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猫杯状病毒CC19-01株的分离鉴定及遗传进化分析

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经济动物学报 2025年

作者：闫曼平单晓枫程悦宁冯二凯吴顺罗国良王振军王春霞吉林农业大学动物科学技术学院中国农业科学院特产研究所

为深入了解猫杯状病毒的流行特点以及遗传演化特征，在长春市某宠物医院选取了52份疑似患有上呼吸道疾病的猫眼鼻拭子样品，进行病毒分离，利用双重纳米PCR鉴定、胶体金试纸条检测以及间接免疫荧光方法进行病毒鉴定，并对分离株进行全... 详细信息

为深入了解猫杯状病毒的流行特点以及遗传演化特征，在长春市某宠物医院选取了52份疑似患有上呼吸道疾病的猫眼鼻拭子样品，进行病毒分离，利用双重纳米PCR鉴定、胶体金试纸条检测以及间接免疫荧光方法进行病毒鉴定，并对分离株进行全基因组扩增及遗传演化分析研究，然后进行人工感染试验。结果表明：试验组猫肾细胞（F81）出现聚缩成团、葡萄串样、脱落典型病变，免疫荧光试验中试验组F81出现特异性绿色荧光，说明试验成功分离出1株猫杯状病毒，将其命名为CC19-01株，GeneBank注册号为PP928983。猫杯状病毒CC19-01株与国内外已知猫杯状病毒的同源性介于76.4%～83.6%，基因组具有高度变异性，与南宁分离的经典毒株MZ712017.1、MZ712021.1、MZ712018.1有密切的亲缘关系，与疫苗株JX519210.1（美国）和KM111171.1（美国）处于并列进化分支。人工感染试验结果表明：猫在感染CC19-01株后发病期3～7 d，体温升高，眼部分泌物增多，眼周睫毛有脱落，食欲下降，精神萎靡，7 d后临床症状开始好转，对猫没有致死性。试验不仅丰富了国内猫杯状病毒（FCV）流行株的基础数据，还为FCV的疫苗研发和疾病防控提供了重要的分子学信息。

关键词：猫上呼吸道感染猫杯状病毒分离鉴定同源性比对遗传进化分析

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猪繁殖与呼吸综合征病毒基因重组的研究进展

中国兽医学报 2025年第01期 145-152+162页

作者：帅文娜郭子强李佳乐罗梦李丽薇周艳君姜一峰童武童光志高飞中国农业科学院上海兽医研究所广西大学动物科学技术学院扬州大学江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心上海市兽医生物技术重点实验室

猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)主要引发母猪流产、死胎、木乃伊胎和仔猪呼吸道症状，自1996年国内首次报道以来，经过20多年的遗传演化，其复杂性显著增加，给养猪业带来了巨大... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)主要引发母猪流产、死胎、木乃伊胎和仔猪呼吸道症状，自1996年国内首次报道以来，经过20多年的遗传演化，其复杂性显著增加，给养猪业带来了巨大的经济损失。近年来，随着各种PRRSV重组病毒的出现，防控这一疫病的难度进一步加大。现全面梳理PRRSV的基因组结构及功能、RNA病毒重组机制、重组的主要类型、流行现状和主要流行毒株的重组情况，以期为深入研究PRRSV的基因重组提供线索，同时为制定科学的防控策略提供理论支撑。

关键词： PRRSV RNA重组重组类型

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猪抗病育种研究进展

中国畜牧杂志 2025年

作者：郭春和陈永杰张晓晓张春红焦茂兴岭南现代农业科学与技术广东省实验室华南农业大学兽医学院肇庆市动物疫病预防控制中心宜春学院生命科学与资源环境学院

我国是生猪养殖和猪肉消费第一大国，养殖量和消费量均占全球一半以上，猪肉占我国肉类消费的60%。疾病是影响生猪产业健康发展的重要因素。针对猪场传染性疾病防控，可以从病原体的角度开发疫苗和药物；也可以从宿主（猪）遗传角度发... 详细信息

我国是生猪养殖和猪肉消费第一大国，养殖量和消费量均占全球一半以上，猪肉占我国肉类消费的60%。疾病是影响生猪产业健康发展的重要因素。针对猪场传染性疾病防控，可以从病原体的角度开发疫苗和药物；也可以从宿主（猪）遗传角度发掘抗性基因，培育抗病猪新品系（种）。对于疫苗效果不理想或无疫苗的重大传染性疾病（蓝耳病、非洲猪瘟），借助生物育种技术如基因编辑培育抗病猪有望从根本上解决这些疾病的防控及其对养猪业造成的经济损失。本文主要围绕目前我国在猪病领域开展的抗病育种工作进行综述，以期为我国猪场疫病防控、培育战略性新品种以及实现种业科技自立自强提供基础；同时对猪抗病育种领域未来发展趋势进行展望。

