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IGF2BP3基因表达水平在急性髓系白血病患者中的预后价值

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中国实验血液学杂志 2024年第2期32卷 355-364页

作者：乐凝杨晶晶刘宇辰张夏玮王昊温亚男焦一帆王莉莉窦立萍解放军医学院中国人民解放军总医院第五医学中心血液病医学部北京100853

目的:探寻IGF2BP3基因表达水平与急性髓系白血病(AML)患者预后的关系。方法:通过对本中心27例AML患者骨髓原代白血病细胞进行转录组高通量测序,分析IGF2BP3基因表达水平与患者临床特征之间的关系,并在初治AML患者及难治AML(Refractory A... 详细信息

目的:探寻IGF2BP3基因表达水平与急性髓系白血病(AML)患者预后的关系。方法:通过对本中心27例AML患者骨髓原代白血病细胞进行转录组高通量测序,分析IGF2BP3基因表达水平与患者临床特征之间的关系,并在初治AML患者及难治AML(Refractory AML)患者样本中验证。分析20例健康对照者和26例AML患者中IGF2BP3基因表达水平的差异。采用RT-qPCR、Western blot检测两种蒽环类耐药细胞系(HL60/ADR、K562/ADR)中IGF2BP3表达水平,比较其与敏感细胞(HL60、K562)的表达差异。通过3个数据集,分析IGF2BP3在AML患者中的表达水平及与预后的关系,进一步使用Cox生存分析IGF2BP3在AML中的预后价值。结果:在本中心27例AML患者骨髓原代白血病细胞中,难治性AML患者的IGF2BP3表达量明显高于化疗敏感的患者(P=0.0343),白血病细胞髓外浸润(extramedullary infiltration,EMI)患者的IGF2BP3表达量明显高于无髓外浸润的AML患者(P=0.0049)。与健康人比较,IGF2BP3在AML患者中表达增加(P=0.0009)。蒽环类耐药细胞系(HL60/ADR、K562/ADR)中IGF2BP3 mRNA的表达显著高于敏感细胞系(K562/ADR vs K562,P=0.0430;HL60/ADR vs HL60,P=0.7369)。Western blot结果显示,耐药细胞中IGF2BP3蛋白表达显著高于敏感细胞(P<0.001)。qPCR结果显示,难治AML患者中IGF2BP3的mRNA表达水平明显高于化疗敏感患者(P=0.002)。在3个大样本AML患者队列中IGF2BP3高表达预示AML预后不良(P<0.05)。单因素和多因素预后分析证实IGF2BP3高表达与患者较短的无事件生存(HR=1.887,P=0.024)和总体生存(HR=1.619,P=0.016)显著相关。结论:IGF2BP3基因高表达可能是AML预后不良的重要因素,提示IGF2BP3基因有望成为AML的临床预后评估和提供治疗策略的新的分子标志物。

关键词：急性髓系白血病 IGF2BP3 预后

维奈克拉联合CACAG方案治疗难治/复发急性髓系白血病的前瞻性临床研究

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中国实验血液学杂志 2024年第1期32卷 90-95页

作者：高文静杨晶晶李猛温亚男焦一帆乐凝刘宇辰王楠黄赛窦立萍解放军医学院中国人民解放军总医院第五医学中心血液病医学部北京100853

目的:探讨维奈克拉联合CACAG方案治疗难治/复发急性髓系白血病(R/R AML)的有效性和安全性。方法:本研究为前瞻性单臂临床研究,入组患者均符合R/R AML诊断标准。采用阿扎胞苷(75 mg/m^(2),d 1-7)、阿糖胞苷(75-100 mg/m^(2),q12h,d 1-5)... 详细信息

