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小鼠高迁移率族蛋白B1基因短发卡RNA的构建及干扰效果检测

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中华实验外科杂志 2015年第1期32卷 45-47页

作者：朱红伟李志强黄利华余枭中南大学湘雅三医院胃肠胰外科长沙410013 中南大学湘雅三医院中心实验室长沙410013

目的构建有效靶向小鼠高迁移率族蛋白B1 （HMGB1）基因的短发卡RNA（shRNA）载体.方法针对小鼠HMGB1序列设计4条HMGB1干扰序列的shRNA载体：pYr-1.1-musHMGB1-sh1～4以及与哺乳动物基因组无同源性序列的shRNA作为对照（NC）组,Xho Ⅰ... 详细信息

目的构建有效靶向小鼠高迁移率族蛋白B1 （HMGB1）基因的短发卡RNA（shRNA）载体.方法针对小鼠HMGB1序列设计4条HMGB1干扰序列的shRNA载体：pYr-1.1-musHMGB1-sh1～4以及与哺乳动物基因组无同源性序列的shRNA作为对照（NC）组,Xho Ⅰ酶切鉴定其序列.然后利用质粒转染小鼠肝癌细胞株Hepal-6,实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测干扰效率.结果经酶切凝胶电泳证实shRNA构建正确;质粒筛选结果表明,转染48h后,pYr-1.1-musHMGB1-sh1～4及NC组的荧光表达率为85％、78％、75％、70％、60％;FQ-PCR显示pYr-1.1-musHMGB1-sh1～4组及NC组转染Hepal-6细胞48h后相对表达量分别为0.52±0.05、0.59±0.08、0.61±0.08、0.57±0.21、1.02±0.21.结论成功构建表达靶向HMGB1的4条shRNA重组质粒载体,其中pYr-1.1-musHMGB1-sh1质粒对HMGB1基因的抑制作用最强,为研究HMGB1的功能提供实验基础.

关键词：高迁移率族蛋白B1 RNA干扰 shRNA载体

miR-181a基因rs77418916位点多态性与川崎病的关联性研究

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湖南师范大学学报（医学版） 2021年第2期18卷 13-15页

作者：姚美清余梦吴吉平黄利华杨作成中南大学湘雅三医院儿科长沙410013 中南大学湘雅三医院中心实验室长沙410013

目的:观察miR-181a基因rs77418916位点多态性与川崎病(KD)及其并发冠状动脉损伤(CAL)的关联性。方法:选取100名KD患儿和100名健康儿童外周血标本,提取DNA,使用聚合酶链反应-直接测序法(PCR-SBT)技术检测miR-181a基因rs77418916位点的多... 详细信息

目的:观察miR-181a基因rs77418916位点多态性与川崎病(KD)及其并发冠状动脉损伤(CAL)的关联性。方法:选取100名KD患儿和100名健康儿童外周血标本,提取DNA,使用聚合酶链反应-直接测序法(PCR-SBT)技术检测miR-181a基因rs77418916位点的多态性。结果:miR-181a基因rs77418916位点的AA、AT、TT基因型分布和A、T等位基因频率在KD组与对照组间,及川崎病合并冠状动脉损伤组(KD-CAL)组与川崎病无冠状动脉损伤组(KD-NCAL)组间的差异无统计学意义。结论:miR-181a基因rs77418916位点多态性与KD发病及其CAL的发生均无明显关联性。

关键词：川崎病 miR-181a基因基因多态性

一个MYH9综合征家系2例耳聋患者临床特征及耳聋基因检测分析

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第三军医大学学报 2019年第11期41卷 1083-1089页

作者：陈印宜张应爱高鑫陈美王顺兰张淑芳中南大学湘雅医学院附属海口医院中心实验室海口570208

目的分析一个MYH9综合征家系中2例耳聋患者的表型特征,进行候选耳聋基因的突变筛查,明确该家系耳聋表型的基因突变位点。方法对家系进行详细的病史问诊及体格检查、血常规及生化检查、听力学检测、外周血涂片瑞-吉染色及MYH9蛋白质免疫... 详细信息