关键词：猪抗病育种基因编辑抗性基因

狐狸流产胎儿体内肺炎克雷伯菌的分离鉴定及耐药性分析

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畜牧兽医学报 2024年第8期55卷 3640-3648页

作者：王奇林曹润来王威阳张博刘志杰王晓旭中国农业科学院特产研究所农业农村部经济动物疫病重点实验室长春130112

旨在了解狐狸流产的病因。本研究对河北省某狐狸养殖场流产胎儿进行解剖、病原分离培养、16S rRNA测序、毒力基因检测、血清型检测、药敏试验及致病性试验。结果显示,从狐狸流产胎儿体内分离获得6株肺炎克雷伯菌,检测出12种毒力基因(wab... 详细信息

旨在了解狐狸流产的病因。本研究对河北省某狐狸养殖场流产胎儿进行解剖、病原分离培养、16S rRNA测序、毒力基因检测、血清型检测、药敏试验及致病性试验。结果显示,从狐狸流产胎儿体内分离获得6株肺炎克雷伯菌,检测出12种毒力基因(wabG、fimH、ent、icuA、icuB、mrkA、ycf、ecp、uge、ureA、iroB和ybtA)和3种血清型(K20、K54和K57),其中,K57为本次检测过程的优势血清型;经K-B药敏纸片法分析,发现本次分离获得的肺炎克雷伯菌对氨基糖苷类、头孢菌素类、喹诺酮、多肽类等抗菌药物存在中度或高度敏感,对大环内酯类、四环素类、青霉素类等抗菌药物存在多重耐药;经致病性试验分析,本次分离获得的肺炎克雷伯菌对小鼠具有一定的致病性,半数致死量(LD_(50))为1.2×10^(7)CFU·mL^(-1)。基于此,本研究分离得到的肺炎克雷伯菌具有一定的致病性和耐药性,且携带多种毒力基因,可能是诱发狐狸胎儿流产、死亡的因素之一,为狐狸胎儿流产的防控及诊断提供思路。

关键词：狐狸肺炎克雷伯菌毒力基因分离鉴定

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RAW264.7细胞Rhoa和Ptgs2基因真核表达载体构建及生物信息学分析

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中国畜牧兽医 2021年第7期48卷 2313-2323页

作者：乔连江陈晨张如崔立恒徐丽杨艳玲中国农业科学院特产研究所农业部经济动物疫病重点实验室长春130000

为深入研究Ras同源基因家族成员A(Ras homolog gene family,member A,Rhoa)和环氧合酶2(cyclooxygenase 2,Ptgs2)分子在布鲁菌逃逸机体免疫中发挥的作用,试验对RAW264.7细胞Rhoa和Ptgs2基因进行扩增与克隆,构建真核表达载体并预测生物... 详细信息

为深入研究Ras同源基因家族成员A(Ras homolog gene family,member A,Rhoa)和环氧合酶2(cyclooxygenase 2,Ptgs2)分子在布鲁菌逃逸机体免疫中发挥的作用,试验对RAW264.7细胞Rhoa和Ptgs2基因进行扩增与克隆,构建真核表达载体并预测生物信息学功能。根据GenBank数据库中公布的RAW264.7细胞Rhoa和Ptgs2基因CDS区序列(登录号:JN971019.1和NM_011198)设计引物,提取RAW264.7细胞总RNA并反转录为cDNA,经RT-PCR扩增Rhoa和Ptgs2片段并测序,将纯化的Rhoa和Ptgs2片段分别与线性化pcDNA3.1质粒相连接,对重组质粒进行测序分析和双酶切鉴定后,利用LipofectamineTM2000转染293T细胞,经实时荧光定量PCR和Western blotting验证Rhoa和Ptgs2基因的表达情况,并应用生物信息学软件对Rhoa和Ptgs2基因进行预测分析。结果显示,试验成功构建了RAW264.7细胞Rhoa和Ptgs2基因的真核表达质粒;实时荧光定量PCR检测均在转录水平上表达;Western blotting可见Ptgs2蛋白在70 ku处有一明显条带,而Rhoa蛋白未出现条带。生物信息学预测显示,Rhoa和Ptgs2基因核苷酸序列相似性较高,在不同物种之间较为保守;Rhoa不具有信号肽,为不稳定蛋白,而Ptgs2在第17-18位氨基酸处存在信号肽,为稳定蛋白;Rhoa和Ptgs2蛋白分别有12和53个潜在的磷酸化位点;二级结构、三级结构均以无规则卷曲为主。本研究成功构建了RAW264.7细胞Rhoa和Ptgs2基因的真核表达载体,均在转录水平上表达,并分析了其生物学功能,为后续开展RAW264.7细胞Rhoa和Ptgs2基因在布鲁菌免疫机制方面的研究提供了工具。

