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旋转细胞培养系统对老年人表皮干细胞增殖和干性维持的影响

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中国组织工程研究 2025年第13期29卷 2698-2705页

作者：张敏董溪溪黄萌王朝祥张鲁岳曹均凯解放军医学院北京市100853 中国人民解放军总医院第一医学中心北京市100853 中国人民解放军总医院第五医学中心北京市100071

背景:由于人口老龄化和老年疾病的增加,对老年人表皮干细胞的研究和利用变得越来越重要。但由于老年人表皮干细胞的增殖和干性能力较弱,限制了其在生物医学和临床研究的应用。目的:探讨旋转细胞培养系统培养的老年人表皮干细胞的增殖和... 详细信息

背景:由于人口老龄化和老年疾病的增加,对老年人表皮干细胞的研究和利用变得越来越重要。但由于老年人表皮干细胞的增殖和干性能力较弱,限制了其在生物医学和临床研究的应用。目的:探讨旋转细胞培养系统培养的老年人表皮干细胞的增殖和干性维持能力。方法:采用传统平面培养方法获取儿童(7-12岁)和老年人(60岁以上)表皮干细胞,经细胞形态学和细胞免疫荧光鉴定后,通过流式细胞术、CCK-8、细胞克隆形成实验分析儿童和老年人表皮干细胞增殖能力的差异;采用旋转细胞培养系统和3D TableTrix®微载体培养儿童和老年人表皮干细胞,通过活/死染色、细胞倍增效率、细胞倍增时间以及实时定量聚合酶链反应检测细胞增殖情况以及干性标志物的表达。结果与结论:①在平面培养条件下,儿童组表皮干细胞较老年组具有更强的增殖能力;②与平面培养相比,经旋转细胞培养系统动态培养的老年人表皮干细胞的细胞倍增效率更高(P<0.01),细胞倍增时间更短(P<0.01);③旋转细胞培养系统动态培养促使老年人表皮干细胞自组装形成基于微载体支架的三维细胞球,具有和儿童组表皮干细胞相似的增殖情况;④动态培养后的老年人表皮干细胞在干性标记物基因(ITGA6和ITGB1)、基底细胞标记物基因(K5)和分化标记物基因(K10和K1)表达上可达到和儿童组相近的表达水平。结果表明:旋转细胞培养系统动态培养不仅可以提高老年人表皮干细胞的培养效率,促进细胞增殖和自组装成三维细胞球,而且可维持老年人表皮干细胞一定的干性,未发生完全终末分化。

关键词：人表皮干细胞老年人旋转细胞培养系统微载体三维动态培养干性增殖

纤维连接蛋白对人神经干细胞诱导分化为少突胶质前体细胞的影响

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中国组织工程研究 2025年第31期29卷 6661-6666页

作者：汪兆艳王倩刘卫鹏杨辉栾佐屈素清中国人民解放军总医院第六医学中心儿科北京市100048

背景:少突胶质前体细胞是治疗脑白质损伤性疾病的种子细胞,建立高效稳定扩增的体外诱导分化方法是实现临床转化研究的重要前提。目的:探讨纤维连接蛋白对人神经干细胞来源少突胶质前体细胞增殖、迁移和分化等生物学特性的影响。方法:将... 详细信息

