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干细胞抗卵巢颗粒细胞衰老的作用机制及进展

中国组织工程研究 2025年第25期29卷 5414-5421页

作者：林美玉赵玺龙高景赵晶阮光萍解放军联勤保障部队第九二〇医院基础医学实验室云南省昆明市650032 干细胞与免疫细胞生物医药技术国家地方联合工程研究中心云南省昆明市650032 云南省细胞治疗技术转化医学重点实验室云南省昆明市650032

背景:干细胞疗法作为一种新兴的治疗手段,有望改善卵巢环境,延缓卵巢颗粒细胞的衰老,为高龄妊娠女性带来新的希望。目的:综述干细胞抗卵巢颗粒细胞衰老的机制及研究进展。方法:检索中国知网和PubMed数据库中关于干细胞抗卵巢颗粒细胞衰... 详细信息

背景:干细胞疗法作为一种新兴的治疗手段,有望改善卵巢环境,延缓卵巢颗粒细胞的衰老,为高龄妊娠女性带来新的希望。目的:综述干细胞抗卵巢颗粒细胞衰老的机制及研究进展。方法:检索中国知网和PubMed数据库中关于干细胞抗卵巢颗粒细胞衰老的文献,以“干细胞,卵巢颗粒细胞,衰老”为中文检索词,以“stem cells,ovary granulosa cells,aging”为英文检索词,最终纳入67篇文献进行分析。结果与结论:①总结了5种卵巢颗粒细胞衰老的机制:DNA损伤和修复能力下降、氧化应激、线粒体功能受损、炎症反应、激素水平变化;②整理了当前干细胞治疗卵巢颗粒细胞衰老的5种机制:促进增殖和抑制凋亡、分化潜能及再生能力、分泌因子、抗氧化、抗炎症反应和免疫调节;③目前有多种类型的干细胞可通过多种方式协同治疗卵巢颗粒细胞衰老,干细胞疗法在恢复女性生育能力方面具有广阔前景。

关键词：干细胞卵巢颗粒细胞衰老机制氧化应激抑制凋亡细胞因子抗氧化抗炎症反应

年轻和老年小鼠脂肪来源干细胞生物学特性对比

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中国组织工程研究 2025年第19期29卷 4063-4068页

作者：林美玉姚翔高景赵玺龙潘兴华阮光萍解放军联勤保障部队第九二〇医院基础医学实验室云南省昆明市650032 干细胞与免疫细胞生物医药技术国家地方联合工程研究中心云南省昆明市650032 云南省细胞治疗技术转化医学重点实验室云南省昆明市650032

背景:脂肪来源干细胞具有抗衰老的作用,但来自不同年龄供者的脂肪来源干细胞是否有区别,还需深入研究。目的:对比老年和年轻小鼠脂肪来源干细胞的生物学特性。方法:分别从8周龄、14周龄C57BL小鼠脂肪组织中提取脂肪来源干细胞,对比分析... 详细信息

背景:脂肪来源干细胞具有抗衰老的作用,但来自不同年龄供者的脂肪来源干细胞是否有区别,还需深入研究。目的:对比老年和年轻小鼠脂肪来源干细胞的生物学特性。方法:分别从8周龄、14周龄C57BL小鼠脂肪组织中提取脂肪来源干细胞,对比分析老年和年轻小鼠脂肪来源干细胞的细胞周期、凋亡、增殖能力的差异,定量PCR和Western blot检测老年和年轻小鼠脂肪来源干细胞衰老相关P21、P27基因和蛋白的表达。结果与结论:与老年小鼠脂肪来源干细胞相比,年轻小鼠脂肪来源干细胞更有活力,形态更规则,凋亡更少,增殖更快,衰老相关P21、P27基因和蛋白表达量更低,说明年轻小鼠脂肪来源干细胞具有更好的抗衰老作用。