关键词： RAW264.7细胞 Rhoa基因 Ptgs2基因真核表达载体生物信息学

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口蹄疫病毒非结构蛋白3D的研究进展

中国兽医科学 2025年第2期 247-254页

作者：翟凤格聂振宇张涵张钊裴晶晶郑海学河南农业大学动物医学院中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃省病原生物学基础学科研究中心

口蹄疫（FMD）是由口蹄疫病毒（FMDV）引起的一种在偶蹄动物间感染与传播的急性、热性、高度传染性疾病，动物死亡率高，严重影响农业生产，造成巨大的经济损失。FMDV 3Dpol蛋白不仅在基因组复制中发挥至关重要的作用，还参与调节宿主... 详细信息

口蹄疫（FMD）是由口蹄疫病毒（FMDV）引起的一种在偶蹄动物间感染与传播的急性、热性、高度传染性疾病，动物死亡率高，严重影响农业生产，造成巨大的经济损失。FMDV 3Dpol蛋白不仅在基因组复制中发挥至关重要的作用，还参与调节宿主细胞生物学过程，包括病毒复制复合体的组装和定位以及先天免疫反应。本文对FMDV 3Dpol与宿主的相互作用、抗病毒靶点研究以及病毒检测应用等内容进行了系统综述，旨在为疫病防控提供新思路。

关键词：口蹄疫病毒 3Dpol 宿主病毒相互作用药物靶点

猪源牛病毒性腹泻病毒JLS-01株的分离鉴定及致病性研究

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中国畜牧兽医 2019年第2期46卷 557-564页

作者：张淑琴谭斌刘泽余王超郭利孙娜程世鹏中国农业科学院特产研究所农业部经济动物疫病重点实验室长春130112

为了解猪源牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)的分子特征及致病性,本研究利用RT-PCR从吉林省某猪场出现严重腹泻症状的仔猪病料中检测到BVDV核酸阳性,将处理后的BVDV阳性样品接种于MDBK细胞,分离到1株病毒,命名为BVDV... 详细信息

为了解猪源牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)的分子特征及致病性,本研究利用RT-PCR从吉林省某猪场出现严重腹泻症状的仔猪病料中检测到BVDV核酸阳性,将处理后的BVDV阳性样品接种于MDBK细胞,分离到1株病毒,命名为BVDV JLS-01。通过免疫荧光检测、5′UTR与Npro RT-PCR扩增对其分子进化特征进行分析。结果显示,该分离毒株在MDBK细胞上盲传至8代未出现细胞病变,在免疫荧光试验中呈阳性荧光信号。RT-PCR扩增获得大小分别为280和735bp的5′UTR和Npro片段。BVDV JLS-01株5′UTR与Npro序列遗传进化分析表明,其与LN-1和ZM-95亲缘性最近,与牛源毒株LN-1基因同源性达99.3%,提示该毒株可能来源于牛源毒株。将BVDV JLS-01株F8代细胞培养液人工感染BVDV和猪瘟病毒(CSFV)抗体阴性猪,感染猪未表现出明显的体温升高,但白细胞数量下降,并在感染猪的白细胞提取物中分离到该毒株,表明该毒株具有一定的致病性。该毒株的成功分离对进一步开展BVDV流行病学调查及致病机理等方面的研究具有重要意义。

关键词：猪源牛病毒性腹泻病毒 (BVDV) 进化分析分离鉴定致病性

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梅花鹿激活素A重组蛋白真核表达、纯化及其生物活性的测定

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中国农业科学 2020年第5期53卷 1058-1070页

作者：张宇飞曹满园王丽英赵伟刚李晓霞常彤许保增中国农业科学院特产研究所/中国农业科学院特种经济动物分子生物学重点实验室

【目的】体外真核表达梅花鹿(Cervus nippon)激活素A重组蛋白并测定其生物活性,为进一步明确激活素A在梅花鹿卵母细胞体外成熟过程中的生理学功能提供基础。【方法】利用RT-PCR技术克隆梅花鹿激活素βA (ActivinβA, ACTBA)亚基基因的c... 详细信息

