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同位素微量试验法检测新化合物抗恶性疟原虫活性试验

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2009年第1期27卷 83-86页

作者：陈兆国 Alicia MORENO Agustin BENITO Marta MORENO Pedro J.BERZOSA Aida de LUCIO Eva MOYANO 中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200232 西班牙卡洛斯三世健康研究院国家微生物中心马德里28220

将连续培养的恶性疟原虫克隆系Dd2和3D7用6%山梨醇作2次同步处理。处理后第2代原虫用健康人红细胞稀释至红细胞比容为2.5%、原虫血症为0.5%,并加入2μCi/ml8-3H-次黄嘌呤,利用同位素微量试验法检测20个新化合物的抗疟原虫活性。结果显... 详细信息

将连续培养的恶性疟原虫克隆系Dd2和3D7用6%山梨醇作2次同步处理。处理后第2代原虫用健康人红细胞稀释至红细胞比容为2.5%、原虫血症为0.5%,并加入2μCi/ml8-3H-次黄嘌呤,利用同位素微量试验法检测20个新化合物的抗疟原虫活性。结果显示20个新化合物均无明显的抗疟原虫活性;对照药物氯喹和奎宁显示出良好的抗疟活性,表明同位素微量试验法是一个稳定、可靠的体外筛选新抗疟药的方法。

关键词：恶性疟原虫抗疟药同位素微量试验法

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泛素样蛋白ISG15抗病毒机制研究进展

病毒学报 2012年第1期28卷 78-83页

作者：朱紫祥魏建超史子学吴开宝马志永中国农业科学院上海兽医研究所兽医公共卫生学实验室上海200241 南京农业大学动物医学院南京210095

ISG15(Interferon stimulated gene 15,ISG15)蛋白是由干扰素诱导产生的一种泛素样蛋白分子,分子量大小约为15kD。ISG15同泛素分子相类似可以被共价结合于其他蛋白分子上,这种现象称为ISG化(ISGylation)现象。ISG化系统包括ISG15、UBE1L... 详细信息

ISG15(Interferon stimulated gene 15,ISG15)蛋白是由干扰素诱导产生的一种泛素样蛋白分子,分子量大小约为15kD。ISG15同泛素分子相类似可以被共价结合于其他蛋白分子上,这种现象称为ISG化(ISGylation)现象。ISG化系统包括ISG15、UBE1L、UBCH8和HERC5四类蛋白分子,协同完成ISG化过程。ISG15及ISG化系统在抗病毒反应中具有重要作用。近几年对于ISG15的抗病毒作用和机制的研究已经有了很大的突破,ISG15的抗病毒作用也越来越受到人们重视,了解清楚ISG15抗病毒机制对于研制新的抗病毒药物及提出新的抗病毒策略具有重要意义。本文对ISG15在不同种病毒中的抗病毒机制研究进展进行了简要综述。

关键词： ISG15 ISG化抗病毒作用

原鸡属（Gallus）动物球虫种类与地理分布

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中国动物传染病学报 2024年

作者：韩红玉黄兵王青杰董辉赵其平朱顺海中国农业科学院上海兽医研究所农业农村部动物寄生虫学重点实验室陕西省动物疫病预防控制中心

为了解原鸡属（Gallus）动物球虫的种类及在世界各地的分布状况，本文收集整理了世界上有关报道原鸡属动物球虫的相关文献，按虫种学名的字母为序，收录了原鸡属动物16种艾美耳球虫（Eimeria）在74个国家的分布状况，每种球虫依序介绍... 详细信息

