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寄生蠕虫丝氨酸蛋白酶抑制剂的研究进展

中国预防兽医学报 2024年第2期46卷 214-220页

作者：李晓璐郭爱疆王帅中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃兰州730046

蛋白酶抑制剂存在于所有生物体内,它们可能通过抑制对自身细胞有害的多余蛋白酶而发挥重要作用^([1])。1985年,Carrell命名的丝氨酸蛋白酶抑制剂(Serine protease inhibitor,Serpin),其大部分成员具有抑制丝氨酸蛋白酶活性的作用^([2])。

关键词：丝氨酸蛋白酶抑制剂寄生蠕虫蛋白酶

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猫冠状病毒荧光定量PCR检测方法的建立

动物医学进展 2024年第3期45卷 16-21页

作者：陈秋阳梁瑞英梁琳汤新明秦彤丁家波中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193

猫冠状病毒(FCoV)在全球猫种群中广泛流行,隐形感染的猫导致病毒在猫群中持续传播。提高样本检测率、早预防、早治疗可减少种群中病毒流行率。为建立可以灵敏、准确检测FCoV的Taq Man荧光定量PCR检测方法,根据GenBank公布的FCoV基因片段... 详细信息

猫冠状病毒(FCoV)在全球猫种群中广泛流行,隐形感染的猫导致病毒在猫群中持续传播。提高样本检测率、早预防、早治疗可减少种群中病毒流行率。为建立可以灵敏、准确检测FCoV的Taq Man荧光定量PCR检测方法,根据GenBank公布的FCoV基因片段N保守区域设计了1对特异性引物和1条探针,通过优化反应体系,建立了FCoV Taq Man荧光定量PCR检测方法,对75份临床样品进行检测。结果表明,该方法在1.49×10^(11)~1.49×10^(2) copies/μL之间具有良好的线性关系,特异性强,敏感性高,对FCoV质粒标准品最低检测下限为1.49×10^(0) copies/μL,而普通PCR对FCoV质粒标准品最低检测下限为1.49×10^(5) copies/μL;重复性好,组内变异系数和组间变异系数均小于3%;75份临床样品,阳性率为37.33%。研究建立的FCoV检测方法扩增效率高、特异性强、敏感性好、稳定性高,且实用性好,可以用于FCoV的快速检测,可为流行病学调查提供有效的技术手段。

关键词：猫冠状病毒荧光定量PCR Taq Man探针

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非洲猪瘟对东南亚生猪产业的影响及启示

中国农业科技导报 2024年第1期26卷 9-17页

作者：林挺李鹏程浦华朱增勇中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193

2019年以来非洲猪瘟的爆发和持续传播给亚洲生猪产业造成严重损失,非洲猪瘟的有效防控直接关系产业的稳定。通过分析东南亚地区非洲猪瘟疫情形势、爆发原因以及对该地区两大生猪生产国(越南和菲律宾)生猪产业和市场的影响,评估非洲猪瘟... 详细信息

2019年以来非洲猪瘟的爆发和持续传播给亚洲生猪产业造成严重损失,非洲猪瘟的有效防控直接关系产业的稳定。通过分析东南亚地区非洲猪瘟疫情形势、爆发原因以及对该地区两大生猪生产国(越南和菲律宾)生猪产业和市场的影响,评估非洲猪瘟防控、产业支持和市场调控政策的效果,结合我国疫病防控存在的问题,提出我国非洲猪瘟疫情防控和产业稳定政策优化建议,以促进我国生猪产业持续健康发展。研究发现,规模化程度低、生物安全意识不高、行业管理困难、活猪为主的流通模式等是越南和菲律宾非洲猪瘟疫情爆发并持续蔓延的主要原因,在非洲猪瘟发生后,两国猪肉产量大幅下降,猪价先跌后涨,猪肉进口大幅增长,引发生猪产业链重大变化。借鉴两国的防控经验,我国在非洲猪瘟防控中应加强对中小规模户的扶持,促进其转型升级,加快提升产业规模化、组织化水平,提高疫情防控效果,强化基础兽医服务体系建设,提升重大动物疫病防控能力,优化冻猪肉收储启动机制等措施,提高市场干预效果。

关键词：非洲猪瘟生猪产业越南菲律宾疫情防控

非洲猪瘟病毒MGF360-13L蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

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中国动物传染病学报 2024年第1期32卷 194-201页

