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基于UPLC-MS/MS测定比格犬血浆中炒酸枣仁提取物9种成分及其药代动力学研究

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中国中药杂志 2024年第9期49卷 2501-2511页

作者：夏可欣于歆吴思玚赵丽凤王玉艳康琛袁征李鹰飞中国中医科学院中药研究所北京100700 山东中医药大学中医学院山东济南250301

该研究建立了一种简便、快速、灵敏的超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS),能够同时测定给药炒酸枣仁提取物后比格犬血浆中木兰花碱、乌药碱、维采宁Ⅱ、异斯皮诺素、斯皮诺素、当药黄素、N-去甲基荷叶碱、6'''-阿魏酰斯皮诺素和酸... 详细信息

该研究建立了一种简便、快速、灵敏的超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS),能够同时测定给药炒酸枣仁提取物后比格犬血浆中木兰花碱、乌药碱、维采宁Ⅱ、异斯皮诺素、斯皮诺素、当药黄素、N-去甲基荷叶碱、6'''-阿魏酰斯皮诺素和酸枣仁皂苷B的含量。采用Waters HSS-T3 C_(18)色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm),流动相为甲醇-水(含0.01%甲酸),梯度洗脱,9种成分和2种内标于8 min内完全分离;质谱检测在电喷雾离子源正、负离子切换模式下,采用多反应监测模式进行检测。分析方法经特异性、选择性、线性范围、准确度、精密度、回收率、基质效应和稳定性验证,可满足犬灌胃炒酸枣仁提取物后的药代动力学的研究要求。结果显示,比格犬单次灌胃给药后,木兰花碱、乌药碱、维采宁Ⅱ、异斯皮诺素、斯皮诺素、6'''-阿魏酰斯皮诺素和酸枣仁皂苷B的T_(max)为2.40~3.20 h,t1/2为2.08~6.79 h,其中木兰花碱和斯皮诺素的暴露量相对较高,C_(max)分别为76.7、31.5 ng·mL^(-1),AUC_(0-∞)分别为581、315 ng·h·mL^(-1);其余5种暴露较弱的化合物的C_(max)为0.81~13.0 ng·mL^(-1),AUC_(0-∞)为6.00~106 ng·h·mL^(-1)。该研究为炒酸枣仁后续相关药理研究提供了参考依据。

关键词：炒酸枣仁比格犬药代动力学 UPLC-MS/MS

小檗碱类成分对乙酰胆碱酯酶的抑制作用及血脑屏障透过性分析

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中国实验方剂学杂志 2024年第9期30卷 116-124页

作者：潘福璐刘洋刘慧宁于爽李雪岩王新宇祁东盈柴晓钰王倩倩易紫容潘艳丽北京中医药大学中药学院北京102488 中国中医科学院中医药信息研究所北京100700

目的:从药靶结合亲和力和动力学角度研究非洲防己碱等小檗碱类成分对乙酰胆碱酯酶的抑制作用;并在不同多成分背景下研究这类成分的血脑屏障透过性。方法:采用Ellman改良的光度检测法测量非洲防己碱等小檗碱类成分对乙酰胆碱酯酶的半数... 详细信息

目的:从药靶结合亲和力和动力学角度研究非洲防己碱等小檗碱类成分对乙酰胆碱酯酶的抑制作用;并在不同多成分背景下研究这类成分的血脑屏障透过性。方法:采用Ellman改良的光度检测法测量非洲防己碱等小檗碱类成分对乙酰胆碱酯酶的半数抑制浓度(IC50);采用酶活恢复方法测定这类成分与乙酰胆碱酯酶结合的动力学参数(Koff);采用超高效液相色谱-高分辨率质谱法(UPLC-HRMS)对各成分在不同背景下(药材与复方)透过血脑屏障到达脑组织的定性分析。结果:非洲防己碱等小檗碱类成分对乙酰胆碱酯酶有较强的抑制活性,其IC_(50)可达到纳摩尔级,并且多个生物碱成分具有优于阳性药盐酸多奈哌齐的药靶结合动力学特征(更小的Koff,P<0.01),表明该类成分可在乙酰胆碱酯酶上持续更长时间的抑制;非洲防己碱等小檗碱类成分以单体形式、以及在黄连和黄柏药材提取物和复方黄连解毒汤的多成分背景下都可以透过血脑屏障到达脑组织。结论:非洲防己碱等小檗碱类成分对乙酰胆碱酯酶具有较强的抑制作用且在多种成分背景下均可入脑。这在药效物质基础层面上可以佐证临床上复方黄连解毒汤改善阿尔茨海默病的效果,为阐明复方黄连解毒汤的药效物质基础提供了数据支持。

