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苏云金芽胞杆菌可视化快速表达载体的构建与特性分析

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生物技术通报 2025年第1期41卷 95-102页

作者：张静安胡孝龙曹蓓蓓廖敏束长龙张杰王奎操海群安徽农业大学资源与环境学院合肥230036 安徽农业大学植物保护学院合肥230036 中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害综合治理全国重点实验室北京100193

【目的】构建可以快速高效表达苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)杀虫基因的表达载体,提高Bt杀虫基因发掘及功能研究效率。【方法】以pUC18载体为基础,构建一个以cry1Ac基因启动子p1Ac指导、融合绿色荧光蛋白GFP的可视化快速... 详细信息

【目的】构建可以快速高效表达苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)杀虫基因的表达载体,提高Bt杀虫基因发掘及功能研究效率。【方法】以pUC18载体为基础,构建一个以cry1Ac基因启动子p1Ac指导、融合绿色荧光蛋白GFP的可视化快速表达载体p1Ac-GFP,并从生物活性、碱溶性、抗胰蛋白酶稳定性、培养条件等方面对其进行分析。【结果】p1Ac-GFP在大肠杆菌中指导表达的Cry1Ac蛋白与Bt来源的蛋白在杀虫活性方面无明显差异。同时,p1Ac-GFP表达的Cry1Ac蛋白能够溶解于50 mmol/L Na_(2)CO_(3)溶液中,可溶性组分可被胰蛋白酶消化为60 kD大小的核心活性片段。此外,p1Ac-GFP大肠杆菌宿主菌株可以发出绿色荧光,培养菌液荧光强度与所表达的Bt蛋白浓度呈较好的线性关系。培养条件优化结果显示,37℃、培养液与装瓶体积比为5/5、48 h的培养时间最适合p1Ac-GFP表达Bt Cry1Ac蛋白。【结论】p1Ac-GFP表达Bt蛋白时可以直接使用菌液荧光强度作为生物活性测定的浓度指示依据,有助于Bt基因杀虫活性功能的快速批量筛选。

关键词：苏云金芽胞杆菌杀虫基因 cry1Ac启动子大肠杆菌表达载体

利用Y2H筛选本氏烟中与辣椒脉黄病毒P0互作的蛋白

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病毒学报 2025年第1期 184-192页

作者：王莉爽李淳安星宇姚令吴石平贵州省农业科学院植物保护研究所植物病虫害综合治理全国重点实验室贵州研究中心

辣椒脉黄病毒（Pepper vein yellows virus,PeVYV）是一种由蚜虫传播的韧皮部限制病毒，引起辣椒叶脉黄化畸形，导致辣椒减产的主要病原之一。PeVYV编码的P0蛋白能诱导寄主产生超敏反应，导致叶片细胞坏死，但是调控超敏反应的寄主蛋白... 详细信息

辣椒脉黄病毒（Pepper vein yellows virus,PeVYV）是一种由蚜虫传播的韧皮部限制病毒，引起辣椒叶脉黄化畸形，导致辣椒减产的主要病原之一。PeVYV编码的P0蛋白能诱导寄主产生超敏反应，导致叶片细胞坏死，但是调控超敏反应的寄主蛋白种类尚不清楚。本研究以PeVYV P0蛋白作为诱饵蛋白，采用酵母双杂交（Yeast twohybrid, Y2H）的方法筛选本氏烟内与PeVYV P0相互作用的寄主蛋白，共筛选获得16种与PeVYV P0相互作用的寄主蛋白。生物信息学分析表明这些蛋白参与了泛素蛋白酶体途径、乙酰化修饰、细胞色素生物合成、细胞防御反应、钙结合反应等过程，可能在病毒侵染中发挥重要作用。研究结果为探索PeVYV P0在病毒侵染中的致病机制及筛选新的抗病基因奠定基础。

关键词：辣椒脉黄病毒 P0蛋白酵母双杂寄主蛋白

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安徽省猕猴桃溃疡病菌群体遗传多样性及致病性分析

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植物病理学报 2025年

作者：常小席张雷陈云鹤傅敏张立新安徽农业大学植物保护学院植物病虫害生物学与绿色防控安徽普通高校重点实验室

由丁香假单胞猕猴桃致病变种（Pseudomonas syringae pv. actinidiae,Psa）引起的溃疡病已发展为安徽省猕猴桃生产的重要限制因素。本研究于2022—2023年从安徽省5个猕猴桃主产区采集具有细菌性溃疡病症状的植株病样，并通过稀释平板法... 详细信息