为了解原鸡属（Gallus）动物球虫的种类及在世界各地的分布状况，本文收集整理了世界上有关报道原鸡属动物球虫的相关文献，按虫种学名的字母为序，收录了原鸡属动物16种艾美耳球虫（Eimeria）在74个国家的分布状况，每种球虫依序介绍了中文名称与学名、寄生宿主、寄生部位、地理分布，部分虫种列出了同物异名，地理分布按照国家和一级行政区划的英文或拼音字母为序。在收录的74个国家中，记录了阿尔及利亚等55个国家鸡球虫分布的200个一级行政区划，奥地利等19个国家未记录行政区划。记录球虫种类数量前5位的国家分别为印度15种、美国12种、尼日利亚11种、澳大利亚10种、中国等6个国家9种，分布国家数量前5位的球虫种类分别为Eimeria tenella 69个国家、Eimeria maxima 64个国家、Eimeria acervulina 63个国家、Eimeria necatrix 53个国家、Eimeria mitis 52个国家。本文基本反映出原鸡属动物球虫在世界范围的分布状况，为全面了解原鸡属动物球虫的种类与地理分布提供了一份较为完整的基础资料。

关键词：鸡球虫艾美耳球虫种类地理分布

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猪附红细胞体a1基因的克隆及序列分析

中国兽医科学 2014年第6期44卷 593-598页

作者：王向佩周鹏沈莉萍曹薇米荣升黄燕王晓娟杨晓娇石凯刘宇轩雷晓思陈兆国赵权吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点实验室中国农业科学院动物源性食品安全研究中心上海200241 上海市动物疫病预防控制中心上海201103

为研究猪附红细胞体DnaK样蛋白HspA1编码基因a1的遗传变异规律,根据GenBank上登录的猪附红细胞体a1基因核苷酸序列(登录号AM265536)设计合成1对引物,从上海市3个屠宰场采集自然感染猪附红细胞体的猪血液,提取基因组DNA作为模板,进行a1... 详细信息

为研究猪附红细胞体DnaK样蛋白HspA1编码基因a1的遗传变异规律,根据GenBank上登录的猪附红细胞体a1基因核苷酸序列(登录号AM265536)设计合成1对引物,从上海市3个屠宰场采集自然感染猪附红细胞体的猪血液,提取基因组DNA作为模板,进行a1基因部分序列的PCR扩增、克隆、序列测定及生物信息学分析。结果显示,共获得了41条猪附红细胞体a1基因片段序列,序列长度均为1 657bp;同源性分析显示,它们与GenBank中登录的猪附红细胞体a1基因核苷酸序列的相似性在97.7%~99.9%之间,氨基酸序列的相似性在99.1%~99.8%之间。系统进化分析表明,多数上海市猪附红细胞体分离株的a1基因与GenBank中登录的德国54/96分离株a1基因序列在同一个聚簇上。

关键词：猪附红细胞体 a1基因克隆序列分析

腹泻性贝类毒素大田软海绵酸液态芯片检测方法的建立

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海洋环境科学 2012年第2期31卷 263-267页

作者：汪卿柳俊秀王权胡乐琴沈伟贾睿蔡春尔何培民上海海洋大学水产与生命学院上海201306 中国农业科学院上海兽医研究所兽医公共卫生实验室农业部动物寄生虫学重点实验室上海200232

利用间接竞争法免疫学原理,以自制的大田软海绵酸(okadaic acid,OA)与卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)的偶联物OA-OVA包覆微球为载体,同时自制生物化抗OA单克隆抗体,利用液态芯片(Luminex Xmap 200TM)系统建立OA液态芯片定量检测方法;同时测... 详细信息

利用间接竞争法免疫学原理,以自制的大田软海绵酸(okadaic acid,OA)与卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)的偶联物OA-OVA包覆微球为载体,同时自制生物化抗OA单克隆抗体,利用液态芯片(Luminex Xmap 200TM)系统建立OA液态芯片定量检测方法;同时测定了方法的灵敏性和特异性,并对贝类模拟样本进行了测试。结果显示:液态芯片法对OA的检测线性范围为0.2～63μg/L,最低检测值为0.129μg/L,均优于酶联免疫吸附法;除与DTX-1的交叉反应率为54.2%外,与其他几种用于检测的贝类毒素没有任何交叉现象;在加标浓度为6.25～400μg/L时,回收率为84.96%～90.35%,变异系数为3.20%～6.59%。因此,该方法可满足海产品中贝类样品OA限量标准检测。