关键词：非洲防己碱乙酰胆碱酯酶药靶结合亲和力血脑屏障

针刺治疗结直肠癌术后胃肠功能障碍疗效的系统评价和Meta分析

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针刺研究 2024年第2期49卷 208-219页

作者：周彤王烁樊柄杰张兰鑫胡帅航侯炜北京中医药大学研究生院北京100029 中国中医科学院广安门医院北京100053

目的:运用Meta分析评价针刺治疗结直肠癌术后胃肠功能障碍的疗效。方法:检索PubMed、Embase、Cochrane Library、中国知网数据库、万方学术期刊全文数据库、维普中文科技期刊全文数据库、中国生物医学文献数据库7个数据库中针刺治疗结... 详细信息

目的:运用Meta分析评价针刺治疗结直肠癌术后胃肠功能障碍的疗效。方法:检索PubMed、Embase、Cochrane Library、中国知网数据库、万方学术期刊全文数据库、维普中文科技期刊全文数据库、中国生物医学文献数据库7个数据库中针刺治疗结直肠癌术后胃肠功能障碍的随机对照试验,时间为建库至2022年11月10日。利用Cochrane偏倚风险评估工具及改良的Jadad量表评价纳入文献的质量。应用RevMan 5.4进行Meta分析,应用Stata 16.0进行回归分析及偏倚风险分析,采用TSA 0.9软件进行试验序贯分析。结果:研究共纳入27项随机对照试验,共2 629例患者。干预措施包括手针、电针、经皮穴位电刺激、温针、揿针。结果显示针刺治疗可缩短患者术后首次耐受流质饮食时间(MD=-13.70,95%CI=[-17.94,-9.46],P<0.000 01)、首次排便时间(MD=-18.20,95%CI=[-22.62,-13.78],P<0.000 01)、首次排气时间(MD=-16.31,95%CI=[-20.32,-12.31],P<0.000 01)、首次肠鸣音恢复时间(MD=-11.91,95%CI=[-14.01,-9.81],P<0.000 01)、住院天数(MD=-1.49,95%CI=[-2.27,-0.70],P=0.000 2)。回归分析结果显示癌症类型、文献质量及针刺次数是异质性的主要来源。偏倚分析显示可能存在一定发表偏倚风险。试验序贯分析显示研究已满足所需病例数,结论可靠。结论:针刺治疗是结直肠癌患者术后胃肠功能的有效恢复措施,未来仍需要大样本量及严格设计的临床研究比较不同针刺方法的疗效。

关键词：针刺结直肠癌术后胃肠功能障碍 Meta分析

刮痧对膝关节骨关节炎大鼠软骨细胞凋亡及自噬的影响

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针刺研究 2024年第3期49卷 247-255页

作者：颜雪华朱浩陈帅张改月张豪斌杨金生王莹莹陕西中医药大学针灸推拿学院陕西咸阳712046 陕西中医药大学第二附属医院陕西咸阳712000 中国中医科学院中医基础理论研究所北京100700 中国中医科学院针灸研究所北京100700

目的:观察刮痧对膝关节骨关节炎(KOA)大鼠膝关节软骨组织炎性因子、细胞凋亡及自噬的影响,探讨刮痧治疗KOA的作用机制。方法:SD大鼠随机分为空白组、模型组和刮痧组,每组17只。采用右膝关节腔内注射谷氨酸钠碘乙酸复制KOA大鼠模型。刮... 详细信息