背景:少突胶质前体细胞是治疗脑白质损伤性疾病的种子细胞,建立高效稳定扩增的体外诱导分化方法是实现临床转化研究的重要前提。目的:探讨纤维连接蛋白对人神经干细胞来源少突胶质前体细胞增殖、迁移和分化等生物学特性的影响。方法:将悬浮培养的人神经干细胞用Accutase消化成单细胞,通过流式细胞术检测特异性标志物Nestin、Sox2、Vimentin、CD133、Musashi的表达。然后将人神经干细胞单细胞重悬于少突胶质前体细胞培养基,接种于不同质量浓度纤维连接蛋白(0,1,2.5,5,10μg/mL)包被的6孔板中,培养7 d后Accutase消化进行传代,锥虫蓝染色计数细胞,选择扩增能力最强的纤维连接蛋白包被与未用纤维连接蛋白包被的少突胶质前体细胞进行下一步实验,Transwell小室检测细胞迁移能力,流式细胞术检测Olig2、Sox10、PDGFR-α的表达。将少突胶质前体细胞向少突胶质细胞诱导分化3周,免疫荧光染色检测分化细胞Galc的表达。结果与结论:①人神经干细胞呈悬浮球状生长,流式细胞术检测结果显示,人神经干细胞高表达Nestin、Sox2、Vimentin、CD133和Musashi;②由人神经干细胞诱导的少突胶质前体细胞的胞体为圆形或椭圆形,折光性强,有双极或三级突起结构;与0μg/mL纤维连接蛋白包被组比较,2.5,5,10μg/mL纤维连接蛋白包被组少突胶质前体细胞的扩增能力显著增强(P0.05);④Transwell小室检测结果显示,与0μg/mL纤维连接蛋白包被组比较,10μg/mL纤维连接蛋白包被组少突胶质前体细胞的迁移能力增加(P0.05)。结果表明,纤维连接蛋白质量浓度为10μg/mL时对少突胶质前体细胞的增殖和迁移作用最强,但不影响少突胶质前体细胞特异性标志物Olig2、Sox10和PDGFR-α的表达及其向少突胶质细胞的分化。

关键词：纤维连接蛋白神经干细胞少突胶质前体细胞少突胶质细胞细胞增殖细胞分化工程化干细胞工程化细胞

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N-乙酰半胱氨酸治疗重症酒精性肝炎的有效性及安全性

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临床肝胆病杂志 2025年第12期40卷 2484-2491页

作者：宋芳娇徐天娇尹艺睿田华吕飒游绍莉辛绍杰朱冰中国人民解放军总医院第五医学中心肝病医学部肝病内科北京 100039 青岛市第六人民医院肝病二科山东青岛 266033

目的通过分析N-乙酰半胱氨酸（NAC）治疗重症酒精性肝炎（SAH）的有效性及安全性，为SAH的临床用药提供相关依据。方法对2015年6月—2018年6月中国人民解放军总医院第五医学中心招募的172例马德里判别函数>32分的SAH患者进行前瞻性随机... 详细信息

目的通过分析N-乙酰半胱氨酸（NAC）治疗重症酒精性肝炎（SAH）的有效性及安全性，为SAH的临床用药提供相关依据。方法对2015年6月—2018年6月中国人民解放军总医院第五医学中心招募的172例马德里判别函数>32分的SAH患者进行前瞻性随机对照研究，分为NAC组（n=84）和对照组（n=86），评价NAC（8 g/d，28 d）治疗对SAH患者的安全性、28 d生化指标的影响，以及28 d、180 d生存率的改善作用。进一步评价NAC对SAH中慢加急性肝衰竭（ACLF-SAH）患者及非ACLF患者（non-ACLF-SAH）28 d及180 d生存率的影响。符合正态分布的计量资料两组间比较采用成组t检验，不满足正态分布的计量资料两组间比较采用Mann-Whitney U检验。Kaplan-Meier法绘制生存曲线，采用Log-rank检验对生存曲线进行比较。单因素和多因素Cox比例风险回归分析独立影响因素。结果NAC治疗期间未发生相关严重不良事件，安全性良好。与对照组相比，NAC对SAH患者28 d生化指标（P值均>0.05）及生存率（P=0.081）无明显改善作用，但可提高SAH患者180 d的生存率（67.4% vs 81.0%，2=4.280，P=0.039）。NAC对ACLF-SAH患者28 d及180 d的生存率均无改善作用（P值均>0.05）；NAC对non-ACLF-SAH患者28 d生存率无改善作用（P>0.05），但可提高其180 d的生存率（68.4% vs 88.9%，2=4.883，P=0.027）。多因素Cox回归分析结果显示，是否采用NAC治疗（HR=2.530，95%CI：1.334～4.796，P=0.004）、马德里判别函数（HR=3.852，95%CI：2.032～7.304，P<0.001）、血钠水平（HR=1.948，95%CI：1.079～3.517，P=0.027）是SAH患者180 d生存率的独立影响因素。结论NAC治疗SAH具有较好的安全性，可提高SAH患者180 d的中长期生存率，且中长期生存率受益患者群体主要是non-ACLF-SAH患者。

