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2022年达州市家畜O型口蹄疫免疫抗体监测与分析

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动物医学进展 2024年第2期45卷 123-127页

作者：张蕾欧云文刘俐君赵小波唐慧伦杨青李成高嵩李清竹达州市动物疫病预防控制中心四川达州635000 开江县动物疫病预防控制中心四川达州636250 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃兰州730046

为准确掌握2022年达州市家畜O型口蹄疫(Foot-and-mouth disease, FMD)免疫效果,从辖区180个场(点)随机采集猪、牛和羊血清2 879份,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行O型FMD免疫抗体检测。结果显示,家畜O型FMD免疫抗体场(点)阳性率为88.8... 详细信息

为准确掌握2022年达州市家畜O型口蹄疫(Foot-and-mouth disease, FMD)免疫效果,从辖区180个场(点)随机采集猪、牛和羊血清2 879份,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行O型FMD免疫抗体检测。结果显示,家畜O型FMD免疫抗体场(点)阳性率为88.89%,样品阳性率为88.78%,均达到农业农村部规定标准。在不同种类家畜方面,牛场(点)阳性率和样品阳性率均最高,分别为93.94%和93.41%;在场(点)类型方面,屠宰环节的场(点)阳性率显著低于养殖环节(P家畜O型FMD免疫效果较好,建立了有效的免疫保护屏障,可为进一步做好FMD科学防控提供数据参考。

关键词：家畜 O型口蹄疫免疫抗体

羊肠道蒙氏肠球菌和屎肠球菌的分离鉴定及益生特性分析

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微生物学通报 2024年第7期51卷 2546-2562页

作者：褚鑫龙马轲高鹏程付磊李学瑞冉维储岳峰蒋建军石河子大学动物科技学院新疆石河子832000 中国农业科学院兰州兽医研究所、兰州大学动物医学与生物安全学院、动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730000 甘肃省病原生物学基础学科研究中心甘肃兰州730046

【背景】随着病原菌对抗生素耐药性的不断增加,在畜牧业养殖中研发安全可靠的抗生素替代品变得越来越重要。益生菌以其无毒、无残留、低成本且能有效补充肠道有益微生物等诸多优点,成为一种理想的抗生素替代品。【目的】从绵羊肠道共生... 详细信息

【背景】随着病原菌对抗生素耐药性的不断增加,在畜牧业养殖中研发安全可靠的抗生素替代品变得越来越重要。益生菌以其无毒、无残留、低成本且能有效补充肠道有益微生物等诸多优点,成为一种理想的抗生素替代品。【目的】从绵羊肠道共生菌中分离获得满足益生特性的益生菌。【方法】将健康绵羊肠道内容物及粪便在MRS培养基上分离纯化,利用形态学和16S rRNA基因序列分析鉴定分离菌株;通过抗菌活性分析、耐酸和耐胆盐能力测定、自聚集能力测定、抗生素敏感性分析及对小鼠的安全性测定等确定益生特性。【结果】从健康绵羊肠道中分离出多株肠道共生菌,经鉴定其中2株属于肠球菌,分别为蒙氏肠球菌(Enterococcus mundtii)A12和屎肠球菌(Enterococcus faecium)C1。抗菌分析显示,分离菌株A12和C1培养上清对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和猪霍乱沙门氏菌(Salmonella choleraesuis)均有很强的抗菌活性。耐受性分析显示分离菌株A12和C1具有良好的耐酸和耐胆盐特性,并且均具有很强的自聚集能力。药敏试验发现分离菌株A12和C1对多种抗生素敏感。小鼠体内安全性试验显示分离菌株A12和C1未使小鼠出现明显的病理变化,因此具备良好的安全性。【结论】分离纯化的2株肠道共生菌Enterococcus mundtii A12和Enterococcus faecium C1具有优良的益生特性和良好的安全性,具备作为益生菌开发的潜力。

关键词：羊肠道分离纯化肠球菌益生特性

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2020－2023甘肃猪繁殖与呼吸综合征病毒的基因遗传变异分析

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中国兽医科学 2024年

作者：焦守德张婧李平花王健韩庆彦张雨星魏达礼王方洲白兴文卢曾军马雪青孙普甘肃农业大学中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃省病原生物学基础学科研究中心甘肃省动物疫病预防控制中心

