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UPLC-QQQ-MS/MS同时测定黄花蒿中7个青蒿素类相关化合物的含量

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中国中药杂志 2024年第5期49卷 1260-1265页

作者：王梦月万会花向丽蒲雨婷尹青岗高冉冉师玉华邬兰中国中医科学院、中药研究所、青蒿素研究中心、中药鉴定与安全性评估北京市重点实验室北京100700

同时检测黄花蒿Artemisia annua中多个化合物,以对黄花蒿的品质进行多角度评价。建立超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱(UPLC-QQQ-MS/MS)同时检测黄花蒿中紫穗槐-4,11-二烯、青蒿醛、双氢青蒿酸、青蒿酸、青蒿素B、青蒿烯和青蒿素7个... 详细信息

同时检测黄花蒿Artemisia annua中多个化合物,以对黄花蒿的品质进行多角度评价。建立超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱(UPLC-QQQ-MS/MS)同时检测黄花蒿中紫穗槐-4,11-二烯、青蒿醛、双氢青蒿酸、青蒿酸、青蒿素B、青蒿烯和青蒿素7个青蒿素类相关化合物的方法,并对黄花蒿不同组织部位(根、茎、叶和侧枝)中这7个化合物含量进行差异比较,检测其在黄花蒿中的累积情况。采集生长盛期4月龄黄花蒿的根、茎、叶和侧枝,检测黄花蒿不同组织部位7个青蒿素类相关化合物的含量。采用UPLC-QQQ-MS/MS的多反应监测(MRM)采集模式,大气压力化学离子源(APCI)正离子模式,色谱柱为Eclipse Plus RRHD C_(18)(2.1 mm×50 mm,1.8μm),流动相为含甲酸(0.1%)-甲酸铵(5 mmol·L^(-1))水溶液(A)和甲醇(B),梯度洗脱(0~8 min,55%~100%B;8~11 min,100%B;平衡3 min)。流速0.6 mL·min^(-1),柱温40℃,进样量5μL,检测时间8 min。通过方法学考察,建立了基于UPLC-QQQ-MS/MS同时定量检测青蒿素生物合成途径中7个代表性化合物含量的方法。对黄花蒿根、茎、叶和侧枝的含量比较分析结果表明:黄花蒿中青蒿素含量高于青蒿素B,且青蒿素和双氢青蒿酸在黄花蒿各部位的含量相对较高;7个化合物在各部位的含量存在较大差异,均在叶片中最高,且青蒿烯和青蒿醛在根中未检测到。该研究建立了基于UPLC-QQQ-MS/MS同时检测青蒿素生物合成途径上7个代表性化合物的定量方法,准确、灵敏且高效,可用于黄花蒿中青蒿素类相关化合物的含量测定、新品种选育和中药材质量控制等。

关键词： UPLC-QQQ-MS/MS 黄花蒿青蒿素青蒿素B 多反应监测(MRM)

中药调控肠道菌群改善溃疡性结肠炎大肠湿热证的研究进展

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中国实验方剂学杂志 2024年第1期30卷 244-254页

作者：龙静怡梁爱华天津中医药大学中医学院天津301617 中国中医科学院中药研究所中药鉴定与安全性检测评估北京市重点实验室北京100700

结合溃疡性结肠炎(UC)主要证候大肠湿热证的相关临床变化及其机制,收集UC该证型各肠道菌群的变化规律,探索其变化机制。通过对大肠湿热证UC治疗手段的分类归纳,发现其中代表性的中药及复方,并探索其治病机制,因而与肠道菌群相关机制相结... 详细信息

结合溃疡性结肠炎(UC)主要证候大肠湿热证的相关临床变化及其机制,收集UC该证型各肠道菌群的变化规律,探索其变化机制。通过对大肠湿热证UC治疗手段的分类归纳,发现其中代表性的中药及复方,并探索其治病机制,因而与肠道菌群相关机制相结合,根据其相同的机制探索其可能的内在联系。从而发现中药及复方对大肠湿热证UC患者肠道菌群精准调控的可行性。整理知网大量相关文献发现,目前特征菌群嗜黏蛋白阿克曼菌、大肠埃希菌、肠球菌、双歧杆菌和乳酸杆菌等益生菌与中药在大肠湿热证UC中关系最为密切,但由于临床研究仍有诸多不足,肠道菌群受多方面影响,目前还不能精准刻画肠道菌群和疾病相关的变化,且中药调控肠道菌群相关机制研究也有欠缺,中药及复方对大肠湿热证UC患者肠道菌群精准调控的可行性仍然值得商榷。对于此,阐明大肠湿热证UC临床证候的生物学内涵及证候与肠道菌群的相互关系等科学问题成为首要研究任务,除此之外,还应重视机体中药的肠腔暴露谱与肠道菌群的相互作用研究。最后,中医思维与现代医学理念应互相结合,积极开展并推进制定中医药调控肠道菌群治疗UC策略的研究。