关键词：腹泻性贝毒素软海绵酸芯片分析技术液态芯片

弓形虫表面抗原SAG1截短型片段在大肠杆菌中的可溶性表达及纯化

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生物技术通报 2009年第10期25卷 136-141页

作者：安立刚蒋蔚王权陈永军龚国华周锦萍邢小勇孙泉云丁铲中国农业科学院上海兽医研究所农业部寄生虫学重点开放实验室上海200241 上海市动物疫病防控中心上海201103

在大肠杆菌中高效表达及纯化获得可溶性、有反应活性的弓形虫表面抗原SAG1截短型片段(tSAG1),为研制新型的弓形虫病检测试剂奠定基础。构建重组质粒pET-32a-tSAG1并将其转化大肠埃希菌BL21(DE3)表达菌株,在异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG... 详细信息

在大肠杆菌中高效表达及纯化获得可溶性、有反应活性的弓形虫表面抗原SAG1截短型片段(tSAG1),为研制新型的弓形虫病检测试剂奠定基础。构建重组质粒pET-32a-tSAG1并将其转化大肠埃希菌BL21(DE3)表达菌株,在异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导下表达蛋白。SDS-PAGE分析表达产物的表达形式,通过降低培养温度、降低摇床转数和升高LB液体培养基pH,诱导目的蛋白在上清中表达,利用*** Kit试剂盒对目的蛋白进行纯化,Western blot和ELISA检测纯化蛋白的反应原性。在IPTG为1mmol/L、温度37℃条件下,tSAG1以融合蛋白(His-tSAG1)的形式在大肠埃希菌中高效表达,表达产物以包涵体形式存在。在22℃和LB培养基pH为7.7条件下,融合蛋白主要在上清中表达。Western blot和ELISA分析纯化蛋白能被弓形虫的阳性血清所识别。tSAG1在大肠埃希菌中得到了可溶性蛋白表达,经纯化后能被弓形虫的阳性血清所识别,可用于制备检测弓形虫病的诊断试剂。

关键词：弓形虫 tSAG1 蛋白表达蛋白纯化免疫印迹 ELISA

硒在草地放牧系统“土壤-植物-动物”间的流动与调控

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草业科学 2017年第4期34卷 869-880页

作者：罗建川周梅王宗礼张英俊中国农业科学院草原研究所内蒙古呼和浩特010010 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100094 中国动物卫生与流行病学中心山东青岛266032 中国农业大学动物科技学院北京100094

硒(Se)作为动物必需而容易缺乏的微量元素,具有多种生物学功能。在草地放牧系统中,硒随着物质在土壤、植物和动物之间的转移而循环流动。本文从硒在放牧草地"土壤-植物-动物"间的含量、分布及功能等方面,对国内外的研究现状进行了综述,... 详细信息

硒(Se)作为动物必需而容易缺乏的微量元素,具有多种生物学功能。在草地放牧系统中,硒随着物质在土壤、植物和动物之间的转移而循环流动。本文从硒在放牧草地"土壤-植物-动物"间的含量、分布及功能等方面,对国内外的研究现状进行了综述,分析了硒在放牧系统中的循环流动特点。结果表明,硒在土壤、植物和动物中的含量分别为0.1~2.0、0.05~1.50和0.02~0.05mg·kg-1。受多种因素影响,硒在土壤、植物和动物之间的流动量存在较大差异且不稳定,导致放牧家畜往往容易出现硒元素摄入不足的现象。在合理的放牧制度下,采取适宜的施肥方式,补播对硒积累能力强的牧草品种,可有效增加草地放牧系统中硒的循环流动量,以缓解或解决放牧家畜缺硒的不利局面。