目的:探讨维奈克拉联合CACAG方案治疗难治/复发急性髓系白血病(R/R AML)的有效性和安全性。方法:本研究为前瞻性单臂临床研究,入组患者均符合R/R AML诊断标准。采用阿扎胞苷(75 mg/m^(2),d 1-7)、阿糖胞苷(75-100 mg/m^(2),q12h,d 1-5)、阿柔比星(20 mg,d 1、3和5)、西达本胺(30 mg,d 1和4)、维奈克拉(100 mg d 1,200 mg d 2,400 mg d 3-14,与唑类药物联用,减量为100 mg/d)、重组人粒细胞集落刺激因子(300μg/d,直至中性粒细胞恢复)的治疗方案,主要研究终点为1疗程后总反应率。结果:自2022年1月至2023年4月共入组19例患者,1个疗程后总反应率为81.3%(13/16),完全缓解率为68.8%(11/16),部分缓解率为12.5%(2/16),在11例获得完全缓解(CR/CRi)的患者中,达CRm 8例,未达CRm 3例。截至2023年3月27日,中位随访时间为111(19-406)d。6个月的总生存率和无进展生存率均为55.7%;1年的总生存率和无进展生存率分别为46.4%和47.7%。此外,相比于未达CRm组,CRm组患者具有较高的PFS(377 vs 111 d,P=0.046)。治疗相关不良反应主要是3-4级骨髓抑制,并发不同程度的感染(n=12)、低钾血症(n=12)、低钙血症(n=10)和肝酶升高(n=8)等,其中3-4级占比为47.4%(9/19)。结论:维奈克拉联合CACAG方案是R/R AML患者有效的挽救性治疗方案,缓解率高且安全性良好。

关键词：维奈克拉联合CACAG方案急性髓系白血病难治复发前瞻性研究

MeRIP-qPCR技术检测RNA m^(6)A甲基化修饰对t(8;21)AML细胞中KDM4B基因表达的调控作用

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中国实验血液学杂志 2024年第2期32卷 382-388页

作者：李雨晴邵杨柳李梦月王莉莉高晓宁中国人民解放军总医院第五医学中心血液病医学部北京100071 解放军医学院北京100853

目的:通过MeRIP联合逆转录实时定量PCR(RT-qPCR)技术,证明WTAP介导的RNA m^(6)A修饰对伴t(8;21)急性髓系白血病(AML)细胞中KDM4B基因的直接调控作用。方法:采用靶向WTAP或KDM4B基因的短发夹RNA(small hairpin RNA,shRNA)慢病毒载体沉默t(8;21)AML细胞系Kasumi-1和SKNO-1中WTAP或KDM4B基因表达,以转染随机打乱序列(scramble)的shRNA的细胞为对照。用超纯RNA提取试剂盒(DNaseⅠ)提取细胞RNA,Magna MeRIP^(TM)m^(6)A Kit试剂盒富集甲基化修饰片段,并通过RT-qPCR检测m^(6)A甲基化修饰的RNA区域;采用蛋白免疫印迹实验(Western blot)和逆转录实时定量PCR(RT-qPCR)技术检测细胞中WTAP、KDM4B蛋白和mRNA的表达水平。采用克隆形成实验检测细胞体外克隆形成能力。结果:沉默Kasumi-1细胞中WTAP的表达后,m^(6)A甲基化修饰在KDM4B mRNA 3’UTR的富集程度显著下降(P<0.01),沉默Kasumi-1和SKNO-1细胞中WTAP的表达可显著抑制KDM4B蛋白(P<0.001)和mRNA表达水平(Kasumi-1:P<0.001;SKNO-1:P<0.01)、细胞体外克隆形成能力下降(Kasumi-1:P<0.001;SKNO-1:P<0.01)。结论:t(8;21)AML细胞系中,WTAP通过调控KDM4B基因mRNA 3’UTR的m^(6)A修饰调控KDM4B的表达,沉默KDM4B表达可以抑制t(8;21)AML细胞增殖。

关键词： MeRIP-qPCR 急性髓系白血病 t(8 21)染色体易位 KDM4B RNA m^(6)A甲基化修饰

表面增强拉曼光谱与机器学习的组学技术在常染色体显性多囊肾病进展性评估中的应用

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表面增强拉曼光谱与机器学习的组学技术在常染色体显性多囊肾病进...