目的:观察刮痧对膝关节骨关节炎(KOA)大鼠膝关节软骨组织炎性因子、细胞凋亡及自噬的影响,探讨刮痧治疗KOA的作用机制。方法:SD大鼠随机分为空白组、模型组和刮痧组,每组17只。采用右膝关节腔内注射谷氨酸钠碘乙酸复制KOA大鼠模型。刮痧组选择右侧“阳陵泉”“血海”进行刮痧治疗,频率为1次/s,按压力度在0.3~0.5 kgf,隔日干预1次,连续干预7次。记录各组大鼠右膝关节周径变化;HE染色法观察大鼠右膝关节软骨病理形态变化;ELISA法检测大鼠右膝关节软骨组织中白细胞介素(IL)-1β及肿瘤坏死因子(TNF)-α含量;荧光定量PCR法和Western blot法分别检测大鼠膝关节软骨组织中自噬性关键小分子酵母Atg6的同素系物(Beclin-1)、微管相关结合蛋白1轻链蛋白酶复合物3Ⅱ/Ⅰ型(LC3Ⅱ/LC3Ⅰ)、泛素相关结合蛋白62(P62)、半胱天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA和蛋白的表达水平;TUNEL染色观察大鼠膝关节软骨细胞的凋亡情况;免疫荧光法检测大鼠右膝关节软骨中LC3的表达水平。结果:造模后,与空白组比较,模型组右侧膝关节周径明显增大(P<0.01);软骨层有明显的紊乱和缺损,软骨细胞大量坏死,有纤维增生及大量骨小梁破坏;软骨组织细胞凋亡率、IL-1β和TNF-α含量及Caspase-3、P62 mRNA和蛋白表达水平均升高(P<0.01,P<0.001),Beclin-1、LC3 mRNA和蛋白表达水平和LC3平均荧光强度降低(P<0.01,P<0.001)。治疗后,与模型组比较,刮痧组右侧膝关节周径缩小(P<0.05);软骨层排列趋于正常,炎性细胞浸润程度较低;软骨组织细胞凋亡率、IL-1β和TNF-α含量降低(P<0.05),Caspase-3、P62mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.01,P<0.05),Beclin-1、LC3 mRNA和蛋白表达水平及LC3平均荧光强度升高(P<0.05)。结论:刮痧能够改善KOA大鼠关节软骨损伤,抑制炎性因子过量释放,减少软骨细胞凋亡率。这可能与上调Beclin-1、LC3的表达,降低P62、Caspase-3的表达,促进KOA大鼠软骨细胞自噬有关。

关键词：刮痧膝关节骨关节炎自噬细胞凋亡

含苍术-黄柏内服方剂用药规律的数据挖掘研究

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中医杂志 2024年第13期65卷 1392-1398页

作者：苏鹏丽徐鹏汪燕红祖雅琪李鲲赵玉凤中国中医科学院中医临床基础医学研究所北京市100700 中国中医科学院中医药信息研究所中国中医科学院中国中医科学院中医药数据中心

目的采用数据挖掘分析含苍术-黄柏方剂的用药规律。方法纳入《中医方剂大辞典》《中华医典》第5版中含苍术-黄柏方剂,建立数据库,对涉及的方剂、方剂的药物组成、药物的性味归经、方剂主治中医疾病和证型的种类数和出现频次进行统计;绘... 详细信息