关键词：肝炎, 酒精性乙酰半胱氨酸治疗学

可注射水凝胶包埋骨髓间充质干细胞可有效促进损伤软骨的修复

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基础医学与临床 2025年第1期45卷 44-50页

作者：刘德国陈宏张颉鸿郑宇翔刘振刚陈宣辰侯振海中国人民解放军联勤保障部队第九〇三医院骨三科浙江杭州310000

目的构建可注射水凝胶(IH)包埋骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)体系,探究其促进关节软骨修复的作用及机制。方法使用全骨髓贴壁法培养小鼠原代BM-MSCs。采用茜素红(ARS)、油红O(ORO)及阿尔新蓝(AB)染色鉴定其分化潜能;采用流式细胞测量术鉴... 详细信息

目的构建可注射水凝胶(IH)包埋骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)体系,探究其促进关节软骨修复的作用及机制。方法使用全骨髓贴壁法培养小鼠原代BM-MSCs。采用茜素红(ARS)、油红O(ORO)及阿尔新蓝(AB)染色鉴定其分化潜能;采用流式细胞测量术鉴定其表面CD44、CD90、CD105、CD34、CD45的表达。制备可注射水凝胶包埋BM-MSC(BM-MSC-IH),采用流变学测试检测BM-MSC-IH的流变性能。构建小鼠膝关节软骨全层损伤模型,采用随机数字表法将小鼠分为盐水组、BM-MSC组和BM-MSC-IH组,每组8只。采用关节注射法给药,试验组小鼠注射BM-MSC-IH 0.2 mL,BM-MSCs组注射等量细胞悬液,盐水组注射等量0.9%氯化钠溶液。分别于注射药物6周及12周后,使用番红-固绿染色观察小鼠膝关节软骨的修复情况,使用免疫组织化学染色观察小鼠膝关节Ⅱ型胶原表达情况。结果原代培养的小鼠BM-MSCs阳性表达CD44、CD90、CD105,而CD34、CD45表达呈阴性,且具有成骨、成脂、成软骨分化潜能;构建的BM-MSCs-IH体系为类固体胶体,流变性能符合水凝胶的基本特征;BM-MSC-IH可有效促进小鼠膝关节软骨再生,并增加局部Ⅱ型胶原的表达,效果较单独使用BM-MSCs更佳。结论可注射水凝胶包埋骨髓间充质干细胞可有效促进损伤软骨的修复,该作用可能是通过促进软骨细胞分化、促进Ⅱ型胶原的表达实现的。

关键词：水凝胶骨髓间充质干细胞软骨损伤修复软骨再生

人脐带间充质干细胞联合褪黑素治疗化疗致早发性卵巢功能不全的作用及机制

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中国组织工程研究 2025年第25期29卷 5281-5288页

作者：魏璐晓黄冰雪杜静石拴霞王纪田王玲中国人民解放军联勤保障部队第九四〇医院生殖医学中心甘肃省兰州市730000 甘肃中医药大学第一临床医学院甘肃省兰州市730000 中国人民解放军联勤保障部队第九四〇医院甘肃省干细胞与基因药物重点实验室甘肃省兰州市730000

背景:目前研究证明,人脐带间充质干细胞和褪黑素均可改善卵巢功能,但人脐带间充质干细胞联合褪黑素对化疗所致早发性卵巢功能不全的保护作用及机制尚未有研究报道。目的:探讨人脐带间充质干细胞联合褪黑素对化疗所致早发性卵巢功能不全... 详细信息