【目的】体外真核表达梅花鹿(Cervus nippon)激活素A重组蛋白并测定其生物活性,为进一步明确激活素A在梅花鹿卵母细胞体外成熟过程中的生理学功能提供基础。【方法】利用RT-PCR技术克隆梅花鹿激活素βA (ActivinβA, ACTBA)亚基基因的cDNA全长序列,同时利用生物信息学对梅花鹿激活素βA的基因特征进行分析。在NCBI数据库下载其他物种激活素βA同源序列,利用Clustalx和MEGA 4软件进行同源比对并构建进化树。构建pcDNA4/ACTBA重组质粒并转染至CHO细胞内,进行目的蛋白的体外表达。采用免疫荧光及Western blot技术对目的蛋白表达情况进行检测,并通过Ni-NTA亲和层析柱对蛋白产物进行纯化。采用Western blot检测了梅花鹿激活素A重组蛋白处理后的猪颗粒细胞中的SMAD2和SMAD3的磷酸化水平。最后采用荧光定量PCR及Western blot检测了梅花鹿激活素A重组蛋白处理后的猪颗粒细胞中类固醇激素合成相关酶的表达量。【结果】克隆得到的梅花鹿ACTBA亚基基因含有1 278 bp的碱基,编码426个氨基酸。同源性比较发现梅花鹿ACTBA基因与牛的ACTBA基因同源性最高达98.4%同源。进化分析表明该基因与同为偶蹄目动物的反刍兽牛和山羊亲缘关系最为接近。经酶切、PCR和测序方法鉴定,成功构建真核表达质粒pcDNA4/ACTBA。免疫荧光显示该质粒在CHO细胞中主要定位在细胞质。Western blot结果显示激活素A的前体蛋白分子量约为58 kD左右。镍亲和层析纯化后的激活素A重组蛋白显著增加SMAD2和SMAD3的磷酸化,表明激活素A可以激活SMAD信号通路。同时成熟的激活素A重组蛋白可以诱导猪颗粒细胞芳香化酶(Aromatase)蛋白表达量上调,类固醇生成急性调节蛋白(steroidogenic acute regulatory protein, StAR)表达量下调,FSH受体基因表达量升高,LH受体基因表达量降低,但胆固醇侧链裂解酶(Cholesterolside-chaincleavageenzyme,CYP11A1orP450scc)及3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-Hydroxysteroid dehydrogenase, 3β-HSD)基因表达量不变。结果表明梅花鹿激活素A重组蛋白可以增强FSH对颗粒细胞的生物学作用,也可以减弱LH对颗粒细胞的生物学作用。【结论】成功构建了激活素A蛋白的真核表达载体,并获得了较高纯度的、具有生物学活性的梅花鹿激活素A重组蛋白,为下一步激活素A蛋白的生物学功能和生理学机制研究奠定了基础。

关键词：梅花鹿激活素A 颗粒细胞真核表达蛋白纯化

半巢式多重PCR法对A组轮状病毒VP7基因的分型

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中国生物制品学杂志 2021年第2期34卷 213-215页

作者：谷长维胡博中国农业科学院特产研究所农业农村部经济动物疫病重点实验室吉林长春130112

目的采用半巢式多重PCR法对A组轮状病毒(group A rotavirus,RVA)VP7基因进行分型。方法根据GenBank中RVA VP7基因5′端保守区设计合成多组基因分型引物,提取11个RVA代表流行毒株病毒的RNA,采用半巢式多重PCR方法进行RVA的VP7基因分型,使... 详细信息

目的采用半巢式多重PCR法对A组轮状病毒(group A rotavirus,RVA)VP7基因进行分型。方法根据GenBank中RVA VP7基因5′端保守区设计合成多组基因分型引物,提取11个RVA代表流行毒株病毒的RNA,采用半巢式多重PCR方法进行RVA的VP7基因分型,使用BLAST在线软件与GenBank上相应VP7核苷酸序列比对。结果经琼脂糖凝胶电泳鉴定,11株RVA的多重PCR产物大小均与预期一致,能正确鉴别具有代表性的流行毒株VP7基因型[G1、G2、KN105(Wa-like G3)、To16-01(equine-like,DS-1-likeG3)、G4、G8、G9及G12];经BLAST在线软件比对,RVA病毒株VP7基因序列与设计的上游引物匹配,并与下游引物互补,引物特异性良好。结论利用设计的引物成功建立的半巢式多重PCR方法能正确识别RVA的VP7基因型。

关键词：轮状病毒 VP7基因型半巢式多重PCR 引物设计

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