目的采用数据挖掘分析含苍术-黄柏方剂的用药规律。方法纳入《中医方剂大辞典》《中华医典》第5版中含苍术-黄柏方剂,建立数据库,对涉及的方剂、方剂的药物组成、药物的性味归经、方剂主治中医疾病和证型的种类数和出现频次进行统计;绘制药物组合网络图;基于Apriori算法对药物组合进行关联规则分析,同时对高频疾病涉及的药物进行关联规则分析并提取含苍术-黄柏药对的方剂主治某一疾病的核心处方,按照升阳除湿、健脾除湿、清利湿热、专病用药四个类别对核心处方中的药物分类。结果共检索到方剂323首,涉及中药318味,证型52种,中医疾病200种,其中痹证、脚气病、痿证、带下病、疝气类病、头痛、痔疮7种疾病出现频次>10。分析高频疾病核心处方,发现苍术-黄柏组合健脾除湿类药频次最多(353次),用药模式为补气补血药和理气药合用,常使用黄芪、人参、炙甘草、白术、当归、陈皮、香附。其次为组合清热利湿类药(213次),常使用防己、牛膝、半夏,且治疗痔疮使用该类药物种类最多,治疗脚气病使用最频繁。组合升阳除湿类药频次212次,常使用羌活、柴胡、防风,且治疗头痛使用该类药物种类最多,治疗痹证使用最频繁。组合专病用药频次最少(39次)。结论苍术-黄柏药对常通过组合升阳除湿、健脾除湿、清热利湿类药物以分利湿邪,同时组合专病用药以病证同治。

关键词：苍术黄柏除湿数据挖掘用药规律

转录组学数据挖掘结合“临床-动物”研究验证识别激素性股骨头坏死全病程的证素标志基因

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中国中药杂志 2024年第5期49卷 1343-1352页

作者：李群胡智星张彦琼贾雁杨超王丽丽王佳琳严倩倩陈卫衡林娜刘春芳中国中医科学院中药研究所北京100700 北京中医药大学第三附属医院北京100029

采用转录组数据挖掘与实验验证相结合的研究策略,识别表征激素性股骨头坏死(SONFH)痰、瘀、虚证素的标志基因。首先,利用项目组前期临床转录组学检测所得SONFH痰瘀阻络证、经脉痹阻证、肝肾亏虚证共性差异表达基因集,整合差异表达趋势... 详细信息

采用转录组数据挖掘与实验验证相结合的研究策略,识别表征激素性股骨头坏死(SONFH)痰、瘀、虚证素的标志基因。首先,利用项目组前期临床转录组学检测所得SONFH痰瘀阻络证、经脉痹阻证、肝肾亏虚证共性差异表达基因集,整合差异表达趋势分析与功能挖掘,分别预测出表征痰、瘀、虚证素的候选标志基因集。再利用来源于临床SONFH患者的全血样本、SONFH大鼠的全血和受累股骨头组织样本,采用实时荧光定量PCR(qPCR)技术检测上述候选标志基因的表达量;进一步,采用受试者工作特征曲线(ROC)法,客观评价上述候选标志基因的辨证效能。转录组数据分析结果显示,痰证素候选标志基因为超长链脂肪酸延伸酶6(ELOVL6),瘀证素候选标志基因为锚蛋白1(ANK1)、血型糖蛋白A/B(GYPA/B)、Rh相关糖蛋白(RHAG),虚证素候选标志基因为溶质载体家族2(促进葡萄糖转运体)成员1(SLC2A1)、胃口素(STOM)。qPCR验证结果显示,与非SONFH组比较,ELOVL6在痰瘀阻络证患者外周血中的表达量最低(P<0.05);与正常对照组比较,其在SONFH大鼠造模4周外周血和受累股骨头组织中的表达量最低(P<0.01),且对大鼠造模4周的辨证效能(AUC=0.850,P=0.006)优于其他造模时间点(8、12、16、21周AUC分别为0.689、0.766、0.588、0.662)。与非SONFH组比较,ANK1、GYPA、RHAG均在经脉痹阻证患者外周血中表达最低(P<0.05);与正常对照组比较,其在SONFH大鼠造模12周外周血和受累股骨头组织中的表达量最低(P<0.05,P<0.01),且对大鼠造模12周的辨证效能(ANK1:AUC=0.855,P=0.006;GYPA:AUC=0.861,P=0.012;RHAG:AUC=0.854,P=0.009)优于其他造模时间点(4、8、16、21周,ANK1的AUC分别为0.630、0.658、0.657、0.585;GYPA的AUC分别为0.646、0.573、0.691、0.617;RHAG的AUC分别为0.592、0.511、0.515、0.536)。与非SONFH组比较,SLC2A1和STOM均在肝肾亏虚证患者外周血中表达量最低(P<0.05);与正常对照组比较,其在SONFH大鼠造模21周外周血和受累股骨头组织中的表达量最低(P<0.05,STOM在大鼠外周血中表达量与正常对照组间的差异无统计学意义除外),且SLC2A1对大鼠造模21周的辨证效能(AUC=0.806,P=0.009)优于其他造模时间点(4、8、12、16周AUC分别为0.520、0.580、0.741、0.774),STOM的辨证效能无意义。综上,SONFH中痰证素的标志基因为ELOVL6,瘀证素的标志基因为ANK1、GYPA和RHAG,虚证素的标志基因为SLC2A1,有助于从基因水平揭示SONFH痰、瘀、虚证素的生物学内涵。