关键词：溃疡性结肠炎肠道菌群大肠湿热证综述中药调控

基于标准提取物的欧洲越橘提取物质量控制方法及药效活性关联研究

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中草药 2024年第8期55卷 2561-2570页

作者：李镇李俊安若凡孙伟岳中宝杨维贺瑞坤大理大学药学院云南大理671000 中国中医科学院中药研究所中药鉴定与安全性评估北京市重点实验室北京100007 汤臣倍健股份有限公司营养健康研究院广东广州510663

目的建立对照品非依赖性的20种花青素类成分定量分析方法,并利用该法对市售欧洲越橘Vaccinium myrtillus提取物进行质量控制,同时筛选出代表性抗氧化活性成分。方法以欧洲越橘标准对照提取物替代对照品,采用超高效液相色谱-三重四极杆... 详细信息

目的建立对照品非依赖性的20种花青素类成分定量分析方法,并利用该法对市售欧洲越橘Vaccinium myrtillus提取物进行质量控制,同时筛选出代表性抗氧化活性成分。方法以欧洲越橘标准对照提取物替代对照品,采用超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱(UPLC-QQQ-MS/MS)联用技术,建立一种针对20种花青素类成分的定量方法,并利用该法对10批市售欧洲越橘提取物中的花青素类成分含量进行研究。采用DPPH自由基清除法和总抗氧化能力测试法评价不同欧洲越橘提取物的抗氧化能力。结果方法学验证结果显示,20种花青素类成分线性良好,r为0.9994~1.0000,精密度RSD为0.05%~4.23%,稳定性RSD为0.29%~3.38%,平均加样回收率为98.1%~102.1%,RSD为0.50%~4.12%。样品分析结果显示,不同样品中部分花青素类成分含量存在显著差异,其中锦葵素变化最大,RSD为18.23%。欧洲越橘提取物具有较好的DPPH自由基清除能力和总抗氧化能力。其中矢车菊素与DPPH自由基率相关性为0.94,芍药素-3-O-半乳糖苷与总抗氧化活性相关性为0.93。二者有望作为欧洲越橘提取物清除DPPH自由基活性和总抗氧化活性的潜在质控成分。结论基于UPLC-QQQ-MS/MS所建立的对照品非依赖性的欧洲越橘提取物中20种花青素类成分定量分析方法,灵敏度高,准确性好,方法简单,适用于欧洲越橘提取物中20种花青素类成分的含量测定,为中药对照提取物替代单体对照品在中药质量控制中的应用提供了数据支撑,为中药材质量控制研究提供新的研究思路。

关键词：欧洲越橘对照提取物 UPLC-QQQ-MS/MS 抗氧化能力质量控制花青素矢车菊素-3-O-葡萄糖苷芍药素-3-O-葡萄糖苷飞燕草素3-O-半乳糖苷锦葵素矢车菊素芍药素-3-O-半乳糖苷

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整合药理学在中医药现代研究的若干进展

中国实验方剂学杂志 2024年第14期30卷 270-278页

作者：李珊珊李玮婕王萍中国中医科学院中药研究所北京100700

中药方剂作为临床治疗的主要形式和手段,是中医理法方药的关键环节,是中医学理论和临床实践的桥梁,探索中药方剂的化学物质实体和机体生命活动的关系及其复杂交互规律,是中药现代研究的关键科学问题之一。然因本身组成的复杂性、生物效... 详细信息

