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2型腺相关病毒转导人骨髓CD34^+细胞与间充质干细胞

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中南大学学报（医学版） 2006年第1期31卷 19-23页

作者：孙小娟王峰谭孟群卢光琇中南大学湘雅医学院生理系血液生理研究室长沙410078 中南大学湘雅医学院人类生殖工程研究室长沙410078

目的:探讨2型重组腺相关病毒(AAV2)载体能否有效转导人骨髓CD34+细胞与间充质干细胞。方法:构建、包装、纯化携带绿色荧光蛋白基因的2型重组腺相关病毒(rAAV22/GFP),转染骨髓CD34+造血干/祖细胞和间充质干细胞,转导后48 h在荧光显微镜... 详细信息

目的:探讨2型重组腺相关病毒(AAV2)载体能否有效转导人骨髓CD34+细胞与间充质干细胞。方法:构建、包装、纯化携带绿色荧光蛋白基因的2型重组腺相关病毒(rAAV22/GFP),转染骨髓CD34+造血干/祖细胞和间充质干细胞,转导后48 h在荧光显微镜下观察GFP的表达,并比较羟基脲(HU)处理前后rAAV2/GFP对CD34+细胞的转染效率。结果:rAAV2/GFP对CD34+细胞的转染效率为5.3%±1.7%。经羟基脲预处理后达13.2%±2.8%,rAAV2/GFP对间充质干细胞的转染效率为23%±3.6%。结论:rAAV2对间充质干细胞的转染效率高于骨髓CD34+细胞,羟基脲预处理可以明显提高rAAV2对CD34+细胞的转染效率。

关键词： 2型重组腺相关病毒造血干/祖细胞间充质干细胞绿色荧光蛋白羟基脲基因转导

骨髓内皮细胞条件培养液对巨核系细胞体外增殖的影响

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中南大学学报（医学版） 2004年第4期29卷 386-388页

作者：黄艳红王绮如中南大学湘雅医学院血液生理研究室长沙410078

目的 :探讨骨髓内皮细胞条件培养液 (E CM)对巨核系细胞体外增殖的调节作用。方法 :分离纯化骨髓内皮细胞和骨髓成纤维细胞 ,分别收集其无血清条件培养液 ,比较两种无血清条件培养液对体外扩增成熟巨核细胞和巨核系祖细胞的作用。结果 :... 详细信息

目的 :探讨骨髓内皮细胞条件培养液 (E CM)对巨核系细胞体外增殖的调节作用。方法 :分离纯化骨髓内皮细胞和骨髓成纤维细胞 ,分别收集其无血清条件培养液 ,比较两种无血清条件培养液对体外扩增成熟巨核细胞和巨核系祖细胞的作用。结果 :E CM和骨髓成纤维细胞条件培养液 (F CM )对成熟巨核细胞及巨核系祖细胞有体外扩增作用 ;E CM对巨核系祖细胞的扩增作用明显优于F CM (P 系细胞。

关键词：条件培养液巨核系祖细胞体外扩增体外增殖骨髓内皮细胞巨核细胞成纤维细胞分离纯化成熟

小鼠骨髓内皮细胞条件培养液支持卵黄囊造血干/祖细胞的体外生长

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中国医学科学院学报 2002年第1期24卷 36-40页

作者：那晓东赵自平谭孟群谢祁阳王绮如中南大学湘雅医学院血液生理研究室长沙410078

目的观察小鼠骨髓内皮细胞条件培养液（ｍＢＭＥＣ－ＣＭ）对卵黄囊造血干／祖细胞体外生长的支持作用。方法取妊娠第８．５天的卵黄囊，经消化后获得卵黄囊细胞，取卵黄囊非贴壁细胞加入含１０％ｍＢＭＥＣ－ＣＭ和１０％ＦＢＳ的ＤＭ... 详细信息