作者：崔方正中国人民解放军海军军医大学

学位级别：硕士

目的:本研究基于表面增强拉曼光谱（SERS）这一高度灵敏的技术,通过该技术对正常人群和常染色体显性多囊肾病（ADPKD）患者尿液样本进行检测,对比正常人群和ADPKD患者以及快速进展型ADPKD患者和缓慢进展型ADPKD患者的拉曼光谱图,筛选出... 详细信息

目的:本研究基于表面增强拉曼光谱（SERS）这一高度灵敏的技术,通过该技术对正常人群和常染色体显性多囊肾病（ADPKD）患者尿液样本进行检测,对比正常人群和ADPKD患者以及快速进展型ADPKD患者和缓慢进展型ADPKD患者的拉曼光谱图,筛选出与ADPKD发病以及疾病进展相关的拉曼峰并确定各拉曼峰对应拉曼强度所指代的分子振动模式和物质归属。在拉曼光谱数据的基础上,采用主成分分析（PCA）、支持向量机（SVM）机器学习算法挑选出最具信息量和预测力的特征,建立本研究中ADPKD患者的疾病进展性预测模型。最后,通过留一交叉验证（LOOCV）来验证预测模型,评估不同特征子集的泛化能力,提高预测模型的稳定性,从而为ADPKD患者疾病的进展性评估提供一种新型、快速、简单、可靠、无创的方法。方法:1.样本收集:本研究选取了2023年3月至2023年10月上海长征医院健康体检中心体检人员和长征医院肾脏病科符合1型梅奥分型（典型）ADPKD患者的尿液样本,取中段尿约5-10ml,至普通尿管保存,并在6h内送上海理工大学能源与动力工程学院实验室进行检测。2.样本检测并生成拉曼光谱:采用上海理工大学能源与动力工程学院研制的表面增强拉曼光谱仪对尿液样本进行检测。将1ml尿液与2ml商用银胶体纳米颗粒（南京先锋纳米材料科技有限公司）混合。纳米银的浓度为0.1 mg/ml。然后将混合物倒入比色皿进行进一步研究。激光光源设定为功率50m W的785nm的二极管激光器。入射光依次通过二极管激光器前的准直器和带通滤波器,然后聚焦在比色皿上。与入射光在90°方向上的散射光经过透镜组和边缘滤波器滤光,消除瑞利散射,通过光谱仪（IHR 320）传输,然后由CCD探测器（Horiba-Syncerity）接收。利用1200沟槽/mm光栅采集了460 cm-1～960 cm-1和1060 cm-1～1660 cm-1的光谱区域,采集时间为20秒,累积两次,光谱分辨率为0.8 cm-1。拉曼光谱仪每天用无水乙醇校准两次。每个样品测试5次,每个样品采集的光谱使用Origin Pro,Version 2019（Origin Lab Corporation,Northampton,MA,USA）进行矢量归一化处理,每个样品检测5次,取平均数据最为样品最终代表光谱。最后,采用四阶多项式拟合消除荧光背景和噪声。3.拉曼光谱图分析:根据身高校正的肾脏总体积（Ht TKV）和年龄估算的Ht TKV年增长率（Ht TKV-α）,将本研究的ADPKD患者分为快速进展型和缓慢进展型两组。分别对比正常人群和ADPKD患者以及快速进展型ADPKD患者和缓慢进展型ADPKD患者的拉曼光谱图,采用Shapiro Wilk和Kolmogorov-Smirnov检验来验证数据的正态分布,使用参数（t检验）或非参数（Wilcoxon检验）检验来比较组间的平均值,统计学显著性定义为P病状态、性别、年龄以及肾功能情况对上述各拉曼峰的影响。最后,根据既往文献报道确定上述拉曼峰对应拉曼强度下的分子振动模式和物质归属。4.建立疾病分类和进展性预测模型:在上述两组拉曼光谱数据的基础上,采用PCA将光谱数据集复杂程度降低,选取其中可涵盖数据集大部分信息的前12-20个主成分作为数据集,建立PCA-SVM分类模型。通过ROC曲线优化SVM阈值,并将该值用于分类模型预测中,得到最优模型的灵敏度、特异度、准确度和F1值。最后,对上述模型进行留一交叉验证,评估不同特征子集的稳定性和泛化能力。结果:1.通过SERS检测正常人群和ADPKD患者的尿液,对比二组拉曼光谱图发现正常人群和ADPKD患者在14个拉曼峰（483/520/542/604/673/715/794/820/888/928/1185/1278/1385/1414 cm-1）的拉曼强度存在差异。对以上14个主要拉曼峰进行正态分布检验和差异性分析,结果显示:正常人群与ADPKD患者在12个主要拉曼峰（483/520/604/673/715/794/820/888/928/1185/1385/1414 cm-1）的拉曼强度存在差异（P<0.05）。广义线性模型分析显示该12个主要拉曼峰的拉曼强度均与年龄和性别无关。最后我们通过查找文献中拉曼光谱强度谱找到以上12个主要拉曼峰对应的物质归属,包括多糖和糖原、磷脂酰肌醇、甘油、胞嘧啶、尿嘧啶、腺嘌呤、I型胶原、脯氨酸、缬氨酸、脂质、磷酸盐等。2.采用PCA将正常人群和ADPKD患者尿液光谱数据复杂度降低至171个主成分,采用前15个PC（包含原数据的97.47%信息）作为训练数据,建立PCA-SVM分类模型。通过ROC曲线,

