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非洲猪瘟病毒I7L蛋白参与病毒免疫逃逸的新机制

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中国兽医科学 2025年第1期55卷 139-140页

作者：陈佳宁中国农业科学院兰州兽医研究所

非洲猪瘟(ASF)是猪的一种急性,热性,高度接触性传染病,致死率可达100%。非洲猪瘟病毒(ASFV)是引起该病的病原。ASFV主要感染原代猪单核巨噬细胞系统,仅低效感染少数细胞系,这极大地制约了相应疫苗的研发及对ASFV病原生物学及致病机制的... 详细信息

非洲猪瘟(ASF)是猪的一种急性,热性,高度接触性传染病,致死率可达100%。非洲猪瘟病毒(ASFV)是引起该病的病原。ASFV主要感染原代猪单核巨噬细胞系统,仅低效感染少数细胞系,这极大地制约了相应疫苗的研发及对ASFV病原生物学及致病机制的探索。近期,PLoS Pathogens杂志在线发表了题为“The I7L protein of African swine fever virus is involved in viral pathogenicity by antagonizing the IFN-γ-triggered JAK-STAT signaling pathway through inhibiting the phosphorylation of STAT1”的研究论文,中国农业科学院哈尔滨兽医研究所孙元研究员、李素研究员、仇华吉研究员和李连峰研究员为该论文的共同通讯作者。研究证实,ASFV基因组编码的I7L蛋白可结合STAT1,从而抑制STAT1的磷酸化并拮抗IFN-γ介导的JAK-STAT信号通路,进而调控病毒致病力。该研究为开发ASF弱毒活疫苗提供了新靶点。

关键词：非洲猪瘟病毒(ASFV) I7L蛋白免疫逃逸

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南非2型口蹄疫病毒抗体胶体金免疫层析试纸条的研制及初步应用

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病毒学报 2025年

作者：石鑫泰朱昱茜石正旺罗俊聪席韬张帆何印娣李帅鹏郑海学田宏中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃农业大学动物医学院

本研究旨在开发一种用于检测南非2型口蹄疫病毒（Foot-and-mouth sisease virus south African territory 2,FMDV-SAT2）抗体的简便、迅速、高特异性和灵敏性的胶体金免疫层析方法。该方法利用胶体金颗粒标记的VP1蛋白作为标记抗原，并... 详细信息

本研究旨在开发一种用于检测南非2型口蹄疫病毒（Foot-and-mouth sisease virus south African territory 2,FMDV-SAT2）抗体的简便、迅速、高特异性和灵敏性的胶体金免疫层析方法。该方法利用胶体金颗粒标记的VP1蛋白作为标记抗原，并在硝酸纤维素膜上固定VP1蛋白及其单克隆抗体（Monoclonal antibody,mAb），分别形成检测线（T线）和质量控制线（C线）。通过一系列优化试验，胶体金标记VP1蛋白的最适pH、标记量分别为8.0和24μg/mL,C线的喷膜浓度为1.5 mg/mL,T线的喷膜浓度为0.2 mg/mL，可在12～15 min内完成检测，用于检测FMDV-SAT2抗体。结果显示，研制的胶体金试纸条与塞内卡病毒（Senecavirus A,SVA）、O型口蹄疫病毒（FMDV-O）、A型口蹄疫病毒（FMDV-A）的灭活血清以及南非1型口蹄疫病毒（FMDV-SAT1）、南非3型口蹄疫病毒（FMDV-SAT3）VP1蛋白免疫的兔血清均无交叉反应；与南非2型口蹄疫病毒VP1蛋白（FMDV-SAT2-VP1）免疫的兔血清的反应灵敏度可达1:64；对110份FMDV-O型和50份FMDV-A型阳性猪血清样品进行检测，所有检测结果均显示为阴性；该试纸条在室温（18℃～25℃）和冷藏（4℃）环境下可分别保持稳定6个月和9个月。结果表明，本研究研发的胶体金免疫层析试纸条展现出高度的灵敏性和特异性，同时具备检测快速、操作便捷、结果直观等特点，对FMDV-SAT2的现场检测具有实际应用价值。