关键词：脂肪来源干细胞脂肪组织年轻老年小鼠抗衰老

高活性脐带间充质干细胞干预老年树鼩衰老脾脏的作用与机制

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中国组织工程研究 2025年第19期29卷 4000-4010页

作者：叶丽田川赵晓娟陈梦蝶叶倩倩李强廖珠银李晔朱向情阮光萍何志旭舒莉萍潘兴华贵州医科大学基础医学院免疫学教研室组织工程与干细胞实验中心贵州省贵阳市550004 中国人民解放军联勤保障部队第九二〇医院干细胞与免疫细胞生物医药技术国家地方联合工程实验室云南省细胞治疗技术转化医学重点实验室昆明市干细胞与再生医学重点实验室基础医学实验室云南省昆明市650032 遵义医科大学附属医院儿科学教研室贵州省遵义市563100

背景:脾脏具有储血、造血和免疫功能,随着年龄增长,脾脏结构退变、功能衰退引起免疫系统功能受损,进而加速机体衰老进程,而高活性脐带间充质干细胞治疗树鼩脾脏衰老尚未见报道。目的:探讨高活性脐带间充质干细胞对树鼩脾脏衰老的干预作... 详细信息

背景:脾脏具有储血、造血和免疫功能,随着年龄增长,脾脏结构退变、功能衰退引起免疫系统功能受损,进而加速机体衰老进程,而高活性脐带间充质干细胞治疗树鼩脾脏衰老尚未见报道。目的:探讨高活性脐带间充质干细胞对树鼩脾脏衰老的干预作用及机制。方法:从剖腹产的新生树鼩脐带组织中分离、培养和获得高活性脐带间充质干细胞,三系分化试剂盒检测成脂、成骨、成软骨分化能力,流式细胞术检测细胞周期和表面标志物。以感染复数值分别为100,120,140,160,180,200的吉凯基因绿色荧光蛋白转染第2代高活性脐带间充质干细胞,筛选最佳转染条件;转染后的第4代高活性脐带间充质干细胞尾静脉输注给老年治疗组树鼩,青年对照组和老年模型组不予特殊处理,治疗4个月时取脾脏组织,苏木精-伊红染色观察脾脏组织结构;β-半乳糖苷酶染色检测衰老相关半乳糖苷酶活性;免疫组织化学染色检测p21和p53蛋白表达水平;Ki67和PCNA免疫荧光染色检测细胞增殖活性;免疫荧光染色检测脾脏自噬蛋白分子Beclin1和APG5L/ATG5表达水平;活性氧荧光染色检测脾脏组织的活性氧含量;CD3免疫荧光染色检测总T淋巴细胞比例变化;酶联免疫吸附实验检测脾脏组织白细胞介素1β和转化生长因子β1分泌水平;DAPI复染细胞核观察绿色荧光蛋白标记的高活性脐带间充质干细胞在脾脏组织的分布情况。结果与结论:①高活性脐带间充质干细胞呈核小短梭形、鱼群样生长,G_(0)/G_(1)期占比大,具有向成脂、成骨和成软骨分化潜能。②感染复数为140且转染72 h为吉凯基因绿色荧光蛋白标记树鼩高活性脐带间充质干细胞的最佳条件。③与老年模型组相比,老年治疗组树鼩脾脏组织细胞排列紧密,白髓面积增加(P0.05),脾脏组织衰老相关半乳糖苷酶活性水平降低(P细胞比例增加(P细胞介素1β分泌水平降低(P转化生长因子β1分泌水平无显著差异(P>0.05)。与青年对照组相比,以上检测指标在老年治疗组中均有显著差异(P治疗组树鼩脾脏组织中有绿色荧光蛋白标记的绿色荧光细胞。结果表明:静脉输注高活性脐带间充质干细胞可迁移至脾脏组织,抑制活性氧产生,下调衰老相关蛋白分子表达,诱导细胞自噬,促进细胞增殖,降低慢性炎症,进而改善脾脏组织结构和功能。