关键词：常染色体显性多囊肾病表面增强拉曼光谱疾病分型预测模型

烟酰胺单核苷酸的功能及其抗衰老作用的研究进展（英文）

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Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology) 2024年第9期 723-736页

作者：王敏曹媛李云王陆刘育妍邓子辉朱连荣康红军中国人民解放军医学院中国人民解放军总医院第一医学中心重症医学科河北医科大学第二附属医院急诊科中国人民解放军医学院生化教研室中国人民解放军总医院第一医学中心临床营养科中国人民解放军总医院第一医学中心肾脏病科中国人民解放军肾脏病研究所肾脏疾病国家重点实验室国家肾脏疾病临床医学研究中心肾脏疾病研究北京市重点实验室

老龄化和年龄相关疾病已成为全球当代社会面临的重大挑战和沉重负担。解决这些问题是一项势在必行的任务，其目的是延缓衰老过程，并找到与年龄有关的退行性疾病的有效治疗方法。最近的研究强调了烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）在抗衰老... 详细信息

老龄化和年龄相关疾病已成为全球当代社会面临的重大挑战和沉重负担。解决这些问题是一项势在必行的任务，其目的是延缓衰老过程，并找到与年龄有关的退行性疾病的有效治疗方法。最近的研究强调了烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）在抗衰老领域的重要作用。经验证明，补充烟酰胺单核苷酸（NMN）可以提高体内NAD+水平，从而改善某些与年龄相关的退行性疾病。NMN的抗衰老机制主要在于其对细胞能量代谢的影响、对细胞凋亡的抑制、对免疫功能的调节和对基因组稳定性的保持，这些共同延缓了衰老进程。本文对NMN抗衰老机制的现有研究进行了批判性的回顾和评价，阐明了当前研究的内在局限性，并提出了抗衰老研究的新途径。

关键词：烟酰胺单核苷酸(NMN) 抗衰老能量代谢细胞凋亡 DNA修复

CD8^(+)CD28^(-)T细胞对单倍型造血干细胞移植后急性移植物抗宿主病的影响

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中国实验血液学杂志 2024年第3期32卷 896-905页