作者：陈世钰蒋亚君鑫婷崔帅王洋郭晓宇贾红朱鸿飞中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193

本研究旨在通过构建非洲猪瘟病毒(ASFV)MGF360-13L基因原核表达系统表达13L蛋白,并制备其鼠源多克隆抗体。利用生物信息学方法,对ASFV MGF360-13L基因进行序列比对,分析其同源性、构建遗传进化树;将非洲猪瘟病毒MGF360-13L基因密码子优... 详细信息

本研究旨在通过构建非洲猪瘟病毒(ASFV)MGF360-13L基因原核表达系统表达13L蛋白,并制备其鼠源多克隆抗体。利用生物信息学方法,对ASFV MGF360-13L基因进行序列比对,分析其同源性、构建遗传进化树;将非洲猪瘟病毒MGF360-13L基因密码子优化后进行合成,连接至PET32a载体构建重组质粒pET32a-13L,转化至***21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达获得目的蛋白,采用镍柱纯化法进行蛋白纯化。将纯化后的蛋白乳化后免疫8周龄BALB/c雌鼠制备多克隆抗体,间接ELISA和Western blot检测抗体特异性。SDS-PAGE结果显示,重组蛋白分子量大小为58.2 kDa,主要以包涵体形式存在;Western blot结果显示免疫猪阳性血清可特异性识别该蛋白,具有良好的反应性,表明该重组蛋白获得正确表达。利用该蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体进行Western blot,结果显示其能与MGF360-13L重组蛋白发生特异性反应。间接ELISA测定抗体效价高达1∶256000。本研究成功制备非洲猪瘟病毒MGF360-13L重组蛋白,以其为免疫原制备的多克隆抗体具备较高的特异性和反应性,为进一步阐述MGF360-13L蛋白的生物学功能和研制非洲猪瘟新型疫苗奠定了基础。

关键词：非洲猪瘟病毒 MGF360-13L基因序列分析原核表达多克隆抗体

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一起东北黑熊死亡病例的病毒宏基因组学分析

病毒学报 2024年第4期40卷 787-793页

作者：孙政张如涂长春杨艳玲何彪吉林农业大学动物医学院长春130118 中国农业科学院长春兽医研究所长春130122 中国农业科学院特产研究所长春130112

黑熊是我国重要的野生动物资源,保护黑熊是我国野生动物保护的重要内容之一。本研究使用常规细菌检测和病毒组学分析,对一起黑熊死亡案例进行病原分析。细菌学检测发现了肠出血性大肠杆菌和A型魏氏梭菌阳性,但结合临床症状,排除了细菌... 详细信息

黑熊是我国重要的野生动物资源,保护黑熊是我国野生动物保护的重要内容之一。本研究使用常规细菌检测和病毒组学分析,对一起黑熊死亡案例进行病原分析。细菌学检测发现了肠出血性大肠杆菌和A型魏氏梭菌阳性,但结合临床症状,排除了细菌感染的可能。随后使用RNA和DNA病毒组技术相结合,对其进行全病毒组分析,结果发现了Parvovirus、Anellovirus、Circovirus等7个病毒信息,其中肾脏携带的病毒最为丰富,有7个科。在这些病毒中,Parvovirus、Anellovirus和Circovirus与已知病毒核苷酸同源性小于90%,而其余病毒与当前已知病毒同源性高达99%。绝大多数病毒致病性不明确,值得注意的是本研究发现的细小病毒在黑熊中呈现系统感染,且与美国的一株熊细小病毒NS1氨基酸同源性为86.8%,但其与此次黑熊死亡的关联需进一步研究。本研究首次用病毒组技术对黑熊样本病毒组进行分析,结果虽不能判定此次黑熊死亡的原因,但相关数据为了解黑熊病毒多样性提供了重要的基础数据。

关键词：东北黑熊细菌检测病毒宏基因组细小病毒

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紫花苜蓿MsBBX20基因克隆及耐盐功能分析

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草业学报 2024年

作者：周昕越蒋庆雪贾会丽马琳樊璐王学敏中国农业科学院北京畜牧兽医研究所山西农业大学草业学院

BBX家族转录因子参与光形态建成、成花生理、避荫反应、种子生长发育、激素信号转导及对逆境胁迫的响应等植物重要生长发育过程。紫花苜蓿是耐盐性较强的牧草饲料作物，其品质优良，有“牧草之王”的美誉。发掘并探索紫花苜蓿MsBBX20基... 详细信息