为了了解甘肃地区猪群中猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 的流行及遗传变异情况，采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法对2020－2023年收集的猪组织样品进行PRRSV ORF5、NSP2和ORF3基因扩增并测序，通过MEGA软件构建遗传进化树进行遗传... 详细信息

为了了解甘肃地区猪群中猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 的流行及遗传变异情况，采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法对2020－2023年收集的猪组织样品进行PRRSV ORF5、NSP2和ORF3基因扩增并测序，通过MEGA软件构建遗传进化树进行遗传变异分析。结果显示，共检测了52份猪临床样品，PRRSV核酸阳性率为52%（32/52），成功获得了32条ORF5、15条NSP2和14条ORF3基因序列。ORF5基因遗传进化分析表明，2020－2023年甘肃地区猪群中PRRSV流行毒株中存在美洲型1.5谱系（4株）、1.8谱系（24株）、5.1谱系（2株）、8.7谱系（2株）；NSP2基因遗传进化分析表明，获得的15条NSP2序列均为1.8谱系；ORF3基因遗传进化分析表明，获得的14条ORF3序列包括1.5谱系（2株）、1.8谱系（11株）、3.5谱系（1株）。基因核苷酸序列与参考毒株的同源性分别为ORF5 82.3%～99.7%、NSP2 85.9%～90%和ORF3 89.8%～95.7%；基因编码氨基酸序列与参考毒株的同源性分别为ORF5 79.6%～99%、NSP2 83.4%～87.7%和ORF3 85.1%～94.5%。ORF5基因编码的GP5蛋白的信号肽区、高变区、细胞表位区等区域均存在不同程度的变异，其中5株毒株的第33位氨基酸出现了缺失；15株NSP2蛋白氨基酸序列的缺失模式与NADC30株一致。上述结果表明，当前甘肃地区猪群中PRRSV呈现以1.8毒株谱系为优势的美洲型多谱系共循环流行，这对甘肃地区防控PRRSV提供了重要的流行病学数据。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5 NSP2 ORF3 遗传变异

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纳米抗体及其在动物传染病防控中的应用

中国兽医学报 2024年第2期44卷 377-385页

作者：李甜甜邓效禹李智杰许丽文孙亚杰胡博白雪中国农业科学院特产研究所农业农村部经济动物疫病重点实验室吉林长春130112

纳米抗体是存在于骆驼科外周血中的一种天然缺失轻链的重链抗体可变区结构域,因其特殊的结构特点具有相对分子质量小、亲和力高、稳定性强、易于可溶性重组表达等优点,近年来在轮状病毒、流感病毒、新型冠状病毒、口蹄疫病毒、小反刍兽... 详细信息

纳米抗体是存在于骆驼科外周血中的一种天然缺失轻链的重链抗体可变区结构域,因其特殊的结构特点具有相对分子质量小、亲和力高、稳定性强、易于可溶性重组表达等优点,近年来在轮状病毒、流感病毒、新型冠状病毒、口蹄疫病毒、小反刍兽疫病毒、狂犬病病毒、金黄色葡萄球菌以及沙门菌等传染性病原体的诊断与治疗中取得了较好的应用效果。现主要介绍纳米抗体的结构与特点、制备与表达技术,在传染病诊断与治疗中的应用研究现状与发展趋势,以及优缺点,为传染病的防控技术提供参考。

关键词：纳米抗体病毒诊断治疗

分泌型免疫球蛋白A和肠道菌群相互作用的研究进展

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中国兽医科学 2024年第4期54卷 541-545页

作者：时志琪王玉桂李晓璐王帅郭爱疆中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730000

分泌型免疫球蛋白A(sIgA)是肠道黏膜组织中最丰富的抗体类型,与黏液和抗菌肽组成肠上皮细胞的第一道防线,保护其免受肠道病原的侵害。sIgA不仅可以阻止病原微生物的入侵,中和毒素,而且能够调节肠道菌群的组成比例,维持肠道内微生物群的... 详细信息

