞质中转向分布于胞核和核周胞质

关键词：钙周期蛋白(calcyclin) 钙周期蛋白结合蛋白(CacyBP) 克隆表达

人类胚胎的价值和道德地位——治疗性克隆的合理性

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基础医学与临床 2005年第5期25卷 385-389页

作者：翟晓梅中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所生命伦理学研究中心北京100005

本文将考查有关反对和支持人类胚胎干细胞研究的伦理论证,尤其是支持和反对利用核转移技术形成人类胚胎(即人的治疗性克隆)从而取得全能干细胞的伦理论证。在分析这些论证中作者将着重讨论人类胚胎的价值和道德地位问题。文章最后的结... 详细信息

本文将考查有关反对和支持人类胚胎干细胞研究的伦理论证,尤其是支持和反对利用核转移技术形成人类胚胎(即人的治疗性克隆)从而取得全能干细胞的伦理论证。在分析这些论证中作者将着重讨论人类胚胎的价值和道德地位问题。文章最后的结论将是:在一定的条件下支持人的治疗性克隆是在伦理学上可以得到辩护的,或在伦理学上可以允许的。

关键词：治疗性克隆人类胚胎道德地位价值合理性转移技术于细胞伦理学

异体垂体移植大鼠E_2诱致催乳素瘤的实验研究

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中国医学科学院学报 1998年第4期20卷 257-263页

作者：吴雪梅张荣许荣焜周远征狄安稞单惠敏黄曼影王悦中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所北京100005 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所北京100005

目的探讨催乳素瘤的发病机理,验证其原发于腺垂体的假说。方法应用雄性S.D.大鼠进行异体垂体移植,并通过背部埋植17-β-雌二醇(E_2)药泵,观察E_2对大鼠原位垂体,异体移植于肾囊的垂体及血浆催乳素(prolactin,PRL)水平的影响。并利... 详细信息

目的探讨催乳素瘤的发病机理,验证其原发于腺垂体的假说。方法应用雄性S.D.大鼠进行异体垂体移植,并通过背部埋植17-β-雌二醇(E_2)药泵,观察E_2对大鼠原位垂体,异体移植于肾囊的垂体及血浆催乳素(prolactin,PRL)水平的影响。并利用上述垂体细胞原代培养及原位杂交组化方法,研究经E_2作用120d后的原位及移植垂体细胞中PRL基因表达水平的改变。结果经E_2作用60d及120d后,大鼠体重分别降至正常大鼠的74%(P<0.01)和50%(P<0.001),原位垂体及移植垂体的重量则较对照组增加达三倍以上(P<0.001),并伴高催乳素血症,血浆催乳素水平为对照组的100～200倍(P<0.001)。原位杂交结果表明,E_2作用120d后,原位及移植垂体细胞中PRL mRNA水平分别升高为正常大鼠垂体细胞的3.1倍和3.5倍(P<0.001),且二者的表达水平无显著差异。结论提示E_2也可不经下丘脑机制直接作用于腺垂体水平诱发催乳素瘤,即催乳素瘤有可能原发于腺垂体。但本工作尚未进一步排除催乳素瘤的形成涉及下丘脑机制的可能性。

关键词：催乳素瘤垂体移植原位杂交病理学

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试论商业化基因检测中的社会伦理问题

首都师范大学学报（社会科学版） 2007年第2期 135-139页

作者：睢素利中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学生命伦理学研究中心

基因检测能够为个人提供了解和知悉自己的基因信息和对于某些疾病易感性的渠道。然而,目前商业化的基因检测服务却存在诸多社会和伦理问题,本文介绍了目前中国商业化基因服务的现状,论述了商业化基因检测可能引起的社会和伦理问题。

关键词：商业化基因检测基因缺陷社会伦理问题

用DDRT-PCR方法克隆小鼠精子发生早期相关基因的EST

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2003年第1期35卷 92-96页

作者：俞作仁郭睿葛晔华关纪奎马静薛社普韩代书中国医学科学院基础医学研究所、中国协和医科大学基础医学院细胞生物学系中国医学科学院基础医学研究所、中国协和医科大学基础医学院细胞生物学系北京100005