关键词：南非2型口蹄疫病毒胶体金试纸条抗体检测方法

非洲猪瘟病毒H108R蛋白的制备及其免疫原性评价

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畜牧兽医学报 2025年

作者：张越茹毅郝荣增杨锐赵陇和李亚军杨洋张荣蒋成辉郑海学中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃农业大学动物医学院

本研究旨在制备ASFV H108R蛋白，通过免疫小鼠评价该蛋白的免疫原性，为该蛋白作为疫苗候选抗原的研究提供理论依据。利用生物信息学工具分析H108R蛋白的结构及基本理化性质，选择编码蛋白33-108 AA的基因序列串联融合到原核表达载体，... 详细信息

本研究旨在制备ASFV H108R蛋白，通过免疫小鼠评价该蛋白的免疫原性，为该蛋白作为疫苗候选抗原的研究提供理论依据。利用生物信息学工具分析H108R蛋白的结构及基本理化性质，选择编码蛋白33-108 AA的基因序列串联融合到原核表达载体，转化后经IPTG诱导表达，用镍亲和层析纯化目标蛋白质。免疫小鼠利用流式细胞术检测脾脏活化的CD4+和CD8+T淋巴细胞，分离小鼠血清测定特异性抗体滴度，利用WB和IFA鉴定多克隆抗体的特异性。并用试剂盒检测血清中细胞因子含量，将血清与ASFV-GFP病毒孵育评估抗体是否能抑制病毒的复制。生物信息学分析表明H108R蛋白为亲水性蛋白质，有跨膜区，无信号肽，蛋白二三级结构中存在较多α-螺旋。SDS-PAGE、Western blotting显示IPTG诱导后，成功表达纯化H108R蛋白。蛋白免疫小鼠后能够诱导小鼠脾脏T细胞的活化，刺激机体产生更高水平的细胞因子。免疫制备的多克隆抗体效价为1∶128 000，能与ASFV-GFP病毒特异性结合，与病毒孵育后能明显抑制病毒的复制。本研究成功表达制备了ASFV H108R蛋白，免疫能够诱导脾脏T淋巴细胞活化，引起细胞因子水平升高，制备的多克隆抗体能够明显抑制病毒的复制，具有较好的免疫原性，为深入研究H108R蛋白的生物学功能及疫苗研究奠定基础。

关键词：非洲猪瘟病毒(ASFV) H108R蛋白多克隆抗体免疫原性

结节性皮肤病病毒A27L蛋白的可溶性表达及其多克隆抗体制备

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中国兽医科学 2025年

作者：包燕玲宋昱庆户鑫兵张格林田占成关贵全罗建勋苟惠天殷宏独军政甘肃农业大学动物医学院中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃省病原生物学基础学科研究中心

旨在获得结节性皮肤病病毒（LSDV）的重组A27L蛋白并制备其多克隆抗体，将密码子优化的A27L基因进行人工合成，随后克隆至pET-28a表达载体中，成功构建重组表达质粒pET-28a-A27L，将其转化入BL21(DE3)感受态细胞中，用0.5 mmol/L IPTG... 详细信息

旨在获得结节性皮肤病病毒（LSDV）的重组A27L蛋白并制备其多克隆抗体，将密码子优化的A27L基因进行人工合成，随后克隆至pET-28a表达载体中，成功构建重组表达质粒pET-28a-A27L，将其转化入BL21(DE3)感受态细胞中，用0.5 mmol/L IPTG进行诱导表达，利用SDS-PAGE和Western-blot对表达产物进行分析。经优化表达条件获得分子质量约为19 kDa的可溶性重组A27L蛋白。采用High Affinity Ni-Charged Resin FF对可溶性表达产物进行纯化，成功获得高纯度的重组A27L蛋白，将其免疫新西兰大白兔4次后收集血清，Western-blot分析和间接免疫荧光鉴定结果表明A27L多克隆抗体可特异识别BHK-21细胞中表达的重组A27L蛋白。本研究利用大肠杆菌成功表达了可溶性重组LSDV A27L蛋白，并制备出特异的A27L多克隆抗体，为深入研究A27L蛋白的生物学功能以及研发结节性皮肤病疫苗和诊断技术提供了基础。

关键词：结节性皮肤病病毒 A27L蛋白可溶性表达多克隆抗体

甘肃一起小反刍兽疫病例中流行毒株的生物学特性和遗传进化分析

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中国兽医科学 2025年

作者：刘萍杜国玉柳周斌聂帅帅吴锦艳曹小安何继军尚佑军中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室庄浪县通化镇畜牧兽医站

