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羊口疮病毒基因组结构及重要基因功能研究进展

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畜牧与兽医 2024年第9期56卷 142-151页

作者：张江绒田谦王艳华周洛译孙跃峰王光祥中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃兰州730046

羊口疮是由羊口疮病毒(orf virus, ORFV)引起的一种人畜共患疾病,具有接触性、嗜上皮性和自限性的特征,该疾病在全球范围内广泛流行,严重影响公共卫生,对养羊业也造成不可忽视的经济损失。本文主要综述了国内外在羊口疮病原学、基因组... 详细信息

羊口疮是由羊口疮病毒(orf virus, ORFV)引起的一种人畜共患疾病,具有接触性、嗜上皮性和自限性的特征,该疾病在全球范围内广泛流行,严重影响公共卫生,对养羊业也造成不可忽视的经济损失。本文主要综述了国内外在羊口疮病原学、基因组结构以及功能基因等方面的研究进展,旨在为相关学者提供研究参考。通过对病毒基因组及其功能基因的深入解析,不仅有助于深入理解病毒的致病机理和宿主的互作机制,同时也为疫苗的研发提供理论依据。

关键词：羊口疮羊口疮病毒功能基因

展示口蹄疫病毒优势中和表位的铁蛋白纳米颗粒制备及其在小鼠模型上的免疫原性评价

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农业生物技术学报 2024年第5期32卷 1216-1226页

作者：卢炳州茹毅郝荣增李亚军杨洋杨锐毛玉涵蒋成辉陶世宇郑海学余四九崔燕甘肃农业大学动物医学院中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室

蛋白纳米颗粒能够在表面展现多拷贝抗原，模拟病毒的结构形态，更有利于免疫细胞摄取和促进抗原递呈，从而增强疫苗保护效力。本研究旨在利用大肠杆菌(Escherichia coli)表达系统制备展示口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus, FMDV... 详细信息

蛋白纳米颗粒能够在表面展现多拷贝抗原，模拟病毒的结构形态，更有利于免疫细胞摄取和促进抗原递呈，从而增强疫苗保护效力。本研究旨在利用大肠杆菌(Escherichia coli)表达系统制备展示口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus, FMDV)优势中和表位的铁蛋白纳米颗粒，并评估其免疫原性。首先以幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)铁蛋白序列为基础，将FMDV优势中和表位序列插入铁蛋白第33和34位氨基酸之间，同时将耶尔森氏菌属(Yersinia) T细胞表位序列插入铁蛋白氨基酸序列的氨基末端，构建具有铁蛋白序列、B细胞表位(优势中和表位)和T细胞表位的重组表达质粒pET28a-FBT，以仅插入铁蛋白序列的重组质粒pET28a-Fer作为对照。将重组质粒转入大肠杆菌感受态细胞，经诱导表达和分子筛层析纯化获得目的蛋白，利用SDS-PAGE、Western blot、粒径分析和透射电镜进行鉴定，进一步免疫BALB/c小鼠(Mus musculus)评价免疫原性。结果显示，利用大肠杆菌表达系统成功制备的铁蛋白纳米颗粒FBT可与FMDV阳性血清发生特异性反应；FBT免疫14 d即产生血清抗体，并持续升高，在免疫35 d中和抗体效价最高可达1∶128；同时，FBT免疫小鼠的脾淋巴细胞增殖水平和白介素2 (interleukin 2, IL-2)、IL-4、IL-10、干扰素-γ (interferon-γ, IFN-γ)分泌水平显著高于对照组(P研究制备了展示FMDV中和表位且具有良好免疫原性的铁蛋白纳米颗粒，为新型口蹄疫基因工程疫苗的研制提供技术支持。

关键词：铁蛋白纳米颗粒口蹄疫病毒(FMDV) 中和表位 T细胞表位免疫原性

基于猪细小病毒6型VP1蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立及应用

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农业生物技术学报 2024年第6期32卷 1462-1470页

作者：欧云文潘琴汪洋代军飞任绍科张洋张杰开江县动物疫病预防控制中心中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室河北科技师范学院河北省预防兽医学重点实验室

猪细小病毒6型(Porcine parvovirus type 6, PPV6)是一种新发现的猪细小病毒，可导致猪(Sus scrofa)出现繁殖障碍，严重威胁养猪业健康发展。为建立一种检测PPV6抗体的间接ELISA方法，本研究以PPV6流行毒株高度保守的病毒颗粒蛋白(virio... 详细信息