由丁香假单胞猕猴桃致病变种（Pseudomonas syringae pv. actinidiae,Psa）引起的溃疡病已发展为安徽省猕猴桃生产的重要限制因素。本研究于2022—2023年从安徽省5个猕猴桃主产区采集具有细菌性溃疡病症状的植株病样，并通过稀释平板法分离获得124株Psa菌株。采用重复序列PCR基因指纹（repetitive element palindromic PCR,rep-PCR）技术对124株菌株进行分析，发现3对rep-PCR引物可扩增出34条清晰的条带，其中26个为多态性条带。按采集地区将菌株划分为5个种群，在物种水平上，有效等位基因数、Nei’s基因多样性指数和Shannon信息指数分别为1.19、0.13和0.21，其中来自金寨的Psa种群多样性最高，霍邱的Psa种群多样性最低。聚类分析表明，当遗传相似系数为0.80时，124株Psa菌株可被划分为3个类群，但类群划分与菌株地理来源无明显相关性。致病性试验结果表明，72株测试菌株可分为强、中、弱和无致病力4个类型，分别占59.72%、25%、5.56%和9.72%。相同来源（地理、寄主品种或分离部位）的不同菌株间存在致病力分化现象，但其与菌株来源无明显相关性。此外，本研究发现4株无致病力菌株均存在转座子ISPsy36插入hrpR基因事件，推断转座子插入破坏Psa的T3SS功能可能是田间病菌丧失致病力的主要原因之一。

关键词：猕猴桃溃疡病菌遗传多样性 rep-PCR 致病力差异

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桃树重要害虫为害特点及其寄生蜂研究进展

中国生物防治学报 2025年第1期41卷 231-250页

作者：孙星星王凡蒋颖洁张礼生中国农业科学院植物保护研究所/农业农村部天敌昆虫重点实验室/植物病虫害综合治理全国重点实验室北京100081 中国农业科学院上海兽医研究所/农业农村部动物生物风险防控(北方)重点实验室上海200241 江苏沿海地区农业科学研究所盐城224300

桃树是我国重要的果树资源之一,其生长发育及果实产量受到众多害虫的影响。寄生蜂作为关键的生物防治因子,在有效控制如桃蚜、桃蛀螟、桃小食心虫等害虫时发挥了重要的作用。本文针对已发表的文献进行全面综述,重点讨论了桃树的重要害... 详细信息

桃树是我国重要的果树资源之一,其生长发育及果实产量受到众多害虫的影响。寄生蜂作为关键的生物防治因子,在有效控制如桃蚜、桃蛀螟、桃小食心虫等害虫时发挥了重要的作用。本文针对已发表的文献进行全面综述,重点讨论了桃树的重要害虫及其为害特点、相关寄生蜂资源研究进展及寄生蜂在害虫综合控制中的应用,共梳理了21种对桃树具有显著经济影响的害虫(包括螨类),列出20科194种在桃树害虫生物防治中具有关键影响的寄生蜂。本文也总结了当前在桃树害虫寄生蜂研究方面存在的问题,并对未来研究方向提出展望,旨在为桃树害虫管理策略的改进和桃园生物多样性保护提供更深入的理论支撑。

关键词：桃树寄生蜂重要害虫危害特点生物防治

重大农业入侵害虫番茄潜叶蛾检测鉴定技术研究进展

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环境昆虫学报 2025年

作者：姚若楠王玉生张桂芬谭琳湖南农业大学植物保护学院中国农业科学院植物保护研究所/植物病虫害综合治理全国重点实验室/农业农村部外来入侵生物防控重点实验室

番茄潜叶蛾Tuta absoluta（Meyrick）（异名Phthorimaea absoluta）是一种多食性的重大农业入侵害虫，主要危害番茄、马铃薯等茄科作物，可造成番茄减产50%～80%，甚至绝产绝收，有“番茄埃博拉病毒”之称，2017年首次在我国新疆被发现... 详细信息