背景:目前研究证明,人脐带间充质干细胞和褪黑素均可改善卵巢功能,但人脐带间充质干细胞联合褪黑素对化疗所致早发性卵巢功能不全的保护作用及机制尚未有研究报道。目的:探讨人脐带间充质干细胞联合褪黑素对化疗所致早发性卵巢功能不全的保护作用及机制。方法:将动情周期正常的40只Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、人脐带间充质干细胞组、褪黑素组和人脐带间充质干细胞+褪黑素组,每组8只。除对照组外,其他组腹腔注射顺铂溶液构建早发性卵巢功能不全大鼠模型,人脐带间充质干细胞组和人脐带间充质干细胞+褪黑素组于造模后第1,6,11天分别尾静脉注射1×10^(6)个人脐带间充质干细胞,褪黑素组和人脐带间充质干细胞+褪黑素组每日腹腔注射10 mg/kg褪黑素,治疗期间监测大鼠体质量和动情周期变化。治疗14 d后,ELISA法检测血清雌二醇、卵泡刺激素、促黄体生成素、抗缪勒管激素水平,计算卵巢指数,苏木精-伊红染色观察卵巢组织学形态,透射电镜观察卵巢颗粒细胞超微结构,Western blot检测PI3K/AKT/mTOR信号通路蛋白和LC3、P62等自噬蛋白在卵巢组织中的表达。结果与结论:(1)与对照组相比,模型组大鼠体质量逐渐减轻、动情周期紊乱,卵巢指数显著下降(P<0.01);雌二醇、抗缪勒管激素水平降低(P<0.01),卵泡刺激素、促黄体生成素水平升高(P<0.01);卵巢组织学形态和卵巢颗粒细胞超微结构严重破坏;p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR和P62蛋白表达显著降低(P<0.01),LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达显著升高(P<0.001)。(2)与模型组相比,各治疗组大鼠体质量逐渐恢复,部分大鼠动情周期恢复正常,卵巢指数显著升高(P<0.01);雌二醇、抗缪勒管激素水平升高(P<0.05),卵泡刺激素、促黄体生成素水平降低(P<0.05);卵巢组织学形态和卵巢颗粒细胞超微结构显著改善;p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR和P62蛋白表达显著升高(P<0.001),LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达显著降低(P<0.01)。其中人脐带间充质干细胞+褪黑素组上述指标改善更为显著。结果表明,人脐带间充质干细胞联合褪黑素可能通过上调PI3K/AKT/mTOR信号通路,抑制卵巢颗粒细胞自噬来治疗早发性卵巢功能不全。

关键词：早发性卵巢功能不全人脐带间充质干细胞褪黑素雌激素自噬 PI3K AKT mTOR

芬吗通治疗人工流产不全的疗效及对月经复潮时间和子宫内膜厚度的影响

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临床合理用药 2025年第1期 126-128+132页

作者：郭淑蓉吴双漳州第三医院妇产科中国人民解放军联勤保障部队第九一〇医院检验科

目的观察芬吗通治疗人工流产不全的疗效及对月经复潮时间和子宫内膜厚度的影响。方法选取2018年1月—2022年12月漳州第三医院和中国人民解放军联勤保障部队第九一〇医院收治的人工流产不全患者80例作为研究对象，应用随机数字表法分... 详细信息