目的观察小鼠骨髓内皮细胞条件培养液（ｍＢＭＥＣ－ＣＭ）对卵黄囊造血干／祖细胞体外生长的支持作用。方法取妊娠第８．５天的卵黄囊，经消化后获得卵黄囊细胞，取卵黄囊非贴壁细胞加入含１０％ｍＢＭＥＣ－ＣＭ和１０％ＦＢＳ的ＤＭＥＭ中培养２４ｈ后，收集细胞做半固体培养。结果ｍＢＭＥＣ－ＣＭ在液体培养体系中能扩增卵黄囊造血干／祖细胞使粒－巨噬系集落形成单位（ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ－ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ　ｃｏｌｏｎｙ　ｆｏｒｍｉｎｇ　ｕｎｉｔ，ＣＦＵ－ＧＭ）和高增殖潜能集落形成细胞（ｈｉｇｈ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ－ｃｏｌｏｎｙ　ｆｏｒｍｉｎｇ　ｃｅｌｌ，ＨＰＰ－ＣＦＣ）的产率增加，经２４ｈ液体培养后的ＣＦＵ－ＧＭ和ＨＰＰ－ＣＦＣ的数目分别为培养０ｈ对照组的１１９．５％和１３０．８％（Ｐ＜０．０５＝；ｍＢＭＥＣ－ＣＭ联合ｆｌｔ３配基（ｆｌｔ３ｌｉｇａｎｄ，ＦＬ）和血小板生成素（ｔｈｒｏｍｂｏｐｏｉｅｔｉｎ，ＴＰＯ）后，其扩增ＣＦＵ－ＧＭ和ＨＰＰ－ＣＦＣ的能力明显增强，ｍＢＭＥＣ－ＣＭ联合ＦＬ和ＴＰＯ经２４ｈ液体培养后的ＣＦＵ－ＧＭ和ＨＰＰ－ＣＦＣ的数目分别为培养０ｈ对照组的１３２．０％和１７６．９％?

关键词：骨髓内皮细胞胚胎发生造血调控小鼠造血干/祖细胞体外生长

骨髓基质细胞条件培养液联合TPO体外扩增巨核系细胞

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中国应用生理学杂志 2006年第1期22卷 97-98,128页

作者：黄艳红周小莹王绮如中南大学湘雅医学院血液生理研究室湖南长沙410078

目的:探讨骨髓成纤维细胞条件培养液(F-CM)和骨髓内皮细胞条件培养液(E-CM)分别联用TPO对巨核系细胞的体外扩增作用。方法:分别收集纯的F-CM和E-CM,观察它们分别与TPO联用后对体外扩增成熟巨核细胞和巨核系祖细胞的作用。结果:F-CM或E-C... 详细信息

目的:探讨骨髓成纤维细胞条件培养液(F-CM)和骨髓内皮细胞条件培养液(E-CM)分别联用TPO对巨核系细胞的体外扩增作用。方法:分别收集纯的F-CM和E-CM,观察它们分别与TPO联用后对体外扩增成熟巨核细胞和巨核系祖细胞的作用。结果:F-CM或E-CM与TPO联用后对巨核系成熟细胞的扩增作用明显优于F-CM或E-CM单用(P0.05)。结论:F-CM与TPO联用后可显著提高它们对成熟巨核细胞体外扩增的效率,其作用优于SCF+TPO+IL-3+IL-6;F-CM或E-CM与TPO联用后对巨核系祖细胞体外扩增作用与二者单用无显著差异。

关键词：基质细胞条件培养液 TPO 巨核细胞扩增

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生物化学与生物物理进展 2011年第9期38卷 830-841页

作者：栗炳南李志艳张娟刘珍清谭孟群中南大学湘雅医学院血液生理系长沙410078 深圳市湘雅生物医药研究院深圳518057

重组腺相关病毒载体(AAV)具有很多安全方面的特性,有利于其在动脉硬化方面的治疗研究.尽管如此,传统的介导单个基因的治疗效果并不是很理想,这都归因于动脉硬化疾病的发生是由于多种基因的缺陷而不是单单某一特定基因.为了克服这个问题... 详细信息