中药方剂作为临床治疗的主要形式和手段,是中医理法方药的关键环节,是中医学理论和临床实践的桥梁,探索中药方剂的化学物质实体和机体生命活动的关系及其复杂交互规律,是中药现代研究的关键科学问题之一。然因本身组成的复杂性、生物效应表达的多样性,使其“化学成分群-体内过程-药效活性”之间缺乏“完整的证据链”,存在严重的“碎片化”现象。整合药理学的提出,是中药复杂系统分子作用解析的有效策略和方法,特别体现了以生物技术革命为代表的第四次浪潮的时代背景下,利用互联网、大数据、人工智能为代表的新技术驱动中药复杂体系发展的新趋势,为系统揭示多成分药物与机体相互作用及其整合规律和作用原理提供了一条切实可行的途径。该文试从中药整合药理学的形成和发展、研究思路、关键技术及应用等方面进行综述,为阐释中医药理论的科学内涵和中医原创思维的科学价值、总结与传承名医经验、中药质量控制、中药作用原理阐释和中药新药研发等提供强有力支持。

关键词：整合药理学中药方剂证候生物内涵安全性和有效性质量控制药效物质基础

黄体酮撤退加情志刺激诱导型经前期综合征大鼠模型的建立与评价

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中国中药杂志 2024年第13期49卷 3608-3618页

作者：陈可点高双荣刘雪婷林娜张彦琼中国中医科学院中药研究所北京100700

经前期综合征(PMS)缺乏与中西医临床诊疗标准吻合度高、可行性好且表现稳定的动物模型,导致其发病机制、药效药理的相关研究缺乏可靠的实验载体。该研究旨在从“病-证-症”关联视角,系统解析PMS的生物内涵,在此基础上建立黄体酮撤退与... 详细信息

经前期综合征(PMS)缺乏与中西医临床诊疗标准吻合度高、可行性好且表现稳定的动物模型,导致其发病机制、药效药理的相关研究缺乏可靠的实验载体。该研究旨在从“病-证-症”关联视角,系统解析PMS的生物内涵,在此基础上建立黄体酮撤退与情志刺激结合诱导型PMS动物模型,并对其进行客观评价。首先通过GeneCards、DisGeNET、MalaCards和中医证候本体及多维定量关联计算平台(SoFDA)数据库与已发表文献,收集PMS现代医学与中医诊疗标准中肝郁气滞与气滞血瘀证型相关的临床症状基因集,并依据基因间相互作用信息,建立PMS的“病-证-症”关联网络。基于数据挖掘结果,在经典黄体酮撤退模型基础上,结合慢性束缚刺激,模拟临床发病过程中由外部环境刺激引起的情绪抑郁,从生理与情志2个维度引起病理损伤,制备PMS大鼠模型,评价2种造模条件下的模型在旷场实验得分,脏器指数,卵巢病理变化,血清雌二醇(E_2)、促卵泡激素/促黄体生成素(FSH/LH)、5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NE)水平及凝血四项、血流变指标。通过计算“病-证-症”关联网络节点在网络中的度值、介度和接近度,筛选出163个具有网络拓扑重要性的核心基因。进一步的生物功能挖掘结果表明,PMS核心基因主要参与“神经-内分泌-免疫”系统与血液循环障碍相关通路的调控;临床表型症状基因集映射分析提示,PMS核心基因与抑郁症状及血瘀所致肿痛症状显著相关。与单纯的黄体酮撤退模型相比,注射与束缚双重刺激的大鼠在旷场实验水平得分与总分,卵巢组织病理变化,血清神经递质5-HT与DA水平,血清性激素E_2与FSH/LH水平的异常改变均更为显著,且注射加束缚条件加剧了模型大鼠血液流变性、凝血功能和红细胞形态的病理改变,证实了该大鼠模型能够表征PMS发生、进展中的“神经-内分泌-免疫”系统紊乱与血液循环系统障碍,与该疾病的中西医临床诊疗标准相符。黄体酮撤退与情志刺激结合诱导型PMS大鼠模型的建立能够为PMS发病机制的阐释、治疗药物的发现与药效评价提供可靠的实验载体,也为客观化反映PMS中西医临床表征与精准治疗提供参考。

关键词：经前期综合征 “病-证-症”关联黄体酮慢性束缚应激抑郁血瘀

红花逍遥片的化学成分谱鉴定及其干预经前期综合征“病-证-症-方”关联的功效内涵解析

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药学学报 2024年第5期59卷 1245-1260页

作者：陈可点陈文佳刘雪婷林娜张彦琼中国中医科学院中药研究所北京100700

鉴定红花逍遥片的化学成分谱,从“病-证-症-方”关联角度,探索该中成药品种治疗经前期综合征(premenstrual syndrome,PMS)肝郁气滞血瘀证的作用特点与生物学内涵。采用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q Exactive O... 详细信息