目的观察芬吗通治疗人工流产不全的疗效及对月经复潮时间和子宫内膜厚度的影响。方法选取2018年1月—2022年12月漳州第三医院和中国人民解放军联勤保障部队第九一〇医院收治的人工流产不全患者80例作为研究对象，应用随机数字表法分为联合组和单药组，每组40例。单药组接受益母草治疗，联合组在单药组基础上接受芬吗通治疗，2组均治疗4周。比较2组治疗效果、阴道持续出血时间、7 d内平均出血量、月经首次复潮时间、首次来潮量，治疗前后子宫内膜厚度、性激素[卵泡刺激素（FSH）、雌二醇（E2）、黄体生成素（LH）]、缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、妊娠相关血浆蛋白-A（PAPP-A）、血管生成因子[血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）]、子宫内膜微血管密度（MVD）及并发症。结果联合组治疗总有效率为97.50%,高于单药组的77.50%（χ2=5.600,P=0.018）;联合组阴道持续出血时间、月经首次复潮时间短于单药组，7 d内平均出血量少于单药组，首次来潮量多于单药组（P<0.01）。治疗4周后，2组子宫内膜厚度均较治疗前增厚，且联合组增厚幅度大于单药组（P<0.01）;2组FSH、E2、VEGF、bFGF水平及MVD较治疗前升高，LH、HIF-1α、PAPP-A水平较治疗前降低，且联合组升高/降低幅度大于单药组（P<0.05或P<0.01）。联合组并发症总发生率为7.50%,与单药组的10.00%比较差异无统计学意义（P=1.000）。结论人工流产不全患者接受芬吗通治疗的效果好，能调控机体HIF-1α、PAPP-A,改善月经状态，促进子宫内膜修复，且安全性高。

关键词：人工流产不全芬吗通月经复潮时间子宫内膜厚度性激素并发症

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基于影像学的心脏周围脂肪组织的研究进展

临床放射学杂志 2025年第1期44卷 175-178页

作者：吴静萍孟晓(综述) 张帆(审校) 中国人民解放军总医院海南医院放射诊断科三亚572013 南方医科大学第二临床医学院广州510515 三亚学院三亚572000

心血管疾病(CVD)在城乡居民死亡原因中居于首位且发病率逐年上升[1]。近年来随着对心脏周围脂肪组织的不断深入了解,其旁分泌及内分泌功能在CVD中的作用逐渐被熟知。其中,心外膜脂肪组织(EAT)、血管周围脂肪组织(PVAT)和心血管系统的双... 详细信息

心血管疾病(CVD)在城乡居民死亡原因中居于首位且发病率逐年上升[1]。近年来随着对心脏周围脂肪组织的不断深入了解,其旁分泌及内分泌功能在CVD中的作用逐渐被熟知。其中,心外膜脂肪组织(EAT)、血管周围脂肪组织(PVAT)和心血管系统的双向通讯作用与CVD的发生发展密切相关。文献报道可以通过影像学手段包括超声、CT、MRI和PET等手段对其中的病理生理改变进行无创检测及评估。近年来更有应用影像组学技术捕捉心脏周围脂肪的形态、纹理等微观特征,这在CVD的诊断及预测中起重要作用。

关键词：周围脂肪组织居民死亡原因心外膜脂肪组织影像组学心血管系统双向通讯无创检测内分泌功能

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羊胫骨慢性骨髓炎模型的构建及评价

中国组织工程研究 2025年第14期29卷 2937-2942页

作者：田冬子沈伟伟李文帅石杰邓晓文赵峥嵘刘登科刘涛涛蔡茂林高秋明甘肃中医药大学第一临床医学院甘肃省兰州市730000 中国人民解放军联勤保障部队第九四〇医院骨科中心甘肃省兰州市730050

背景:高原环境会影响骨髓炎患者的免疫功能和代谢状态,导致疾病进程的加速或复杂化。构建有效稳定的慢性骨髓炎动物模型对于慢性骨髓炎的实验研究至关重要。目的:在高原地区建立一种基于羊的慢性骨髓炎模型,以供毒性评估和治疗性研究。... 详细信息

