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猪繁殖与呼吸综合征病毒5′非翻译区一茎环结构的功能解析

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畜牧兽医学报 2010年第11期41卷 1428-1434页

作者：陆嘉琦高飞刘萍袁世山中国农业科学院上海兽医研究所/中国动物卫生与流行病学中心上海分中心猪传染病研究室农业部动物寄生虫病重点实验室上海200241

以猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)北美株感染性克隆为平台进行反向遗传操作,利用突变PCR将5′非翻译区(5′UTR)中部分一级序列进行系列突变,以改变5′UTR二级结构中的一保守茎部结构,从而解析PRRSV5′UTR中结构与功能的关系。通过DNA转... 详细信息

以猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)北美株感染性克隆为平台进行反向遗传操作,利用突变PCR将5′非翻译区(5′UTR)中部分一级序列进行系列突变,以改变5′UTR二级结构中的一保守茎部结构,从而解析PRRSV5′UTR中结构与功能的关系。通过DNA转染MARC-145细胞观察突变体克隆的感染性,并通过免疫荧光及Northern blot来研究拯救后突变病毒的复制、转录特性,以及通过空斑形态学分析突变病毒的生长特性。结果表明,PRRSV5′UTR中保守茎部结构的二级结构与病毒的拯救无直接关系,但其一级核苷酸序列却是PRRSV病毒复制所必需的,作者还找到直接调控病毒复制的核心位点。由此证实了5′UTR中调控PRRSV复制过程的必需序列,为进一步解析PRRSV复制过程的调控元件奠定了基础。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 5′UTR 高级结构与功能病毒复制基因表达调控

猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5/6和ORF6/7重叠区的分离(人工)改造病毒的构建及鉴定

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中国预防兽医学报 2008年第2期30卷 81-85页

作者：余丹丹孙志王金勇袁世山中国农业科学院上海兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心上海分中心/动物传染病研究室/农业部动物寄生虫病重点实验室上海200232

为了研究重叠序列在病毒繁殖周期中所起的作用以及更好地操作感染性克隆,将猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染性克隆ORF间(ORF5/6和ORF6/7)重叠区域分离并插入酶切位点,成功构建两个突变的全长质粒,随后进行了病毒拯救和复制分析。结... 详细信息

为了研究重叠序列在病毒繁殖周期中所起的作用以及更好地操作感染性克隆,将猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染性克隆ORF间(ORF5/6和ORF6/7)重叠区域分离并插入酶切位点,成功构建两个突变的全长质粒,随后进行了病毒拯救和复制分析。结果表明:(1)两个全长质粒均能够进行病毒拯救,并产生明显细胞病变;(2)突变病毒具遗传稳定性;(3)病毒空斑形态及生长曲线与亲本毒株近似。表明PRRSVORF间重叠碱基的安排方式对病毒的感染性是非必需的,获得的两株突变病毒为进一步研制PRRSV基因标识疫苗、研究PRRSV各编码蛋白功能奠定了基础。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒重叠序列病毒感染性反向遗传操作

辅助T细胞表位预测及其在抗寄生虫疫苗研发中的应用

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2008年第3期26卷 228-233页

作者：邵东华(综述) 冯新港(审校) 中国农业科学院上海兽医研究所上海动物生物技术研究中心农业部动物寄生虫学重点实验室上海200232

细胞免疫在防御外来病原感染、自身免疫及肿瘤等疾病中发挥重要作用。随着分子免疫学研究的不断发展,对T淋巴细胞免疫分子机制的阐释,大量T细胞表位信息以及功能基因组学资料的积累,使得基于数据驱动的预测T细胞表位的研究受到重视,可... 详细信息

细胞免疫在防御外来病原感染、自身免疫及肿瘤等疾病中发挥重要作用。随着分子免疫学研究的不断发展,对T淋巴细胞免疫分子机制的阐释,大量T细胞表位信息以及功能基因组学资料的积累,使得基于数据驱动的预测T细胞表位的研究受到重视,可能成为疫苗研发的重要工具之一。本文概述辅助T细胞表位预测的理论和方法及其在寄生虫疫苗研发中的应用,并讨论未来的研究方向。

关键词：辅助T细胞表位预测疫苗寄生虫

猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)3′末端非翻译区中调控序列的研究

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微生物学报 2007年第5期47卷 774-778页

作者：孙志王金勇张建武秦爱健袁世山中国农业科学院上海兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心上海分中心农业部动物寄生虫病重点实验室上海200232 扬州大学兽医学院扬州225009

以北美株PRRSV感染性克隆pCBC2为平台进行反向遗传操作,将3′UTR中的一级结构进行了系列缺失或插入突变,并改变二级结构中的一个保守的茎环结构,构建全长PRRSV突变体克隆,解析3′UTR突变对病毒感染性的影响,旨在界定调控PRRSV3′UTR的... 详细信息