番茄潜叶蛾Tuta absoluta（Meyrick）（异名Phthorimaea absoluta）是一种多食性的重大农业入侵害虫，主要危害番茄、马铃薯等茄科作物，可造成番茄减产50%～80%，甚至绝产绝收，有“番茄埃博拉病毒”之称，2017年首次在我国新疆被发现，已在我国局部地区暴发。番茄潜叶蛾常隐蔽发生，且在我国的适生区广泛，主要随番茄苗及果实的销运进行远距离传播，进一步扩散势头明显。因此，亟需研发高效低成本的番茄潜叶蛾检测鉴定技术和方法，进而实现对重大入侵物种的及早发现和提前预警，降低农业经济损失。目前，用于番茄潜叶蛾的检测鉴定技术方法主要包括传统形态学鉴定、分子生物学检测以及基于人工智能的图像识别技术等，本文综述了番茄潜叶蛾检测鉴定技术的研究现状并展望了其发展趋势，旨在为延缓番茄潜叶蛾传播扩散与对靶施策提供技术支撑。

关键词：番茄潜叶蛾形态学鉴定分子检测人工智能

黑翅土白蚁共生放线菌及其次级代谢产物在农业中的应用研究进展

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浙江大学学报(农业与生命科学版) 2025年

作者：刘佳敏冯一璐莫建初李鸿杰宁波大学海洋学院宁波大学植物病毒学研究所浙江省植物保护生物技术国家重点实验室浙江大学昆虫科学研究所/农业农村部作物病虫害分子生物学重点实验室

放线菌能产生丰富的次生代谢物，是抗生素、酶和抗氧化剂等生物活性产物的重要生产者。随着抗生素耐药性问题的日益严重，传统方法从土壤微生物中发掘新化合物的速度放缓，因此，新生境微生物及其代谢产物的挖掘工作变得愈加迫切。近年... 详细信息

放线菌能产生丰富的次生代谢物，是抗生素、酶和抗氧化剂等生物活性产物的重要生产者。随着抗生素耐药性问题的日益严重，传统方法从土壤微生物中发掘新化合物的速度放缓，因此，新生境微生物及其代谢产物的挖掘工作变得愈加迫切。近年来，国内外多个研究团队从黑翅土白蚁中分离并鉴定出具有显著抗菌活性的新型微生物天然产物，并在农业领域表现出广泛的应用潜力。本文深入探讨了黑翅土白蚁来源的放线菌属菌株类群多样性，基因组代谢潜能多样性和次生代谢产物多样性，以及这些天然产物中在多种农业病原菌防控中的应用潜力。同时，本文对其开发成环保型的生物农药的未来研究重点进行了展望，以期为新农药创制提供参考。

关键词：放线菌黑翅土白蚁天然产物基因组挖掘生物农药

液相色谱串联质谱法检测大豆及其植株中异草松、异丙草胺及丙炔氟草胺残留量

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农药 2025年

作者：魏龙兵梁星王宽潘兴鲁吴小虎徐军董丰收郑永权中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害综合治理全国重点实验室青岛农业大学植物医学学院

[目的]为了明确大豆田除草剂施用后的作物中农药残留污染水平，基于分散固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱技术，建立大豆、青豆、老秸秆、青秸杆中异草松、异丙草胺及丙炔氟草胺的残留分析方法。[方法]样品经1%甲酸乙腈提取，分散固相... 详细信息

[目的]为了明确大豆田除草剂施用后的作物中农药残留污染水平，基于分散固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱技术，建立大豆、青豆、老秸秆、青秸杆中异草松、异丙草胺及丙炔氟草胺的残留分析方法。[方法]样品经1%甲酸乙腈提取，分散固相萃取净化，0.2%甲酸水-乙腈作流动相，C18色谱柱分离，三重四极杆质谱检测，基质外标法定量。[结果]4种基质中3种除草剂在0.01～0.5 mg/kg质量浓度范围内与其峰面积均呈现良好的线性关系，决定系数R2>0.99,3种除草剂在4种基质中的定量限均为0.01 mg/kg。在0.01、0.1、0.5 mg/kg 3个添加水平下4种基质中3种除草剂的平均添加回收率在88.0%～112.6%之间，RSD在1.5%～16.5%之间。48份田间样品均未检出上述3种除草剂残留。[结论]在推荐剂量下使用3种除草剂对大豆地上部位一般不会产生农药残留风险。试验建立的方法简便、高效、灵敏度高，适用于大豆、青豆、老秸秆、青秸杆中异草松、异丙草胺及丙炔氟草胺的测定。