分泌型免疫球蛋白A(sIgA)是肠道黏膜组织中最丰富的抗体类型,与黏液和抗菌肽组成肠上皮细胞的第一道防线,保护其免受肠道病原的侵害。sIgA不仅可以阻止病原微生物的入侵,中和毒素,而且能够调节肠道菌群的组成比例,维持肠道内微生物群的稳态。本综述主要介绍肠道sIgA的合成与分泌途径、sIgA与肠道菌群的相互作用。

关键词：分泌型免疫球蛋白A 肠道菌群相互作用

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呼吸道合胞病毒NS2蛋白单克隆抗体的制备及初步研究

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病毒学报 2024年第2期40卷 302-313页

作者：王亚娟陈娇陈志华茹毅郑海学裴晶晶兰州理工大学生命科学与工程学院兰州730050 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室兰州730000 甘肃省病原生物学基础学科研究中心兰州730046

呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)是一种引起婴幼儿下呼吸道感染的RNA病毒,其非结构蛋白(Nonstructural protein 2,NS2)在病毒复制和宿主抗病毒免疫中起到关键作用,但目前尚无商品化NS2单克隆抗体。本研究选取NS2基因,... 详细信息

呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)是一种引起婴幼儿下呼吸道感染的RNA病毒,其非结构蛋白(Nonstructural protein 2,NS2)在病毒复制和宿主抗病毒免疫中起到关键作用,但目前尚无商品化NS2单克隆抗体。本研究选取NS2基因,经密码子优化后构建重组质粒pET-32a-NS2。将该重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经16℃诱导表达后,对表达蛋白进行SDS-PAGE鉴定。应用亲和层析技术纯化重组蛋白,将纯化的蛋白免疫小鼠制备单克隆抗体,并将该单克隆抗体用于Western blot分析、免疫荧光检测和免疫沉淀反应。结果表明,诱导后的重组蛋白为可溶性表达,并经纯化后得到高纯度的NS2蛋白;纯化的NS2蛋白免疫小鼠后,获得了一株特异性强、反应性好的RSV NS2单克隆抗体4A4 2B2,其亚型为IgG1,且抗体效价可达1∶1024000;使用该单克隆抗体鉴定出RSV NS2蛋白在转染和感染细胞中正常表达,且NS2主要分布在细胞质中,在细胞核周围形成点状聚集体;在免疫沉淀反应中,该单克隆抗体作为捕获抗体能够特异性结合细胞中表达的NS2蛋白,为NS2蛋白的功能研究奠定了基础。

关键词：呼吸道合胞病毒 NS2蛋白原核表达单克隆抗体

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非洲马瘟病毒VP5蛋白在杆状病毒表达系统中的表达及其抗体制备

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中国兽医科学 2024年第3期54卷 357-363页

作者：范亚亚王轩莹户鑫兵田占成关贵全罗建勋殷宏郑玉姝独军政河南科技学院动物科技学院河南新乡453003 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730000 甘肃省病原生物学基础学科研究中心甘肃兰州730046

为了确定非洲马瘟病毒(AHSV)VP5蛋白的免疫学特性,通过人工合成非洲马瘟病毒VP5蛋白的S6全长基因序列,经PCR扩增后克隆到转座质粒载体pFastBac HTb上,将重组质粒转化至DH10Bac感受态细胞,通过蓝白斑试验筛选出重组杆状病毒质粒Bacmid-AH... 详细信息

为了确定非洲马瘟病毒(AHSV)VP5蛋白的免疫学特性,通过人工合成非洲马瘟病毒VP5蛋白的S6全长基因序列,经PCR扩增后克隆到转座质粒载体pFastBac HTb上,将重组质粒转化至DH10Bac感受态细胞,通过蓝白斑试验筛选出重组杆状病毒质粒Bacmid-AHSVS6,转染Sf9昆虫细胞;构建了重组质粒pFastBac-AHSVS6,拯救获得含有AHSV S6基因的重组杆状病毒。SDS-PAGE和Western-blot鉴定表明,在Sf9昆虫细胞中成功表达分子质量大小为60 ku的AHSV VP5重组蛋白。采用组氨酸标签纯化树脂对重组VP5蛋白进行纯化,将其与弗氏佐剂乳化后3次免疫新西兰大白兔收集血清,获得了针对AHSV VP5蛋白的多克隆抗体,并通过Western-blot和间接免疫荧光试验验证了该抗体的特异性。本试验利用杆状病毒表达系统成功表达了AHSV全长VP5重组蛋白,成功制备出特异的VP5蛋白多克隆抗体,这为进一步研究AHSV VP5蛋白的功能及研制亚单位疫苗奠定了基础。