以北美株PRRSV感染性克隆pCBC2为平台进行反向遗传操作,将3′UTR中的一级结构进行了系列缺失或插入突变,并改变二级结构中的一个保守的茎环结构,构建全长PRRSV突变体克隆,解析3′UTR突变对病毒感染性的影响,旨在界定调控PRRSV3′UTR的启动子序列及二级结构,即复制过程中的最小调控元件。以空斑和Northern blot来研究拯救后重组病毒的复制、转录和生长特性,发现重组病毒感染动力学与亲本病毒无可见差别。结果表明PRRSV3′UTR的5′端可耐受一定数目的核苷酸的缺失(41nt)与插入(23nt)突变,但进一步9nt缺失造成保守的环结构突变后就使病毒失去了感染性。证明了这是3′UTR中控制PRRSV复制过程的的必需序列及二级结构,为进一步解析PRRSV复制过程的调控元件奠定了基础。

关键词： PRRSV 反向遗传操作 3′非翻译区基因组复制 mRNA转录

猪繁殖与呼吸综合征病毒5'非编码区前导转录调控序列及其侧翼序列的结构与功能解析

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畜牧与兽医 2011年第11期43卷 1-6页

作者：陆嘉琦高飞刘萍蔺涛袁世山中国农业科学院上海兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心上海分中心猪传染病研究室农业部动物寄生虫病重点实验室上海200241

为解析猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)5'非翻译区(5'UTR)的高级结构与功能,以北美株PRRSV感染性克隆为平台,通过定点突变PCR技术将其5'UTR中一特殊高级调控元件的一级序列进行突变,以改变其二级茎环结构,从而解析该结构的基因调控水平... 详细信息

为解析猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)5'非翻译区(5'UTR)的高级结构与功能,以北美株PRRSV感染性克隆为平台,通过定点突变PCR技术将其5'UTR中一特殊高级调控元件的一级序列进行突变,以改变其二级茎环结构,从而解析该结构的基因调控水平。将突变DNA克隆转染入BHK-21细胞后利用免疫荧光及RT-PCR试验来研究拯救后突变病毒的转录、翻译特性,及通过空斑形态学及病毒生长曲线分析突变病毒的生长特性。结果表明,PRRSV 5'UTR中该高级调控元件的顶端环结构为病毒复制所必需,其只可耐受2个核苷酸的突变;同时发现该调控元件中一保守的茎结构为病毒复制非必需。由此证实了PRRSV 5'UTR中调控病毒复制过程的必需高级结构,为进一步解析PRRSV复制调控元件奠定基础。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 5’非编码区前导转录调控序列病毒复制基因表达调控

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日本血吸虫童虫部分差异表达蛋白的质谱分析

中国兽医科学 2007年第1期37卷 1-6页

作者：赵晓宇姚利晓孙安国傅志强刘金明蔡幼民林矫矫中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海动物生物技术研究中心上海200232

应用蛋白质双向电泳技术和质谱技术对16日龄日本血吸虫童虫的可溶性蛋白进行分离、分析,得到了2 000±69个蛋白斑点,其中500±86个蛋白斑点与血吸虫雌虫和雄虫的蛋白所共有,童虫特异呈现的蛋白斑点有26±1个。对其中20个童虫特异呈现的... 详细信息

应用蛋白质双向电泳技术和质谱技术对16日龄日本血吸虫童虫的可溶性蛋白进行分离、分析,得到了2 000±69个蛋白斑点,其中500±86个蛋白斑点与血吸虫雌虫和雄虫的蛋白所共有,童虫特异呈现的蛋白斑点有26±1个。对其中20个童虫特异呈现的蛋白斑点进行质谱和生物信息学分析的结果表明,它们代表了16种蛋白;对这些蛋白进行生物学功能预测的结果表明,它们可能与寄生虫的生物合成、能量代谢、信号传导和细胞构成等相关。

关键词：日本血吸虫童虫蛋白质组质谱

重视羊血吸虫病防治推进我国消除血吸虫病进程

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中国血吸虫病防治杂志 2016年第5期28卷 481-484页

作者：林矫矫中国农业科学院上海兽医研究所、农业部动物寄生虫学重点实验室上海200241

虽然我国血吸虫病防治工作已取得举世瞩目的成就,但日本血吸虫病仍是我国重要的公共卫生问题之一。日本血吸虫可自然感染四十余种哺乳动物。自2004年以来,我国实施了以传染源控制为主的血吸虫病综合防治策略,并将牛作为重点防控对象,重... 详细信息