关键词：高活性脐带间充质干细胞树鼩脾脏衰老免疫自噬炎症

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异补骨脂素通过促进骨形成加快骨折愈合

陆军军医大学学报 2024年第3期46卷 240-248页

作者：吴西王中琪高玉海魏振龙柏鑫陈克明甘肃中医药大学中医临床学院兰州730030 中国人民解放军联勤保障部队第九四〇医院基础医学实验室兰州730050 甘肃省干细胞与基因药物重点实验室兰州730050

目的研究异补骨脂素(isopsoralen,ISO)对小鼠胫骨骨折愈合的影响及其作用机制。方法取2月龄体质量为(20±2)g雄性C57BL/6小鼠50只,按随机数字表法分为模型(Model)组和异补骨脂素治疗(ISO)组,每组25只,ISO组灌服40 mg/kg的ISO,Model组... 详细信息

目的研究异补骨脂素(isopsoralen,ISO)对小鼠胫骨骨折愈合的影响及其作用机制。方法取2月龄体质量为(20±2)g雄性C57BL/6小鼠50只,按随机数字表法分为模型(Model)组和异补骨脂素治疗(ISO)组,每组25只,ISO组灌服40 mg/kg的ISO,Model组灌服等体积生理盐水,每日1次。取服药第7、14、21、28天术侧胫骨,采用Micro-CT扫描骨折区域量化骨体积分数(bone volume/total volume,BV/TV),并通过HE染色观察骨折断端愈合及塑形情况。采用ELISA法检测服药14 d小鼠血清中骨碱性磷酸酶(bone alkaline phosphatase,BALP)和Ⅰ型前胶原氨基端原肽(procollagen Type I N-terminal peptide,PINP)骨形成指标的变化情况。采用Western blot检测服药7、14 d小鼠胫骨骨痂组织中CollagenⅠ、Runx2、BMP2、OSX和VEGF蛋白的表达含量。通过血管灌注观察服药28 d后骨折区域骨痂微血管,量化分析血管体积分数及血管直径。采用免疫组织化学染色观察服药14 d后胫骨中VEGF表达情况。结果 HE染色结果显示,ISO组的愈合进程快于Model组。Micro-CT量化结果显示,服药7 d后ISO组的BV/TV高于Model组,但差异无统计学意义;14 d后ISO组的BV/TV明显高于Model组(P免疫组织化学染色结果显示ISO组VEGF表达量明显高于Model组(P细胞活性,提高相关骨形成蛋白的表达量,加快造血组织进入来促进骨折愈合。

关键词：异补骨脂素骨折愈合骨重建血管造影

槲皮素对微重力引起骨髓间充质干细胞衰老的影响研究

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中国药理学通报 2024年第1期40卷 38-45页

作者：杨玉田轩莹莹高玉海王龙飞唐汉琴马智慧李亮武艺陈克明兰州大学药学院甘肃兰州730030 中国人民解放军联勤保障部队第九四〇医院基础医学实验室甘肃兰州730050 甘肃省干细胞与基因药物重点实验室甘肃兰州730050

目的研究槲皮素对微重力作用下建立的骨髓间充质干细胞衰老模型的影响。方法用3D回转仪构造骨髓间充质干细胞衰老模型,给予细胞槲皮素后进行相关蛋白检测、氧化指标检测对药物抗衰老作用进行评估研究。结果与对照组相比微重力组细胞... 详细信息

目的研究槲皮素对微重力作用下建立的骨髓间充质干细胞衰老模型的影响。方法用3D回转仪构造骨髓间充质干细胞衰老模型,给予细胞槲皮素后进行相关蛋白检测、氧化指标检测对药物抗衰老作用进行评估研究。结果与对照组相比微重力组细胞的衰老相关蛋白p21、p16、p53、RB的表达显著性上升、细胞周期蛋白Cyclin D1、核纤层蛋白lamin B1表达显著下降,差异具有统计学意义(P细胞线粒体膜电位明显下降(P细胞ROS蓄积量明显上升(P细胞,槲皮素组细胞的衰老相关蛋白p21、p16、p53、RB的表达显著性下降、细胞周期蛋白cyclin D1、核纤层蛋白lamin B1表达显著上升,差异具有统计学意义(P细胞线粒体膜电位明显上升(P细胞ROS蓄积量明显下降(P细胞周期正常进行,从而延缓微重力导致的骨髓间充质干细胞衰老。

