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不同强度电针对大鼠脊髓背角广动力神经元伤害性放电的抑制作用

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针刺研究 2024年第5期49卷 448-455页

作者：于清泉袁咪孙小月张妮楠王晓宇宿杨帅张知云景向红中国中医科学院针灸研究所北京100700

目的:观察不同强度电针对大鼠脊髓背角广动力(WDR)神经元伤害性电活动的作用,探讨电针在脊髓背角水平调控伤害性信号的效应特征。方法:采用多通道在体电生理技术记录25只正常雄性SD大鼠脊髓背角WDR神经元的电活动,在神经元的足底感受野(... 详细信息

目的:观察不同强度电针对大鼠脊髓背角广动力(WDR)神经元伤害性电活动的作用,探讨电针在脊髓背角水平调控伤害性信号的效应特征。方法:采用多通道在体电生理技术记录25只正常雄性SD大鼠脊髓背角WDR神经元的电活动,在神经元的足底感受野(RF)给予连续高强度电刺激诱发神经元的windup,而后于大鼠同侧“足三里”穴区进行不同强度(1 mA或2 mA)的电针(EA1 mA、EA2 mA)干预10 min,刺激频率为2 Hz/15 Hz,然后再次以相同条件诱发WDR神经元的windup。比较不同强度电针干预前后,WDR神经元伤害性放电成分的总数量及windup现象的变化。结果:EA1 mA和EA2 mA均显著减少了WDR神经元Aδ和C成分及后放电的数量(P<0.01,P<0.001),且EA2 mA对C成分的抑制率显著高于EA1 mA(P<0.05);EA1 mA和EA2 mA干预减弱了WDR神经元的windup现象(P<0.05,P<0.01),且EA2 mA的效应要强于EA1 mA(P<0.05)。EA1 mA和EA2 mA作用于WDR神经元的非感受野(non-RF)和RF均明显减少了其Aδ成分、C成分和后放电的数量(P<0.05,P<0.01);对于WDR神经元windup现象,EA2 mA作用于non-RF和RF均能发挥显著的抑制作用(P<0.01,P<0.05),而EA1 mA只有作用于non-RF时才能显著抑制(P<0.01)。结论:电针可以抑制大鼠脊髓背角WDR神经元的伤害性电活动,抑制效应与EA干预的强度和部位直接相关,2 mA的抑制效应要强于1 mA。

关键词：电针刺激强度镇痛伤害性信号广动力神经元

双氢青蒿素和普瑞巴林联用对神经病理性疼痛小鼠的干预作用及炎症调控机制

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中国中药杂志 2024年第6期49卷 1570-1578页

作者：刘莹王文丽张国鑫林娜朱春燕中国中医科学院中药研究所北京100700

明确双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)与普瑞巴林(pregabalin,PGB)联用对小鼠神经病理性疼痛(neuropathic pain,NP)的干预作用,并探索其神经炎症调控的初步机制。以脊神经结扎法建立NP小鼠模型,假手术组暴露脊神经而不结扎。随机分... 详细信息

明确双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)与普瑞巴林(pregabalin,PGB)联用对小鼠神经病理性疼痛(neuropathic pain,NP)的干预作用,并探索其神经炎症调控的初步机制。以脊神经结扎法建立NP小鼠模型,假手术组暴露脊神经而不结扎。随机分为假手术组,模型组,PGB低、中、高剂量(PGB⁃L、PGB⁃M、PGB⁃H,22、45、91 mg·kg^(-1))组、DHA(16 mg·kg^(-1))组、DHA联合PGB低剂量、中剂量、高剂量(DHA+PGB⁃L、DHA+PGB⁃M、DHA+PGB⁃H)组。造模第1~18天灌胃给药。以Von Frey法检测小鼠机械痛阈值,冷板法检测冷痛敏,悬尾及强迫游泳实验检测抑郁行为,旷场实验检测焦虑行为,Morris水迷宫检测认知功能。液相悬浮芯片技术对免疫炎症相关因子进行定量分析,免疫荧光检测CC趋化因子配体3(CCL3)、跨膜蛋白119(TMEM119)表达。结果显示,与假手术组比较,模型组小鼠机械痛及冷痛敏阈值显著降低;悬尾实验、强迫游泳停止挣扎时间显著增加;旷场实验在中心区域活动时间显著减少;Morris水迷宫在第二/四象限的停留时间显著多于其余象限,撤台后上台潜伏期显著增加,免疫荧光TMEM119阳性细胞数量显著增多,胞体面积显著增大,CCL3表达显著增加。与模型组比较,DHA+PGB⁃M组机械痛、冷痛敏阈值显著增加,悬尾、强迫游泳停止挣扎时间显著增加,旷场实验在中心区域活动时间显著减少,Morris水迷宫在第二/四象限的停留时间显著少于其余象限,撤台后上台潜伏期显著减少。与PGB⁃M组比较,DHA+PGB⁃M组D14⁃17机械痛阈值显著增加,强迫游泳停止挣扎时间显著增加,Morris水迷宫在第二/四象限的停留时间显著少于其余象限。与模型组比较,DHA+PGB⁃M组TMEM119阳性细胞数量明显减少,胞体面积明显减小,CCL3表达明显降低。该研究表明,DHA⁃PGB联用可以增强PGB对NP小鼠的镇痛效果,突破PGB耐受性的局限,弥补PGB在抗抑郁、改善认知方面的不足,相关机制可能与抑制小胶质细胞活化及CCL3表达调控神经炎症有关。