虽然我国血吸虫病防治工作已取得举世瞩目的成就,但日本血吸虫病仍是我国重要的公共卫生问题之一。日本血吸虫可自然感染四十余种哺乳动物。自2004年以来,我国实施了以传染源控制为主的血吸虫病综合防治策略,并将牛作为重点防控对象,重点实施了家畜圈养、封洲禁牧、以机代牛、安全牧场以及对感染牛化疗等控制措施,取得了显著成效,流行区人和牛血吸虫感染率以及感染性钉螺面积均已降至历史最低水平,全国血吸虫病防治进程正由传播控制向传播阻断乃至消除迈进。羊是血吸虫易感动物之一,既往流行病学资料显示部分流行区羊血吸虫感染率较高。但羊作为日本血吸虫病主要传染源在疾病传播过程中的作用尚未得到足够重视,且目前尚缺乏有关羊在我国日本血吸虫病传播中作用的专项调查和系统研究。江苏省血吸虫病防治研究所梁幼生研究员课题组通过实验室研究和现场调查,对羊在日本血吸虫病传播中的作用进行了系统研究。课题组对日本血吸虫在山羊体内的发育与繁殖(产卵)、羊粪对环境的污染、温度和湿度对羊粪中血吸虫虫卵存活的影响等进行了观察和调查,进一步明确了羊在日本血吸虫病传播中的作用,并结合既往研究成果,提出羊是我国日本血吸虫病重要传染源之一,有必要将羊日本血吸虫病综合治理纳入国家层面的防控规划。课题组还对羊血吸虫感染粪便孵化技术进行了改进,优化了羊血吸虫病病原诊断技术。这些创新性研究工作填补了国内在羊日本血吸虫病研究领域的一些空白,研究成果将丰富我国以传染源控制为主的血吸虫病综合防治策略,在我国消除血吸虫病进程中发挥应有的作用。鉴于血吸虫病流行会严重影响流行区养羊业发展和当地农民收入,且羊已经成为部分流行区血吸虫病传播重要的传染源之一,做好羊血吸虫病防控工作有助于推进我国消除血吸虫病进程。建议重点做好以下两方面工作:1重视羊血吸虫病防控工作,将羊血吸虫病综合治理纳入国家层面的防控规划;2研发适用于羊血吸虫病防控的技术、产品和措施。

关键词：血吸虫病日本血吸虫羊传染源综合治理消除

单股正链RNA病毒基因组5′非翻译区的结构与功能研究进展

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畜牧与兽医 2010年第11期42卷 99-103页

单股正链RNA病毒是众多人畜共患病及动植物传染病的病原,其种类繁多,对人畜健康和农业经济生产影响重大。该类病毒基因组5′非翻译区(5′UTR)一级序列及各种高级结构在病毒的复制、转录、翻译过程中发挥重要调控作用,本文对一些代表种... 详细信息

单股正链RNA病毒是众多人畜共患病及动植物传染病的病原,其种类繁多,对人畜健康和农业经济生产影响重大。该类病毒基因组5′非翻译区(5′UTR)一级序列及各种高级结构在病毒的复制、转录、翻译过程中发挥重要调控作用,本文对一些代表种属单股正链RNA病毒的5′UTR进行介绍,且就其结构与功能的一般研究方法、主要进展和存在的问题进行了探讨。

关键词：单股正链RNA病毒 5′UTR 高级结构与功能病毒复制基因表达调控

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东方田鼠IgG3抗体抗血吸虫病作用研究

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2008年第1期26卷 34-36页

作者：蒋守富魏梅雄林矫矫潘彩娥邱倩雯何艳燕李浩石耀军上海市疾病预防控制中心上海200336 中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200232

采用ELISA方法,平行检测东方田鼠、BALB/c小鼠和昆明小鼠在攻击感染前、后的血清抗血吸虫童虫(SSA)、成虫(SAWA)和虫卵(SEA)IgG3抗体水平,并进行体内、外试验,观察IgG3抗体抗血吸虫效应。结果攻击感染后第4周,东方田鼠抗SSA和SAWA的IgG... 详细信息

采用ELISA方法,平行检测东方田鼠、BALB/c小鼠和昆明小鼠在攻击感染前、后的血清抗血吸虫童虫(SSA)、成虫(SAWA)和虫卵(SEA)IgG3抗体水平,并进行体内、外试验,观察IgG3抗体抗血吸虫效应。结果攻击感染后第4周,东方田鼠抗SSA和SAWA的IgG3抗体水平增幅较大,分别较感染前增加79.6%和49.6%,BALB/c小鼠IgG3抗体在攻击感染后无明显增加。野生和室内繁殖的东方田鼠的IgG3抗体所致童虫死亡率分别为昆明小鼠的5.88和2.35倍,前者还诱生出较高的减虫率(39.8%)。提示东方田鼠IgG3抗体可能是其抗血吸虫感染的主要免疫物质。

关键词：东方田鼠 IgG3抗体血吸虫