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不同来源的溶菌酶在毕赤酵母中的重组表达及抑菌性分析

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饲料工业 2024年

作者：范冰冰黄婧溪武振龙杨鹰中国农业大学动物科技学院动物营养国家重点实验室

试验旨在毕赤酵母X-33中使用两种不同启动子分别表达四种不同来源的溶菌酶即蛋清溶菌酶（Egg white lysozyme， DLYZ）、牦牛胃溶菌酶（Yak stomach lysozyme， MLYZ）、鲤鱼溶菌酶(Carp lysozyme， XLYZ)、猪溶菌酶(Porcine lysozyme，... 详细信息

试验旨在毕赤酵母X-33中使用两种不同启动子分别表达四种不同来源的溶菌酶即蛋清溶菌酶（Egg white lysozyme， DLYZ）、牦牛胃溶菌酶（Yak stomach lysozyme， MLYZ）、鲤鱼溶菌酶(Carp lysozyme， XLYZ)、猪溶菌酶(Porcine lysozyme， ZLYZ)。并探讨四种重组溶菌酶的抑菌活性，以获得抑菌谱更广的溶菌酶来源。根据毕赤酵母的密码子偏好性优化溶菌酶DLYZ、MLYZ、XLYZ、ZLYZ的编码基因并交由生物公司合成，并利用同源重组的方式构建质粒pGAPZα-DLYZ、pGAPZα-MLYZ、pGAPZα-XLYZ、pGAPZα-ZLYZ以及pPICZα-DLYZ、pPICZα-MLYZ、pPICZα-XLYZ、pPICZα-ZLYZ。将质粒转入大肠杆菌进行扩增并提取，利用Dra1线性化酶将其线性化并电转化进毕赤酵母X-33感受态细胞，利用酵母培养基和博来霉素筛选和发酵表达阳性转化子，测定其发酵上清的抑菌活性。试验利用同源重组的方法成功构建pGAPZα-DLYZ、pGAPZα-MLYZ、pGAPZα-XLYZ、pGAPZα-ZLYZ以及pPICZα-DLYZ、pPICZα-MLYZ、pPICZα-XLYZ、pPICZα-ZLYZ重组质粒，并在毕赤酵母中表达出了重组蛋白。利用共孵育的方法测定发酵上清对细菌的抑菌活性，结果发现，相比于其他三种重组溶菌酶，重组蛋白MLYZ的发酵上清对革兰氏阴性菌的抑菌活性更强。四种不同来源的溶菌酶都可以在毕赤酵母中稳定表达。相比于pGAPZα型载体，使用pPICZα型载体重组表达蛋白的酶活性更高，其中重组蛋白MLYZ对革兰氏阴性菌的抑菌活性最高。

关键词：蛋清溶菌酶牦牛胃溶菌酶鲤鱼溶菌酶猪溶菌酶毕赤酵母同源重组抑菌谱

长角血蜱成蜱的毛细管和生物膜2种人工饲喂技术的建立与初步应用

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中国农业大学学报 2024年第11期 131-140页

作者：陈方维郑亚鑫董子榕王冰洁王健瑜陈倩关兴艾缪娟娟黄彬王佳璐赵俊龙贺兰华中农业大学动物科学技术学院动物医学院/农业微生物学国家重点实验室

为开发硬蜱人工感染技术以便于探索其与病原体之间的共生机制及传播机制，本研究将长角血蜱成蜱分为3组，分别为经毛细管饲喂后叮咬小鼠、小鼠体表叮咬后进行生物膜饲喂和小鼠体表叮咬至饱血3种方式，其中小鼠体表叮咬至饱血为对照组。... 详细信息

为开发硬蜱人工感染技术以便于探索其与病原体之间的共生机制及传播机制，本研究将长角血蜱成蜱分为3组，分别为经毛细管饲喂后叮咬小鼠、小鼠体表叮咬后进行生物膜饲喂和小鼠体表叮咬至饱血3种方式，其中小鼠体表叮咬至饱血为对照组。对饱血蜱体重、孕卵期和产卵量，以及3种饱血方式下蜱的存活率、饱血率和产卵率进行分析，最终建立了针对长角血蜱成蜱的毛细管饲喂和生物膜饲喂技术。同时，通过该技术为长角血蜱饲喂吉氏巴贝斯虫，完成了两种长角血蜱饲喂方式在吉氏巴贝斯虫蜱传性评价的初步应用。结果表明：1）毛细管饲喂后接小鼠体表叮咬的饱血方式在饱血成蜱体重、孕卵期和产卵重量3个指标上与对照组相比差异不显著（P>0.05），但在饱血率上低于小鼠生物膜饲喂和小鼠饲喂两种饱血方式。2）生物膜饲喂在产卵率和产卵重量方面略逊于对照组（P0.05），饲喂成活率也与对照组一致。3）吉氏巴贝斯虫在长角血蜱成蜱吸血初期和后期均能够入侵卵巢并进入子代虫卵内。综上，本研究建立了长角血蜱毛细管和小鼠生物膜2种饲喂方式，并初步应用于吉氏巴贝斯虫的蜱传性研究。2种人工饲喂方式为探索蜱传病原体与媒介蜱的互作关系，开发杀蜱疫苗和药物筛选提供了技术平台。