为了避免差异显示技术中的放射性污染 ,并用之于筛选、克隆精子发生早期的相关基因 ,分离纯化了小鼠的原始精原细胞及B型精原细胞 ,提取其总RNA ,逆转录获得cDNA ,以荧光差异显示方法筛选差异表达基因。利用斑点杂交技术对差异片段进行... 详细信息

为了避免差异显示技术中的放射性污染 ,并用之于筛选、克隆精子发生早期的相关基因 ,分离纯化了小鼠的原始精原细胞及B型精原细胞 ,提取其总RNA ,逆转录获得cDNA ,以荧光差异显示方法筛选差异表达基因。利用斑点杂交技术对差异片段进行快速鉴定以排除假阳性。选取 16条差异显著的片段做克隆测序 ,通过Gen Bank/Blast比较 ,有 7个片段属于新的EST ,且均表现为在B型精原细胞中表达强度高于原始精原细胞。提交Gen Bank获得注册号。从中选取较有意义的 3条基因片段通过半定量RT PCR方法进一步验证其表达特征。和传统的差异显示方法比较 ,文中所采用的mRNA差异显示技术可快速排除假阳性结果 ,避免同位素标记带来的放射性污染。结果表明所获得的 7个新EST均表现为B型精原细胞中高表达 ,这些表达升高的基因可能与其后精子发生过程中的一系列特殊现象 (如减数分裂、变态成形 )有关 ,为生精细胞的分化做物质上的准备。

关键词：荧光mRNA差异显示技术精子发生基因克隆斑点杂交

5-羟色胺和胃动素在狗小肠移行性复合运动调控中的作用

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生理学报 1998年第4期50卷 431-438页

作者：杨春敏周吕张航郝维中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所生理研究室北京100005

应用慢性植入小肠腔外应力传感器记录清醒狗小肠移行性复合运动（MMC）。在颈外静脉和支配10－15cm肠段的空肠动脉内分别放置一硅胶管以备灌流药物和取血样品用。本研究观察了静脉和动脉注射药物对小肠MMC的影响及MMC不同时相血浆5-羟... 详细信息

应用慢性植入小肠腔外应力传感器记录清醒狗小肠移行性复合运动（MMC）。在颈外静脉和支配10－15cm肠段的空肠动脉内分别放置一硅胶管以备灌流药物和取血样品用。本研究观察了静脉和动脉注射药物对小肠MMC的影响及MMC不同时相血浆5-羟色胺（5－HT）和胃动素的浓度变化。结果表明：（1）MMC不同时相血浆5-HT和胃动素浓度呈周期性变化，5-HT峰值在胃动素峰值之前出现。血浆5-HT浓度在MMCⅡ相后期达高峰（41．2±1．3）ng／ml，明显高于MMCI相（22．4±1．1）ng／ml（P＜0．01）；而血浆胃动素浓度在MMCⅢ相时达峰值（580.0±30．2）pg／ml，明显高于MMCI相时的水平（140．0±21．0）pg／ml（P＜0．01）。（2）静脉注射胃动素和空肠肠段动脉局部注射5-HT、胃动素分别引起近端小肠和空肠肠段MMCⅢ相收缩。胃动素在空肠肠段引发的收缩振幅高于5－HT。（3）空肠肠段动脉局部灌流5－HT受体拮抗剂、抗胃动素血清、5，6-双羟色胺和河豚毒素（TTX）均可阻断MMCⅢ相在灌流肠段出现和向远端传播。结论：血浆5-HT和胃动素可能是狗小肠MMC的主要启动因素，5-HT释放高峰先于胃动素峰在MMCⅢ相前出现。肠神经系统的5-HT神经元和胃动素神经元在狗小肠MMC调控中起重要作用。

关键词：移行性复合运动 5-羟色胺胃动素

人巨细胞病毒协同人乳头瘤病毒16型诱导宫颈上皮细胞癌变的研究

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中华病理学杂志 1999年第1期28卷 24-27页

作者：刘朝奇韩广州李昆司静懿刘世德宋国兴中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所

目的探讨宫颈癌的发生发展与人乳头状瘤病毒（ＨＰＶ）和人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）协同感染的关系。方法应用我室建立的ＨＰＶ１６永生化的人宫颈上皮细胞系，转染ＨＣＭＶ即早基因（ＩＥ）。结果ＨＣＭＶ整合在细胞染色体中，协同ＨＰ... 详细信息

