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鸡减蛋综合征病毒(Egg Drop Syndrome Virus,EDSV)巯基内肽酶的基因序列分析

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病毒学报 1997年第2期13卷 176-179页

作者：曾力宇金奇朱雷章金钢殷震侯云德中国预防医学科学院病毒基因工程国家重点实验室中国人民解放军农牧大学军事兽医研究所

鸡减蛋综合征病毒（ＥｇｇＤｒｏｐＳｙｎｄｒｏｍｅＶｉｒｕｓ，ＥＤＳＶ）巯基内肽酶的基因序列分析曾力宇１金奇１朱雷１章金钢２殷震２侯云德１关键词鸡减蛋综合征病毒（ＥＤＳＶ），巯基内肽酶（Ｔｈｉｏｌ－ｅｎｄｏｐｅｐｔｉｄ... 详细信息

鸡减蛋综合征病毒（ＥｇｇＤｒｏｐＳｙｎｄｒｏｍｅＶｉｒｕｓ，ＥＤＳＶ）巯基内肽酶的基因序列分析曾力宇１金奇１朱雷１章金钢２殷震２侯云德１关键词鸡减蛋综合征病毒（ＥＤＳＶ），巯基内肽酶（Ｔｈｉｏｌ－ｅｎｄｏｐｅｐｔｉｄａｓｅ），核苷酸序列分析ＥＤＳ病毒...

关键词：鸡病毒鸡减蛋综合征病毒巯基内肽酶基因序列

两种跨膜蛋白携带myc于细胞表面的能力比较

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生物工程学报 2008年第11期24卷 1888-1894页

作者：刘庆军韩化敏张兆山高斌中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所北京100071 中国科学院微生物研究所北京100101

在细胞表面表达具有某种功能的蛋白后,这些细胞就具备了某些新功能,可以对其进行功能研究和应用。将功能蛋白连接到某些跨膜蛋白的胞外区是实现目的蛋白表达于细胞表面的手段之一。本研究比较了2种跨膜蛋白A2TM和△LNGFR携带外源蛋白-my... 详细信息

在细胞表面表达具有某种功能的蛋白后,这些细胞就具备了某些新功能,可以对其进行功能研究和应用。将功能蛋白连接到某些跨膜蛋白的胞外区是实现目的蛋白表达于细胞表面的手段之一。本研究比较了2种跨膜蛋白A2TM和△LNGFR携带外源蛋白-myc于细胞表面的能力。利用重叠PCR法合成的A2TM和△LNGFR基因片段与载体pEF/myc/ER和载体LL3.7进行酶切、连接、转化、鉴定,成功构建了pEF-A2TM、pL-A2TM和pL-LN真核表达载体。利用磷酸钙沉淀法转染293FT细胞,荧光显微镜下观察EGFP的表达、流式细胞术检测myc在细胞表面的表达情况,Western blotting检测myc目的蛋白的表达。pL-A2TM和pL-LN转染293FT细胞36 h后的荧光强度基本相同,表明A2TM和△LNGFR在细胞内表达的强度相似。流式细胞术分析显示,△LNGFR和A2TM均可在细胞表面表达,但A2TM只有在指示蛋白EGFP表达非常高的情况下才能在细胞表面被检测到。Western blotting显示△LNGFR表达量很高,而A2TM没有达到检测水平。结果表明,以糖基化形式存在的△LNGFR比没有糖基化的内源A2TM的表达更稳定,A2TM在表达量低时可能易被细胞内的蛋白酶降解,因而△LNGFR是一种能携带外源蛋白于细胞表面的比较理想的跨膜蛋白。

关键词：跨膜蛋白 myc抗原决定簇细胞表面表达差异

应用抑制消减杂交技术筛选动脉粥样硬化相关基因

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中国药理学与毒理学杂志 2004年第5期18卷 371-378页

作者：山丽梅张锦超崔文玉俞炜源汪海中国人民解放军第302医院药学部北京100039 军事医学科学院生物工程研究所北京100071 军事医学科学院毒物药物研究所北京100850