重组腺相关病毒载体(AAV)具有很多安全方面的特性,有利于其在动脉硬化方面的治疗研究.尽管如此,传统的介导单个基因的治疗效果并不是很理想,这都归因于动脉硬化疾病的发生是由于多种基因的缺陷而不是单单某一特定基因.为了克服这个问题,尝试了重组腺相关病毒载体介导的双基因对动脉硬化的治疗研究.实验大鼠分为动脉硬化模型鼠和正常饮食组(即正常对照组),动脉硬化组大鼠被随机分为3组,分别进行AAV-apoAⅠ/SR-BⅠ,AAV-apoAⅠ,与AAV-GFP尾静脉注射,同时正常饮食组尾静脉注射PBS作为对照.其中目的基因mRNA检测采用RT-PCR方法,蛋白质表达的检测采用Western blotting和ELISA.由饮食诱导的动脉硬化和高胆固醇的大鼠模型在尾静脉注射后8周进行冰冻切片的荧光检测.重组AAV载体显示出较强的表达活性.尾静脉注射治疗8周后,AAV-apoAⅠ/SR-BⅠ与AAV-apoAⅠ治疗组血浆总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇浓度与AAV-GFP治疗组相比有了明显下降(P研究思路.

关键词： 2型腺相关病毒载体载脂蛋白A I B族I型清道夫受体胆固醇逆向转运基因治疗

2-氨基甾体对慢性粒细胞白血病细胞系K562细胞增殖的抑制作用

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湖南医科大学学报 2002年第5期27卷 405-408页

作者：李琼何群中南大学湘雅医学院血液生理研究室长沙410078

目的 :观察 2 氨基甾体 (MPZ)对慢粒白血病细胞系K5 6 2细胞增殖的作用。方法 :采用形态观察、液体培养、集落培养及MTT实验检测MPZ对K5 6 2细胞增殖的影响 ,并观察其形态学变化。结果 :液体培养 6d后 ,10 - 8和10 - 5mol·L- 1 MPZ对K... 详细信息

目的 :观察 2 氨基甾体 (MPZ)对慢粒白血病细胞系K5 6 2细胞增殖的作用。方法 :采用形态观察、液体培养、集落培养及MTT实验检测MPZ对K5 6 2细胞增殖的影响 ,并观察其形态学变化。结果 :液体培养 6d后 ,10 - 8和10 - 5mol·L- 1 MPZ对K5 6 2细胞的抑制率分别为 4 6 %和 83%。集落培养 8d后 ,10 - 8和 10 - 5mol·L- 1 MPZ对K5 6 2细胞的抑制率分别为 5 2 %和 10 0 %。MTT实验检测表明 ,10 - 8和 10 - 5mol·L- 1 MPZ处理K5 6 2细胞 5d后其抑制率分别为2 9%和 88%。结论 :MPZ(10 - 8～ 10 - 5mol·L- 1 )能明显抑制K5 6 2细胞的增殖。

关键词：抑制作用 K562细胞系培养的细胞增殖 2-氨基甾体慢性粒细胞白血病

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胚胎干细胞形成拟胚体的几个影响因素

湖南医科大学学报 2003年第1期28卷 85-86页

作者：赵惠萍王绮如中南大学湘雅医学院血液生理研究室长沙410078

胚胎干细胞（embryonic stem cells, ES cells）来源于囊胚的内细胞团，在体外长期培养，能保持高度未分化状态~[1]。胚胎干细胞体外悬浮培养，可形成含内胚层、中胚层、外胚层的拟胚体（embryoid bodies, EBs）~[1,2]。应用EBs模拟体... 详细信息

胚胎干细胞（embryonic stem cells, ES cells）来源于囊胚的内细胞团，在体外长期培养，能保持高度未分化状态~[1]。胚胎干细胞体外悬浮培养，可形成含内胚层、中胚层、外胚层的拟胚体（embryoid bodies, EBs）~[1,2]。应用EBs模拟体内环境研究胚胎发育和定向诱导，首先要解决的问题是形成足量的EBs。本文以小鼠的胚胎干细胞系ES-D3为例，探讨有效形成EBs的几个影响因素。