2023年11月，甘肃省临夏市某羊场羔羊死亡，根据临床症状、病理剖检及实时荧光定量RT-PCR结果诊断为小反刍兽疫病毒（PPRV）感染。采用RT-PCR扩增PPRV流行株全基因组序列，比对分析全基因组及其F基因、H基因和N基因序列，绘制进化树。... 详细信息

2023年11月，甘肃省临夏市某羊场羔羊死亡，根据临床症状、病理剖检及实时荧光定量RT-PCR结果诊断为小反刍兽疫病毒（PPRV）感染。采用RT-PCR扩增PPRV流行株全基因组序列，比对分析全基因组及其F基因、H基因和N基因序列，绘制进化树。为探讨不同滴度PPRV疫苗毒株Nigeria75/1对绵羊外周血单个核细胞（PBMCs）增殖和分化的影响，采用CCK-8检测PBMCs的增殖情况，流式细胞术对CD4+和CD8+T淋巴细胞进行分型分析。结果显示，PPRV流行毒株基因组全长15954 bp，属于基因Ⅳ型；该流行毒株与2013-2014年小反刍兽疫疫情分离毒株China/XJYL/2013、China/3/2013及China/GS/2018亲缘关系最近。另外，不同滴度的PPRV疫苗毒株Nigeria75/1均抑制绵羊PBMCs体外增殖，且高滴度的PPRV疫苗毒株抑制CD4+和CD8+T淋巴细胞的分化。以上结果表明，引起此次PPRV感染的毒株可能来源于2013—2014年小反刍兽疫疫情。PPRV疫苗重复免疫或高剂量免疫可能是造成我国PPRV疫苗免疫后仍然会感染和发病的原因。

关键词：病理剖检小反刍兽疫病毒遗传进化分析流行病学

寨卡病毒感染致病机制及其防控策略的研究进展

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中国兽医科学 2025年

作者：巩俊佑段翔瀚郑海学葛朝明兰州大学第二医院中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室兰州大学动物医学与生物安全学院

寨卡病毒（Zika virus，ZIKV）是一种人畜共患的虫媒黄病毒，ZIKV疫情及其临床不良预后引发了全世界的关注。本文综述了当前对ZIKV病原学的认识，讨论了病毒蛋白与宿主相互作用以及致病性的机制，总结了抗病毒化合物和疫苗开发的进展及... 详细信息

寨卡病毒（Zika virus，ZIKV）是一种人畜共患的虫媒黄病毒，ZIKV疫情及其临床不良预后引发了全世界的关注。本文综述了当前对ZIKV病原学的认识，讨论了病毒蛋白与宿主相互作用以及致病性的机制，总结了抗病毒化合物和疫苗开发的进展及公共卫生应对的措施，以期为防控工作提供有益参考。

关键词：寨卡病毒病原学致病机制防控策略

非洲猪瘟病毒p15蛋白在昆虫细胞中的表达及其免疫原性评价

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中国兽医科学 2025年

作者：党海迷杨洋茹毅郝荣增蒋成辉赵陇和卢炳州李亚军胡馨予韩盛楠伍国强郑海学兰州理工大学生命科学与工程学院中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃省病原生物学基础学科研究中心

本研究旨在利用昆虫杆状病毒表达系统制备非洲猪瘟病毒(ASFV) p15蛋白，并对其免疫原性进行评价，为非洲猪瘟亚单位疫苗研究提供试验基础。首先把编码p15蛋白的基因序列克隆至载体pFastBac1中，构建重组质粒pFastBac-p15，将该质粒与DH1... 详细信息