BBX家族转录因子参与光形态建成、成花生理、避荫反应、种子生长发育、激素信号转导及对逆境胁迫的响应等植物重要生长发育过程。紫花苜蓿是耐盐性较强的牧草饲料作物，其品质优良，有“牧草之王”的美誉。发掘并探索紫花苜蓿MsBBX20基因响应非生物胁迫的分子机理，有助于揭示紫花苜蓿抗逆生物学基础，为紫花苜蓿抗逆分子育种提供新的基因资源。通过RT-PCR、3′/5′RACE PCR技术克隆得到MsBBX20基因cDNA序列，生物信息学分析发现其CDS全长834 bp，编码278个氨基酸，该基因编码的蛋白质为锌指结构蛋白家族成员。利用qRTPCR技术分析MsBBX20在紫花苜蓿不同组织和不同非生物胁迫下的表达模式。通过基因枪轰击技术，在洋葱表皮瞬时表达MsBBX20进行亚细胞定位。克隆得到大小为1737 bp的MsBBX20启动子序列并分析了顺式作用元件，该启动子可驱动GUS报告基因在烟草的叶、茎和根中高效表达。将MsBBX20启动子序列与包含GUS基因的pCAMBIA-1301载体连接，瞬时转化烟草并通过组织化学染色对不同组织进行GUS活性分析。构建pCAMBIA3301-MsBBX20植物超表达载体，通过农杆菌介导的方法遗传转化野生型拟南芥，获得超表达MsBBX20的拟南芥株系。用不同浓度盐溶液(150、200和300 mmol·L-1NaCl)处理拟南芥转基因株系并分析其MDA含量和抗氧化酶活性。进化分析表明紫花苜蓿MsBBX20蛋白与红三叶TpBBX20的亲缘关系最近。MsBBX20蛋白定位于细胞核。MsBBX20基因在花中表达量最高，且MsBBX20可以响应干旱、盐、冷、脱落酸、赤霉素、光照等多种非生物胁迫。遗传转化获得MsBBX20过表达拟南芥株系，并选择3个高表达阳性株系进行功能验证。在不同浓度NaCl处理条件下，过量表达MsBBX20的拟南芥株系的丙二醛（MDA）含量显著低于对照，而超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）和过氧化物酶（POD）活性均显著高于对照。克隆获得紫花苜蓿锌指蛋白转录因子基因MsBBX20，该基因在花中表达量最高，能够响应多种非生物逆境胁迫和外源激素处理，表明MsBBX20可能参与紫花苜蓿的多个逆境响应过程。进一步的研究证明MsBBX20可能通过调节植物的抗氧化酶系统，缓解逆境造成的植物细胞氧化损伤，提高转基因拟南芥对盐胁迫的抗性，进而增强植株的耐盐性。

关键词：紫花苜蓿 MsBBX20 基因克隆耐盐性功能分析

一种谷氨酸棒杆菌4-异丙基苯甲酸诱导型启动子的设计与应用

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生物技术通报 2024年第7期40卷 108-116页

作者：毋舒宁苏永平李冬雪柏映国刘波张志伟山西农业大学林学院太谷030801 中国农业科学院生物技术研究所北京100081 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193

【目的】谷氨酸棒杆菌是一种重要的工业微生物,挖掘可调控性元件可有效拓展谷氨酸棒杆菌研究和应用的广度和深度。【方法】在谷氨酸棒杆菌组成型强启动子P_(H10)上嵌入阻遏蛋白CymR结合的操纵序列CuO,构建了4-异丙基苯甲酸(Cumate)为诱... 详细信息

【目的】谷氨酸棒杆菌是一种重要的工业微生物,挖掘可调控性元件可有效拓展谷氨酸棒杆菌研究和应用的广度和深度。【方法】在谷氨酸棒杆菌组成型强启动子P_(H10)上嵌入阻遏蛋白CymR结合的操纵序列CuO,构建了4-异丙基苯甲酸(Cumate)为诱导剂的启动子P_(H10-CuO)。【结果】绿色荧光蛋白作为报告基因的实验结果显示,无诱导剂时,谷氨酸棒杆菌工程菌相对荧光强度较低;以25μg/mL 4-异丙基苯甲酸诱导12 h时,谷氨酸棒杆菌工程菌荧光强度达62000,证明P_(H10-CuO)具有很好的严谨性和诱导表达强度。构建了以启动子P_(H10-CuO)调控recET和Cas12a表达的谷氨酸棒杆菌基因编辑质粒,实现谷氨酸棒杆菌染色体上靶标基因的精准编辑和外源基因插入。【结论】诱导型启动子P_(H10-CuO)具有表达强度高且渗漏表达低的特点,可用于谷氨酸棒杆菌中被其调控基因的时序性表达。