关键词：双氢青蒿素普瑞巴林联合用药神经病理性疼痛神经炎症

瑞香狼毒通过Nrf2抗三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞多药耐药的研究

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中国中药杂志 2024年第8期49卷 2222-2229页

作者：曾蕊王晓萱崔羲和杨庆朱晓新王娅杰中国中医科学院中药研究所北京100700

该研究将探讨瑞香狼毒提取物(SCL)抑制乳腺癌多药耐药的作用及机制。实验以人三阴性乳腺癌细胞亲本株MDA-MB-231,及其阿霉素耐药细胞株MDA-MB-231/ADR为研究对象,通过噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力;DAPI染色和Annexin-V/Pi凋亡双染检测细... 详细信息

该研究将探讨瑞香狼毒提取物(SCL)抑制乳腺癌多药耐药的作用及机制。实验以人三阴性乳腺癌细胞亲本株MDA-MB-231,及其阿霉素耐药细胞株MDA-MB-231/ADR为研究对象,通过噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力;DAPI染色和Annexin-V/Pi凋亡双染检测细胞凋亡,Western blot(WB)检测Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱天冬酶(caspase)-9、caspase-3的表达水平,免疫荧光染色观察Nrf2细胞内分布,流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)水平。实验结果显示SCL的耐药因子是0.69,对应地,阿霉素和紫杉醇的耐药因子分别是8.40、16.36;DAPI染色结果显示SCL能够导致乳腺癌细胞核皱缩、碎裂;Annexin-V/Pi凋亡双染显示,在中、高剂量SCL的作用下,耐药细胞的平均凋亡率分别为32.64%、50.29%;WB检测结果提示:SCL能够明显降低抗凋亡蛋白Bcl-2、caspase-9和caspase-3表达水平,明显升高促凋亡蛋白Bax表达水平,进一步研究发现,SCL能够显著促进Keap1的表达,并明显抑制Nrf2和HO-1的表达,同时能够明显减少Nrf2的入核表达水平;相应地,流式检测细胞内ROS水平明显升高。综上所述,瑞香狼毒能够显著抑制三阴性乳腺癌MDA-MB-231多药耐药细胞的增殖,引起细胞凋亡,其机制与抑制Keap1/Nrf2信号通路,导致耐药细胞内ROS累积,并增加凋亡相关蛋白的表达有关。

关键词：瑞香狼毒提取物乳腺癌多药耐药凋亡 Nrf2 抗氧化

芪芎药对干预缺血性脑卒中网络调控作用特征及配伍功效分析

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中国中药杂志 2024年第9期49卷 2326-2335页

作者：李卓航戚明珠黄荷兰苏晓慧孔祥英中国中医科学院中药研究所北京100700

基于“药对-疾病”关联网络,探索黄芪-川芎(芪芎)药对改善气虚血瘀治疗缺血性脑卒中的作用特点及二者配伍机制。通过中药系统药理分析数据库(TCMSP)、SwissTargetPrediction数据库筛选芪芎药对的有效成分并预测候选靶标;检索人类基因(Ge... 详细信息