目的　筛选动脉粥样硬化 (AS)相关基因。方法通过菌落原位杂交技术筛选用抑制消减杂交法构建的传代培养前后牛主动脉内皮细胞差异表达基因消减cDNA文库 ,用聚合酶链反应方法进一步筛选出有插入片段的阳性克隆 ,将阳性克隆进行DNA测序和... 详细信息

目的　筛选动脉粥样硬化 (AS)相关基因。方法通过菌落原位杂交技术筛选用抑制消减杂交法构建的传代培养前后牛主动脉内皮细胞差异表达基因消减cDNA文库 ,用聚合酶链反应方法进一步筛选出有插入片段的阳性克隆 ,将阳性克隆进行DNA测序和同源性比较分析。建立兔AS模型 ,采用RNA点杂交技术鉴定部分筛选到的cDNA序列的AS相关性。结果　从消减文库中随机挑取的 75 0个白色克隆中筛选出 88个阳性克隆 ,DNA测序获得 6 1个cDNA序列 ,其中 2 6个为已知牛基因序列 ,19个与已知人基因具有高度同源性 ,其他 16个是未知基因片段。通过基因同源性分析 ,选择部分cDNA序列进行组织表达差异及其与AS病变的关系分析 ,结果表明 ,转录调节因子DEAD box ,Ⅻa因子抑制蛋白 ,淋巴调适蛋白和转位复合蛋白 β基因为AS相关基因。结论　这 4种基因为本文首次报道的AS相关基因。

关键词：动脉粥样硬化内皮血管细胞培养的主动脉抑制消减杂交

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蚓激酶基因的人工合成及山羊乳腺表达

中国生物工程杂志 2004年第9期24卷 49-52页

作者：张守峰扈荣良范志强姚汝强梁慧颖涂长春中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所长春130062

为了实现蚓激酶在真核细胞的高效稳定表达 ,人工合成了全长 849bp ,不含罕用密码子的蚓激酶F Ⅲ 1cDNA序列 ,并以其为目的基因 ,构建以山羊β 酪蛋白启动子为上游调控序列的乳腺组织特异性表达载体pBLK和重组逆转录病毒表达载体pLN bCP... 详细信息

为了实现蚓激酶在真核细胞的高效稳定表达 ,人工合成了全长 849bp ,不含罕用密码子的蚓激酶F Ⅲ 1cDNA序列 ,并以其为目的基因 ,构建以山羊β 酪蛋白启动子为上游调控序列的乳腺组织特异性表达载体pBLK和重组逆转录病毒表达载体pLN bCP LK。质粒pBLK 40 0 μg直接注入稳定泌乳期奶山羊乳腺 ,以纤维蛋白平板溶圈法 (FAPA)检测奶样纤溶活性。结果显示 ,注射后 3～ 60h ,奶样有明显纤溶活性 ,其中 6～ 9h活性最高。脂质体介导质粒pLN bCP LK转染PA31 7细胞系 ,5 0 0mg LG41 8筛选后获得 4株高产毒细胞系 ,产毒滴度达 1× 1 0 4～ 1× 1 0 5CFU ml水平。产毒细胞上清 1 0ml直接注入临产前两周的山羊乳腺 ,隔日以等量再注 1次 ,产羔后其奶样即有明显纤溶活性 ,注后第

关键词：蚓激酶纤溶活性 LN 乳腺表达 CP 细胞系质粒上游调控序列 β-酪蛋白目的基因

重组HIV-1 DNA疫苗工程菌中试发酵工艺的优化

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中国生物制品学杂志 2010年第5期23卷 500-502,506页

作者：宋英今金宁一李霄田明摇张立树李昌天津大学农业与生物工程学院天津300072 解放军军事医学科学院军事兽医研究所全军基因工程实验室长春130062

目的优化重组HIV-1DNA疫苗工程菌的中试发酵工艺。方法优化质粒转化条件,制备工程菌Jm109/pVAX1-MEGp24种子液,连续传30代,检测其遗传稳定性;优化培养基成分、补料基质、补料方式和培养时间,确定最佳发酵参数;并应用最佳发酵参数,于50L... 详细信息