关键词：硒元素草地放牧系统流动调控

日本血吸虫Wnt1基因的鉴定及在不同发育阶段表达水平分析

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中国预防兽医学报 2014年第12期36卷 915-921页

作者：塔娜邓玲玲冯新港段明明陆珂李浩苑纯秀林矫矫中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点实验室上海200241 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

为研究Wnt信号通路对血吸虫发育的调节作用,本研究克隆鉴定了日本血吸虫的Wnt1基因(Sj Wnt1)。序列分析显示,Sj Wnt1蛋白具有Wnt信号蛋白家族的结构功能域,但比高等生物的Wnt1少一个保守的Cys。m RNA和蛋白的定量分析结果显示,Sj Wnt1... 详细信息

为研究Wnt信号通路对血吸虫发育的调节作用,本研究克隆鉴定了日本血吸虫的Wnt1基因(Sj Wnt1)。序列分析显示,Sj Wnt1蛋白具有Wnt信号蛋白家族的结构功能域,但比高等生物的Wnt1少一个保守的Cys。m RNA和蛋白的定量分析结果显示,Sj Wnt1表达于血吸虫的整个发育过程,而在虫卵和早期童虫中呈高表达水平,提示Sj Wnt1对卵胚发育和早期童虫的细胞分化具有调节作用。来源于非适宜宿主及单性感染的发育不良虫体中Sj Wnt1 m RNA水平比发育正常的虫体高,表明不良发育的虫体相应的Wnt信号阻滞。Sj Wnt1表达下调后则引起Wnt/β-catenin、Wnt/PCP及Wnt/Ca2+通路的相应下游基因的m RNA水平下降,推测Sj Wnt1可能通过这3种传递途径行使信号传递的功能。

关键词：血吸虫 Wnt1 发育

产单核细胞李斯特菌溶血素基因的克隆及原核表达

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中国预防兽医学报 2008年第11期30卷 870-874页

作者：张衍海白艳艳张彦明郑增忍张宝童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所黑龙江哈尔滨150001 中国动物卫生与流行病学中心山东青岛266032 西北农林科技大学动物医学学院陕西杨陵712100 中国农业科学院上海兽医研究所上海200232

利用PCR方法扩增产单核细胞李斯特菌(LM)的溶血素基因hlyA,获得一条大小约为1600bp的目的片段,将其与pMD18-T载体连接,经酶切、PCR鉴定,命名为pMD18-T-hlyA。测序结果显示所扩增的hlyA基因与GenBank中发表的hlyA的序列同源性为99%。利... 详细信息

利用PCR方法扩增产单核细胞李斯特菌(LM)的溶血素基因hlyA,获得一条大小约为1600bp的目的片段,将其与pMD18-T载体连接,经酶切、PCR鉴定,命名为pMD18-T-hlyA。测序结果显示所扩增的hlyA基因与GenBank中发表的hlyA的序列同源性为99%。利用含有BamHⅠ/XhoⅠ酶切位点引物B从pMD18-T-hlyA扩增不含信号肽序列的目的片段B,获得了大小约为1500bp的基因片段,该片段与pET32a表达载体经BamHⅠ/XhoⅠ处理后进行连接,转化BL21受菌体。通过酶切、PCR鉴定及序列测定后获得阳性pET32a-hlyA表达重组质粒,将重组菌用终浓度为0.1mmol/L的IPTG进行诱导表达,结果表明重组菌在诱导2h～3h表达量最高,融合蛋白约占菌体的40%,分子量大小约为80ku;利用LM的阳性血清进行Western blot分析,证实该融合蛋白可以被LM阳性血清所识别,为今后研制针对该蛋白的单克隆抗体和建立间接ELISA诊断方法提供了条件。

关键词：产单核细胞李斯特菌溶血素 hlyA 克隆表达