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羊胫骨慢性骨髓炎模型的构建及评价

中国组织工程研究 2025年第14期29卷 2937-2942页

作者：田冬子沈伟伟李文帅石杰邓晓文赵峥嵘刘登科刘涛涛蔡茂林高秋明甘肃中医药大学第一临床医学院甘肃省兰州市730000 中国人民解放军联勤保障部队第九四〇医院骨科中心甘肃省兰州市730050

背景:高原环境会影响骨髓炎患者的免疫功能和代谢状态,导致疾病进程的加速或复杂化。构建有效稳定的慢性骨髓炎动物模型对于慢性骨髓炎的实验研究至关重要。目的:在高原地区建立一种基于羊的慢性骨髓炎模型,以供毒性评估和治疗性研究。... 详细信息

背景:高原环境会影响骨髓炎患者的免疫功能和代谢状态,导致疾病进程的加速或复杂化。构建有效稳定的慢性骨髓炎动物模型对于慢性骨髓炎的实验研究至关重要。目的:在高原地区建立一种基于羊的慢性骨髓炎模型,以供毒性评估和治疗性研究。方法:15只健康绵羊,将鱼肝油酸钠和金黄色葡萄球菌悬液注射至左侧胫骨中段髓腔内建立慢性骨髓炎模型,采用大体观察、体质量及体温监测、血液感染指标检测、影像学评分及微生物培养等方法进行评估与分析。结果与结论:①造模后所有绵羊在早期均可观察到局部组织肿胀和病腿跛行症状,伴有不同程度的食欲减退现象;造模1周后绵羊体质量出现轻微下降,体温未见明显变化。②造模4 d后红细胞沉降率明显加快(P细胞数量出现明显升高的趋势,1周后恢复到正常状态;造模后C-反应蛋白水平明显增加(P实验结束仍显著高于正常水平(P<0.05)。③15只绵羊均有典型骨髓炎的放射学表现,溶骨性病灶的边界模糊不清且形态不规则,呈现出一种低密度透亮区域,其中夹杂着密度增高且分布不均的坏死骨块影像,病变区域皮质骨部分出现了不同程度的骨膜反应现象。④13只绵羊培养出单一金黄色葡萄球菌,另2只绵羊培养出金黄色葡萄球菌和大肠杆菌。提示通过向绵羊胫骨骨髓腔内注入适量的金黄色葡萄球菌菌液,并结合局部植入异物棉线与鱼肝油酸钠,可在高原地区成功构建一种可靠的绵羊胫骨慢性骨髓炎动物模型。

关键词：慢性骨髓炎金黄色葡萄球菌羊高原动物模型

干扰和过表达端粒酶卡哈尔体蛋白1小鼠骨髓间充质干细胞的生物学特性对比

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中国组织工程研究 2025年第31期 6616-6624页

作者：林书倩赵玺龙高景潘兴华李自安阮光萍解放军联勤保障部队第九二〇医院基础医学实验室干细胞与免疫细胞生物医药技术国家地方联合工程研究中心云南省细胞治疗技术转化医学重点实验室

背景：随着年龄的增长，骨髓间充质干细胞的功能逐渐降低，延缓骨髓间充质干细胞自身衰老成为一项重要课题。目的：通过改变端粒酶卡哈尔体蛋白1(telomerase cajal body protein 1,TCAB1)基因的表达，探讨延缓骨髓间充质干细胞衰老的途... 详细信息

背景：随着年龄的增长，骨髓间充质干细胞的功能逐渐降低，延缓骨髓间充质干细胞自身衰老成为一项重要课题。目的：通过改变端粒酶卡哈尔体蛋白1(telomerase cajal body protein 1,TCAB1)基因的表达，探讨延缓骨髓间充质干细胞衰老的途径。方法：细胞贴壁法培养小鼠骨髓间充质干细胞，应用重组慢病毒技术过表达或干扰骨髓间充质干细胞中的TCAB1基因，采用qPCR检测衰老相关基因P16、P21、P53、P27的表达，qPCR检测Telomere的表达判断端粒的相对长度；Western blot检测衰老蛋白P16、P21、P53、P27的表达；CCK-8法检测细胞增殖情况；Annexin V-PE/7-AAD细胞凋亡试剂盒检测细胞凋亡情况。结果与结论：过表达TCAB1基因骨髓间充质干细胞中衰老相关基因及蛋白的表达量下降，端粒相对长度增加，细胞增殖能力较强，细胞凋亡数量较少，细胞呈现年轻状态；干扰TCAB1基因骨髓间充质干细胞中衰老相关基因及蛋白的表达量上升，端粒相对长度缩短，细胞增殖能力较弱，细胞凋亡数量较多，细胞呈现衰老状态。以上结果表明，在适当范围内增加TCAB1的表达量，可以延缓细胞衰老的速度。