关键词：激素性股骨头坏死痰瘀虚证素标志基因

基于Keap1/Nrf2/ARE通路探讨槲皮素对LPS诱导的急性肾损伤大鼠铁死亡影响

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中国实验方剂学杂志 2024年

作者：杨昊若于大君张昱杨斌中国中医科学院西苑医院天津中医药大学

目的：基于Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)/核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)通路，探讨槲皮素对脂多糖(LPS)诱导急性肾损伤大鼠铁死亡的影响及治疗作用。方法：60只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、槲皮素高、低(... 详细信息

目的：基于Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)/核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)通路，探讨槲皮素对脂多糖(LPS)诱导急性肾损伤大鼠铁死亡的影响及治疗作用。方法：60只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、槲皮素高、低(100、10 mg·kg-1)剂量组、铁死亡抑制剂(FER1)组(Ferrostatin 1，5 mg·kg-1)、槲皮素高剂量+Nrf2抑制剂(ML385)组(ML385，30 mg·kg-1)。除正常组外各组通过腹腔注射LPS(10 mg·kg-1)制备AKI大鼠模型。造模成功后，各给药组相应剂量药物干预，正常组、模型组给予等量生理盐水，干预周期为3周。生化检测血清肌酐(Scr)、尿素氮(Bun)水平，考察大鼠肾功能；酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量及白细胞介素(IL1-β、IL-6)；检测肾组织Fe2+、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)水平；苏木精-伊红染色(HE)、马松染色(Masson)及高碘酸希夫染色(PAS)法观察肾组织病理形态变化；透射电子显微镜观察线粒体形态变化；免疫荧光法(IF)检测肾组织ROS水平；免疫组化法(IHC)法及实时荧光定量PCR法(RT-PCR)检测Keap1、Nrf2、血红素加氧酶-1(HO-1)、谷胱甘肽过氧化物酶4(Gpx4)、转铁蛋白受体(TFR1)、KIM-1蛋白及mRNA表达。结果:与正常组相比，模型组大鼠血清Scr、Bun、TNF-α、IL-1β、IL-6，肾组织Fe2+、MDA含量均显著升高，SOD、GSH含量明显降低(P<0.01)；大鼠肾组织病理损伤严重；线粒体铁死亡特征性损伤明显且数量减少；肾组织ROS水平明显上升；肾组织中Keap1、TFR1、KIM-1蛋白及mRNA表达明显升高，Nrf2、HO-1、Gpx4表达明显降低(P<0.01)。与模型组比较，槲皮素各剂量组及FER1组血清Scr、Bun、TNF-α、IL-1β、IL-6，肾组织Fe2+、MDA水平呈现不同程度的降低，SOD、GSH含量显著增强(P<0.05)；大鼠肾组织病理损伤得到明显缓解；线粒体损伤好转且数量增多；肾组织ROS水平显著降低；肾组织Keap1、TFR1、KIM-1蛋白及mRNA水平明显降低，Nrf2、HO-1、Gpx4表达升高明显，其中槲皮素高剂量组损伤改善最明显(P<0.05)。与槲皮素高剂量组相比，ML385组可明显削弱槲皮素对AKI大鼠的保护作用(P<0.05)。结论：槲皮素可有效抑制AKI大鼠铁死亡，改善肾组织损伤、修复大鼠肾功能，其机制或与激活Keap1/Nrf2/ARE通路有关。