鉴定红花逍遥片的化学成分谱,从“病-证-症-方”关联角度,探索该中成药品种治疗经前期综合征(premenstrual syndrome,PMS)肝郁气滞血瘀证的作用特点与生物学内涵。采用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q Exactive Orbitrap HRMS)鉴定红花逍遥片的化学成分谱;依据组方原理将其划分为疏肝解郁组、活血调经组和益气健脾组,通过Pharmmapper数据库与中医药整合药理学研究平台(TCMIP v2.0)收集红花逍遥片各功效组所含中药的候选靶标信息;通过中医证候本体及多维定量关联计算平台(SoFDA)数据库、GeneCards、DisGeNET、MalaCards和已发表文献,收集PMS现代医学的临床症状、中医诊疗标准及其临床症状的相关基因集;依据基因间相互作用信息,建立“红花逍遥片候选靶标-PMS肝郁气滞血瘀证相关基因”互作网络,通过计算网络拓扑特征值,筛选核心网络靶标,并基于Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG)数据库开展功能挖掘,进一步探索红花逍遥片组方中各功效组在干预PMS中的优势药效环节,并加以动物实验验证。红花逍遥片中共鉴定获得109个化学成分,其中疏肝解郁组含20个化学成分,主要作用于神经系统、雌激素调节与“免疫-炎症”相关通路而发挥疏肝功效;活血调经组含77个化学成分,主要作用于血液循环系统、“免疫-炎症”与雌激素调节相关通路而发挥补血和气、养血柔肝的功效;益气健脾组含30个化学成分,通过调节“免疫-炎症”、消化系统与激素水平而发挥扶正益气、利水渗湿的功效。疾病靶组织生化指标检测结果表明,与溶剂对照组相比,PMS模型大鼠下丘脑组织中的5-HT与DA水平下降,子宫组织中E2、NO、VEGF、RLN水平下降,OT、PROG、IL-6、IL-1β、TNF-α、ET-1水平上升,红花逍遥片给药后能够缓解或逆转PMS大鼠的上述病理改变,表明红花逍遥片能够通过调节雌激素合成与分泌、干预神经递质合成与信号传导、矫正“免疫-炎症”失衡和调节消化系统功能,发挥其舒肝、理气、活血、健脾的综合功效,有助于改善PMS肝郁气滞血瘀证中机体“神经-内分泌-免疫”系统与血液循环紊乱,为明确红花逍遥片治疗PMS肝郁气滞血瘀证的优势药效环节和探索其作用机制提供参考。本实验获得中国中医科学院中药研究所动物伦理委员会批准(批准号:2023B248)。

关键词：红花逍遥片经前期综合征 “病-证-症-方”关联网络 UHPLC-Q Exactive Orbitrap HRMS 肝郁气滞血瘀

蛋白质修饰组学——中药作用机制研究的新途径

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中国实验方剂学杂志 2024年第17期30卷 211-219页

作者：王砺寒侯静怡张晶晶杨洪军中国中医科学院医学实验中心中医药防治重大疾病基础研究北京市重点实验室中国中医科学院中药研究所

中医药作为我国宝贵的科学遗产与文化瑰宝，承载着中华民族数千年智慧的结晶，其深厚的医学理论和丰富的实践经验在我国卫生保健事业中占据着不可替代的核心地位。面对现代医学挑战与健康需求，深入探究中药作用机制显得尤为迫切和必要... 详细信息

中医药作为我国宝贵的科学遗产与文化瑰宝，承载着中华民族数千年智慧的结晶，其深厚的医学理论和丰富的实践经验在我国卫生保健事业中占据着不可替代的核心地位。面对现代医学挑战与健康需求，深入探究中药作用机制显得尤为迫切和必要。蛋白质翻译后修饰（Post-translational modification，PTM），作为调控蛋白质功能复杂性和多样性的核心机制，是连接内外环境刺激与机体内在生理反应的关键桥梁。同时，不同类型PTM之间可相互作用形成复杂的调控网络，符合中药多成分、多靶点的作用特点。尽管蛋白质修饰组学作为探究PTM的有效工具，近些年已经被应用于一些中药作用机制研究，但总体而言，这一领域的研究在中药学领域尚处于初步发展阶段。为此，本文首先概述了PTM的基础理论和蛋白质修饰组学的基本研究流程，继而系统回顾了蛋白质修饰组学在中药作用机制研究领域的应用现状，并针对现存研究局限性进行了深入剖析。本文旨在探寻一种基于PTM视角解析中药作用机制的创新研究范式，为未来深化理解中药作用机理提供理论依据与实践指导。