关键词：非洲马瘟病毒 VP5蛋白杆状病毒表达系统多克隆抗体免疫荧光

一株羊肠道病毒的分离鉴定及其基因组特征分析

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中国兽医科学 2024年第4期54卷 511-518页

作者：张雨星马雪青李平花魏达礼李冬张婧王卉袁红王萌白兴文刘在新卢曾军曾巧英王桂荣孙普甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州1730070 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730046 甘肃省病原生物学基础学科研究中心甘肃兰州730046

本研究利用宏基因组测序技术,从死亡湖羊淋巴组织中检测出小反刍兽疫病毒与羊肠道病毒混合感染,为了分离羊肠道病毒,采取病毒总RNA转染BHK21细胞方法,连续传代后,通过致细胞病变、测序、TCID_(50)测定和病毒一步生长曲线、电镜观察等鉴... 详细信息

本研究利用宏基因组测序技术,从死亡湖羊淋巴组织中检测出小反刍兽疫病毒与羊肠道病毒混合感染,为了分离羊肠道病毒,采取病毒总RNA转染BHK21细胞方法,连续传代后,通过致细胞病变、测序、TCID_(50)测定和病毒一步生长曲线、电镜观察等鉴定分离出病毒,并与参考毒株比对分析分离病毒的基因特征。结果显示,转染病毒总RNA的BHK21细胞传至第2代就出现了明显的致细胞病变效应,测序证明培养物中仅含羊肠道病毒,其基因组全长为7446 nt,其中5′UTR长821 nt,3′UTR长109 nt,ORF长6516 nt,与参考毒株比较可划分为G种肠道病毒,病毒粒子大小为20~30 nm,第6代细胞毒感染8 h时TCID_(50)值最高,为10^(-4.2)/0.1 mL,命名为JSNT/1/2022株。本研究首次利用组织病料RNA转染细胞的方法成功分离出1株羊肠道病毒,说明羊肠道病毒核酸具有感染性,为羊肠道病毒的分离鉴定探索了一种更为可靠的方法,也为羊肠道病毒相关基础与应用研究奠定了病原学基础。

关键词：羊肠道病毒分离鉴定 RNA感染性基因组

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功能化铁蛋白纳米颗粒疫苗的研究进展

农业生物技术学报 2024年第4期32卷 903-910页

作者：张荣魏彦明茹毅甘肃农业大学动物医学院中农威特生物科技股份有限公司甘肃省病原生物学基础学科研究中心/中国农业科学院兰州兽医研究所/兰州大学动物医学与生物安全学院/动物疫病防控全国重点实验室

在众多的纳米载体中，蛋白质纳米颗粒由于其生物相容性及设计的灵活性，是疫苗纳米载体生物技术中的研究热点。与分离的蛋白质亚基相比，蛋白质纳米颗粒疫苗更容易被抗原提呈的树突状细胞吸收。铁蛋白是一种普遍存在的铁储存和解毒蛋白... 详细信息

在众多的纳米载体中，蛋白质纳米颗粒由于其生物相容性及设计的灵活性，是疫苗纳米载体生物技术中的研究热点。与分离的蛋白质亚基相比，蛋白质纳米颗粒疫苗更容易被抗原提呈的树突状细胞吸收。铁蛋白是一种普遍存在的铁储存和解毒蛋白，可以保护细胞免受铁诱导的氧化损伤，化学和热稳定性良好，具有可逆的组装、拆卸及展示抗原的能力。铁蛋白不仅是实用的纳米反应器和纳米载体，也是有效的疫苗开发平台。本文综述了铁蛋白的结构和功能特性、自组装、新的生物工程策略、铁蛋白纳米颗粒的生产、纯化和功能化，并讨论了铁蛋白在疫苗开发领域的应用进展及前景。本文为纳米生物技术在疫苗研制中的应用提供理论支持。

关键词：铁蛋白纳米颗粒基因融合自组装疫苗