关键词：骨髓间充质干细胞端粒酶卡哈尔体蛋白1 衰老过表达干扰细胞增殖细胞凋亡工程化干细胞

高活性脐带间充质干细胞干预老年树鼩衰老脾脏的作用与机制

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中国组织工程研究 2025年第19期29卷 4000-4010页

作者：叶丽田川赵晓娟陈梦蝶叶倩倩李强廖珠银李晔朱向情阮光萍何志旭舒莉萍潘兴华贵州医科大学基础医学院免疫学教研室组织工程与干细胞实验中心贵州省贵阳市550004 中国人民解放军联勤保障部队第九二〇医院干细胞与免疫细胞生物医药技术国家地方联合工程实验室云南省细胞治疗技术转化医学重点实验室昆明市干细胞与再生医学重点实验室基础医学实验室云南省昆明市650032 遵义医科大学附属医院儿科学教研室贵州省遵义市563100

背景:脾脏具有储血、造血和免疫功能,随着年龄增长,脾脏结构退变、功能衰退引起免疫系统功能受损,进而加速机体衰老进程,而高活性脐带间充质干细胞治疗树鼩脾脏衰老尚未见报道。目的:探讨高活性脐带间充质干细胞对树鼩脾脏衰老的干预作... 详细信息

背景:脾脏具有储血、造血和免疫功能,随着年龄增长,脾脏结构退变、功能衰退引起免疫系统功能受损,进而加速机体衰老进程,而高活性脐带间充质干细胞治疗树鼩脾脏衰老尚未见报道。目的:探讨高活性脐带间充质干细胞对树鼩脾脏衰老的干预作用及机制。方法:从剖腹产的新生树鼩脐带组织中分离、培养和获得高活性脐带间充质干细胞,三系分化试剂盒检测成脂、成骨、成软骨分化能力,流式细胞术检测细胞周期和表面标志物。以感染复数值分别为100,120,140,160,180,200的吉凯基因绿色荧光蛋白转染第2代高活性脐带间充质干细胞,筛选最佳转染条件;转染后的第4代高活性脐带间充质干细胞尾静脉输注给老年治疗组树鼩,青年对照组和老年模型组不予特殊处理,治疗4个月时取脾脏组织,苏木精-伊红染色观察脾脏组织结构;β-半乳糖苷酶染色检测衰老相关半乳糖苷酶活性;免疫组织化学染色检测p21和p53蛋白表达水平;Ki67和PCNA免疫荧光染色检测细胞增殖活性;免疫荧光染色检测脾脏自噬蛋白分子Beclin1和APG5L/ATG5表达水平;活性氧荧光染色检测脾脏组织的活性氧含量;CD3免疫荧光染色检测总T淋巴细胞比例变化;酶联免疫吸附实验检测脾脏组织白细胞介素1β和转化生长因子β1分泌水平;DAPI复染细胞核观察绿色荧光蛋白标记的高活性脐带间充质干细胞在脾脏组织的分布情况。结果与结论:①高活性脐带间充质干细胞呈核小短梭形、鱼群样生长,G_(0)/G_(1)期占比大,具有向成脂、成骨和成软骨分化潜能。②感染复数为140且转染72 h为吉凯基因绿色荧光蛋白标记树鼩高活性脐带间充质干细胞的最佳条件。③与老年模型组相比,老年治疗组树鼩脾脏组织细胞排列紧密,白髓面积增加(P0.05),脾脏组织衰老相关半乳糖苷酶活性水平降低(P细胞比例增加(P细胞介素1β分泌水平降低(P0.05)。与青年对照组相比,以上检测指标在老年治疗组中均有显著差异(P细胞。结果表明:静脉输注高活性脐带间充质干细胞可迁移至脾脏组织,抑制活性氧产生,下调衰老相关蛋白分子表达,诱导细胞自噬,促进细胞增殖,降低慢性炎症,进而改善脾脏组织结构和功能。

关键词：高活性脐带间充质干细胞树鼩脾脏衰老免疫自噬炎症

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干细胞抗卵巢颗粒细胞衰老的作用机制及进展

中国组织工程研究 2025年第25期29卷 5414-5421页

作者：林美玉赵玺龙高景赵晶阮光萍解放军联勤保障部队第九二〇医院基础医学实验室云南省昆明市650032 干细胞与免疫细胞生物医药技术国家地方联合工程研究中心云南省昆明市650032 云南省细胞治疗技术转化医学重点实验室云南省昆明市650032