目的优化重组HIV-1DNA疫苗工程菌的中试发酵工艺。方法优化质粒转化条件,制备工程菌Jm109/pVAX1-MEGp24种子液,连续传30代,检测其遗传稳定性;优化培养基成分、补料基质、补料方式和培养时间,确定最佳发酵参数;并应用最佳发酵参数,于50L发酵罐进行3批中试规模的发酵,考察在发酵培养过程中质粒的稳定性和超螺旋质粒的比例。结果工程菌在连续传代30次后,质粒拷贝数基本保持稳定;最佳发酵参数为:采用以甘油为碳源的培养基,以梯度恒速流加方式补料,培养时间13h;通过3批稳定发酵,最终可获得湿菌67.0～68.6g/L,质粒含量可达1.62～1.73mg/g菌,超螺旋质粒的比例达93%以上。结论已建立了稳定的重组HIV-1DNA疫苗工程菌中试发酵工艺,为进一步规模化生产奠定了基础。

关键词： HIV-1 DNA疫苗工程菌发酵

联合应用凋亡素基因、新城疫病毒HN基因及IL-18基因对黑色素瘤的抑制效应研究

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高技术通讯 2004年第12期14卷 33-36页

作者：李霄金宁一米志强连海孙迎春李杰管国芳中国人民解放军军事医学科学院基因工程重点实验室，长春130062 吉林大学第一医院血液肿瘤科，长春130021 吉林大学第二医院耳鼻喉科，长春130041

以前的研究结果表明，来自于鸡贫血病毒的凋亡素基因、来自于鸡新城疫病毒的HN基因和IL-18基因具有不同的抗肿瘤效应，但上述基因抗肿瘤的机制不同，本研究在双启动子真核表达质粒pIRES中的CMV启动子下游插入凋亡素基因，IRES启动子下... 详细信息

以前的研究结果表明，来自于鸡贫血病毒的凋亡素基因、来自于鸡新城疫病毒的HN基因和IL-18基因具有不同的抗肿瘤效应，但上述基因抗肿瘤的机制不同，本研究在双启动子真核表达质粒pIRES中的CMV启动子下游插入凋亡素基因，IRES启动子下游插入IL-18HN嵌合基因，构建能同时表达三种基因的真核表达质粒pIRVP3IL-18HN。复制C57BL／6小鼠荷黑色素瘤模型，并将质脂体包裹的重组质粒进行瘤内注射，共注射3次，每次100μg质粒，拟观察凋亡素、新城疫病毒HN基因和IL-18基因以核酸疫苗的形式联合应用对小鼠黑色素瘤的抑制效应。结果显示pVIL-18HN、pVlL-18和pVVP3IL-18均有抑制肿瘤作用，但pIRVP3IL-18HN组抑瘤率高于pVIL-18HN组、pVIL-18VP3组、pVIL-18组和Hanks液对照组。研究结果提示，上述3种基因联合应用具有协同抑瘤效应。

关键词： IL-18 HN基因联合应用凋亡素黑色素瘤基因 IRES 鸡新城疫病毒下游鸡贫血病毒

委内瑞拉马脑炎病毒一步法荧光定量RT-PCR方法的建立

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病毒学报 2015年第2期31卷 107-113页

作者：千莎莎何彪涂忠忠郭焕成涂长春吉林农业大学动物科学技术学院长春130118 中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室长春130122

委内瑞拉马脑炎(Venezuelan equine encephalitis,VEE)是由委内瑞拉马脑炎病毒(Venezuelan equine encephalitis virus,VEEV)复合物引起的一种人兽共患病。我国目前尚无该病,因此建立一种快速准确的检测方法对预防和控制该病至关重要。... 详细信息