关键词：微重力衰老骨髓间充质干细胞槲皮素氧化应激 lamin B1 线粒体

白藜芦醇介导AMPK/mTOR信号通路调控线粒体自噬缓解小鼠精原细胞氧化应激损伤和凋亡

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中国药学杂志 2024年第5期59卷 416-424页

作者：石拴霞王纪田宋诚魏璐晓甄雪蓉黄冰雪阎一鑫王玲中国人民解放军联勤保障部队第九四〇医院生殖医学中心兰州730050 甘肃中医药大学第一临床医学院兰州730000 中国人民解放军联勤保障部队第九四〇医院甘肃省干细胞与基因药物重点实验室兰州730050

目的观察白藜芦醇(resveratrol,RES)是否通过腺苷酸活化蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(amp-activatedproteinkinase/mammalian target of rapamycin,AMPK/mTOR)信号通路调控线粒体自噬缓解小鼠精原细胞(Gc-1 spg)氧化应激损伤。方法设置空白对照组(Control)、过氧化氢组(H_(2)O_(2))、H_(2)O_(2)+RES组、H_(2)O_(2)+RES+AMPK抑制剂(Compound C,CC)组,各组给予相应处理后。CCK-8检测细胞活力,试剂盒检测过氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽过氧化物(glutathione peroxidase,GSH-PX)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)和三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)SOD、MDA、GSH-PX、LDH和ATP水平,JC-1检测线粒体膜电位,MitoTracker?Green FM检测活细胞线粒体形态,Hoechst 33342染色检测细胞核凋亡率,透射电镜观察细胞超微结构及线粒体自噬变化,Western blot检测凋亡蛋白Bcl-2关联X蛋白(Bcl-2-associated X protein,Bax)、B细胞淋巴瘤-2蛋白(B-cell lymphoma 2 protein,Bcl-2)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase,Caspase-3),自噬蛋白微管相关蛋白轻链3(light chain 3,LC3)、P62,通路相关蛋白AMPK、p-AMPK、mTOR、p-mTOR表达水平。结果H_(2)O_(2)促进Gc-1 spg细胞氧化应激损伤,激活AMPK/mTOR信号通路和线粒体自噬,提高p-AMPK/AMPK和LC3表达并降低p-mTOR/mTOR和P62表达;RES能缓解Gc-1 spg细胞氧化应激损伤,进一步提高p-AMPK/AMPK和LC3表达,降低p-mTOR/mTOR和P62表达,促进Gc-1 spg细胞线粒体自噬;AMPK抑制剂能逆转RES对Gc-1 spg细胞氧化应激损伤的保护作用,抑制SOD和GSH-PX活性并增加MDA和LDH水平,降低细胞线粒体膜电位,增加线粒体损伤,破坏细胞核,增加Bax、Caspase-3和P62表达水平并降低Bcl-2和LC3表达水平,增加细胞凋亡率,降低线粒体自噬。结论RES可能通过AMPK/mTOR信号通路促进Gc-1 spg细胞线粒体自噬缓解线粒体氧化应激损伤和细胞凋亡。

关键词：白藜芦醇过氧化氢小鼠精原细胞腺苷酸活化蛋白激酶哺乳动物雷帕霉素靶蛋白线粒体自噬凋亡

CIB1通过Wnt/β-catenin信号通路调控三阴性乳腺癌细胞增殖和迁移及侵袭机制研究

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中华肿瘤防治杂志 2024年第14期31卷 856-864+886页