目的分析一个MYH9综合征家系中2例耳聋患者的表型特征,进行候选耳聋基因的突变筛查,明确该家系耳聋表型的基因突变位点。方法对家系进行详细的病史问诊及体格检查、血常规及生化检查、听力学检测、外周血涂片瑞-吉染色及MYH9蛋白质免疫荧光检测;抽提2例患者外周血基因组DNA,使用全外显子组测序技术对包括所有已知的100多个耳聋相关基因进行筛查并对可疑突变进行Sanger测序验证。结果该家系所有患者有巨大血小板、血小板减少和中性粒细胞包涵体三联征,系谱分析符合常染色体显性遗传特征。本研究2例耳聋患者还伴有贫血、高脂血症和转氨酶升高;耳聋表现为语后性、迟发型和渐进性听力下降,以中高频听力损失为主的感音神经性耳聋。全外显子组测序技术检测到MYH9基因致病突变位点:c.G4546C:p.V1516L,未发现其他已知遗传性耳聋基因的致病突变。结论该家系2例患者的耳聋表型可能与MYH9致病突变p.V1516L相关。

关键词： MYH9综合征耳聋感音神经性全外显子组测序基因突变

IL-10对急性冠脉综合征患者外周血单核细胞LOX-1表达的影响

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中南大学学报（医学版） 2008年第2期33卷 169-173页

作者：王建刚梁中书杨侃黄志军李静乐中南大学湘雅三医院心内科长沙410013 中南大学湘雅三医院中心实验室长沙410013

目的:检测急性冠脉综合征(acute coronary syndromes,ACS)患者外周血单核细胞血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(lectin-like oxidized low-density lipoprotein receptor-1,LOX-1)的表达水平,以及抗炎因子白介素-10(interleukin-10,IL-10)对其表达的影响。方法:收集28例健康体检者和28例ACS患者,用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbnent assay,ELISA)检测血清中IL-10和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF-α水平。分离外周血单核细胞进行培养,加或不加IL-10(20μg/L)进行体外干预,检测单核细胞LOX-1蛋白和mRNA表达的变化。结果:与健康对照组相比,ACS患者血清中IL-10和TNF-α水平明显升高(P<0.01)。ACS患者外周血单核细胞LOX-1蛋白和mRNA表达明显高于对照组(P<0.01),IL-10(20μg/L,3h)可明显下调单核细胞LOX-1的蛋白和mRNA表达(P<0.01)。结论:抗炎因子IL-10可能通过抑制ACS患者外周血单核细胞LOX-1的表达而起到稳定斑块的作用,这可能是IL-10抗动脉粥样硬化的又一新机制。

关键词：白介素-10 植物血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1 急性冠脉综合征单核细胞

趋化素样因子-1在狼疮性肾炎患者肾组织中的表达

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中南大学学报（医学版） 2007年第3期32卷 490-493页

作者：季迎张浩袁洪阳国平张柯谢丽华中南大学湘雅三医院肾内科长沙410013 中南大学湘雅三医院中心实验室长沙410013

目的:探讨趋化素样因子-1(chemokine like factor-1,CKLF-1)在狼疮性肾炎的发生、发展过程中的作用。方法:对34例确诊为狼疮性肾炎以及10例对照组患者的肾组织进行免疫组织化学染色,在光镜下观察肾小球CKLF-1阳性细胞率和CKLF-1阳性肾... 详细信息

目的:探讨趋化素样因子-1(chemokine like factor-1,CKLF-1)在狼疮性肾炎的发生、发展过程中的作用。方法:对34例确诊为狼疮性肾炎以及10例对照组患者的肾组织进行免疫组织化学染色,在光镜下观察肾小球CKLF-1阳性细胞率和CKLF-1阳性肾小管百分率及反应强度。结果:狼疮性肾炎患者的肾小球CKLF-1阳性细胞率和CKLF-1阳性肾小管百分率分别为10.4%±1.5%和48.9%±4.3%,与对照组患者4.6%±1.1%和4.3%±0.9%比较均有统计学差异(P<0.01)。CKLF-1在狼疮性肾炎患者的肾小球阳性细胞率和阳性肾小管百分率与狼疮性肾炎活动指数间均存在显著相关性,相关系数分别为0.74和0.53(P<0.05)。结论:CKLF-1参与了狼疮性肾炎的发生、发展过程。