目的探讨宫颈癌的发生发展与人乳头状瘤病毒（ＨＰＶ）和人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）协同感染的关系。方法应用我室建立的ＨＰＶ１６永生化的人宫颈上皮细胞系，转染ＨＣＭＶ即早基因（ＩＥ）。结果ＨＣＭＶ整合在细胞染色体中，协同ＨＰＶ１６促进宫颈上皮细胞的恶性转化，在裸鼠中形成肿瘤。结论ＨＣＭＶＩＥ基因可协同ＨＰＶ１６恶性转化宫颈上皮细胞，并对其协同机制进行了细胞和分子生物学的探讨。

关键词：子宫颈肿瘤 HPV HCMV 癌变上皮细胞

抗运动神经元抗体对培养的鼠神经元的杀伤作用

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中国医学科学院学报 1998年第4期20卷 296-302页

作者：高扬李月魁林嘉友李莉万选才中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所北京100005

目的研究抗运动神经元抗体在运动神经元病发病机制中的作用。方法应用抗运动神经元抗体作用于体外培养的大鼠神经元。结果观察到抗运动神经元抗体对体外培养的大鼠神经元具有明显的细胞毒作用。将anti-SMN(1:50)加入培养的细胞中,24... 详细信息

目的研究抗运动神经元抗体在运动神经元病发病机制中的作用。方法应用抗运动神经元抗体作用于体外培养的大鼠神经元。结果观察到抗运动神经元抗体对体外培养的大鼠神经元具有明显的细胞毒作用。将anti-SMN(1:50)加入培养的细胞中,24h后有31%～41%神经元死亡,48h后有50%～67%神经元死亡,72h后有90%以上神经元死亡。该细胞毒作用不依赖补体参与,强度与抗体浓度呈正相关。AchE组化染色发现anti-SMN对胆碱能神经元有选择性损伤作用,随暴露于抗体时间延长,AchE阳性神经元明显减少。CaBP免疫组化结果显示,CaBP阳性细胞在加入抗体48h达高峰,此后迅速下降,大部分阳性细胞在72h后死亡。结论 antiSMN抗体对胆碱能神经元有选择性细胞毒性作用,其机制可能与神经元内Ca^(2+)浓度的改变有关。

关键词：运动神经元病运动神经元抗体病理学

L-精氨酸和硝普钠对缺氧大鼠肺动脉压及血管结构变化的影响

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中国医学科学院学报 1997年第3期19卷 179-184页

作者：林红蔡英年宋为周晓梅龚伊红董继红中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所北京100005

观察一氧化氮合成的前体物质L-精氨酸和一氧化氮供应剂硝普钠对慢性缺氧大鼠肺动脉压、肺泡内无肌性血管肌化程度以及肺泡内和肺外动脉内皮和平滑肌细胞超微结构的影响，探讨外源性一氧化氮在限制缺氧性肺动脉高压形成和发展中的作用机... 详细信息

观察一氧化氮合成的前体物质L-精氨酸和一氧化氮供应剂硝普钠对慢性缺氧大鼠肺动脉压、肺泡内无肌性血管肌化程度以及肺泡内和肺外动脉内皮和平滑肌细胞超微结构的影响，探讨外源性一氧化氮在限制缺氧性肺动脉高压形成和发展中的作用机制。结果发现：L-精氨酸和硝普钠均可使慢性缺氧大鼠的肺动脉压显著降低，肺泡内无肌性血管肌化程度明显减轻，并且可保护肺血管防止缺氧引起的内皮损伤和中膜平滑肌细胞表型的改变。提示给缺氧大鼠提供充足的外源性一氧化氮或一氧化氮合成的前体物质，可以保护内皮并防止缺氧引起的肺血管功能障碍和结构损伤，从而限制缺氧性肺动脉高压的发生和发展。

关键词：肺动脉高压一氧化氮 L-精氨酸硝普钠药理学