本研究旨在利用昆虫杆状病毒表达系统制备非洲猪瘟病毒(ASFV) p15蛋白，并对其免疫原性进行评价，为非洲猪瘟亚单位疫苗研究提供试验基础。首先把编码p15蛋白的基因序列克隆至载体pFastBac1中，构建重组质粒pFastBac-p15，将该质粒与DH10Bac同源重组后转染昆虫细胞收获重组杆状病毒rBac-p15，将rBac-p15感染sf9细胞进行重组蛋白的表达；然后利用亲和层析纯化获得目的蛋白，并利用SDS-PAGE、Western-blot和IFA鉴定重组蛋白的表达及反应性；再将p15蛋白免疫小鼠，评估其体液和细胞免疫应答水平。结果表明，在感染重组杆状病毒rBac-p15的sf9细胞中，p15蛋白获得高效表达，并可被ASFV康复猪血清特异性识别。p15蛋白免疫小鼠诱导产生高水平的特异性抗体和细胞因子，有利于刺激脾脏CD4+、CD8+ T淋巴细胞的增殖。综上，本研究利用昆虫杆状病毒表达系统成功制备了p15蛋白，该蛋白能够同时诱导很好的体液和细胞免疫应答，有助于非洲猪瘟疫苗的进一步研究。

关键词：非洲猪瘟病毒 p15蛋白昆虫杆状病毒表达系统免疫原性评价

靶向FMDV基因组3B和3Cpro基因CRISPR/Cas13d转基因细胞系的构建及应用

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中国兽医科学 2025年

作者：郑东东齐晓兰杨彪晏子龙郑海学冯涛徐红伟西北民族大学生命科学与工程学院中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃省病原生物学基础学科研究中心

基因组编辑工具在抗病研究中具有巨大潜力。本研究旨在探究CRISPR/Cas13d系统在体外抗口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease virus，FMDV）研究的可行性。首先，靶向FMDV非结构蛋白3B和3Cpro的基因序列设计了2条向导RNA （guide RNA， ... 详细信息

基因组编辑工具在抗病研究中具有巨大潜力。本研究旨在探究CRISPR/Cas13d系统在体外抗口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease virus，FMDV）研究的可行性。首先，靶向FMDV非结构蛋白3B和3Cpro的基因序列设计了2条向导RNA （guide RNA， gRNA），并将其构建到Cas13d表达载体中；通过脂质体将表达载体转染到BHK21细胞中，再通过嘌呤霉素筛选，获得了转基因细胞系。随后，利用RT-qPCR、Western-blot以及TCID50等试验检测FMDV在转基因细胞系中的复制情况。结果显示，CRISPR/Cas13d系统显著抑制了FMDV在BHK21细胞中的复制。提示，CRISPR/Cas13d系统在口蹄疫病毒抗病研究中发挥重要作用，同时为创制具有抗病特性的家畜新品种提供了重要的理论基础，为畜禽疫病的防控提供了新的途径。

关键词：口蹄疫病毒 CRISPR/Cas13d 家畜抗病转基因

CRISPR-Cas9介导的TRIM3基因敲除细胞系的建立及其应用

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中国兽医科学 2025年

作者：裴丹诗范许许朱兆宇王一卓何路任青峰李熙忠郑海学李伟伟万博河南农业大学动物医学院中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室

本研究旨在探究宿主蛋白TRIM3对口蹄疫病毒（FMDV）复制的影响。利用CRISPR/Cas9系统构建了TRIM3基因敲除的BHK21细胞系，并借助CCK8试剂盒检测了该基因的缺失对细胞活力的影响，结果表明，TRIM3敲除对细胞生长状态无明显影响。将FMDV... 详细信息

本研究旨在探究宿主蛋白TRIM3对口蹄疫病毒（FMDV）复制的影响。利用CRISPR/Cas9系统构建了TRIM3基因敲除的BHK21细胞系，并借助CCK8试剂盒检测了该基因的缺失对细胞活力的影响，结果表明，TRIM3敲除对细胞生长状态无明显影响。将FMDV分别感染野生型和TRIM3敲除型的BHK21细胞，通过Q-PCR、Western-blot和TCID50等多种方法检测FMDV在上述2株细胞中的复制情况，结果表明，TRIM3缺失能够显著抑制FMDV的复制。为了进一步验证TRIM3的表型功能，用慢病毒包装系统构建了TRIM3过表达细胞系。结果显示，过量表达TRIM3能够促进FMDV的复制。综上所述，本研究通过CRISPR/Cas9系统成功构建了TRIM3基因敲除细胞系和过表达细胞系，首次证明了TRIM3能够正向调控FMDV的复制，为后续探究TRIM3调控FMDV复制的具体机制奠定了基础。

关键词： TRIM3 口蹄疫病毒细胞系