关键词：长角血蜱人工饲喂蜱传病吉氏巴贝斯虫

体外培养条件下不同挤压膨化工艺对豆粕蛋白质综合利用效果的影响

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动物营养学报 2024年第6期36卷 4036-4049页

作者：张嗣禹张硕张宏亮李珮琪王显立吴敏孙承国何阳苏华维中国农业大学动物科学技术学院畜禽营养与饲养国家重点实验室北京100193 中国农业大学工学院北京100083 中粮油脂研发中心北京102209

本试验旨在通过体外三步法探究不同挤压膨化工艺对豆粕瘤胃发酵和小肠消化的影响。采用单因素随机试验设计,分别制备豆粕[对照组(CON组)]、挤压膨化豆粕(E组)、膨化前添加3%大豆毛油豆粕(AO组)、膨化后添加3%大豆毛油豆粕(CO组)、膨化... 详细信息

本试验旨在通过体外三步法探究不同挤压膨化工艺对豆粕瘤胃发酵和小肠消化的影响。采用单因素随机试验设计,分别制备豆粕[对照组(CON组)]、挤压膨化豆粕(E组)、膨化前添加3%大豆毛油豆粕(AO组)、膨化后添加3%大豆毛油豆粕(CO组)、膨化前后均添加3%大豆毛油豆粕(AO-CO组)、膨化前添加4%葡萄糖豆粕(GE组)、膨化前添加4%葡萄糖和3%大豆毛油豆粕(GAO组)、膨化前添加4%葡萄糖和膨化后添加3%大豆毛油豆粕(GCO组)和膨化前加4%葡萄糖和膨化前后均添加3%大豆毛油豆粕(GAO-CO组),共9组样品。通过测定挤出物性质(色差、褐变程度以及纤维和蛋白质组成),探究挤压膨化工艺对豆粕蛋白质美拉德反应程度的影响。进一步选用3头体重600 kg装有永久性瘤胃瘘管的安格斯阉牛,采用体外三步法(瘤胃液-胃蛋白酶-胰蛋白酶)测定挤压膨化后豆粕瘤胃降解特性和瘤胃不可降解蛋白质(RUP)的体外小肠消化率。结果表明:1)挤压膨化后的色差结果显示,各试验组红度(a*)、黄度(b*)、色差(ΔE)和420 nm吸光度(OD)值相较于CON组显著提高(P0.05),但改变了瘤胃液的挥发性脂肪酸组成,其中各试验组瘤胃液中异丁酸、异戊酸和总支链挥发性脂肪酸(TBCVFA)含量显著低于CON组(P<0.05)。综上所述,添加葡萄糖能够提高挤压膨化过程中美拉德反应的程度,促进豆粕优质蛋白质的过瘤胃而转向小肠消化吸收,但添加富含不饱和脂肪酸的大豆毛油会抑制挤压膨化过程中的美拉德反应。因此,推荐挤压膨化过程中添加葡萄糖来提高膨化效果,且不建议添加富含不饱和脂肪酸的大豆毛油。

关键词：双螺杆挤压膨化挤压膨化豆粕美拉德反应葡萄糖大豆毛油

甘薯激酶基因IbHT1的克隆及抗旱性功能鉴定

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作物学报 2024年

作者：王语新陈天羽翟红张欢高少培何绍贞赵宁刘庆昌农业农村部甘薯生物学与生物技术重点实验室/中国农业大学农学院

HT1 (HIGH LEAF TEMPERATURE 1)属于蛋白激酶，在模式植物拟南芥中主要参与气孔运动，但其在甘薯(Ipomoea batatas (L.) Lam.)中的作用未见相关报道。本研究从甘薯品系徐薯55-2中克隆得到IbHT1基因，其CDS全长1140 bp，编码379个氨基酸... 详细信息