关键词：大豆异草松异丙草胺丙炔氟草胺液质联用

小麦抗条锈基因Yr5、Yr9和Yr18分子标记的特异性评估

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麦类作物学报 2025年第1期45卷 45-51页

作者：孙振宇黄亮黄苗苗刘太国甘肃省农业科学院植物保护研究所甘肃兰州730070 中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害综合治理全国重点实验室北京100193 青海大学农林科学院青海西宁810016

Yr5、Yr9(1B/1R)、Yr18基因的自身性状或连锁性状在中国小麦育种中具有重要的应用前景。本研究运用以Avocet S为背景的单基因近等基因系及其对应基因的载体品种,对Yr5基因的连锁标记STS9/10,Yr9(1B/1R)基因的分子标记AF1/4、D15、20H,Y... 详细信息

Yr5、Yr9(1B/1R)、Yr18基因的自身性状或连锁性状在中国小麦育种中具有重要的应用前景。本研究运用以Avocet S为背景的单基因近等基因系及其对应基因的载体品种,对Yr5基因的连锁标记STS9/10,Yr9(1B/1R)基因的分子标记AF1/4、D15、20H,Yr18基因的分子标记csLV34、cssfr1~cssfr5进行有效性验证。结果表明,Yr5基因的特异性分子标记STS9/10、Yr9(1B/1R)基因的特异性分子标记AF1/4、D15和20H均能够准确识别不同遗传背景材料中的相应抗性基因;Yr18基因分子标记cssfr2能够准确检测Yr18的非载体材料,并检测出Avocet S*6/Yr5、Avocet S*6/Yr24、Avocet S*6/Yr27三个材料具有Yr18的等位变异。这说明Yr5基因的连锁标记STS9/10,Yr9(1B/1R)基因的分子标记AF1/4、D15、20H能对目的基因进行有效检测,Yr18基因的几个分子标记结合使用不仅能够对目的基因进行有效检测,而且能够识别该位点的等位变异。

关键词：抗条锈基因分子标记特异性

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蠋蝽对草地贪夜蛾卵的捕食能力评价

中国生物防治学报 2025年第1期41卷 24-31页

作者：陈彬陈万斌薛传振李玉艳申忠健王孟卿毛建军董辉张礼生沈阳农业大学植物保护学院沈阳110866 中国农业科学院植物保护研究所/农业农村部天敌昆虫重点实验室/植物病虫害综合治理全国重点实验室北京100193 中国农业科学院上海兽医研究所/农业农村部动物生物安全风险防控(北方)重点实验室上海200241

研究天敌昆虫蠋蝽对入侵性害虫草地贪夜蛾卵的控害潜力,明确蠋蝽对不同日龄卵的捕食偏好,可充分发挥蠋蝽的控害作用。在室内测定了蠋蝽5龄若虫和雌、雄成虫对草地贪夜蛾12~24h、24~36h、36~48h日龄卵的捕食能力。结果表明,蠋蝽对不同日... 详细信息

研究天敌昆虫蠋蝽对入侵性害虫草地贪夜蛾卵的控害潜力,明确蠋蝽对不同日龄卵的捕食偏好,可充分发挥蠋蝽的控害作用。在室内测定了蠋蝽5龄若虫和雌、雄成虫对草地贪夜蛾12~24h、24~36h、36~48h日龄卵的捕食能力。结果表明,蠋蝽对不同日龄草地贪夜蛾卵的捕食量均随猎物密度增加逐渐升高后趋于稳定,均符合HollingⅡ功能反应模型。蠋蝽雄成虫的捕食效率最高,其次是5龄若虫,雌成虫最低。蠋蝽5龄若虫、雌成虫、雄成虫分别对24~36h、36~48h、12~24h草地贪夜蛾卵的日均捕食量最高,分别为53.2粒、26.7粒和52.6粒。综合来看,蠋蝽5龄若虫和雄成虫对草地贪夜蛾12~24 h、24~36 h日龄卵的控害效能更强。从生产实践以及提高田间释放效率的角度考虑,以释放蠋蝽5龄若虫为宜。本研究结果为充分利用蠋蝽防控草地贪夜蛾及指导田间释放应用提供了参考依据。

关键词：生物防治功能反应蠋蝽草地贪夜蛾