基于“药对-疾病”关联网络,探索黄芪-川芎(芪芎)药对改善气虚血瘀治疗缺血性脑卒中的作用特点及二者配伍机制。通过中药系统药理分析数据库(TCMSP)、SwissTargetPrediction数据库筛选芪芎药对的有效成分并预测候选靶标;检索人类基因(GeneCards)、DrugBank、在线人类孟德尔遗传(OMIM)及药物靶标(TTD)等数据库获取缺血性脑卒中的相关基因靶标;通过STRING与Cytoscape 3.9.1软件利用病证相关基因和药对候选靶标的相互作用信息构建蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络,根据网络拓扑特征值筛选核心靶点;并基于Metascape平台和DAVID数据库整合生物分子相互作用信息,进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析及生物功能挖掘,进一步探索芪芎药对作用机制及配伍特点。结果显示,候选生物学过程主要涉及免疫调节、血液循环调控、神经递质调控、氧化应激调节等功能模块,富集于血脂与动脉粥样硬化、钙信号通路和血小板活化等通路。且黄芪和川芎作用特点各有侧重,黄芪主要维持机体免疫平衡和生长因子调控反应,川芎则重在改善循环系统并参与激素代谢功能,提示芪芎药对多靶点、多途径协同治疗缺血性脑卒中的配伍机制。进一步通过实验验证,发现芪芎药对可显著下调关键靶点TLR4、NF-κB、IL-1β、F2R、PLCβ1和MYLK的表达。该研究初步揭示芪芎药对可能通过矫正免疫失调、血液循环障碍及炎症反应以发挥活血行血、益气清络的精气血三补功效,进而为其后续改善气虚血瘀治疗缺血性脑卒中的临床研究提供了支持,也为中药“相须”七情配伍的现代生物学内涵解析提供新思路。

关键词：黄芪-川芎药对缺血性脑卒中网络药理学

曼陀罗内生真菌Fusarium solani MBM-5活性次级代谢产物研究

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中国中药杂志 2024年第10期49卷 2722-2727页

作者：王晓晴刘博王子墨赵司南翁小刚郭诗韵孙奕中国中医科学院中药研究所北京100700

该文对木本曼陀罗内生真菌Fusarium solani MBM-5(茄腐皮镰刀菌)的次级代谢产物进行了化学及生物活性研究。运用多种色谱方法(如开放ODS柱色谱、硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱及半制备型HPLC等),从F.solani MBM-5培养物的乙酸... 详细信息

该文对木本曼陀罗内生真菌Fusarium solani MBM-5(茄腐皮镰刀菌)的次级代谢产物进行了化学及生物活性研究。运用多种色谱方法(如开放ODS柱色谱、硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱及半制备型HPLC等),从F.solani MBM-5培养物的乙酸乙酯萃取物中共分离得到6个烯酸类化合物,包括1个新化合物和5个已知化合物。利用化合物的理化常数和波谱学(UV、IR、NMR、HR-ESI-MS等)方法及Mosher′s反应,鉴定了化合物结构,分别为fusaridioic acid E (1)、fusaridioic acid C (2)、fusaridioic acid A (3)、L660282 (4)、hymeglusin (5)、hymeglnone (6),其中化合物1为新化合物。采用MTT法和Griss法,分别评价了所有化合物对2种肿瘤细胞的生长抑制作用,以及对脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞RAW264.7释放NO的影响及其抗炎作用。实验结果表明,化合物5对A549和HepG2细胞株具有较强的生长抑制活性(IC_(50)分别为4.70、13.57μmol·L^(-1)),并且化合物1和6可显著抑制LPS诱导RAW264.7细胞的NO释放量,其IC_(50)分别为77.00、70.33μmol·L^(-1)。

关键词：木本曼陀罗内生真菌茄腐皮镰刀菌MBM-5 烯酸类化合物生物活性评价

川芎嗪激活Nrf2/HO-1/CXCR4通路调控神经干细胞迁移干预缺血再灌注大鼠的作用机制

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中国中药杂志 2024年第9期49卷 2308-2315页

作者：李卓航王栋王艳秋戚明珠黄荷兰林娜苏晓慧孔祥英中国中医科学院中药研究所北京100700

以核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)/血红素加氧酶1(heme oxygenase 1,HO-1)/趋化因子C-X-C-基元受体4(C-X-C motif chemokine receptor 4,CXCR4)通路为切入点,探讨川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)干预大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型大鼠脑内神经干细胞(neural stem cells,NSCs)迁移的作用机制。SD大鼠分为假手术组、模型组、TMP 20 mg·kg^(-1)组和TMP 40 mg·kg^(-1)组;通过神经功能缺失评分评价神经功能损伤;免疫荧光法检测脑组织5-溴脱氧尿苷(5-bromodeoxyuridine,BrdU)/双皮质素(doublecortin,DCX)双标细胞;观察TMP对C17.2细胞迁移的影响;蛋白免疫印迹法检测脑组织和C17.2细胞中Nrf2、HO-1、p62、醌氧化还原酶1[NAD(P)H quinone oxidoreductase 1,NQO1]、基质细胞衍生因子1(stromal cell-derived factor 1,SDF-1)、CXCR4蛋白表达。结果显示,大鼠脑缺血7、21 d后,神经功能损伤评分及BrdU+/DCX+细胞显著升高,脑组织中Nrf2及CXCR4表达均显著升高;与模型组相比,TMP 40 mg·kg-1可显著降低神经功能评分,进一步升高BrdU+/DCX+细胞数量及Nrf2、CXCR4及SDF-1表达;此外TMP可以显著促进C17.2细胞迁移,且时间以及剂量依赖性提高p62、Nrf2、HO-1、NQO1表达,TMP 50μg·mL^(-1)给药12 h表达量最高(P研究为TMP在缺血性脑卒中疾病中的应用提供了实验支持。