HT1 (HIGH LEAF TEMPERATURE 1)属于蛋白激酶，在模式植物拟南芥中主要参与气孔运动，但其在甘薯(Ipomoea batatas (L.) Lam.)中的作用未见相关报道。本研究从甘薯品系徐薯55-2中克隆得到IbHT1基因，其CDS全长1140 bp，编码379个氨基酸。IbHT1蛋白具有一个保守的STKc＿MAP3K＿Like蛋白激酶结构域，预测分子量大小43.07 kD，等电点8.83。其基因组全长2796 bp，含有3个外显子和2个内含子。IbHT1蛋白定位于细胞膜上，其蛋白全长无转录激活活性。IbHT1基因受20% PEG-6000诱导下调表达。过表达IbHT1基因减弱了甘薯植株的抗旱性，而RNA干扰该基因显著增强了甘薯植株的抗旱性。通过酵母筛库筛选到与IbHT1蛋白互作的10个蛋白，由此推测，IbHT1蛋白激酶可能通过与这些蛋白相互作用从而共同参与甘薯抗旱性的调控。

关键词：甘薯 IbHT1 RNA干扰抗旱性互作蛋白

扰流风机降温对奶牛泌乳性能和免疫功能的影响

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农业工程学报 2024年第9期40卷 209-218页

作者：苏东遥单春花郭建军宋连杰李峰杨学颖高玉红河北农业大学动物科技学院保定071000 中国农业大学动物科技学院动物营养学国家重点实验室北京100193 承德市农林科学院承德067000 承德市林业和草原局承德067000

为研究奶牛舍采用扰流风机降温对奶牛泌乳性能和免疫功能的影响,该研究选择结构和饲养管理相同的两栋泌乳牛舍,检测安装风机(风机舍)和不安装风机(对照舍)对不同时期奶牛泌乳性能、淋巴细胞凋亡率、血液理化指标及免疫相关基因mRNA表达... 详细信息

为研究奶牛舍采用扰流风机降温对奶牛泌乳性能和免疫功能的影响,该研究选择结构和饲养管理相同的两栋泌乳牛舍,检测安装风机(风机舍)和不安装风机(对照舍)对不同时期奶牛泌乳性能、淋巴细胞凋亡率、血液理化指标及免疫相关基因mRNA表达的影响,并分析奶牛泌乳性能、免疫性能指标与等温指数(equivalent temperature index for cattle,ETIC)之间的相关性。结果表明:1)安装风机改善了舍内温热环境,整个试验期风机舍的平均ETIC较对照舍降低了3.52℃,有效缓解了奶牛的热应激。2)风机舍的产奶量和4%标准乳在试验中、后期均显著高于对照舍(P<0.05),且风机舍的乳脂率较对照舍也表现出显著性提高(P<0.05)。3)安装风机改善了热应激条件下奶牛的免疫功能。与对照舍相比,风机舍奶牛血液中淋巴细胞数量在试验中、后期显著增加(P<0.05),并降低了淋巴细胞的早期凋亡率(P<0.05),淋巴细胞中促凋亡因子Bax的mRNA表达量及其血清浓度在试验后期均表现出显著性降低(P<0.05),抗凋亡因子Bcl-xl的mRNA表达量(P<0.01)及其血清浓度(P<0.10)在试验中、后期表现出增加趋势。此外,风机舍的血清白细胞介素-12(Interleukin-12,IL-12)和免疫球蛋白G(Immunoglobulin G,IgG)浓度较对照舍也表现出显著性增加(P<0.05)。4)从各项指标之间的相关分析得出,乳蛋白率、淋巴细胞数量与ETIC均呈显著负相关关系(P<0.05),淋巴细胞BAK mRNA表达、血清IL-6浓度与ETIC呈显著正相关关系(P<0.05)。可见,安装扰流风机可改善舍内温热环境,有效缓解夏季奶牛的热应激,提高奶牛生产性能和免疫功能。

关键词：动物风机热应激奶牛生产性能免疫功能

基于16S rDNA分析饲喂唾液乳杆菌XP132对白羽肉种鸡肠道菌群的影响

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畜牧兽医学报 2024年第9期55卷 4091-4099页

作者：何塔娜胡馨匀米洁兰高立张艳萍祁小乐崔红玉杨桂连高玉龙中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150069 吉林农业大学动物医学院长春130118

旨在评估1株替抗专利菌株唾液乳杆菌XP132对健康白羽肉种鸡肠道菌群的影响。选取12只6月龄白羽肉种鸡,随机平均分为试验组和对照组,每组6只。试验组白羽肉种鸡每日饲喂活菌数为1×10^(9)CFU的唾液乳杆菌XP132发酵液,对照组饲喂PBS,连续... 详细信息