委内瑞拉马脑炎(Venezuelan equine encephalitis,VEE)是由委内瑞拉马脑炎病毒(Venezuelan equine encephalitis virus,VEEV)复合物引起的一种人兽共患病。我国目前尚无该病,因此建立一种快速准确的检测方法对预防和控制该病至关重要。本研究通过分析委内瑞拉马脑炎病毒nsp1基因序列的保守性,设计了一对能检测VEEV复合物所有亚型毒株的特异性引物和Taqman探针。通过反应体系和反应条件优化,建立了检测委内瑞拉马脑炎病毒复合物的一步法实时荧光定量RT-PCR方法。该方法检测VEEV经体外转录获得的RNA,检测的灵敏度达3.27×102拷贝/μL。以该方法检测与VEEV同属的东方马脑炎病毒(EEEV)和西方马脑炎病毒(WEEV)nsp1基因相同区段的RNA以及同属的基孔肯雅病毒(CHIKV),结果均为阴性,表明该方法具有良好的特异性。该方法将为可能在我国出现的委内瑞拉马脑炎的侦检提供有效技术手段。

关键词：委内瑞拉马脑炎病毒一步法荧光定量RT-PCR 检测

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狂犬病病毒抗体胶体金检测试纸的制备

生物工程学报 2011年第5期27卷 799-804页

作者：王铁成张涛杨松涛王化磊高玉伟孙玮靳晓霞赵平森冯娜黄耕邹啸环夏咸柱中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室长春130122 中国医学科学院北京协和医院实验动物研究所北京100021 吉林大学畜牧兽医学院长春130062

通过胶体金免疫层析技术建立一种特异、便捷、快速的狂犬病病毒抗体检测方法,对犬等动物免疫狂犬病疫苗后的抗体水平监测提供参考。用醋酸锌沉淀法沉淀狂犬病病毒CVS11,Sepharose 4FF进行层析纯化。用柠檬酸三钠还原法制备的胶体金,标... 详细信息

通过胶体金免疫层析技术建立一种特异、便捷、快速的狂犬病病毒抗体检测方法,对犬等动物免疫狂犬病疫苗后的抗体水平监测提供参考。用醋酸锌沉淀法沉淀狂犬病病毒CVS11,Sepharose 4FF进行层析纯化。用柠檬酸三钠还原法制备的胶体金,标记纯化的狂犬病病毒,喷于试纸的结合释放垫(金标垫),将SPA(葡萄球菌表面A蛋白)和纯化的兔抗狂犬病病毒IgG分别喷于试纸的T(检测线)处和C(对照线)处,组装试纸条。用制备的试纸条对261份犬血清进行检测,与快速荧光灶抑制试验(RFFIT)检测的结果一致;对已知效价的犬狂犬病毒中和抗体(VNA)大于0.5 IU,结果为阳性;对狂犬病病毒中和抗体(VNA)小于0.5 IU/mL的血清,结果为阴性。制备的狂犬病病毒抗体胶体金检测试纸检测犬血清抗体,具有特异、便捷、快速的特点,能够检测出狂犬病病毒中和抗体大于0.5 IU的血清,适用于临床犬血清抗体水平监测,具有良好的应用前景。

关键词：胶体金狂犬病病毒中和抗体 CVS11

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新城疫病毒变异、进化与跨种感染

中国家禽 2010年第7期32卷 1-5页

作者：鲁会军金扩世金宁一中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所吉林长春130062

新城疫病毒是一种变异、进化速度很快的病原,近年来新城疫病毒感染的宿主范围有不断扩大的趋势,不仅可跨种感染多种水禽,并有跨种感染猪的报道。本文通过新城疫病毒F基因和HN基因变异规律分析,探讨了基因变异对新城疫病毒毒力及跨种感... 详细信息

新城疫病毒是一种变异、进化速度很快的病原,近年来新城疫病毒感染的宿主范围有不断扩大的趋势,不仅可跨种感染多种水禽,并有跨种感染猪的报道。本文通过新城疫病毒F基因和HN基因变异规律分析,探讨了基因变异对新城疫病毒毒力及跨种感染能力的影响。

关键词：新城疫病毒变异进化跨种感染