关键词：胚胎干细胞拟胚体

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bFGF对造血基质细胞造血调节作用的影响

湖南医科大学学报 2003年第1期28卷 83-84页

作者：谭鹤长雷军蒋德昭王绮如中南大学湘雅医学院血液生理研究室长沙410078

造血基质细胞包括内皮细胞、成纤维细胞和巨噬细胞，它们分泌正性和负性造血调控因子调节造血~[1]。本室前期研究显示，内皮细胞条件培养液（ECM）对造血集落的生长无明显影响，但ECM的分子量＜10kD组分（＞10kD-ECM）对造血有刺激作... 详细信息

造血基质细胞包括内皮细胞、成纤维细胞和巨噬细胞，它们分泌正性和负性造血调控因子调节造血~[1]。本室前期研究显示，内皮细胞条件培养液（ECM）对造血集落的生长无明显影响，但ECM的分子量＜10kD组分（＞10kD-ECM）对造血有刺激作用，ECM的分子量＜10kD组分（＜10kD-ECM）对造血有抑制作用。成纤维细胞条件培养液（FCM）对造血有刺激作用~[2，3]。本实验的目的是观察和加入硷性成纤维细胞生长因子（bFGF）培养的内皮细胞、成纤维细胞及巨噬细胞的无血清条件培养液及其组分对粒-巨噬系造血集落形成的影响是否更强。收集加或不加bFGF培养的三种基质细胞的无血清条件培养液，再把它们分为原液、＞＜10kD组分和10kD组分，分别用这些条件培养液加入粒-巨噬系集落形成单位（CFU-GM）培养体系，观察三种基质细胞条件培养液原液、＞10kD组分和＜10kD组分以及经bFGF处理后的三种基质细胞条件培养液及其组分对CFU-GM培殖的影响。

关键词：碱性成纤维细胞生长因子造血基质细胞粒-巨噬系集落形成单位

粒-巨噬细胞集落刺激因子对小鼠骨髓内皮细胞增殖的促进作用

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中国实验血液学杂志 2007年第3期15卷 622-625页

作者：王峰王先酉王绮如周小莹谭孟群中南大学湘雅医学院生理学系血液生理研究室

本研究以内皮细胞培养液(Endo-M)培养小鼠骨髓内皮细胞,探讨粒-巨噬系集落刺激因子(rmGM-CSF)对骨髓内皮细胞增殖的影响。用Endo-M培养小鼠骨髓内皮细胞,通过Wright-Giemsa染色计数内皮细胞集落、应用免疫荧光法观察内皮细胞表型;加入... 详细信息

本研究以内皮细胞培养液(Endo-M)培养小鼠骨髓内皮细胞,探讨粒-巨噬系集落刺激因子(rmGM-CSF)对骨髓内皮细胞增殖的影响。用Endo-M培养小鼠骨髓内皮细胞,通过Wright-Giemsa染色计数内皮细胞集落、应用免疫荧光法观察内皮细胞表型;加入不同浓度的GM-CSF,通过集落形成率、MTT法和流式细胞术检测内皮细胞生长周期,观察GM-CSF对内皮细胞体外扩增的影响。结果表明:Endo-M诱导的骨髓细胞可以生成内皮细胞集落,vWF检测呈阳性;集落形成率检测及MTT法测定均证实GM-CSF对内皮细胞的增殖具有明显的促进作用;生长周期检测结果显示,GM-CSF处理组的细胞进入S期的比率为9.3%,而对照组为2.1%,说明GM-CSF可以通过促使内皮细胞进入S期而加快细胞的分裂,促进细胞增殖;比较第1代和第4次传代后细胞的生长曲线,两者无明显差别,说明多次传代后的细胞仍保持传代早期的增殖潜能。结论:GM-CSF对内皮细胞的增殖具有促进作用,经多次扩增传代后内皮细胞的增殖潜能无明显改变。

关键词：骨髓内皮细胞 GM-CSF 细胞增殖