背景:高原环境会影响骨髓炎患者的免疫功能和代谢状态,导致疾病进程的加速或复杂化。构建有效稳定的慢性骨髓炎动物模型对于慢性骨髓炎的实验研究至关重要。目的:在高原地区建立一种基于羊的慢性骨髓炎模型,以供毒性评估和治疗性研究。方法:15只健康绵羊,将鱼肝油酸钠和金黄色葡萄球菌悬液注射至左侧胫骨中段髓腔内建立慢性骨髓炎模型,采用大体观察、体质量及体温监测、血液感染指标检测、影像学评分及微生物培养等方法进行评估与分析。结果与结论:①造模后所有绵羊在早期均可观察到局部组织肿胀和病腿跛行症状,伴有不同程度的食欲减退现象;造模1周后绵羊体质量出现轻微下降,体温未见明显变化。②造模4 d后红细胞沉降率明显加快(P放射学表现,溶骨性病灶的边界模糊不清且形态不规则,呈现出一种低密度透亮区域,其中夹杂着密度增高且分布不均的坏死骨块影像,病变区域皮质骨部分出现了不同程度的骨膜反应现象。④13只绵羊培养出单一金黄色葡萄球菌,另2只绵羊培养出金黄色葡萄球菌和大肠杆菌。提示通过向绵羊胫骨骨髓腔内注入适量的金黄色葡萄球菌菌液,并结合局部植入异物棉线与鱼肝油酸钠,可在高原地区成功构建一种可靠的绵羊胫骨慢性骨髓炎动物模型。

关键词：慢性骨髓炎金黄色葡萄球菌羊高原动物模型

基于中医证候与精液质量相关参数构建精子DNA碎片预测模型与验证

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中国组织工程研究 2025年第13期29卷 2661-2668页

作者：周超庾广聿阳绍华高磊磊金珍蒋月园李欢广西壮族自治区南溪山医院生殖中心广西壮族自治区桂林市541000 浙江省人民医院生殖中心浙江省杭州市310000 中国人民解放军联勤保障部队第九二四医院检验科广西壮族自治区桂林市54100

背景:中医证候与精液质量相关参数相结合,共同预测精子DNA碎片指数(DNA fragmentation index,DFI)异常增高的发生并绘制列线图,能显著提高临床的实操性与应用效能,为临床全面评估精液质量,采取积极干预措施以改善临床结局及制定个体化... 详细信息

背景:中医证候与精液质量相关参数相结合,共同预测精子DNA碎片指数(DNA fragmentation index,DFI)异常增高的发生并绘制列线图,能显著提高临床的实操性与应用效能,为临床全面评估精液质量,采取积极干预措施以改善临床结局及制定个体化医疗方案提供依据。目的:探讨基于中医证候与精液质量相关参数构建精子DNA碎片的预测模型与验证。方法:回顾性分析2019年7月至2021年7月在广西壮族自治区南溪山医院中医男科接受中医证候诊断及精子DNA碎片率检查的不育患者共420例,据《人类精液检查与处理实验室手册》(第6版),将其中137例精子DFI>30%患者纳入精子DFI异常增高组,将283例精子DFI≤30%作为对照组;首先采用单因素分析筛选精子DFI异常增高的影响因素,然后采用套索算法(LASSO)校正因子共线性问题并筛选出最佳匹配因子后,将其纳入多因素向前逐步Logistic回归找出其独立影响因素并绘制列线图,最后采用受试者工作曲线、校准曲线、临床决策曲线、临床影响曲线对该预测模型进行区分度与准确度及临床应用效能验证。结果与结论:①单因素分析结果显示,年龄、体质量指数、前向运动率、精子总活率、精子浓度、精子形态学、肾阳虚衰证、湿热下注证、肾精不足证为引发精子DFI异常增高的影响因子(P0.05,表明该模型预测发生精子DFI异常增高的概率与实际发生精子DFI异常增高的概率无显著统计学差异,证实该模型具有较好的准确度;⑥临床决策曲线与临床影响曲线显示,模型组与验证组分别在阈概率值为0.08-0.84与0.09-0.78时具有临床最大净获益,且在该阈概率范围内具有较好的临床应用效能;⑦结果表明,年龄、体质量指数、精子浓度、精子总活率、湿热下注证、肾阳虚衰证为引发精子DFI异常增高的独立影响因素,通过其构建的临床预测模型列线图具有较好的临床预测价值与临床应用效能,可为临床全面评估精液质量、预后与干预及个体化医疗服务提供依据。

关键词：精子DNA碎片精子DNA完整性中医证候精子DNA碎片指数预测模型