作者：贾庆华王晓宇牛廷献张富婷马俊中国人民解放军联勤保障部队第九四〇医院检验科甘肃省干细胞与基因药物重点实验室中国人民解放军联勤保障部队第九四〇医院基础医学实验室

目的探讨CIB1对三阴性乳腺癌MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法通过慢病毒转染构建过表达CIB1的MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞，实验分为NC组和CIB1组。采用细胞计数试剂盒8（CCK8）、5-乙炔基-2′脱... 详细信息

目的探讨CIB1对三阴性乳腺癌MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法通过慢病毒转染构建过表达CIB1的MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞，实验分为NC组和CIB1组。采用细胞计数试剂盒8（CCK8）、5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷（EdU）实验检测细胞增殖活性，流式细胞术检测细胞凋亡情况，划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力。同时，采用实时荧光定量-聚合酶链式反应（qRT-PCR）和蛋白质印迹实验检测细胞内β-catenin、活化蛋白C（APC）、糖原合酶激酶3β（GSK-3β）、c-myc的mRNA和蛋白表达情况。结果 MDA-MB-231细胞内NC组和CIB1组CIB1蛋白表达水平分别为0.75±0.17和1.53±0.38,t=3.267,P=0.031。MDA-MB-468细胞内NC组和CIB1组CIB1蛋白表达水平分别为0.91±0.01和1.12±0.07,t=4.953,P=0.008。CCK8实验结果显示，MDA-MB-231细胞中NC组和CIB1组增殖力差异有统计学意义，F组别=120.088,P组别细胞中NC组和CIB1组增殖力差异有统计学意义，F组别=277.649,P组别实验结果显示，MDA-MB-231细胞中NC组和CIB1组增殖率分别为（31.42±0.01）%和（46.20±0.02）%,t=14.610,P细胞中NC组和CIB1组增殖率分别为（30.57±0.02）%和（42.61±0.03）%,t=6.397,P=0.003。MDA-MB-231细胞中NC组和CIB1组细胞凋亡率分别为（4.77±0.01）%和（2.07±0.10）%,t=3.785,P=0.019;MDA-MB-468细胞中NC组和CIB1组细胞凋亡率分别为（9.53±0.00）%、（3.90±0.00）%,t=19.390,P细胞中NC组和CIB1组细胞迁移率分别为（46.20±0.01）%和（64.35±0.10）%,t=3.386,P=0.028;MDA-MB-468细胞中NC组和CIB1组细胞迁移率分别为（24.84±0.05）%和（56.83±0.06）%,t=7.278,P=0.002。MDA-MB-231细胞中NC组和CIB1组穿膜细胞数分别为（300.67±25.17）和（411.67±24.99）个，t=5.421,P=0.006;MDA-MB-468细胞中NC组和CIB1组穿膜细胞数分别为（257.00±31.43）和（388.00±8.72）个，t=6.956,P=0.002。qRT-PCR和蛋白质印迹实验结果显示，MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞中CIB1组β-catenin、APC、c-myc mRNA和蛋白表达均升高，GSK-3β mRNA和蛋白表达均降低，差异均有统计学意义，均P细胞增殖、侵袭和迁移能力，抑制细胞凋亡，可能通过促进Wnt/β-catenin信号通路的激活发挥促癌作用。

关键词：钙整合素结合蛋白1 三阴性乳腺癌增殖迁移侵袭 Wnt/β-catenin信号通路

不同低氧胁迫方式下SD大鼠急进高原模型的比较研究

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中国实验动物学报 2024年第8期32卷 1001-1011页

作者：申栋帅陆璐王红义张梅陈克明牛廷献肖攀中国人民解放军联勤保障部队第九四○医院基础医学实验室兰州730050 甘肃省干细胞与基因药物重点实验室兰州730050

目的对SD大鼠在高原实地和模拟高原环境这2种低氧胁迫方式下建立的急进高原模型进行比较研究,进而鉴定模拟高原实验舱的可靠性。方法将SD大鼠分别急进模拟高原动物实验舱(4000 m)或高原实地实验室(4010 m)来建立大鼠急进高原模型,在暴露... 详细信息