猪细小病毒6型(Porcine parvovirus type 6, PPV6)是一种新发现的猪细小病毒，可导致猪(Sus scrofa)出现繁殖障碍，严重威胁养猪业健康发展。为建立一种检测PPV6抗体的间接ELISA方法，本研究以PPV6流行毒株高度保守的病毒颗粒蛋白(virion protein, VP1)(348～675 aa)的编码基因为目标片段，构建原核表达载体pET30a-PPV6-VP1，转入大肠杆菌(Escherichia coli) BL21 (DE3)感受态细胞，IPTG诱导表达，进行Ni-NTA树脂亲和层析纯化，获得具有良好的反应原性的重组VP1蛋白，大小约为40 k D。基于纯化的重组VP1蛋白建立间接ELISA抗体检测方法，优化出最佳抗原包被浓度为1 ng/μL，待检血清最佳稀释比例为1∶100,HRP-兔抗猪IgG稀释比例为1∶60 000，阳性临界值OD450>0.62。该间接ELISA检测方法与猪蓝耳病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)、古典猪瘟病毒(Classical swine fever virus, CSFV)、猪伪狂犬病毒(Pseudorabies virus, PRV)、日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)、猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2, PCV2)、PPV1阳性猪血清均不发生交叉反应，敏感度达1∶3 200，批内变异系数和批间变异系数均病毒中和试验(virus neutralization test, VNT)结果呈正相关，与Western blot结果的阳性符合率为96.6%，表明该间接ELISA检测方法拥有良好的特异性、敏感性、重复性和符合率。采用建立的间接ELISA方法对2018～2022年中国西部地区部分省份收集的452份猪血清进行检测，结果显示样品阳性率为5.31%，表明该病在我国西部地区存在不同程度的感染。本研究成功截短表达了PPV6 VP1 (348～675 aa)蛋白，建立了特异性强、灵敏度高、重复性好和符合率高的PPV6间接ELISA方法，为PPV6的血清学调查和检测试剂盒的开发提供了材料。

关键词：猪细小病毒6型(PPV6) VP1蛋白截短表达 ELISA

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结核分枝杆菌免疫逃逸机制研究进展

科学通报 2024年第4期69卷 531-541页

作者：李娜宋银娟储岳峰兰州大学动物医学与生物安全学院中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室兰州730000

结核病(tuberculosis,TB)是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)感染引起的一种对全球人类健康和经济社会发展具有重大影响的人兽共患病.结核分枝杆菌感染人类已有数千年的历史,在其与人类宿主共同进化的过程中,Mtb已发展... 详细信息

结核病(tuberculosis,TB)是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)感染引起的一种对全球人类健康和经济社会发展具有重大影响的人兽共患病.结核分枝杆菌感染人类已有数千年的历史,在其与人类宿主共同进化的过程中,Mtb已发展出多种巧妙的策略以逃避宿主的免疫防御,从而建立持续性感染.然而,我们对其免疫逃逸的分子机制以及细菌的毒力因子在Mtb不同感染阶段下发挥的作用了解有限.研究表明,在Mtb感染的早期阶段,肺泡巨噬细胞无法控制Mtb的感染,在进入肺间质后,Mtb可通过调控细胞内感染、损害抗原提呈、破坏巨噬细胞和T细胞功能等手段达到免疫逃逸的目的.本文详细回顾并综述了近年来结核分枝杆菌调控巨噬细胞自噬、凋亡以及适应性免疫应答等过程的分子机制,这些分子机制对于开发新的宿主导向疗法以及保护性疫苗至关重要.

关键词：结核分枝杆菌巨噬细胞免疫逃逸宿主导向疗法

猪圆环病毒2型LAMP-CRISPR/Cas12a检测方法的建立与应用

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中国兽医科学 2024年第6期54卷 728-734页

作者：毛首会杜国玉刘晓波吴锦艳兰喜何继军尚佑军王桂琴刘永杰中国农业科学院、兰州兽医研究所、家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃兰州1730046 宁夏大学农学院宁夏银川750021

本研究旨在建立一种快速、准确且易于操作的猪圆环病毒2型(porcine circovirus 2,PCV2)检测方法。首先以PCV2的ORF2基因作为靶基因,设计4条LAMP与5条CRISPR特异性引物,再分别优化获得LAMP反应体系和CRISPR检测体系中各成分最佳配比浓度... 详细信息

本研究旨在建立一种快速、准确且易于操作的猪圆环病毒2型(porcine circovirus 2,PCV2)检测方法。首先以PCV2的ORF2基因作为靶基因,设计4条LAMP与5条CRISPR特异性引物,再分别优化获得LAMP反应体系和CRISPR检测体系中各成分最佳配比浓度,经过特异性、灵敏度、重复性以及符合性验证,最终建立了快速检测PCV2的LAMP-CRISPR/Cas12a方法。结果显示,该方法最小检测量接近1 copy质粒DNA,灵敏度远高于本实验室常用的PCR方法,且在相同条件下只有PCV2呈阳性结果,其他均呈现阴性,表明特异性良好。同时该方法具有良好的重复性,批内变异系数小于5%,批间变异系数小于10%,该方法与qPCR之间的符合率较高,可通过肉眼观察在蓝光下的反应产物判断结果。结果表明,建立的LAMP-CRISPR/Cas12a体系适用于PCV2的快速检测。