作者：张安迪魏筱萱郭佳媛金香淑张琳琳李菲谷振阳薄剑窦立萍刘代红李猛高春记解放军医学院北京100853 中国人民解放军总医院第五医学中心血液病医学部北京100071 南开大学天津300071

目的:探讨CD8^(+)CD28^(-)T细胞对单倍型造血干细胞移植(haplo-HSCT)后急性移植物抗宿主病(aGVHD)的影响。方法:回顾性分析60例行haplo-HSCT的血液病患者移植后CD8^(+)CD28^(-)T细胞绝对计数与aGVHD的关系,并比较不同CD8^(+)CD28^(-)T细胞绝对计数组间慢性移植物抗宿主病(cGVHD)、感染及预后的差异。结果:60例行haplo-HSCT患者中有40例发生aGVHD,发生率为66.67%,中位发生时间为32.5(20-100)天。Haplo-HSCT后30天,aGVHD组CD8^(+)CD28^(-)T细胞绝对计数显著低于无aGVHD组(P=0.03)。ROC曲线表明移植后30天CD8^(+)CD28^(-)T细胞绝对计数在一定程度上可预测aGVHD的易感性。移植后30天低细胞计数组(CD8^(+)CD28^(-)T细胞绝对计数病毒感染、巨细胞病毒感染的发生无统计学差异。不同CD8^(+)CD28^(-)T细胞绝对计数组的总生存率、非复发相关死亡率、复发率没有显示出明显的统计学差异。结论:行haplo-HSCT后30天CD8^(+)CD28^(-)T细胞延迟重建的患者更易发生aGVHD,并且CD8^(+)CD28^(-)T细胞绝对计数在一定程度上可预测其易感性。单倍型造血干细胞移植后CD8^(+)CD28^(-)T细胞绝对计数与cGVHD、真菌感染、EB病毒感染、巨细胞病毒感染无关,且与移植后的生存预后无显著相关。

关键词： CD8^(+)CD28^(-)T细胞单倍型造血干细胞移植急性移植物抗宿主病

多巴酚丁胺可增强奎扎替尼对FLT3-ITD突变型急性髓系白血病的靶向抑制作用

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中国实验血液学杂志 2024年第4期32卷 1071-1077页

作者：高宇昂张倩钰李欣王绅宇李芨慧薛阳李长燕宁红梅解放军医学院研究生院中国人民解放军总医院第五医学中心血液病医学部北京100071 安徽医科大学解放军总医院第五医学临床学院合肥230032 中国人民解放军总医院第八医学中心超声科北京100091 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院辐射医学研究所北京100850

目的:观察多巴酚丁胺对人FLT3-ITD突变型急性髓系白血病(AML)细胞的增殖抑制作用,探讨多巴酚丁胺单药或者联合奎扎替尼治疗该型AML的可行性。方法:体外培养FLT3-ITD突变AML细胞系MOLM13及MV4-11,实验分为对照组、多巴酚丁胺处理组、奎... 详细信息

目的:观察多巴酚丁胺对人FLT3-ITD突变型急性髓系白血病(AML)细胞的增殖抑制作用,探讨多巴酚丁胺单药或者联合奎扎替尼治疗该型AML的可行性。方法:体外培养FLT3-ITD突变AML细胞系MOLM13及MV4-11,实验分为对照组、多巴酚丁胺处理组、奎扎替尼处理组、多巴酚丁胺联合奎扎替尼处理组,采用CCK-8法、流式细胞术分别检测各组细胞活性、细胞凋亡率及ROS水平,并通过Western blot检测YAP1蛋白的表达。结果:多巴酚丁胺和奎扎替尼均可抑制FLT3-ITD突变型AML细胞系MOLM13、MV4-11的增殖。与对照组相比,多巴酚丁胺组FLT3-ITD突变AML细胞的ROS水平显著上升(P病的靶向抑制作用。其机制可能是通过抑制该型AML细胞YAP1蛋白的表达,提高ROS水平从而发挥其抗肿瘤作用。