关键词：蛋白质翻译后修饰蛋白质修饰组学中药研究策略复杂作用机制解析

急性脑梗死瘀毒互结证大鼠模型并发脑心综合征的比较探讨

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中国实验方剂学杂志 2024年第1期30卷 112-119页

作者：姚明江李珺媛刘悦曹策袁果李磊刘建勋张允岭中国中医科学院西苑医院基础医学研究所中药药理北京市重点实验室北京100091 中国中医科学院西苑医院北京100091

目的:观察并比较两种急性脑梗死瘀毒互结证并发脑心综合征病证结合大鼠模型心电图指标、心肌形态及缝隙连接蛋白43(Cx43)蛋白表达的变化情况,为急性脑梗死引发心脏病变的可能发生机制及临床脑心综合征的诊治提供实验依据。方法:SPF级雄... 详细信息

目的:观察并比较两种急性脑梗死瘀毒互结证并发脑心综合征病证结合大鼠模型心电图指标、心肌形态及缝隙连接蛋白43(Cx43)蛋白表达的变化情况,为急性脑梗死引发心脏病变的可能发生机制及临床脑心综合征的诊治提供实验依据。方法:SPF级雄性SD大鼠60只随机分为6组,每组10只,包括正常组、角叉菜胶联合干酵母菌瘀毒互结证组(CA/Y),多发性脑梗死组(ME),大脑中动脉阻塞组(MCAO),多发性脑梗死瘀毒互结证组(CA/Y+ME)及大脑中动脉阻塞瘀毒互结证组(CA/Y+MCAO)。CA/Y组、CA/Y+ME组及CA/Y+MCAO组于造模首日经腹腔注射角叉菜胶10 mg·kg^(-1)、第2天背部皮下注射干酵母悬液2 mg·kg^(-1),ME组及CA/Y+ME组于第2天采用微球栓塞法建立多发性脑梗死模型,MCAO组及CA/Y+MCAO组于第2天采用线栓法建立大脑中动脉阻塞模型。脑梗死模型术后24 h,观察并分析各组大鼠心电图异常率及相关心电图指标,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色观察并分析各组大鼠脑缺血面积百分率,苏木素-伊红(HE)染色观察各组大鼠心肌组织病理变化,免疫组化及蛋白免疫印迹法观察大鼠心肌Cx43蛋白表达。结果:与正常组及证候模型组比较,各模型组内均有一定数量大鼠存在心电图异常的表现,CA/Y+MCAO组心电图异常比率最高(P性脑梗死瘀毒互结证并发脑心综合征大鼠模型均可用于研究急性脑血管病引发心脏病变的可能发生机制及化瘀解毒中药的干预作用,此外,CA/Y+MCAO法具有更高的心电图异常率,心肌病理损伤程度及Cx43蛋白表达水平上调也更为显著,可根据具体实验目的进行选择应用。

关键词：急性脑梗死瘀毒互结证脑心综合征缝隙连接蛋白43 模型评价

前动力蛋白受体2在心脑血管及神经退行性疾病治疗中的研究进展

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中国药理学通报 2024年第8期40卷 1401-1407页

作者：李峰付建华张路姚明江中国中医科学院西苑医院基础医学研究所中药药理北京市重点实验室中国中医科学院西苑医院针灸科北京100091

心脑血管及神经退行性疾病是好发于中老年人群的常见疾病,具有较高的致残率和病死率,严重威胁着人类健康。前动力蛋白受体2(prokineticin 2,PK2)是新发现的一种分泌性蛋白,通过与其受体(prokineticin receptor,PKR)1或2结合,在许多生理... 详细信息

心脑血管及神经退行性疾病是好发于中老年人群的常见疾病,具有较高的致残率和病死率,严重威胁着人类健康。前动力蛋白受体2(prokineticin 2,PK2)是新发现的一种分泌性蛋白,通过与其受体(prokineticin receptor,PKR)1或2结合,在许多生理病理过程中发挥着重要的作用。与PK2/PKRs相关的众多研究显示,该信号通路在心脑血管及神经退行性疾病的发生发展过程中扮演着十分重要的角色,通过研究探讨它们之间的联系,PK2/PKRs将可能成为临床上治疗该类疾病的新靶点。

关键词：前动力蛋白受体心血管疾病脑血管疾病神经退行性疾病作用机制