关键词：谷氨酸棒杆菌诱导型启动子阻遏蛋白CymR 4-异丙基苯甲酸

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MHC Ⅰ分子与交叉递呈机制的研究与应用进展

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中国兽医科学 2024年

作者：刘森韦少强张世栋中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所

脊椎动物的主要组织相容性复合体（major histocompatibility complex，MHC）在免疫反应中对抗原递呈起着关键作用。经典的抗原递呈中MHC Ⅰ分子递呈内源性抗原，而交叉递呈中MHC Ⅰ分子可递呈外源性抗原。交叉递呈在抗菌、抗肿瘤以及... 详细信息

脊椎动物的主要组织相容性复合体（major histocompatibility complex，MHC）在免疫反应中对抗原递呈起着关键作用。经典的抗原递呈中MHC Ⅰ分子递呈内源性抗原，而交叉递呈中MHC Ⅰ分子可递呈外源性抗原。交叉递呈在抗菌、抗肿瘤以及免疫耐受中具有重要作用，它的发现为外源性抗原递呈研究提供了新的理论依据。交叉递呈是一个复杂的过程——从外源性抗原获取到抗原递呈需要多种蛋白分子参与。高效的交叉递呈对于构建强大的免疫应答和抗感染非常重要，有助于机体免疫系统准确识别和清除被感染的细胞，并促进适应性免疫应答的启动。将纳米技术与疫苗技术相结合研发的新型纳米疫苗能靶向性提高外源性抗原交叉递呈的效率，促进抗原递呈细胞成熟，增强机体特异性免疫应答，且与传统疫苗相比具有安全性更高，稳定性更好的优点。本文主要综述了MHC Ⅰ分子递呈外源性抗原的分子机制，以及利用交叉递呈机制设计与研发纳米疫苗的现状，并展望了交叉递呈与纳米疫苗的研发前景。

关键词：主要组织相容性复合体交叉递呈外源性抗原免疫反应纳米疫苗

紫花苜蓿SAUR基因家族的鉴定及其在非生物胁迫中的表达模式研究

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草业学报 2024年第4期33卷 135-153页

作者：刘昊李显炀何飞王雪李明娜龙瑞才康俊梅杨青川陈林中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193 青岛农业大学草业学院山东青岛266109

SAUR(small auxin-up RNA)是植物早期响应生长素的一类基因,参与植物生长发育与非生物胁迫响应等一系列生物过程。在拟南芥、水稻、棉花等物种中已经对SAUR基因家族进行了系统鉴定与分析,但是,在世界上最重要的豆科牧草紫花苜蓿中关于S... 详细信息

SAUR(small auxin-up RNA)是植物早期响应生长素的一类基因,参与植物生长发育与非生物胁迫响应等一系列生物过程。在拟南芥、水稻、棉花等物种中已经对SAUR基因家族进行了系统鉴定与分析,但是,在世界上最重要的豆科牧草紫花苜蓿中关于SAUR基因家族的研究尚未开展。本研究利用生物信息学的方法在紫花苜蓿参考基因组共鉴定到433个MsSAUR成员,并对其基因组位置、基因结构、启动子顺式作用元件以及不同组织中的表达模式进行了分析。同时,利用紫花苜蓿在不同非生物胁迫下的转录组数据,发现有5、11、19以及12个MsSAUR成员分别响应干旱、盐、冷以及碱胁迫,MsSAUR14/94/254可以同时响应干旱和盐胁迫,MsSAUR297可以同时响应干旱、盐以及碱胁迫,MsSAUR306可以同时响应干旱、盐以及冷胁迫。本研究结果可为后期通过基因工程技术创制高产抗逆新种质提供重要的候选基因。

关键词：紫花苜蓿 SAUR基因全基因组鉴定非生物胁迫表达模式