关键词：急性髓系白血病 fms样酪氨酸激酶3 多巴酚丁胺 YAP1

伴GATA2基因突变的急性髓系白血病患者的临床特征及预后分析

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中国实验血液学杂志 2024年第2期32卷 327-334页

作者：单若琪黄赛谷振阳王楠刘代红窦立萍南开大学医学院天津300071 中国人民解放军总医院第五医学中心血液科北京100071 解放军医学院北京100853

目的:探讨伴有GATA2基因突变的急性髓系白血病(AML)患者的临床特征、共存突变基因及其对预后的影响。方法:回顾性分析2008年1月至2021年1月就诊于解放军总医院第一医学中心血液科的370例初诊AML患者的临床资料,应用二代基因测序技术检... 详细信息

目的:探讨伴有GATA2基因突变的急性髓系白血病(AML)患者的临床特征、共存突变基因及其对预后的影响。方法:回顾性分析2008年1月至2021年1月就诊于解放军总医院第一医学中心血液科的370例初诊AML患者的临床资料,应用二代基因测序技术检测其突变基因,分析AML中GATA2突变患者的临床特征、GATA2突变的共变基因及GATA2突变对预后的影响。结果:370例AML患者中,共23例(6.2%)患者检测到GATA2突变。与GATA2未突变组相比,GATA2突变组患者多属于正常核型(P=0.037)且多处于低危细胞遗传学分层(P=0.028),CEBPAdm、NRAS在GATA2突变组的发生率显著高于GATA2未突变组(P=0.010,P=0.009),两组在性别、年龄、白细胞数、血小板数、血红蛋白、原始细胞数、诱导方案、CR率方面的差异均无统计学意义(P>0.05)。23例伴有GATA2突变的患者中主要共存基因突变依次为CEBPAdm、NRAS(均为39.1%),NPM1、FLT3、TET2、WT1(均为17.4%),ASXL1、IDH1(均为13.0%)。生存分析结果显示,在整个队列中,伴GATA2突变组患者与不伴GATA2突变组患者5年总生存(OS)及无白血病生存(LFS)率无统计学差异(P=0.306,P=0.308);在306例不伴CEBPAdm的患者中,GATA2突变组患者较GATA2未突变组患者5年OS率及LFS率均有提高趋势,但差异未达统计学意义(P2=0.092,P=0.056);而在64例伴CEBPAdm的患者中,GATA2突变组患者与GATA未突变组患者5年OS率无统计学差异(P=0.104),但GATA2突变组患者5年LFS率显著降低(P=0.047)。23例GATA2突变患者中,16例接受“3+7”诱导方案,其中12例接受异基因造血干细胞移植;7例接受“PDCAG”诱导方案,其中3例接受移植。“3+7”方案组与“DCAG”方案组相比,CR率无统计学差异(=1.000)。移植组较化疗组5年OS率及LFS率显著提高(P=0.021,P=0.020)。结论:GATA2突变显著多见于核型正常及低危细胞遗传学分层的m AML患者,与CEBPAdm、NRAS共突变显著相关。GATA2对预后的意义受CEBPAd共突变影响。GATA2突变患者诱导方案选择“3+7”方案或“DCAG”方案不影响其CR率,而选择异基因造血干细胞移植相较于化疗能显著改善预后。

关键词：急性髓系白血病 GATA2基因突变 CEBPAdm 造血干细胞移植预后

基于环介导等温扩增微流控芯片技术快速检测蚊媒携带登革病毒方法的建立

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2024年第2期42卷 234-241页

作者：姜宁白洁李平单文琪周秋明董昊炜袁浩陶峰李翔宇马雅军彭恒上海理工大学健康科学与工程学院上海200093 中国人民解放军海军军医大学基础医学院病原生物学教研室上海200433 海口市疾病预防控制中心海南海口571100 中国人民解放军海军军医大学海医系上海200433