关键词：系统性红斑狼疮狼疮性肾炎趋化因子趋化素样因子-1

铜绿假单胞菌整合子可变区长度对intⅠ1基因表达的影响

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中华医院感染学杂志 2013年第8期23卷 1745-1748页

作者：冯银陈体 Govinda Paudel 袁金玲黄利华伍勇中南大学湘雅三医院检验科湖南长沙410013 中南大学湘雅三医院中心实验室湖南长沙410013

目的分析铜绿假单胞菌中Ⅰ类整合子可变区的长度对Ⅰ类整合酶基因(intⅠ1)表达水平的影响,以探讨整合酶表达的调控机制。方法将25株临床分离的Ⅰ类整合子阳性铜绿假单胞菌按可变区的长度分为A、B组(A组:1000～2000bp;B组:>2000bp),提取... 详细信息

目的分析铜绿假单胞菌中Ⅰ类整合子可变区的长度对Ⅰ类整合酶基因(intⅠ1)表达水平的影响,以探讨整合酶表达的调控机制。方法将25株临床分离的Ⅰ类整合子阳性铜绿假单胞菌按可变区的长度分为A、B组(A组:1000～2000bp;B组:>2000bp),提取细菌的总RNA并逆转录为cDNA,用实时荧光定量PCR法测定两组细菌intⅠ1mRNA的相对表达量,并比较具有不同长度可变区的细菌中intⅠ1基因的平均表达水平。结果两组细菌中intⅠ1mRNA的相对表达量差异有统计学意义(P<0.05);A组细菌intⅠ1和16SrRNA的Ct值均值及⊿Ct值分别为:17.25、10.34、6.91,B组细菌intⅠ1和16SrRNA的Ct值均值及⊿Ct值分别为:18.91、9.47、9.45,⊿⊿Ct为5.81;A组细菌的intⅠ1mRNA平均表达水平是B组的5.81倍。结论在临床分离的Ⅰ类整合子阳性的铜绿假单胞菌中,短可变区组整合酶表达水平较高,而长可变区组整合酶表达水平较低,提示Ⅰ类整合子中整合酶的表达水平可能受整合子可变区基因盒数目的影响,从而影响整合子继续捕获基因盒的能力。

关键词：铜绿假单胞菌整合子整合酶基因盒耐药实时荧光定量PCR

产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌Ⅰ类整合子与耐药性关系

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临床检验杂志 2011年第1期29卷 28-30页

作者：陈体漆涌黄利华伍勇中南大学湘雅三医院检验科长沙410013 中南大学湘雅三医院中心实验室长沙410013

目的研究产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中Ⅰ类整合子的分布,探讨整合子介导的耐药机制在产ESBLs菌耐药性中的作用。方法用PCR检测100株产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌Ⅰ类整合酶基因及blaTEM、blaSHV和blaCTX-... 详细信息

目的研究产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中Ⅰ类整合子的分布,探讨整合子介导的耐药机制在产ESBLs菌耐药性中的作用。方法用PCR检测100株产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌Ⅰ类整合酶基因及blaTEM、blaSHV和blaCTX-M基因,对Ⅰ类整合子阳性菌进行耐药基因盒检测并测序。结果产ESBLs菌株中Ⅰ类整合子阳性率为69%,整合子阳性的产ESBLs菌株对包括头孢菌素类、喹诺酮类、磺胺类和β-内酰胺酶抑制剂类在内的12种抗菌药物的耐药率高于整合子阴性产ESBLs菌株,2χ检验差异有统计学意义,P<0.05;Ⅰ类整合子在blaSHV、blaTEM和blaCTX-M基因阳性菌株中检出率分别为84.4%、72.9%和68.9%。结论在产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中,Ⅰ类整合子广泛分布且参与产ESBLs菌的多重耐药的形成,容易引起多重耐药的广泛传播。