背景:干细胞疗法作为一种新兴的治疗手段,有望改善卵巢环境,延缓卵巢颗粒细胞的衰老,为高龄妊娠女性带来新的希望。目的:综述干细胞抗卵巢颗粒细胞衰老的机制及研究进展。方法:检索中国知网和PubMed数据库中关于干细胞抗卵巢颗粒细胞衰... 详细信息

背景:干细胞疗法作为一种新兴的治疗手段,有望改善卵巢环境,延缓卵巢颗粒细胞的衰老,为高龄妊娠女性带来新的希望。目的:综述干细胞抗卵巢颗粒细胞衰老的机制及研究进展。方法:检索中国知网和PubMed数据库中关于干细胞抗卵巢颗粒细胞衰老的文献,以“干细胞,卵巢颗粒细胞,衰老”为中文检索词,以“stem cells,ovary granulosa cells,aging”为英文检索词,最终纳入67篇文献进行分析。结果与结论:①总结了5种卵巢颗粒细胞衰老的机制:DNA损伤和修复能力下降、氧化应激、线粒体功能受损、炎症反应、激素水平变化;②整理了当前干细胞治疗卵巢颗粒细胞衰老的5种机制:促进增殖和抑制凋亡、分化潜能及再生能力、分泌因子、抗氧化、抗炎症反应和免疫调节;③目前有多种类型的干细胞可通过多种方式协同治疗卵巢颗粒细胞衰老,干细胞疗法在恢复女性生育能力方面具有广阔前景。

关键词：干细胞卵巢颗粒细胞衰老机制氧化应激抑制凋亡细胞因子抗氧化抗炎症反应

年轻和老年小鼠脂肪来源干细胞生物学特性对比

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中国组织工程研究 2025年第19期29卷 4063-4068页

作者：林美玉姚翔高景赵玺龙潘兴华阮光萍解放军联勤保障部队第九二〇医院基础医学实验室云南省昆明市650032 干细胞与免疫细胞生物医药技术国家地方联合工程研究中心云南省昆明市650032 云南省细胞治疗技术转化医学重点实验室云南省昆明市650032

背景:脂肪来源干细胞具有抗衰老的作用,但来自不同年龄供者的脂肪来源干细胞是否有区别,还需深入研究。目的:对比老年和年轻小鼠脂肪来源干细胞的生物学特性。方法:分别从8周龄、14周龄C57BL小鼠脂肪组织中提取脂肪来源干细胞,对比分析... 详细信息

背景:脂肪来源干细胞具有抗衰老的作用,但来自不同年龄供者的脂肪来源干细胞是否有区别,还需深入研究。目的:对比老年和年轻小鼠脂肪来源干细胞的生物学特性。方法:分别从8周龄、14周龄C57BL小鼠脂肪组织中提取脂肪来源干细胞,对比分析老年和年轻小鼠脂肪来源干细胞的细胞周期、凋亡、增殖能力的差异,定量PCR和Western blot检测老年和年轻小鼠脂肪来源干细胞衰老相关P21、P27基因和蛋白的表达。结果与结论:与老年小鼠脂肪来源干细胞相比,年轻小鼠脂肪来源干细胞更有活力,形态更规则,凋亡更少,增殖更快,衰老相关P21、P27基因和蛋白表达量更低,说明年轻小鼠脂肪来源干细胞具有更好的抗衰老作用。

关键词：脂肪来源干细胞脂肪组织年轻老年小鼠抗衰老

白藜芦醇介导AMPK/mTOR信号通路调控线粒体自噬缓解小鼠精原细胞氧化应激损伤和凋亡

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中国药学杂志 2024年第5期59卷 416-424页

作者：石拴霞王纪田宋诚魏璐晓甄雪蓉黄冰雪阎一鑫王玲中国人民解放军联勤保障部队第九四〇医院生殖医学中心兰州730050 甘肃中医药大学第一临床医学院兰州730000 中国人民解放军联勤保障部队第九四〇医院甘肃省干细胞与基因药物重点实验室兰州730050