目的建立一种基于环介导等温扩增(LAMP)微流控芯片技术的快速检测蚊媒携带登革病毒的方法。方法根据登革病毒衣壳蛋白(C)、前膜蛋白(prM)和非结构蛋白2A(NS2A)基因片段构建pUC-GWAmp-CprM和pUC-GW-Amp-NS2A质粒,设计多组环介导等温扩增... 详细信息

目的建立一种基于环介导等温扩增(LAMP)微流控芯片技术的快速检测蚊媒携带登革病毒的方法。方法根据登革病毒衣壳蛋白(C)、前膜蛋白(prM)和非结构蛋白2A(NS2A)基因片段构建pUC-GWAmp-CprM和pUC-GW-Amp-NS2A质粒,设计多组环介导等温扩增特异性引物组。制备LAMP微流控芯片,以靶基因质粒、登革病毒核酸为模板进行检测,根据起峰时间、相对荧光单位、假阳性、重复实验稳定性、检测灵敏度等指标筛选最优引物组。用最优引物组分别检测埃及伊蚊、白纹伊蚊等主要登革热传播媒介和常见的致倦库蚊、中华按蚊、摇蚊的cDNA,并与寨卡病毒、流行性乙型脑炎病毒、恶性疟原虫、黄热病毒等常见蚊媒传播病原体进行交叉检测,评价LAMP法的特异性。评价LAMP法检测CprM和NS2A靶基因质粒的灵敏度,分别与PCR、实时荧光定量PCR(qPCR)检测结果进行比较。用登革病毒RNA与传播媒介埃及伊蚊、白纹伊蚊RNA分别以1∶10、1∶100和1∶1000混合,模拟媒介携带登革病毒的样品进行LAMP微流控芯片检测。对采集自宁德市三都岛、西安市、上海朱家角、长兴岛和五角场等5地的白纹伊蚊的cDNA进行检测。结果引物组筛选结果显示,CprMG2和NS2AG1引物组起峰时间早,相对荧光单位高,灵敏度最高,为最优引物组。CprMG2引物组可检测浓度低至10-6 ng/μl的pUC-GW-Amp-CprM质粒,最低检测限为1.3×10^(3)拷贝;NS2AG1引物组可检测浓度低至10-9 ng/μl的pUC-GW-Amp-NS2A质粒,最低检测限为1拷贝。最优引物组CprMG2、NS2AG1对埃及伊蚊、白纹伊蚊、中华按蚊、致倦库蚊、摇蚊等蚊虫cDNA无非特异性扩增,与寨卡病毒、流行性乙型脑炎病毒、恶性疟原虫、黄热病毒核酸无交叉反应。LAMP微流控芯片检测CprM靶基因的最低检测限为1.3×10^(3)拷贝,较PCR检测的最低检测限(1.3×10^(4)拷贝)高1个数量级;LAMP微流控芯片检测CprM和NS2A靶基因的最低检测限分别为1.3×10^(3)拷贝、1拷贝,与qPCR检测的最低检测限(1.3×10^(3)拷贝、1拷贝)相当。LAMP微流控芯片检测模拟现场样品的结果显示,CprMG2可检出与埃及伊蚊、白纹伊蚊RNA 1∶10、1∶100和1∶1000混合的登革病毒RNA,NS2AG1最低可检出1∶100混合的登革病毒,特异性均为100%。LAMP微流控芯片检测5地现场采集白纹伊蚊的结果均为阴性。结论建立了基于LAMP微流控芯片检测登革病毒的方法,该法敏感性和特异性高,检测时间短,可用于现场蚊媒携带登革病毒的检测。

关键词：登革病毒蚊虫环介导等温扩增微流控芯片现场检测技术