旨在评估1株替抗专利菌株唾液乳杆菌XP132对健康白羽肉种鸡肠道菌群的影响。选取12只6月龄白羽肉种鸡,随机平均分为试验组和对照组,每组6只。试验组白羽肉种鸡每日饲喂活菌数为1×10^(9)CFU的唾液乳杆菌XP132发酵液,对照组饲喂PBS,连续饲喂4周后,基于16S rDNA测序方法,比较两组鸡肠道菌群发生的相对改变。结果表明,在饲喂唾液乳杆菌XP132后,通过α多样性分析物种丰富度,试验组菌群丰富程度高于对照组。在菌群组成的属水平上,饲喂唾液乳杆菌XP132的肉种鸡肠道菌群中,螺旋体科NK4A136属、梭状芽胞杆菌属、副拟杆菌属、罗氏菌属等有益物种丰度增加;在种水平上,饲喂唾液乳杆菌XP132组的肉种鸡肠道菌群中乳杆菌、拟杆菌、鼠李糖乳杆菌类等有益物种丰度增加。结果提示,本试验条件下,饲喂唾液乳杆菌XP132改变了白羽肉种鸡肠道菌群的丰富度,增加了有益菌菌群的物种丰度。

关键词：肠道菌群唾液乳杆菌 16S rDNA 白羽肉种鸡

基于电子舌和代谢组学评价不同等级滇红茶汤非挥发性差异组分

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中国食品学报 2024年第6期24卷 354-368页

作者：谢佳灵陈佳瑜袁海波王立磊杨艳芹江用文中国农业科学院茶叶研究所农业部茶树生物学与资源利用重点实验室杭州310008 安徽农业大学茶树生物学与资源利用国家重点实验室合肥230036

茶汤滋味是评价茶汤品质以及划分茶叶等级的重要因子之一。为了探明不同等级滇红工夫红茶茶汤差异的关键组分,本研究采用感官审评、电子舌和超高效液相色谱-四极杆静电场轨道阱高分辨质谱技术,对不同等级滇红工夫红茶汤品质进行研究。... 详细信息

茶汤滋味是评价茶汤品质以及划分茶叶等级的重要因子之一。为了探明不同等级滇红工夫红茶茶汤差异的关键组分,本研究采用感官审评、电子舌和超高效液相色谱-四极杆静电场轨道阱高分辨质谱技术,对不同等级滇红工夫红茶汤品质进行研究。结果表明:依据感官审评12个滇红茶汤可分为优质组、良好组、劣质组3组。电子舌分类结果与感官审评相一致,且电子舌对应不同滋味属性的传感器对3组茶汤的响应度各有不同。采用超高效液相色谱-四极杆静电场轨道阱高分辨质谱技术对其进行代谢组学研究,共检出116个化合物,包括氨基酸及其衍生物类26个,儿茶素类及其聚合物类15个,酚酸类16个,核苷酸及其衍生物类15个,黄酮(醇)及其糖苷类20个,生物碱类6个,有机酸类11个,糖类2个以及其它类5个。利用正交偏最小二乘回归分析,3组滇红茶汤得到良好区分(R^(2)Y=0.985,Q^(2)=0.902)。此外,基于VIP>1.2和显著性P<0.05,共筛选出7个影响不同等级茶汤的关键差异性组分,即:精氨酸、没食子儿茶素、表儿茶素、尿酸、脱落酸、烟酸、腺苷-5'-二磷酸。研究结果为不同等级的滇红茶汤品质评价和质量控制提供一定的理论支撑。

关键词：电子舌代谢组学滇红茶汤非挥发性组分

复方黄龙软膏促急性软组织损伤及烫伤修复的药效研究

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农业生物技术学报 2024年第1期32卷 234-246页

作者：谢曈张培华林珈好中国农业大学动物医学院中国农业大学中兽医药创新中心

急性软组织损伤和烫伤是兽医临床上常见的外伤疾病，均以局部急性无菌性炎症反应和组织损伤修复为主要的病理变化特点。目前，在兽医领域，对促进组织损伤修复的药物研究较少，复方黄龙软膏是依据中兽医经验方研制而成的促组织损伤修复... 详细信息