目的观察白藜芦醇(resveratrol,RES)是否通过腺苷酸活化蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(amp-activatedproteinkinase/mammalian target of rapamycin,AMPK/mTOR)信号通路调控线粒体自噬缓解小鼠精原细胞(Gc-1 spg)氧化应激损伤。方法设置空白对照组(Control)、过氧化氢组(H_(2)O_(2))、H_(2)O_(2)+RES组、H_(2)O_(2)+RES+AMPK抑制剂(Compound C,CC)组,各组给予相应处理后。CCK-8检测细胞活力,试剂盒检测过氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽过氧化物(glutathione peroxidase,GSH-PX)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)和三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)SOD、MDA、GSH-PX、LDH和ATP水平,JC-1检测线粒体膜电位,MitoTracker?Green FM检测活细胞线粒体形态,Hoechst 33342染色检测细胞核凋亡率,透射电镜观察细胞超微结构及线粒体自噬变化,Western blot检测凋亡蛋白Bcl-2关联X蛋白(Bcl-2-associated X protein,Bax)、B细胞淋巴瘤-2蛋白(B-cell lymphoma 2 protein,Bcl-2)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase,Caspase-3),自噬蛋白微管相关蛋白轻链3(light chain 3,LC3)、P62,通路相关蛋白AMPK、p-AMPK、mTOR、p-mTOR表达水平。结果H_(2)O_(2)促进Gc-1 spg细胞氧化应激损伤,激活AMPK/mTOR信号通路和线粒体自噬,提高p-AMPK/AMPK和LC3表达并降低p-mTOR/mTOR和P62表达;RES能缓解Gc-1 spg细胞氧化应激损伤,进一步提高p-AMPK/AMPK和LC3表达,降低p-mTOR/mTOR和P62表达,促进Gc-1 spg细胞线粒体自噬;AMPK抑制剂能逆转RES对Gc-1 spg细胞氧化应激损伤的保护作用,抑制SOD和GSH-PX活性并增加MDA和LDH水平,降低细胞线粒体膜电位,增加线粒体损伤,破坏细胞核,增加Bax、Caspase-3和P62表达水平并降低Bcl-2和LC3表达水平,增加细胞凋亡率,降低线粒体自噬。结论RES可能通过AMPK/mTOR信号通路促进Gc-1 spg细胞线粒体自噬缓解线粒体氧化应激损伤和细胞凋亡。

关键词：白藜芦醇过氧化氢小鼠精原细胞腺苷酸活化蛋白激酶哺乳动物雷帕霉素靶蛋白线粒体自噬凋亡

CIB1通过Wnt/β-catenin信号通路调控三阴性乳腺癌细胞增殖和迁移及侵袭机制研究

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中华肿瘤防治杂志 2024年第14期31卷 856-864,886页

作者：贾庆华王晓宇牛廷献张富婷马俊中国人民解放军联勤保障部队第九四〇医院检验科甘肃兰州730050 中国人民解放军联勤保障部队第九四〇医院基础医学实验室甘肃兰州730050 甘肃省干细胞与基因药物重点实验室甘肃兰州730050

目的探讨CIB1对三阴性乳腺癌MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法通过慢病毒转染构建过表达CIB1的MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞,实验分为NC组和CIB1组。采用细胞计数试剂盒8(CCK8)、5-乙炔基-2′脱氧尿嘧... 详细信息

目的探讨CIB1对三阴性乳腺癌MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法通过慢病毒转染构建过表达CIB1的MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞,实验分为NC组和CIB1组。采用细胞计数试剂盒8(CCK8)、5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)实验检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力。同时,采用实时荧光定量-聚合酶链式反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹实验检测细胞内β-catenin、活化蛋白C(APC)、糖原合酶激酶3β(GSK-3β)、c-myc的mRNA和蛋白表达情况。结果MDA-MB-231细胞内NC组和CIB1组CIB1蛋白表达水平分别为0.75±0.17和1.53±0.38,t=3.267,P=0.031。MDA-MB-468细胞内NC组和CIB1组CIB1蛋白表达水平分别为0.91±0.01和1.12±0.07,t=4.953,P=0.008。CCK8实验结果显示,MDA-MB-231细胞中NC组和CIB1组增殖力差异有统计学意义,F_(组别)=120.088,P_(组别)细胞中NC组和CIB1组增殖力差异有统计学意义,F_(组别)=277.649,P_(组别)实验结果显示,MDA-MB-231细胞中NC组和CIB1组增殖率分别为(31.42±0.01)%和(46.20±0.02)%,t=14.610,P细胞中NC组和CIB1组增殖率分别为(30.57±0.02)%和(42.61±0.03)%,t=6.397,P=0.003。MDA-MB-231细胞中NC组和CIB1组细胞凋亡率分别为(4.77±0.01)%和(2.07±0.10)%,t=3.785,P=0.019;MDA-MB-468细胞中NC组和CIB1组细胞凋亡率分别为(9.53±0.00)%、(3.90±0.00)%,t=19.390,P细胞中NC组和CIB1组细胞迁移率分别为(46.20±0.01)%和(64.35±0.10)%,t=3.386,P=0.028;MDA-MB-468细胞中NC组和CIB1组细胞迁移率分别为(24.84±0.05)%和(56.83±0.06)%,t=7.278,P=0.002。MDA-MB-231细胞中NC组和CIB1组穿膜细胞数分别为(300.67±25.17)和(411.67±24.99)个,t=5.421,P=0.006;MDA-MB-468细胞中NC组和CIB1组穿膜细胞数分别为(257.00±31.43)和(388.00±8.72)个,t=6.956,P=0.002。qRT-PCR和蛋白质印迹实验结果显示,MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞中CIB1组β-catenin、APC、c-myc mRNA和蛋白表达均升高,GSK-3βmRNA和蛋白表达均降低,差异均有统计学意义,均P细胞增殖、侵袭和迁移能力,抑制细胞凋亡,可能通过促进Wnt/β-catenin信号通路的激活发挥促癌作用。