关键词：猪圆环病毒2型 CRISPR/Cas12a检测环介导等温扩增

南非2型口蹄疫病毒VP1蛋白单抗的制备与特性研究

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病毒学报 2024年第4期40卷 794-801页

作者：朱昱茜石正旺罗俊聪陈婕林永玉席韬张帆石鑫泰郑海学包世俊田宏甘肃农业大学动物医学院兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院家畜疫病病原生物学国家重点实验室兰州730000

为制备南非2型口蹄疫病毒型特异性单克隆抗体,本研究通过原核系统表达南非2型口蹄疫病毒VP1蛋白,亲和层析的方法纯化目的蛋白。将纯化的VP1蛋白使用弗氏佐剂乳化后,免疫BALB/c小鼠,待加强免疫后取血清效价最稳定的小鼠脾细胞与小鼠骨髓... 详细信息

为制备南非2型口蹄疫病毒型特异性单克隆抗体,本研究通过原核系统表达南非2型口蹄疫病毒VP1蛋白,亲和层析的方法纯化目的蛋白。将纯化的VP1蛋白使用弗氏佐剂乳化后,免疫BALB/c小鼠,待加强免疫后取血清效价最稳定的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0细胞进行融合,应用间接ELISA筛选针对南非2型VP1蛋白的单克隆抗体。采用特异性试验、叠加试验和抗体亚型鉴定等方法对筛选的单克隆抗体特性进行分析。结果发现,本研究成功表达南非2型VP1蛋白,筛选出2株能稳定分泌特异性针对南非2型VP1蛋白的杂交瘤细胞株(3B2和6F2),其亚型分别为IgG2a和IgG1,叠加试验结果表明2株单抗的叠加系数>40%,说明两株单抗针对不同的抗原位点;单抗的效价可达1∶256000,特异性试验证明2株单抗均不与O型、A型口蹄疫病毒及其他常见猪病病毒产生交叉反应。由此可见,本研究制备的单克隆抗体具有良好的特异性和反应性,为南非2型口蹄疫病毒定型诊断和未来疫苗的研制奠定了基础。

关键词：南非2型口蹄疫病毒 VP1蛋白特异性单克隆抗体

猴痘Ⅰ型毒株疫情流行新态势及其公共卫生风险应对策略与建议

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病毒学报 2024年

作者：景伟何小兵房永祥陈国华高真贞张亚岭苏洋郭慧琛景志忠中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室甘肃省病原生物学基础学科研究中心农业农村部兽医公共卫生重点实验室(兰州)

猴痘（Monkeypox,Mpox）是由猴痘病毒（Mpox virus,MPXV）感染引起的一种以发热、皮疹和淋巴结肿大为特征的病毒性人兽共患病，现被WHO第二次认定为构成“全球关注的突发公共卫生事件”。2022-Mpox疫情主要由MPXV进化支Ⅱ毒株B1谱系，... 详细信息

猴痘（Monkeypox,Mpox）是由猴痘病毒（Mpox virus,MPXV）感染引起的一种以发热、皮疹和淋巴结肿大为特征的病毒性人兽共患病，现被WHO第二次认定为构成“全球关注的突发公共卫生事件”。2022-Mpox疫情主要由MPXV进化支Ⅱ毒株B1谱系，通过男-男性行为接触方式主要在欧美等地区的人际间流行，但已于2023年5月解除了危机状态。然而，由MPXV进化支Ⅰb毒株谱系自2023年9月前后在刚果民主共和国等非洲地区多个国家大规模暴发流行，并在非洲地区之外的瑞典、泰国等国家首次发现相应的输入病例。由于MPXV进化支Ⅰ型毒株毒力比Ⅱ型更强，致死率更高，传播方式更多，人们担心该疫情可跨国、跨洲际传播，可对全球造成巨大危害和威胁。本文重点通过猴痘Ⅰ型毒株疫情在刚果民主共和国的暴发流行态势、临床特征以及流行毒株遗传演化适应人际间传播关键点的介绍，以期为我国新一波猴痘防控和公共卫生风险提出预警和应对依据。