关键词：大脑中动脉阻塞川芎嗪神经干细胞迁移 Nrf2/HO-1/CXCR4通路

鸡血藤乙酸乙酯提取物对NK细胞免疫杀伤功能的影响

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中国中药杂志 2024年第5期49卷 1335-1342页

作者：杨丽娜张阳杜欣珂刘丽张径杨庆孙立东朱晓新李琦中国中医科学院中药研究所北京100700

探讨鸡血藤乙酸乙酯提取物(Spatholobi Caulis extract from ethyl acetate,SEA)在生理状态下对自然杀伤(natural killer,NK)细胞的免疫调节作用及其潜在机制。利用C57BL/6J小鼠及NK-92细胞系为研究对象,设置空白组(NC)、给药组(SEA)的... 详细信息

探讨鸡血藤乙酸乙酯提取物(Spatholobi Caulis extract from ethyl acetate,SEA)在生理状态下对自然杀伤(natural killer,NK)细胞的免疫调节作用及其潜在机制。利用C57BL/6J小鼠及NK-92细胞系为研究对象,设置空白组(NC)、给药组(SEA)的动物实验分组及0、25、50、100μg·mL^(-1)SEA给药浓度的细胞实验分组。实验过程中及结束后获取小鼠体质量及免疫器官指数并进行差异分析;应用LDH法检测SEA对NK-92细胞的毒性及小鼠NK细胞对其靶细胞YAC-1的杀伤活性;应用CCK-8法检测SEA对NK-92细胞增殖的影响;应用流式细胞术检测小鼠外周血中NK细胞数目及NK细胞膜表面自然杀伤细胞2族成员A和D(natural killer group 2 member A、D,NKG2A、NKG2D)的表达;应用ELISA法检测小鼠血清中干扰素γ(interferon gamma,IFN-γ)分泌的改变;应用半定量PCR法检测小鼠脾细胞中NKG2A、NKG2D、IFN-γmRNA的表达;应用Western blot法对磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/细胞外调节蛋白激酶1(extracellular regulated protein kinases 1,ERK1)信号通路进行SEA药效机制的初步分析。实验结果证实,SEA对机体无明显毒副影响,可以显著增加小鼠体内NK细胞的数目及NK-92细胞对YAC-1的杀伤功能,可以抑制NKG2A受体表达并增强NKG2D受体表达,加强IFN-γ的分泌,加强PI3K/ERK信号通路蛋白表达。该研究结果提示,SEA具备增强NK细胞免疫识别杀伤功能,这一药效可能与增加NK细胞数目、重塑功能性受体表达稳态,调动PI3K/ERK信号通路并增强IFN-γ的分泌有关。

关键词：鸡血藤自然杀伤(NK)细胞 NKG2D NKG2A IFN-γ

川芎嗪联合神经干细胞移植干预脑缺血再灌注大鼠的作用机制研究

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中国中药杂志 2024年第9期49卷 2316-2325页