关键词：超广谱β-内酰胺酶整合子多重耐药性

纤维蛋白原β链-148C/T和-455G/A基因多态性与川崎病的相关性

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临床心血管病杂志 2013年第5期29卷 387-390页

作者：陈碧仪李卓颖江杰陈志衡陈佳田朗黄利华杨作成中南大学湘雅三医院儿科长沙410013 澳门镜湖医院儿科澳门515031 中南大学湘雅三医院中心实验室

目的:探讨纤维蛋白原β链(Fgβ)-148C/T和-455G/A基因多态性与川崎病发病,及并发冠状动脉损伤(CAL)之间的关系。方法:应用聚合酶链反应-限制性内切酶片断长度多态性分析方法结合琼脂糖凝胶电泳技术,对47例川崎病患儿(川崎病组)和60例对... 详细信息

目的:探讨纤维蛋白原β链(Fgβ)-148C/T和-455G/A基因多态性与川崎病发病,及并发冠状动脉损伤(CAL)之间的关系。方法:应用聚合酶链反应-限制性内切酶片断长度多态性分析方法结合琼脂糖凝胶电泳技术,对47例川崎病患儿(川崎病组)和60例对照儿童(对照组)进行Fgβ-148C/T及-455G/A基因多态性分析。结果:①2组Fgβ-148C/T基因多态性的CC、CT、TT基因型频率和C、T等位基因频率均差异无统计学意义。川崎病组中,并发CAL者CT基因型频率明显高于未并发者(χ2=7.009,P<0.05)。②2组Fgβ-455G/A基因多态性的GG、GA、AA基因型频率和G、A等位基因频率均差异无统计学意义。川崎病组中,并发CAL者GA基因型频率明显高于未并发者(χ2=7.009,P<0.05)。结论:Fgβ-148C/T和Fgβ-455G/A基因的基因型和等位基因与川崎病的发生均无明显相关性。Fgβ-148C/T基因的CT基因型及Fgβ-455G/A基因的GA基因型与川崎病并发CAL的发生存在相关性。

关键词：纤维蛋白原基因多态性川崎病冠状动脉损伤儿童

高迁移率族蛋白-1在急性胰腺炎大鼠胰腺中的表达

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中华实验外科杂志 2014年第1期31卷 44-46页

作者：余枭余灿李霞黄利华朱红伟中南大学湘雅三医院胃肠胰外科长沙410013 中南大学湘雅三医院内分泌科长沙410013 中南大学湘雅三医院中心实验室长沙410013

目的探讨高迁移率族蛋白-1（HMGB1）在急性胰腺炎大鼠血清及胰腺组织中的表达及意义.方法 44只SD大鼠[（350±30）g]随机分为假手术组和实验组,实验组以5％牛黄胆酸钠胰胆管逆行注射制作急性胰腺炎大鼠模型.酶联免疫吸附试验检测外周... 详细信息

目的探讨高迁移率族蛋白-1（HMGB1）在急性胰腺炎大鼠血清及胰腺组织中的表达及意义.方法 44只SD大鼠[（350±30）g]随机分为假手术组和实验组,实验组以5％牛黄胆酸钠胰胆管逆行注射制作急性胰腺炎大鼠模型.酶联免疫吸附试验检测外周血液中不同炎性因子的表达,Western blot法检测胰腺组织中HMGB1的蛋白表达.结果早期炎性因子白细胞介素（IL）-1β、IL-6、肿瘤坏死因子（TNF）-α在造模3h后表达明显升高,6h达峰值,12 h后出现表达下调[IL-1β：（163.42±19.63） ng/L （6 h）,IL-6：（168.98±19.97） ng/L （6 h）,TNF-α：（1 438.60±94.78） ng/L（6 h）,P＜O.05].HMGB1在外周血清中,3h无明显表达,6h后持续升高[HMGB1：（192.46±34.29） ng/L（6 h）,P＜0.05].结论 HMGB1在急性胰腺炎中的表达晚于早期炎性因子IL-1、TNF-α、IL-6,可能在维持和促进急性胰腺炎的发生、发展中起关键作用.

关键词：急性胰腺炎高迁移率族蛋白-1 炎性因子