关键词：钙整合素结合蛋白1 三阴性乳腺癌增殖迁移侵袭 Wnt/β-catenin信号通路

1990—2019年中国消化性溃疡疾病负担及变化趋势分析

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现代预防医学 2023年第17期50卷 3090-3095+3101页

作者：李娜汪哲包云丽唐海茹马俊郑英于晓辉甘肃中医药大学第一临床医学院中国人民解放军联勤保障部队第九四〇医院基础医学实验室甘肃省干细胞与基因药物重点实验室中国人民解放军联勤保障部队第九四〇医院消化内科

目的分析中国1990—2019年消化性溃疡疾病负担及变化趋势，以完善其防治策略。方法基于2019年全球疾病负担数据库，分析中国1990—2019年消化性溃疡发病、患病、死亡、伤残调整寿命年（DALYs）及其标化率等数据，并利用Joinpoint 4.9.... 详细信息

目的分析中国1990—2019年消化性溃疡疾病负担及变化趋势，以完善其防治策略。方法基于2019年全球疾病负担数据库，分析中国1990—2019年消化性溃疡发病、患病、死亡、伤残调整寿命年（DALYs）及其标化率等数据，并利用Joinpoint 4.***.1.0软件通过Joinpoint回归模型分析相应的变化趋势。结果（1）1990—2019年中国消化性溃疡标化发病率、标化患病率、标化死亡率及标化DALYs率的AAPC值分别为-2.15(t=-30.397,P中国消化性溃疡疾病负担下降，防治效果显著，但近年来发病和患病出现升高趋势，需进一步完善防治策略。

关键词：消化性溃疡疾病负担变化趋势 Joinpoint回归分析中国

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黏蛋白阿克曼菌辅助治疗恶性肿瘤的研究进展

微生物学报 2023年第10期63卷 3746-3757页

作者：唐海茹解有成李娜王盼于晓辉甘肃中医药大学第一临床医学院甘肃兰州730000 中国人民解放军联勤保障部队第九四〇医院消化内科甘肃兰州730050 中国人民解放军联勤保障部队第九四〇医院基础医学实验室、甘肃省干细胞与基因药物重点实验室甘肃兰州730050

恶性肿瘤是威胁人类健康的全球重大公共卫生问题,多种方法联合,特别是以靶向治疗联合免疫治疗为主的治疗手段,在一定程度延缓了恶性肿瘤的发展,提高了患者的近期生存率,但这些治疗方法并不能覆盖所有患者,远期疗效仍然有限。因此,如何... 详细信息

恶性肿瘤是威胁人类健康的全球重大公共卫生问题,多种方法联合,特别是以靶向治疗联合免疫治疗为主的治疗手段,在一定程度延缓了恶性肿瘤的发展,提高了患者的近期生存率,但这些治疗方法并不能覆盖所有患者,远期疗效仍然有限。因此,如何提高患者的生存质量和远期生存率,降低死亡率,成为当前亟待解决的关键问题。近年来越来越多的研究显示肠道微生物的分布与恶性肿瘤的发生、发展密切相关,或可成为治疗恶性肿瘤的新辅助方法,特别是嗜黏蛋白阿克曼菌(Akkermansia muciniphila)的报道较多,然而,关于该菌在恶性肿瘤辅助治疗中安全性和有效性的文献报道尚不多见。因此,本文旨在通过收集近年来嗜黏蛋白阿克曼菌在恶性肿瘤方面的文献,将其研究成果和应用结果进行归纳、分析,以期为临床综合治疗提供一定的药物选择。

关键词：嗜黏蛋白阿克曼菌肠道微生物恶性肿瘤辅助治疗