作者：戚明珠王艳秋王栋李卓航黄荷兰林娜苏晓慧孔祥英中国中医科学院中药研究所北京100700

该文旨在研究川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)联合神经干细胞(neural stem cells,NSCs)移植对大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型大鼠的干预作用,并基于干细胞生物学行为调控探讨TMP联合NSCs移植对缺血性脑卒中的作用机制。将MCAO大鼠按神经功能评分随机分为模型组、TMP组、神经干细胞移植(NSCs)组和TMP联合神经干细胞移植(TMP+NSCs)组,同时设立假手术组。以神经功能评分来评价TMP联合NSCs移植对MCAO大鼠神经功能的改善情况;分别以BrdU、BrdU/DCX、BrdU/NeuN和BrdU/GFAP免疫荧光标记法评价NSCs的增殖、迁移、分化情况;蛋白免疫印迹检测基质细胞衍生因子1(SDF-1)、趋化因子C-X-C-基元受体4(CXCR4)的蛋白表达及氧化应激通路核因子E2相关因子2(Nrf2)、胞浆蛋白伴侣分子1(KEAP1)、血红素加氧酶1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO1)的蛋白表达,研究TMP联合NSCs发生迁移的作用机制。结果发现,TMP联合NSCs移植可以显著改善MCAO大鼠神经功能评分;免疫荧光染色结果显示TMP组、NSCs组、TMP+NSCs组的BrdU^(+)、BrdU^(+)/DCX^(+)、BrdU^(+)/NeuN^(+)、BrdU^(+)/GFAP^(+)细胞数均明显升高,且以联合治疗组最明显;进一步的蛋白免疫印迹结果分析发现TMP组、NSCs组、TMP+NSCs组的CXCR4蛋白表达均显著升高,Nrf2、HO-1、NQO1的蛋白表达上调,KEAP1蛋白表达降低。该研究表明TMP以及NSCs移植均可促进NSCs增殖、迁移和分化,进而促进神经功能恢复,两者联合作用更佳,其作用机制可能与激活Nrf2/HO-1/CXCR4通路有关。

关键词：川芎嗪神经干细胞移植氧化应激迁移

雷公藤甲素对Ⅱ型胶原诱导性关节炎雌性大鼠生殖毒性的影响

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中国中药杂志 2024年第11期49卷 3061-3069页

作者：樊媛芳苏晓慧徐颖孔祥英刘立玲田雅格林娜中国中医科学院中药研究所北京100700

为研究雷公藤甲素(triptolide, TP)对Ⅱ型胶原诱导性关节炎(collagen induced arthritis, CIA)雌性大鼠生殖系统的毒性作用及机制,将50只SD大鼠随机分为正常组(Con),模型组(CIA),雷公藤片临床等效剂量0.5、1、2倍组(含雷公藤甲素3.75、... 详细信息

为研究雷公藤甲素(triptolide, TP)对Ⅱ型胶原诱导性关节炎(collagen induced arthritis, CIA)雌性大鼠生殖系统的毒性作用及机制,将50只SD大鼠随机分为正常组(Con),模型组(CIA),雷公藤片临床等效剂量0.5、1、2倍组(含雷公藤甲素3.75、7.5、15μg·kg^(-1)·d^(-1)),每组10只,首次免疫后当日开始灌胃给药,每天1次,给药42 d。分别于第21、42天取材,计算子宫和卵巢脏器指数;显微镜下观察子宫和卵巢组织病理形态学变化;ELISA法检测卵巢组织匀浆中雌二醇(estradiol, E_(2))及细胞色素P450A1(aromatase, CYP19A1)水平;免疫组织化学法检测卵巢组织中通路相关蛋白转化生长因子β3(transforming growth factor β3, TGFβ3)、细胞信号传导分子3(mothers against decapentaplegic homolog 3, Smad3)及肾上腺核受体1(steroidogenic factor-1, SF-1)表达水平。并在体外建立中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary, CHO)细胞系,经TP给药(30、60、120 nmol·L^(-1))24 h后MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测细胞中TGFβ3、Smad3及SF-1蛋白表达,并通过免疫荧光检测SF-1因子入核情况。结果表明,与模型组比较,TP各给药组在给药21、42 d子宫腺体数、总卵泡数、成熟卵泡数、黄体数均有降低趋势,但差异并无统计学意义,仅2倍TP在给药42 d时可显著增加闭锁卵泡数;TP 3.75μg·kg^(-1)·d^(-1)在给药21 d即可显著降低E_(2)水平,但对雌激素合成限速酶CYP19A1无显著影响,但可显著降低卵巢组织TGFβ3、Smad3因子表达,且无论给药21 d还是42 d,TP 7.5、15μg·kg^(-1)·d^(-1)均显著降低SF-1因子表达。TP可显著促进体外卵巢细胞凋亡,给药24 h后,凋亡主要集中在凋亡晚期;且60 nmol·L^(-1) TP即可显著降低TGFβ3、Smad3及SF-1蛋白表达,并呈剂量依赖性。综上所述,2倍以下临床等效剂量的TP灌胃21、42 d并未引起CIA大鼠子宫、卵巢组织明显的生殖损伤,仅在2倍临床等效剂量给药42 d时,闭锁卵泡数发生显著变化。TP通过抑制TGFβ3/Smad3/SF-1通路表达发挥体内生殖靶器官及体外卵巢细胞生殖毒性作用。

关键词：雷公藤甲素胶原诱导性关节炎雌性大鼠卵巢功能毒性毒性机制