急性软组织损伤和烫伤是兽医临床上常见的外伤疾病，均以局部急性无菌性炎症反应和组织损伤修复为主要的病理变化特点。目前，在兽医领域，对促进组织损伤修复的药物研究较少，复方黄龙软膏是依据中兽医经验方研制而成的促组织损伤修复的中药软膏，具有较好的临床疗效。本研究对复方黄龙软膏的药效进行初步探索，建立了重物击打SD大鼠(Rattus norvegicus)急性软组织损伤模型和热金属高温烫伤C57BL/6J小鼠(Mus musculus)模型，通过症候表现变化和苏木精-伊红(haematoxylin and eosin, HE)染色病理组织切片观察，评估复方黄龙软膏促急性软组织损伤及烫伤修复的药效。结果表明，促急性软组织损伤修复试验中，用药72 h时，复方黄龙软膏组与模型组相比，急性软组织损伤大鼠症候评分极显著下降(P<0.01)，后肢肿胀率极显著降低(P<0.01)；复方黄龙软膏组与阳性药物(双氯芬酸二乙胺乳胶)组相比，肿胀率显著降低(P<0.05)。促烫伤修复试验中，用药7 d时，复方黄龙软膏组小鼠烫伤病灶愈合率为(47.82±5.53)%，是模型组愈合率的1.4倍，差异显著(P<0.05)。病理切片结果表明，与模型组相比，复方黄龙软膏组中大鼠软组织和小鼠皮肤中的出血和炎症征象均减轻，胶原纤维增多。本研究证明，复方黄龙软膏能显著改善急性软组织损伤模型大鼠的瘀斑、水肿等症状，抑制炎症反应，促进损伤组织修复，且与双氯芬酸二乙胺乳膏相比，在消除水肿方面更具优势。在促烫伤修复方面，能加快烫伤模型小鼠烫伤创面愈合，促进其创面修复，并抑制炎症反应。本研究为复方黄龙软膏的临床应用提供初步理论依据。

关键词：复方黄龙软膏急性软组织损伤烫伤组织修复药效研究

HIF-1α信号通路对脂多糖诱导鸡巨噬细胞炎症的调节作用研究

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中国畜牧兽医 2024年第5期51卷 2071-2080页

作者：冯晓梦高超陶新磊李小方吕晓萍高雪丽赵一李亚楠刘超男东北农业大学动物医学院黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150030 中国农业大学动物医学院北京100193

【目的】探究鸡巨噬细胞(HD11)在脂多糖(LPS)诱导条件下,缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)信号通路和线粒体功能对细胞炎症反应的影响。【方法】试验以HD11细胞为研究对象,分别用不同浓度LPS作用于细胞,培养24 h后检测细胞活力,筛选LPS最佳作... 详细信息

【目的】探究鸡巨噬细胞(HD11)在脂多糖(LPS)诱导条件下,缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)信号通路和线粒体功能对细胞炎症反应的影响。【方法】试验以HD11细胞为研究对象,分别用不同浓度LPS作用于细胞,培养24 h后检测细胞活力,筛选LPS最佳作用浓度;同时在最佳LPS作用浓度下,筛选LPS最佳作用时间。将HD11细胞分为对照组和模型组,模型组加入最佳作用浓度LPS培养,对照组加等量的完全培养液,按照LPS最佳作用时间培养后,提取细胞总RNA进行转录组测序,并对差异表达基因进行GO功能注释和KEGG通路富集分析。利用实时荧光定量PCR和Western blotting分别检测HIF-1α信号通路相关因子mRNA和蛋白表达量;通过流式细胞术检测线粒体膜电位和活性氧(ROS)水平变化。【结果】LPS诱导的HD11细胞炎症模型中最适条件为1μg/mL LPS培养12 h,以此条件成功建立了细胞炎症模型。与对照组相比,模型组共检测到2063个差异表达基因,其中1319个上调,744个下调。GO功能注释结果显示,差异表达基因显著富集到免疫系统应答、对外部刺激的反应和细胞因子受体结合等过程。KEGG通路富集分析结果显示,差异表达基因显著富集在50条信号通路,主要涉及免疫细胞介导的炎症反应和Toll样受体、核转录因子-κB(NF-κB)、HIF-1α等信号通路。其中有13个显著上调表达的基因集中在HIF-1α相关信号通路,包括Toll样受体4(TLR4)、NF-κB、HIF-1α、血管内皮生长因子(VEGF)基因等。实时荧光定量PCR和Western blotting结果显示,NF-κB p65、HIF-1α、VEGF等mRNA和蛋白表达水平均显著上调(P<0.05)。流式细胞术检测结果显示,与对照组相比,模型组线粒体膜电位极显著下降(P<0.01),ROS水平显著升高(P<0.05)。【结论】成功建立LPS诱导鸡巨噬细胞炎症模型,HIF-1α与NF-κB信号通路相互串扰共同参与LPS诱导的细胞炎症过程。同时,细胞线粒体功能下降,导致ROS生成增多,进而促进HIF-1α的表达,共同加重了炎性反应和代谢紊乱。

关键词：鸡巨噬细胞脂多糖(LPS) HIF-1α 炎症反应线粒体功能

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