目的对SD大鼠在高原实地和模拟高原环境这2种低氧胁迫方式下建立的急进高原模型进行比较研究,进而鉴定模拟高原实验舱的可靠性。方法将SD大鼠分别急进模拟高原动物实验舱(4000 m)或高原实地实验室(4010 m)来建立大鼠急进高原模型,在暴露24 h或72 h后采集并测定高原生理病理变化相关指标,主要包括血常规、血生化、血气、氧化损伤指标(超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px))、炎症指标(白细胞介素-1β(interleukin 1β,IL-1β)、γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)、单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)和白细胞介素-6(interleukin 6,IL-6))、病理组织分析和低氧敏感基因(低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,Hif-1α)和血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,Vegfa))等,最终对结果进行差异性分析,得出差异性评估报告。结果相同海拔高度下,高原实地或模拟高原暴露72 h后均可以产生明显的肺部和脑部损伤。相同暴露时间下,动物机体的血常规、血生化和血气结果相近,炎症指标(IL-6,IL-1β,MCP-1和IFN-γ)、氧化损伤指标(MDA,SOD和GSH)和脑部低氧敏感基因(Hif-1α和Vegfa)等检测结果无显著性差异。但是,模拟72 h组的二氧化碳分压(partial pressure of carbon dioxide,PaCO_(2))和碱剩余(base excess,BE)显著高于其他低氧处理组、模拟72 h组的肺部低氧敏感基因(Hif-1α和Vegfa)与空白对照组无显著性差异,以及高原实地处理组脑系数显著高于模拟高原处理组等结果提示高原实地和模拟高原环境可能存在细微区别。结论模拟高原实验舱在4000 m海拔可成功建立急进高原动物模型,最优暴露时间应大于24 h但略短于72 h。模拟高原实验舱具有良好的可靠性,但条件允许情况下应尽量前往高原实地来建立急进高原动物模型。

关键词： SD大鼠高原实地模拟高原实验舱急进高原差异性研究

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铁死亡的分子机制及其对膀胱癌的影响

中南大学学报（医学版） 2024年第2期49卷 286-295页

作者：李瑞杰宁艺萍袁亚成杨旭凯甘肃中医药大学第一临床医学院兰州730000 中国人民解放军联勤保障部队第九四〇医院泌尿外科兰州730050 甘肃省干细胞与基因药物重点实验室兰州730050

膀胱癌(bladder cancer,BC)是泌尿系统三大常见恶性肿瘤之一,具有发病率高、易转移、治疗效果不佳、预后较差的特点,严重威胁着全人类的健康。肿瘤细胞表现出强烈的需铁现象,而铁超载会诱导细胞发生铁死亡,即一种由脂质过氧化和细胞膜... 详细信息

膀胱癌(bladder cancer,BC)是泌尿系统三大常见恶性肿瘤之一,具有发病率高、易转移、治疗效果不佳、预后较差的特点,严重威胁着全人类的健康。肿瘤细胞表现出强烈的需铁现象,而铁超载会诱导细胞发生铁死亡,即一种由脂质过氧化和细胞膜损伤引起的铁依赖性细胞死亡。因此,铁死亡具有很强的抗肿瘤潜力。铁死亡的分子机制与细胞磷脂代谢异常、铁代谢异常、抗氧化和非抗氧化系统Xc-/谷胱甘肽(glutathione,GSH)/谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)的失调有关。铁死亡相关分子在BC的发生和发展、转移、耐药及免疫反应等方面发挥着重要的作用,有望成为治疗BC的靶点。

关键词：膀胱癌铁死亡脂质过氧化磷脂代谢铁代谢 Xc-/谷胱甘肽/谷胱甘肽过氧化物酶4 铁死亡相关分子

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