关键词：急性肾损伤槲皮素铁死亡 Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)/核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)通路大鼠

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经典名方中白及的本草考证

中国实验方剂学杂志 2024年第4期30卷 77-88页

作者：赵丹周涛罗朝磊甘德卫刘灵玲康传志吴之坤李旭付艳曹国琼张永萍肖承鸿詹志来贵州中医药大学贵阳550025 中国中医科学院中药资源中心北京100700

通过查阅古代本草、方书、医籍和近现代文献资料,对白及名称、基原、学名演变、产地变迁、质量评价、采收加工及炮制等进行系统整理与考证,以期为含白及药材经典名方的开发和利用提供依据。考证结果表明,历代本草多以“白及”为正名,部... 详细信息

通过查阅古代本草、方书、医籍和近现代文献资料,对白及名称、基原、学名演变、产地变迁、质量评价、采收加工及炮制等进行系统整理与考证,以期为含白及药材经典名方的开发和利用提供依据。考证结果表明,历代本草多以“白及”为正名,部分学者习惯以“白芨”为正名,另有“白给”“白根”“白苙”等多个别名;历代主流来源为兰科植物白及Bletilla striata的块茎;药材品质以“身干、个大、色白、质坚、无须根、外皮去尽者”为佳,随着野生变家种的推广,其性状与野生药材存在一定差异,品质评价指标应作相应调整;历代白及著录产地较广,近代以贵州、四川所产量大质佳;采收期多在春秋两季,以秋季为佳;产地加工与炮制工艺较为简单,古代多鲜用或以粉末入药,现代则以切片生用为主。基于考证结果,建议经典名方中选用兰科植物白及Bletilla striata的块茎,统一规范书写为“白及”,原方注明炮制要求的根据要求操作,未注明炮制要求的可以生品入药。

关键词：白及本草考证基原学名产地品质评价采收与炮制

补骨脂中11种活性成分在正常和糖尿病大鼠体内的药代动力学研究

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中国中药杂志 2024年第5期49卷 1369-1377页

作者：朱娜成丽媛张孝莹张玥周昆天津中医药大学药物安全评价中心天津301617 天津中医药大学中医药研究院天津301617

采用超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)技术同时测定正常大鼠和糖尿病模型大鼠血浆中补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂酚、补骨脂查尔酮、补骨脂二氢黄酮甲醚、补骨脂宁、补骨脂甲素、补骨脂乙素、新补骨脂异黄酮、巴库查尔酮及corylif... 详细信息

采用超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)技术同时测定正常大鼠和糖尿病模型大鼠血浆中补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂酚、补骨脂查尔酮、补骨脂二氢黄酮甲醚、补骨脂宁、补骨脂甲素、补骨脂乙素、新补骨脂异黄酮、巴库查尔酮及corylifol A 11种有效成分,以阐明补骨脂香豆素类、黄酮类及单萜酚类在正常和糖尿病模型大鼠体内的药代动力学特征。以高糖高脂饲料结合每2 d注射一次1%链脲佐菌素诱导2型糖尿病(T2DM)大鼠模型,灌胃给予补骨脂后采集不同时间点血浆,血浆样品经乙酸乙酯沉淀蛋白,以UHPLC-MS/MS测定血浆中补骨脂11种成分的血药浓度,采用DAS 3.0软件计算药动学参数。结果显示,雌、雄性T2DM大鼠灌胃给予补骨脂,补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂酚、补骨脂二氢黄酮甲醚等8种受试成分的药动学行为与正常大鼠存在显著性差异。其中香豆素类成分补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂宁在雌性与雄性T2DM大鼠体内均出现入血暴露水平降低,但黄酮类成分如补骨脂二氢黄酮甲醚、corylifol A、巴库查尔酮以及单萜酚类成分补骨脂酚在雌性T2DM大鼠体内的暴露减少,而在雄性患病大鼠体内暴露增多,提示补骨脂在临床用药时针对不同性别患者应合理调整服用剂量。

关键词：补骨脂糖尿病 UHPLC-MS/MS 药代动力学