关键词：猴痘猴痘病毒进化支Ⅰ型毒株流行特征公共卫生风险防控策略

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HIF-1α在病原体感染中的作用研究进展

畜牧兽医学报 2024年第6期55卷 2357-2367页

作者：张正洋宋银娟储岳峰中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室兰州730000 甘肃省病原生物学基础学科研究中心兰州730046 农业农村部动物病原生物学重点实验室农业农村部反刍动物重大疫病防控重点实验室(西部) 兰州730046

缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)是细胞应对缺氧反应的中枢调节因子,稳定的HIF-1α具有多种功能,参与血管生成、代谢调节、细胞自噬及细胞凋亡等多种生物学过程。HIF-1α的稳定性受到多种信号的调节,包括氧气水平、病原体感染以及代谢中间体... 详细信息

缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)是细胞应对缺氧反应的中枢调节因子,稳定的HIF-1α具有多种功能,参与血管生成、代谢调节、细胞自噬及细胞凋亡等多种生物学过程。HIF-1α的稳定性受到多种信号的调节,包括氧气水平、病原体感染以及代谢中间体等。近年来,越来越多的研究表明,HIF-1α在感染性疾病中起着重要作用。因此,本文就HIF-1α稳定性的调节机制及其在病毒、细菌等病原体感染和相关疾病发生发展中的作用进行讨论和总结,旨在为进一步解析HIF-1α在防御多种病原体感染中的作用和其作为靶向治疗的潜在靶点等相关研究提供参考。

关键词： HIF-1α 稳定性病原体感染作用机制

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口蹄疫病毒O型全自动磁微粒CLIA抗体定量检测方法的建立

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中国农业科学 2024年第4期57卷 810-819页

作者：包艳芳蒋韬何莉吕律李涛善李昕孙燕燕杨光魏婷潘晓乐林密兰州兽研生物科技有限公司中国农业科学院兰州兽医研究所/动物疫病防控全国重点实验室/国家口蹄疫参考实验室

【背景】口蹄疫(foot and mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒引起的一种急性、热性、烈性传染病，疫苗接种是预防临床口蹄疫的有效措施。免疫抗体水平监测则是评估疫苗免疫效果、制定免疫程序的重要依据，是免疫工作和疫情防控必不可少... 详细信息

【背景】口蹄疫(foot and mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒引起的一种急性、热性、烈性传染病，疫苗接种是预防临床口蹄疫的有效措施。免疫抗体水平监测则是评估疫苗免疫效果、制定免疫程序的重要依据，是免疫工作和疫情防控必不可少的关键环节，因此建立高效、快速、全自动的抗体检测方法具有重要意义。【目的】基于磁微粒(micromagnetic particles,MPs)化学发光免疫分析技术(CLIA)，建立一种新型、全自动、可定量的口蹄疫病毒O型抗体检测方法，为口蹄疫免疫监测和疫情防控提供技术支撑。【方法】使用纳米材料磁微粒为固相载体和分离载体包被捕获抗体，用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)标记检测抗体，经过条件优化建立了一种新型磁微粒CLIA检测方法(magnetic particle chemiluminescence immunoassay,MP-CLIA)。本方法首先加入磁微粒-兔抗偶联物(magnetic particle-polyclonal antibodies,MPs-p Abs)、待测样本、口蹄疫病毒O型抗原，37℃孵育；再加入适量酶标抗体(ALP-p Abs),37℃孵育；最后加入化学发光底物AMPPD，检测相对发光强度(relative light unit,RLU)。研究通过检测标准品拟合标准曲线，并应用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic,ROC)确定检测方法的判定标准；利用质控样本进行方法学评价，同时检测田间样本，并和液相阻断ELISA(LPB-ELISA)比对，验证临床检测效果。【结果】优化后最佳反应条件为磁微粒浓度0.25 mg·m L-1、口蹄疫病毒O型抗原1﹕1 000稀释、酶标抗体1﹕2 000稀释、加样量20μL。整个检测过程均在全自动化学发光免疫分析仪中完成，反应时间20 min，在抗体含量0—1 280 U(效价0—1﹕2 048)范围内标准曲线R2>0.99，可进行定量检测。该方法敏感性为94.66%；特异性为97.10%，检测口蹄疫A型、Asia I型血清型特异性为97.14%，与塞内卡病毒(SVV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、牛流行热病毒(BEFV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、羊痘病毒(QRFV)、小反刍兽疫病毒(PPRV)抗体阳性血清无交叉反应；重复检测变异系数CV值学发光仪，可进行全自动化检测，是一种新型、高效的口蹄疫病毒O型抗体定量检测方法，本方法对应的试剂盒已经完成中试生产和临床检测试验，在全国不同区域试用效果较好，具有较高的临床应用价值。

关键词：磁微粒化学发光免疫分析法口蹄疫磁微粒全自动化